全 文 ：第 卷 第 期
年 月
林 业 科 学 研 究
「吸〕 卫 人
人一 , 夕
人 ,
一种简便的单抱分离法
人们 在观察一种真菌病害的标本时 , 不一定都能检查到子实体而作出诊断 。 同时 , 在病
部表面或组织中检查到的真菌 , 也并非一定就是其病原物。 对病害病 原物的确定 , 最好的方
法是分离 , 培养、 回接后的发病鉴定和病原物的再分离 。 目前采用的菌种纯化和 单 抱 分 离
法 , 国内有著名植物病理学家方中达先生介绍的琼胶平板稀释法 、 稀释纯化法 、 琼胶平板表
面单抱子挑取法等多种 , 笔者曾试用其一二种‘。 由于国产培养皿的光学性能差 , 镜检时费
力又费时 , 不容易找到抱子 , 特别是无色 、 较 小的抱子 。 现经本人多次实验 , 摸索出了一种
简便的单抱分离方法 , 介绍如下 。
。
材料和方法
材料与设备 无菌室或超净工作台 、 显微镜 、 培养皿 直径 和 各 若干只 、
琼脂培养某 、无菌水 、 具细长嘴的皮头滴管 、 金属打孔器 直径 、 接种针 、 培养箱 、 载
玻片、 酒精灯 、 试管斜面 培养基 。
方法 将显微镜移入无菌室或超净工作台 , 事先已灭过菌的培养皿 皿内置一片载玻
片 、无菌水、 具细长嘴的皮头滴管及金属打孔器、 直径 和 的空培养皿 、 接 种针 、
酒精灯等所需工具也同时放入室内备用 , 室内用紫外灯灭菌 。 把溶化了 的 琼脂培
养基带进接种室 , 然后倒入直径 的空培养 皿 内 《厚度为 。 待琼脂培养基
冷却后 , 用在酒精灯火焰上灭过菌的金属打孔器在培养基上打出许多小琼脂薄圆饼。 用接
种针挑出十几个琼脂小圆饼放在无菌 、 直径 培养皿内的载玻片上 , 并在每个小圆饼上
用接种针划一下 , 使小圆饼向两边分开成扇形 , 中间留部分空处 。 用无菌水逐级稀释法制
成抱子悬浮液 , 使其在 倍显微镜下每 视野 约有 个抱子 。 用具细长嘴的皮头滴管
在酒精灯火焰上灭菌 吸取上述抱子悬浮液 , 逐一滴入琼脂小圆饼的中间空出部分处 , 每处
一滴即可 。 每一载玻片置培养皿内 , 在 ℃温箱内培养过夜 , 并贴上标 签 。 一昼夜后 ,
皿 内抱子己萌芽 , 带入接种室内镜检 , 发现有萌芽抱子 , 即可选最客易挑出的单 抱 子 移 入
试管斜面培养基 , 置 ℃培养箱内培 养备用 。
试验结果
近来 , 笔者已用此法从仪县油茶 万 趁 和普通油茶 二
了。 各个生长器官的病组织上 , 经分离培养后 挑 取 了 油 茶 炭 疽 菌 汀‘二
。二。 ’。 和交链抱属一种菌 。多个具生活力的单抱子 , 成功率达 以
上 。 经筛选获取保存了 多个单抱菌系 , 供致病力测定和分子真菌系统学研究之用 。 实践证
明 , 此法简单方便 , 省力、 省时 , 可靠性大 , 凡对病原菌的组织分离培养有 一定操作经验者 ,
稍加练 习 , 即可掌握 。
参 考 文 献
方 中达 植病 研究方法 ,巴
北京 农业 出版社 , ,
“ 比
‘ 一 ‘
, , ! 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 杨婉粤
一 一 收稿。 本 试验曾得到翁月徽 研究员的启发和扣 导 , 特此致谢 。