全 文 ：第 51 卷 第 5 期
2 0 1 5 年 5 月
林 业 科 学
SCIENTIA SILVAE SINICAE
Vol. 51，No. 5
May，2 0 1 5
doi:10．11707 / j．1001-7488．20150510
收稿日期: 2013 － 12 － 31; 修回日期: 2014 － 04 － 21。
基金项目: 国家科技支撑计划项目(2012BAD23B03)。
* 汤锋为通讯作者。魏琦现在国家林业局盐碱地研究中心从事博士后研究工作。
苦竹叶化学成分对细菌及 3 种肿瘤细胞的抑制活性*
魏 琦 姚 曦 孙 嘏 荀 航 岳永德 汤 锋
(国际竹藤中心 竹藤科学与技术重点实验室 北京 100102)
摘 要: 【目的】评价苦竹叶提取物及其化学成分对细菌和 3 种肿瘤细胞的离体抑制生长活性，为竹叶化学成分
的开发利用奠定基础。【方法】采用 95%乙醇提取和柱色谱分离，从苦竹叶中获得提取物流分及单体化合物; 以
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌为研究对象，采用抑菌圈法评价苦竹叶提取物各流分及单体化合物的
离体抑菌活性; 采用 MTT 法和小鼠 H22 肝癌细胞腹水瘤模型，评价木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡
萄糖苷的体内外抗肿瘤活性。【结果】苦竹叶乙醇提取物萃取流分中，乙酸乙酯相的离体抑菌作用整体强于石油
醚相和正丁醇相，水相抑菌作用不明显。乙酸乙酯相 8 个流分中 Fr． 3 的离体抑菌作用最强，在 25 mg·mL － 1浓度
下，对枯草芽孢杆菌的离体抑菌作用最强，24 h 抑菌圈直径为 21. 05 mm。25 mg·mL － 1浓度下，单体化合物中从组
分 Fr． 4 中分得的反式香豆酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的离体抑菌作用最强，24 h 的抑菌圈直径分别为
20. 23 mm及 18. 35 mm。离体试验表明，木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷对子宫颈癌 HeLa 细
胞、肝癌 HepG2 细胞及结肠癌 HT-29 细胞具有明显的抑制增殖作用，IC50值分别为 592，2 058，1 712 mg·L
－ 1。
5 mg·kg － 1和 10 mg·kg － 1的木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷对 H22 荷瘤鼠肝肿瘤有体内抑制
作用，抑制率分别为 2. 9%和 20. 0%。【结论】苦竹叶化学成分具有一定的抑菌及抑制肿瘤增殖活性，在植物源农
药及药物的开发利用方面具有一定的潜力。本研究为推进苦竹叶化学成分基础研究和促进苦竹叶资源的综合利
用提供了依据。
关键词: 苦竹叶; 化学成分; 抑菌活性; 抗肿瘤活性
中图分类号: S795. 9 文献标识码: A 文章编号: 1001 － 7488(2015)05 － 0087 － 08
Inhibitive Activity of Chemical Constituents from Leaves of
Pleioblastus amarus against Bacteria and 3 Kinds of Tumor Cells
Wei Qi Yao Xi Sun Jia Xun Hang Yue Yongde Tang Feng
(Key Laboratory of Bamboo and Ｒattan Science and Technology International Center for Bamboo and Ｒattan Beijing 100102)
Abstract: 【Objective】The compounds from leaves of Pleioblastus amarus were extracted and isolated． The inhibitive
activity of the compounds against bacteria and 3 kinds of tumor cells were tested in vitro． ［Method］ The extract was
extracted from the bamboo leaves with 95% ethanol and separated with the column chromatograph． The antibacterial
activities of the extract against Escherichia coli，Staphyloccocus aureus and Bacillus subtilis were tested by the inhibition
zone method． The inhibitive activity against tumor cells of 5，7，3’-trihydroxy-6-C-β-D-digitoxopyranosyl-4-O-β-D-
glucopyranosyl flavonoside was evaluated by the MTT method and the ascites tumor model of mice H22 hepatoma cells．
【Ｒesult】The results showed that the antibacterial activity of ethyl acetate extracts was stronger than that of petroleum
ether extracts and n-butanol extracts，while the water extracts had no obvious antibacterial effect． The antibacterial activity
of Fr． 3 was strongest in 8 fractional parts of ethyl acetate extracts． At the concentration of 25 mg·mL － 1，Fr． 3 showed the
strongest antibacterial activity against Bacillus subtilis，and the diameter of inhibition zone was 21． 05 mm in 24 h． At the
concentration of 25 mg·mL － 1， the Fr． 4 of ethyl acetate extracts had the strongest antibacterial activities against
Escherichia coli and Staphyloccocus aureus of β-coumaric acid in all compounds，and the diameters of inhibition zone were
20． 23 mm and 18. 35 mm respectively in 24 h． High concentration of 5，7，3-trihydroxy-6-C-β-D-digitoxopyranosyl-4-O-
β-D-glucopyranosyl flavonoside showed antitumor effects on Hela cells，HepG2 cells and HT-29 cells in vitro，and the
IC50 was 592 mg·L
－ 1，2 058 mg·L － 1 and 1 712 mg·L － 1，respectively． The doses of 5 mg·kg － 1 and 10 mg·kg － 1
林 业 科 学 51 卷
5，7，3-trihydroxy-6-C-β-D-digitoxopyranosyl-4-O-β-D-glucopyranosyl flavonoside had antitumor effects on the liver
tumors of H22 mice in vivo，and the inhibition rates were 2． 9% and 20． 0%，respectively． 【Conclusion】Chemical
Constituents from leaves of P． amarus have antibacterial and antitumor activities， and they have potential in the
development of plant original pesticide and medicine． This study provides references for promoting the basic research and
comprehensive utilization of P． amarus leaves．
Key words: Pleioblastus amarus; chemical components; antibacterial activity; antitumor activity
苦竹(Pleioblastus amarus)为禾本科(Gramineae)
竹亚科(Bambusoideae)苦竹属植物，广泛分布于我国
长江流域以南地区(易同培等，2008)。苦竹叶是中
医药典籍中收载的常用中草药，具有清心、利尿明目、
解毒等功效，主治热病烦渴、失眠、小便短赤、口疮、目
痛、失音、烫火伤(国家中医药管理局《中华本草》编
委会，1999; 中国药材公司，1994)。苦竹叶的化学
成分是其药理活性的基础。苦竹叶化学成分的活性
已有一些研究，据报道，苦竹乙醚提取物对萝卜蚜
(Lipaphis erysimi)拒食活性较强，24 h AFC50 (拒食中
浓度)为 2. 555 g·L － 1(操海群等，2003)，对淡色库蚊
(Culex pipiens pallens)幼虫 24 h LC50为 54. 49 mg·L
－ 1
(Cao et al．，2004)。以小鼠巨噬细胞分泌 IL-1、IL-6、
TNF-a 为抗炎模型，研究发现苦竹 30%乙醇组分对 3
种因子均有较强抑制作用，抑制率在 22. 68% ～
42. 15%之间(姚曦等，2010)。研究表明，苦竹提取
物对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、大肠杆
菌 ( Escherichia coli ) 和 变 异 链 球 菌 ( Streptococcus
mutans)的最小抑菌浓度(MIC)分别为 3. 125，6. 25，
12. 5 mg·mL － 1 (王慧霞等，2010)。章晴等(2010)评
价了苦竹叶提取物的杀虫活性，发现石油醚组分的第
2 组分(F2)具有显著的杀虫活性，在 2. 0 g·L
－ 1浓度
下对蚜虫的 24 h 和 48 h 校正死亡率为 77. 61% 和
93. 24%。Wang 等(2004)从苦竹叶中提取分离出了
3 种具有免疫调节活性的新黄酮类化合物 pleiosides
A-C。笔者从苦竹叶中分离并鉴定出木犀草素 － 6 －
C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷(魏琦，2013)，
该化合物由 Guo 等 (2008)首次从铺地竹竹 ( Sasa
argenteistriatus)叶中分离得到，但其活性研究迄今未
见报道。
苦竹叶化学成分的活性研究中，对苦竹叶有机
溶剂粗提物的活性研究较多，对粗提物细分后的组
分及分离得到的单体化合物的活性研究较少; 苦竹
叶化学成分抑菌及抑制肿瘤活性报道也较少。本文
采用抑菌圈法对苦竹叶乙醇提取物的各组分及分离
得到的单体化合物进行了离体抑菌活性研究，并利
用 MTT 法和小鼠 H22 肝癌细胞腹水瘤模型测定乙
酸乙酯相 Fr． 7 组分中分离得到的木犀草素 － 6 －
C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷的体内体外
抗肿瘤活性，以期为苦竹叶的化学利用提供依据。
1 材料与方法
1. 1 试验材料
苦竹叶采自四川省长宁县。供试菌种金黄色葡
萄球菌、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和大肠杆菌
均购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物
中心。宫颈癌细胞株(Hela)、肝癌细胞株(HepG2)和
结肠癌细胞株(HT-29)为北京中医药大学中药学院
生物制药系提供。H22 鼠肉瘤细胞株，由北京大学医
学部提供。 ICＲ 小鼠，SPF /VAF 级，雌性，体质量
(24 ± 2)g，由北京大学医学部实验动物科学部提供，
饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供。
1. 2 苦竹叶提取物及其化合物的制备
苦竹叶自然阴干后剪碎，用 95%乙醇按料液比
1∶ 10 浸泡，置于密封提取罐中在 80 ℃下提取1. 5 h，
减压浓缩提取液，待近干时收集。重复提取 2 次。
合并 2 次收集的提取液，减压浓缩后得浸膏。浸膏
用水悬浮后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃
取，得石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相。将
乙酸乙酯相上硅胶柱，以石油醚 － 丙酮梯度洗脱
(石油醚 ∶ 丙酮 = 100 ∶ 1，50 ∶ 1，30 ∶ 1，20 ∶ 1，15 ∶ 1，
10∶ 1，5∶ 1，4∶ 1，3 ∶ 1，2 ∶ 1，1 ∶ 1)，最后以甲醇洗脱，按
洗脱溶剂极性由小到大分得 8 段组分 ( Fr． 1 － 8)。
经反复上 Sephadex LH-20 凝胶柱层析(甲醇洗脱)、
室温重结晶及高压制备 HPLC，得到单体化合物。
其中对羟基苯甲醛从 Fr． 1 中分得; 7 －羟基 －香豆
素从 Fr． 2 中分得; 反式香豆酸从 Fr． 4 中分得; 苜
蓿素及 Demethyltorosaflavone 从 Fr． 5 中分得; 6 －反
式 － (2″ － O － α －鼠李糖基)乙烯基 － 5，7，3，4 －
四羟基黄酮从 Fr． 6 中分得; 木犀草素 － 6 － C － 洋
地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷、苜蓿素 － 7 － O －
葡萄糖苷及苜蓿素 － 4 － O －葡萄糖苷从 Fr． 7 中分
得。将供试样品用不同比例的甲醇及水配制成系列
浓度的溶液备用。
1. 3 抑菌活性测定方法
采用抑菌圈法。将直径 6. 0 mm 的滤纸圆片干
88
第 5 期 魏 琦等: 苦竹叶化学成分对细菌及 3 种肿瘤细胞的抑制活性
热灭菌。用无菌水制备菌悬液，稀释到合适浓度。
在超净台里将牛肉膏蛋白胨培养基(蛋白胨 10. 0 g、
牛肉膏 3. 0 g、氯化钠 5. 0 g、琼脂 13. 0 g、蒸馏水
1 000 mL，pH7. 0 ～ 7. 4)倒入平板，每板 15 mL，凝固
后取 0. 2 mL 菌悬液注入平板，用三角耙涂布均匀，
每种菌设置 3 个重复平板。制备含药纸碟时，样品
溶液点样量为 20 μL; 无菌水配制的氨苄青霉素钠
溶液为阳性对照，点样量为 10 μL; 甲醇及无菌水为
阴性对照。将含药纸碟放在涂布菌悬液培养基的培
养皿上展平，培养皿倒置放入培养箱中 37 ℃下培
养。培养 24 h 后观察有无抑菌圈。采用抗生素测
定仪测量抑菌圈大小。
1. 4 抗肿瘤活性测定方法
1. 4. 1 体外抗肿瘤细胞活性试验方法 采用 MTT
法测定乙酸乙酯相 Fr． 7 组分中分离得到的木犀草
素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷对宫
颈癌细胞 Hela、肝癌细胞 HepG2 和结肠癌 HT-29 细
胞的增殖抑制作用。3 种肿瘤细胞培养于含 10%
FBS 的 ＲPMI1640 培养基，于 37 ℃、5% CO2 条件下
培养，冻存于 － 80 ℃超低温冰箱。取对数生长期细
胞，离心收集细胞，用完全培养基(含 10% FBS、100
U·mL － 1双抗)调整至一定密度(5 万个·mL － 1 )。取
96 孔板，将细胞悬液摇匀后，每孔加入 100 μL，同时
设置空白对照(只加 100 μL 培养液)，而后置于含
5% CO2 的 37 ℃恒温箱中培养。4 h 后，轻轻吸取上
层培养液并弃去。用完全培养基配制不同浓度的样
品，各取 100 μL 加入各样品测试孔中，空白对照和
阴性对照孔只加 100 μL 完全培养基，每测试孔均设
置 4 个平行，将 96 孔板置于培养箱继续温育 24 h。
取出 96 孔板，倒出旧培养基，每孔加入 100 μL
MTT，温育 4 h。轻吸上清液，每孔加150 μL DMSO，
振摇，孔底的蓝色甲瓒溶解，于 450 nm 处测定每孔
吸光度。计算细胞生长抑制率及 IC50值: ΔA(% ) =
［(A0 － A) / A0］× 100%，A 和 A0分别是加样组和阴
性对照组平均吸光度; lgIC50 = Xm － I［P － ( 3 －
Pm － P n) /4］，Xm = lg 最大剂量，I = lg(最大剂量 /相
邻剂量)，P =阳性反应率之和，Pm为最大阳性反应
率，P n =最小阳性反应率。
1. 4. 2 体内抗肿瘤细胞活性试验方法 采用小鼠
H22 肝癌细胞腹水瘤模型进行木犀草素 － 6 － C －
洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷的体内抑瘤试验。
ICＲ 小鼠饲养于 SPF 级动物实验室，室温 24℃ ±
1℃，相对湿度为 55% ± 15%。无菌条件下抽取肝
癌小鼠腹水中的 H22 细胞，用无菌 PBS 将收集到的
肿瘤细胞浓度调整为 1 × 106 个·mL － 1，于 BALB /C
小鼠左下腹部进行无菌皮下接种，每只小鼠接种
0. 2 mL 细胞悬液。小鼠接种后 24 h 称体质量并分
组，随机分为样品高、中、低剂量(20，10，5 mg·kg － 1)
组，环磷酰胺(CTX，5 mg·kg － 1)组为阳性对照组，另
设阴性对照组，给以等量 5%羧甲基纤维素钠溶液。
各组均灌胃给药，每只 0. 2 mL，每日 1 次，连续 10
天。每日观察小鼠活动、皮毛等生理指标，每日灌胃
前称质量。于接种后第 12 天处死，取肿瘤、肝脏、脾
脏、胸腺称质量，计算抑瘤率和肝指数、脾指数及胸
腺指数。肿瘤抑制率(% ) = (C － T) /C × 100%，C
为对照组平均瘤质量，T 为给药组平均瘤质量。脏
器指数 =脏器质量(mg) /体质量( g)。
2 结果与分析
2. 1 苦竹叶化学成分的抑菌作用
2. 1. 1 苦竹叶提取物对细菌的抑制作用 苦竹叶
乙醇提取物的石油醚相、正丁醇相和水相对 3 种细
菌的抑菌效果见表 1。由表 1 看出，样品对 3 种细
菌的体外抑制作用随剂量的增加而不同程度的增
强。水相对金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌抑制效
果不明显，只在高浓度 25 mg·mL － 1对大肠杆菌有较
小的抑制作用，抑菌圈为 8. 93 mm。
行中方差分析表明，25 mg·mL － 1浓度下，石油
醚相对 3 种细菌的抑菌效果无显著差异，正丁醇相
亦同。列中方差分析表明，25 mg·mL － 1浓度下，石
油醚相与正丁醇相对 3 种细菌的抑制效果均无显著
差异，石油醚相对大肠杆菌及枯草芽孢杆菌的抑菌
圈较大，分别为 10. 48 和 10. 57 mm，正丁醇相对金
黄色葡萄球菌的抑菌圈较大，为 10. 54 mm。样品的
抑菌作用均不及阳性对照氨苄青霉素钠，且与其差
异显著(P ＜ 0. 05)。
2. 1. 2 苦竹叶提取物乙酸乙酯相组分对细菌的
抑制作用 苦竹叶乙醇提取物乙酸乙酯相 8 个组
分对 3 种细菌的抑菌效果见表 2。由表 2 看出，不
同浓度的乙酸乙酯相 8 个组分对 3 种细菌均有不
同程度的抑制作用，且随样品剂量的增加而不同
程度的增强。
行中方差分析表明，25 mg·mL － 1浓度下，Fr． 2
对 3 种细菌的抑菌效果无显著差异，Fr． 5、Fr． 6、
Fr． 7及 Fr． 8 亦同; Fr． 3 对枯草芽孢杆菌的抑制作
用强于其他2 种细菌且差异显著 ( P ＜ 0. 05)，抑菌
圈直径为 21. 05 mm。10 mg·mL － 1浓度下，Fr． 1 对
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用强于枯草芽
孢杆菌且差异显著(P ＜ 0. 05); Fr． 4 对 3 种细菌的
抑菌效果无显著差异。
98
林 业 科 学 51 卷
10 mg·mL － 1浓度下测定的乙酸乙酯相 8 个组
分中，Fr． 3 对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用
最强，抑菌圈直径为 13. 40 及 12. 33 mm; Fr． 2 对金
黄色葡萄球菌的抑制作用最强，抑菌圈直径为
12. 29 mm; Fr． 7 对 3 种细菌的抑制作用最小，抑菌
圈分别为 9. 66，8. 89 及 9. 40 mm。列中方差分析表
明，25 mg·mL － 1浓度下测定的乙酸乙酯相 6 个组分
中，Fr． 3 对 3 种细菌的抑制作用最强，抑菌圈分别
为 18. 88，18. 20 及 21. 05 mm; Fr． 7 对 3 种细菌的
抑制作用最小，抑菌圈分别为 11. 49，10. 28 及
11. 76 mm。样品的抑菌作用均不及阳性对照氨苄
青霉素钠，且与其差异显著(P ＜ 0. 05)。
表 1 苦竹叶提取物对参试细菌的抑菌效果(24 h) ①
Tab． 1 Antibacterial effect of samples on test bacteria (24 h)
样品
Sample
浓度
Concentration /
(mg·mL － 1 )
点样量
Sampling
amount /
mg
抑菌圈直径 Diameter of inhibition zone /mm
大肠杆菌
Escherichia coli
金黄色葡萄球菌
Staphyloccocus aureus
枯草芽孢杆菌
Bacillus subtilis
石油醚相
Petroleum
ether extracts
5 0. 1 8. 41 ± 0. 06 8. 75 ± 0. 01 8. 52 ± 0. 19
15 0. 3 8. 99 ± 0. 44 9. 35 ± 0. 34 9. 01 ± 0. 07
25 0. 5 10. 48 ± 0. 31b* 10. 46 ± 0. 21a* 10. 57 ± 0. 35a*
正丁醇相
N-butanol extracts
5 0. 1 — — —
15 0. 3 8. 49 ± 0. 04 — 8. 46 ± 0. 05
25 0. 5 10. 15 ± 0. 27b* 10. 54 ± 0. 38a* 10. 47 ± 0. 53a*
水相
Water extracts
5 0. 1 — — —
15 0. 3 — — —
25 0. 5 8. 93 ± 0. 12a — —
氨苄青霉素钠
Ampicillin sodium
0. 1 0. 001 24. 03 ± 0. 53 21. 86 ± 0. 59 20. 39 ± 1. 61
0. 3 0. 003 27. 79 ± 0. 05 25. 56 ± 1. 02 24. 76 ± 1. 54
0. 5 0. 005 29. 56 ± 0. 37c 27. 77 ± 1. 17b 26. 97 ± 2. 59b
甲醇对照 Methanol — — —
无菌水对照 Sterile water — — —
① 数值 =平均值 ±标准误( n = 3)，采用邓肯氏新复极差检验法(DMＲT 法)进行多重比较，列中相同字母表示差异不显著，行中相同数量
“* ”表示差异不显著，检验的显著性水平为 P = 0. 05。Values are mean ± SE ( n = 3) ． Values in a line followed by same letters and values in a row
followed by the same number of“* ”are not significantly different (P = 0. 05) according to Duncan’s multiple comparison (DMＲT) ． － : 表示抑菌效
果不明显 No obvious antibacterial effect．下同 The same below．
2. 1. 3 苦竹叶主要成分对细菌的抑制作用 苦竹
叶分离得到的单体化合物对 3 种细菌的抑菌效果见
表 3。由表 3 看出，不同浓度的对羟基苯甲醛、7 －
羟基 － 香豆素、反式香豆酸、苜蓿素及 6 － 反式 －
(2″ － O － α －鼠李糖基)乙烯基 － 5，7，3，4 － 四羟
基黄酮对 3 种细菌均有不同程度的抑制作用，且随
样 品 剂 量 的 增 加 而 不 同 程 度 的 增 强。
Demethyltorosaflavone、木犀草素 － 6 － C － 洋地黄毒
糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷、苜蓿素 － 7 － O － 葡萄糖
苷及苜蓿素 － 4 － O － 葡萄糖苷在试验浓度下抑菌
效果不明显。
行中方差分析表明，25 mg·mL － 1浓度下，对羟基
苯甲醛对枯草芽孢杆菌的抑制作用强于其他 2 种细
菌且差异显著(P ＜ 0. 05)，抑菌圈直径为14. 28 mm;
反式香豆酸对大肠杆菌的抑制作用强于其他2 种细
菌且差异显著(P ＜ 0. 05)，抑菌圈直径为 20. 23 mm。
15 mg·mL － 1浓度下，7 －羟基 －香豆素对 3 种细菌的
抑菌效果无显著差异。1. 25 mg·mL － 1浓度下，6 －反
式 － (2″ － O － α －鼠李糖基)乙烯基 － 5，7，3，4 －四
羟基黄酮对 3 种细菌的抑菌效果无显著差异。
1. 25 mg·mL － 1浓度下测定的 5 个单体化合物
中，7 －羟基 － 香豆素对大肠杆菌及金黄色葡萄球
菌、苜蓿素对枯草芽孢杆菌的抑制效果不明显; 反
式香豆酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用最
大; 苜蓿素及反式香豆酸对金黄色葡萄球菌的抑制
作用 较 大，抑 菌 圈 直 径 为 10. 12 和 9. 3 mm。
25 mg·mL － 1浓度下测定的 2 个单体化合物中，反式
香豆酸对 3 种细菌的抑制作用均大于对羟基苯甲
醛，抑菌圈分别为 20. 23，18. 35 及 19. 20 mm。列中
方差分析表明，15 mg·mL － 1浓度下测定的 3 个单体
化合物中，反式香豆酸对 3 种细菌的抑制作用最强
且与其他 2 个单体化合物差异显著(P ＜ 0. 05)，抑
菌圈分别为 19. 97，17. 42 和 17. 17 mm; 7 － 羟基香
豆素对 3 种细菌的抑制作用最小。样品的抑菌作用
均不及阳性对照氨苄青霉素钠，且与其差异显
著(P ＜ 0. 05)。
09
第 5 期 魏 琦等: 苦竹叶化学成分对细菌及 3 种肿瘤细胞的抑制活性
表 2 乙酸乙酯相各组分对参试细菌的抑菌效果(24 h)
Tab． 2 Antibacterial effect of ethyl acetate extracts on test bacteria (24 h)
样品
Sample
浓度 Concentration /
(mg·mL － 1 )
点样量
Sampling
amount /
mg
抑菌圈直径 Diameter of inhibition zone /mm
大肠杆菌
Escherichia coli
金黄色葡萄球菌
Staphyloccocus aureus
枯草芽孢杆菌
Bacillus subtilis
Fr． 1
5 0. 1 11. 51 ± 0. 67 9. 87 ± 0. 22 10. 16 ± 0. 27
10 0. 2 11. 79 ± 0. 42＊＊ 11. 78 ± 0. 20＊＊ 10. 67 ± 0. 25 *
Fr． 2
5 0. 1 10. 78 ± 0. 60 10. 82 ± 0. 63 10. 72 ± 0. 23
10 0. 2 11. 82 ± 0. 45 12. 29 ± 0. 34 11. 26 ± 0. 48
25 0. 5 17. 75 ± 0. 72cd* 17. 21 ± 0. 13bc* 19. 96 ± 0. 10cd*
Fr． 3
5 0. 1 10. 50 ± 0. 17 11. 63 ± 0. 34 11. 82 ± 0. 27
10 0. 2 13. 40 ± 0. 48 11. 78 ± 0. 24 12. 33 ± 0. 15
25 0. 5 18. 88 ± 0. 59d* 18. 20 ± 0. 52c* 21. 05 ± 0. 55d＊＊
Fr． 4
5 0. 1 10. 20 ± 0. 25 10. 94 ± 0. 37 10. 73 ± 0. 63
10 0. 2 11. 42 ± 0. 40 * 10. 95 ± 0. 76 * 11. 21 ± 0. 62 *
Fr． 5
5 0. 1 10. 69 ± 0. 61 10. 33 ± 0. 42 10. 27 ± 0. 34
10 0. 2 10. 99 ± 0. 13 10. 45 ± 0. 47 10. 70 ± 0. 12
25 0. 5 15. 43 ± 0. 19bc* 15. 20 ± 0. 53b* 16. 72 ± 0. 81bc*
Fr． 6
5 0. 1 9. 22 ± 0. 27 7. 97 ± 0. 18 8. 93 ± 0. 15
10 0. 2 10. 10 ± 0. 24 9. 71 ± 0. 18 9. 90 ± 0. 39
25 0. 5 12. 22 ± 0. 26a* 11. 83 ± 0. 14a* 13. 38 ± 0. 84ab*
Fr． 7
5 0. 1 9. 15 ± 0. 06 8. 50 ± 0. 14 8. 43 ± 0. 11
10 0. 2 9. 66 ± 0. 33 8. 89 ± 0. 09 9. 40 ± 0. 19
25 0. 5 11. 49 ± 0. 49a* 10. 28 ± 0. 14a* 11. 76 ± 0. 61a*
Fr． 8
5 0. 1 9. 44 ± 0. 24 8. 55 ± 0. 31 9. 09 ± 0. 52
10 0. 2 10. 19 ± 0. 31 9. 05 ± 0. 24 9. 45 ± 0. 38
25 0. 5 12. 91 ± 0. 19ab* 12. 46 ± 0. 48a* 12. 86 ± 0. 51ab*
氨苄青霉素钠
Ampicillin sodium
0. 1 0. 001 24. 03 ± 0. 53 21. 86 ± 0. 59 20. 39 ± 1. 61
0. 3 0. 003 27. 79 ± 0. 05 25. 56 ± 1. 02 24. 76 ± 1. 54
0. 5 0. 005 29. 56 ± 0. 37e 27. 77 ± 1. 17d 26. 97 ± 1. 59e
甲醇对照 Methanol — — —
无菌水对照 Sterile water — — —
由于一些组分和单体化合物在有机溶剂和水中
溶解度低，故未对其高浓度的抑菌活性进行测定。
所有样品在低于试验浓度时对 3 种细菌的抑制作用
均不明显。甲醇及无菌水空白对照未观测到抑菌作
用，表明甲醇及无菌水不影响试验结果。
综上所述，综合 20 种样品试验浓度下对 3 种细
菌的离体抑菌作用，乙酸乙酯相组分的抑制作用整
体强于石油醚相和正丁醇相，水相抑菌作用不明显;
Fr． 3 的抑菌作用在乙酸乙酯相 8 个组分中最强;
Fr． 4 中分得的反式香豆酸的抑制作用最强。
2. 2 木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －
葡萄糖苷的抑制肿瘤作用
2. 2. 1 木犀草素 － 6 － C － 洋地黄毒糖苷 － 4 －
O －葡萄糖苷的体外抑制肿瘤作用 以 MTT 法研究
乙酸乙酯相 Fr． 7 组分中分离得到的木犀草素 － 6 －
C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷对 3 种肿瘤
细胞的增殖抑制作用，结果见表 4。结果表明，样品
对子宫颈癌 HeLa 细胞、肝癌 HepG2 细胞及结肠癌
HT-29细胞有体外增殖抑制作用，其 IC50值分别为
592，2 058 和 1 712 mg·L － 1。据报道，5 氟尿嘧啶对
Hela 细胞、HepG2 细胞和 HT-29 细胞体外增殖抑制
作用的 IC50值分别为 10. 5，95. 5 和 135. 2 mg·L
－ 1
(王瑞廷等，2005; 王宁等，2007; 杜伯雨等，
2005)，而样品对 3 种肿瘤细胞体外抑制作用的 IC50
值偏高。
2. 2. 2 木犀草素 － 6 － C － 洋地黄毒糖苷 － 4 －
O －葡萄糖苷的体内抑制肿瘤作用 木犀草素 －
6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷对 H22 荷
瘤小鼠肝、脾和胸腺的影响见表 5。经口给入样品
后，荷瘤小鼠的生存质量没有明显改善，毛色比较光
滑，活动比较正常。由表 5 可看出，木犀草素 － 6 －
C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷高、中及低剂
19
林 业 科 学 51 卷
量的肝指数、脾指数和胸腺指数较阴性对照无显著
差异，但阳性对照与阴性对照差异显著(P ＜ 0. 05)，
说明木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡
萄糖苷对小鼠肝、脾和胸腺等重要免疫器官的质量
无影响。
木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄
糖苷对 H22 荷瘤鼠肝肿瘤的影响见表 6。由表 6 可
以看出，低剂量和中剂量样品对 H22 荷瘤鼠肝肿瘤有
抑制作用，抑制率分别为 2. 9%和 20. 0%，高剂量样
品则对肝肿瘤有一定促进作用，抑制率为 － 13. 7%。
表 3 单体化合物对参试细菌的抑菌效果(24 h)
Tab． 3 Antibacterial effect of compounds on test bacteria (24 h)
样品
Sample
浓度
Concentration /
(mg·mL － 1 )
点样量
Sampling
amount /
mg
抑菌圈直径 Diameter of inhibition zone /mm
大肠杆菌
Escherichia coli
金黄色葡萄球菌
Staphyloccocus aureus
枯草芽孢杆菌
Bacillus subtilis
对羟基苯甲醛
4-hydroxybenzaldehyde
1. 25 0. 025 8. 16 ± 0. 38 8. 09 ± 0. 13 8. 21 ± 0. 22
15 0. 3 11. 17 ± 0. 17a 11. 18 ± 0. 14a 11. 92 ± 0. 12a
25 0. 5 13. 23 ± 0. 08 * 12. 86 ± 0. 33 * 14. 28 ± 0. 36＊＊
7 －羟基 －香豆素
7-hydroxycoumarin
1. 25 0. 025 — — 7. 55 ± 0. 15
10 0. 2 9. 28 ± 0. 08 9. 27 ± 0. 08 9. 43 ± 0. 10
15 0. 3 10. 06 ± 0. 33a* 10. 00 ± 0. 17a* 10. 50 ± 0. 11a*
反式香豆酸
β-coumaric acid
1. 25 0. 025 8. 93 ± 0. 26 9. 83 ± 0. 03 9. 75 ± 0. 25
10 0. 2 18. 46 ± 0. 62 16. 52 ± 0. 34 16. 22 ± 0. 23
15 0. 3 19. 97 ± 0. 74b 17. 42 ± 0. 39b 17. 17 ± 0. 23b
25 0. 5 20. 23 ± 0. 32＊＊ 18. 35 ± 0. 10 * 19. 20 ± 0. 37 *
苜蓿素 Tricin 1. 25 0. 025 8. 67 ± 0. 51 10. 12 ± 0. 03 —
Demethyltorosaflavone 0. 625 0. 012 5 — — —
6 －反式 － (2″ － O － α －鼠李糖基)乙烯
基 － 5，7，3，4 － 四羟基黄酮 6-trans-( 2″-
O-α-
rhamnopyranosyl) ethenyl-5，7，3，4-
tetrahydroxyflavone
1. 25 0. 025 8. 36 ± 0. 36 * 8. 43 ± 0. 36 * 8. 59 ± 0. 18 *
木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －
葡 萄 糖 苷 5， 7， 3-trihydroxy-6-C-β-D-
digitoxopyranosyl-4-O-β-D-
glucopyranosyl flavonoside
0. 35 0. 007 — — —
苜蓿素 － 7 － O －葡萄糖苷
Tricin-7-O-glucoside
5 0. 1 — — —
苜蓿素 － 4 － O －葡萄糖苷
Tricin-4-O-glucoside
0. 8 0. 016 — — —
氨苄青霉素钠
Ampicillin sodium
0. 1 0. 001 24. 03 ± 0. 53 21. 86 ± 0. 59 20. 39 ± 1. 61
0. 3 0. 003 27. 79 ± 0. 05c 25. 56 ± 1. 02c 24. 76 ± 1. 54c
0. 5 0. 005 29. 56 ± 0. 37 27. 77 ± 1. 17 26. 97 ± 1. 59
甲醇对照 Methanol — — —
无菌水对照 Sterile water — — —
表 4 木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷对肿瘤细胞的毒力
Tab． 4 Toxicity of 5，7，3-trihydroxy-6-C-β-D-digitoxopyranosyl-4-O-β-D-glucopyranosyl
flavonoside against tumor cells
肿瘤细胞 Tumor cells 毒力方程 Toxic regression equation IC50 /(mg·L
－ 1 ) 相关系数 Correlation coefficient
Hela 细胞 Hela cells y = 0. 070 0x + 11. 950 8 592 0. 9878
HepG2 细胞 HepG2 cells y = 0. 017 7x + 0. 579 7 2 058 0. 968 5
HT-29 细胞 HT-29 cells y = 0. 025 4x － 2. 841 7 1 712 0. 981 9
29
第 5 期 魏 琦等: 苦竹叶化学成分对细菌及 3 种肿瘤细胞的抑制活性
表 5 木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －葡萄糖苷对 H22 荷瘤鼠肝、脾和胸腺的影响①
Tab． 5 Effects of 5，7，3-trihydroxy-6-C-β-D-digitoxopyranosyl-4-O-β-D-glucopyranosyl
flavonoside on livers，spleens and thymuses of H22 mice with tumor
组别 Groups
剂量
Dose /
(mg·kg － 1 )
肝指数
Liver index /
(mg·g － 1 )
脾指数
Spleen index /
(mg·g － 1 )
胸腺指数
Thymus index /
(mg·g － 1 )
环磷酰胺 CTX 50 65. 03 ± 9． 99 * 5. 68 ± 2． 92 * 0. 56 ± 0． 29 *
阴性对照 Negative control — 70. 63 ± 12． 63 7. 68 ± 2． 38 2. 36 ± 0． 73
高剂量样品 High-dose sample 20 71. 46 ± 12． 11 # 7. 17 ± 2． 78 # 1. 72 ± 0． 70 #
中剂量样品 Middle dose sample 10 71. 80 ± 18． 72 # 8. 54 ± 2． 78 # 2. 37 ± 0． 98 #
低剂量样品 Low dose sample 5 72. 82 ± 12． 93 # 7. 27 ± 2． 82 # 2. 37 ± 0． 85 #
①数值 =平均值 ±标准差( n = 10)，采用 t 检验进行多重比较，列中“* ”表示与阴性对照组相比差异显著(P ＜ 0. 05)，“#”表示与阴性对照
相比差异不显著 ( P ＞ 0. 05)。Values are mean ± SD ( n = 10) ． Values in a line followed by“* ”are significantly different with negative control
(P ＜ 0. 05) ; Values in a line followed by“#”are not significantly different with negative control (P ＞ 0. 05) according to t test．
表 6 木犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O －
葡萄糖苷对 H22 荷瘤鼠肝肿瘤的影响(n = 10)
Tab． 6 Effects of 5，7，3-trihydroxy-6-C-β-
D-digitoxopyranosyl-4-O-β-D-glucopyranosyl
flavonoside on liver tumours of H22
mice with tumor (n = 10)
组别
Groups
剂量
Dose /(mg·kg － 1 )
抑制率
Inhibition rate(% )
环磷酰胺 CTX 50 95. 0
阴性对照 Negative control — —
高剂量样品
High-dose sample
20 － 13. 7
中剂量样品
Middle dose sample
10 20. 0
低剂量样品
Low dose sample
5 2. 9
3 小结与讨论
在试验浓度下，苦竹叶化学成分对大肠杆菌、金
黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌具有一定的抑菌作
用，其中中等极性的乙酸乙酯相组分整体抑菌作用
强于极性较低的石油醚相和极性较高的正丁醇相，
极性最大的水相抑菌作用不明显; 乙酸乙酯相 8 个
组分中中等极性的组分 Fr． 3 的抑菌作用强于其他
组分; 从乙酸乙酯相中等极性组分 Fr． 4 分离得到
的化合物反式香豆酸的抑菌作用在参试各组分和化
合物中最强。由此推测，对于大肠杆菌、金黄色葡萄
球菌及枯草芽孢杆菌，苦竹叶中具有抑菌活性的化
学成分可能集中在中等极性化合物中，极性较高或
较低的化合物抑菌活性较弱，极性很高的水相部分
中 的 化 合 物 基 本 无 抑 菌 活 性。相 同 浓 度 下
(10 mg·mL － 1)，Fr． 4 分离得到反式香豆酸对 3 种细
菌的抑制作用均高于 Fr． 4，反式香豆酸可能是 Fr． 4
组分中的抑菌活性成分之一。
乙酸乙酯相 Fr． 7 组分中分离得到的木犀草
素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷对子
宫颈癌 HeLa 细胞、肝癌 HepG2 细胞及结肠癌 HT-
29 细胞有体外增殖抑制作用，其 IC50值均偏高。木
犀草素 － 6 － C －洋地黄毒糖苷 － 4 － O － 葡萄糖苷
对小鼠肝、脾和胸腺等重要免疫器官的质量无影响，
但中低剂量样品对 H22 荷瘤鼠肝肿瘤有抑制作用，
可能由于免疫系统抗肿瘤作用的发挥还与其他多种
因素有关，诸如致癌因子、体内代谢和基因改变等
(陆再英等，2008)。
参 考 文 献
操海群，岳永德，彭镇华，等 ． 2003．竹提取物对蚜虫生物活性的研究 ．
植物保护，29(2) : 33 － 36．
(Cao H Q，Yue Y D，Peng Z H，et al． 2003． Bioactivities of extracts
from bamboo to Lipaphis erysimi． Plant Protection，29(2) : 33 － 36．
［in Chinese］)
杜伯雨，蒋丽平，仲来福 ． 2005．姜黄素与 5 － 氟尿嘧啶联用对人结肠
癌 HT － 29 细胞增殖的影响 ． 中国药理学与毒理学杂志，19
(1) : 49 － 52．
(Du B Y，Jiang L P，Zhong L F． 2005． Combined inhibitory effects of
curcumin and 5-fluorouracil on growth of human colon carcinoma cell
line HT-29． Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology，19
(1) : 49 － 52． ［in Chinese］)
国家中医药管理局《中华本草》编委会 ． 1999． 中华本草 ． 上海: 上海
科学技术出版社，406．
( State Administration of Traditional Chinese Medicine of the People’s
Ｒepublic of China Editorial Board of“Chinese Herbal Medicine”．
1999． Chinese Herbal Medicine． 1st ed． Shanghai: Shanghai
Science and Technology Press，406． ［in Chinese］)
陆再英，钟南山 ． 2008．内科学 ． 7 版 ．北京: 人民卫生出版社，457．
(Lu Z Y，Zhong N S． 2008． Internal medicine． 7th ed． Beijing:
People’s Medical Publishing House，457． ［in Chinese］)
王慧霞，王忠义，杨聚才，等 ． 2010． 两种竹提取物的体外抗菌活性研
究 ．牙体牙髓牙周病学杂志，20(11) : 642 － 644．
(Wang H X，Wang Z Y，Yang J C，et al． 2010． In vitro study of the
antibacterial activity of two bamboo extracts． Chinese Journal of
Conservative Dentistry，20(11) : 642 － 644． ［in Chinese］)
王 宁，戴朝六，徐志远，等 ． 2007． Celecoxib 与 5 － FU 联用对人肝癌
细胞系 HepG2 细胞增殖的影响 ． 中华肿瘤防治杂志，14 ( 7 ) :
39
林 业 科 学 51 卷
505 － 509．
(Wang N，Dai C L，Xu Z Y，et al． 2007． Combined inhibitory effects of
celecoxib and 5-fluorouracil on growth of human hepatic carcinoma
cell line HepG2． Chinese Journal of Cancer Prevention and
Treatment，14(7) : 505 － 509． ［in Chinese］)
王瑞廷，申兴斌，许 倩，等 ． 2005．黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌 Hela
细胞株体外生长的影响 ．山东医药，45(2) : 15 － 16．
(Wang Ｒ T，Shen X B，Xu Q，et al． 2005． Effect of scutellarria
baicalensis stem-leaf total flavonicl on in vitro growth of human
cervical carcinoma Hela-cell． Shandong Medical Journal，45 ( 2 ) :
15 － 16． ［in Chinese］)
魏 琦 ． 2013．苦竹属竹叶化学成分及其生物活性研究 ． 北京: 中国
林业科学研究院博士学位论文，44 － 47．
( Wei Q． 2013． Chemical components and biological activities of
Pleioblastus Nakai leaves． Beijing: PhD thesis of Chinese Academy
of Forestry，44 － 47． ［in Chinese］)
姚 曦，岳永德，汤 锋，等 ． 2010．苦竹、粉单竹竹叶提取物抗炎活性
研究 ．第九届中国林业青年学术年会论文摘要集，197．
(Yao X，Yue Y D，Tang F，et al． 2010． Anti-inflammatory activities of
Pleioblastus amarus and Bambusa chungii leave extracts． Ninth
China Forestry Youth Academic Conference Abstract Book，197．
［in Chinese］)
易同培，史军义，马丽莎，等 ． 2008．中国竹类图志 ． 1 版 ．北京: 科学出
版社，625．
(Yi T P，Shi J Y，Ma L S，et al． 2008． Chinese Bamboo Illustrated
Ｒecord． 1st ed． Beijing: Science Press，625． ［in Chinese］)
章 晴，花日茂，操海群，等 ． 2010． 苦竹提取物杀虫活性测定及有效
成分初步分离 ．安徽农业大学学报，37(1) : 107 － 110．
(Zhang Q，Hua Ｒ M， Cao H Q， et al． 2010． Determination of
insecticidal activity of Phyllostachys amarus extract and preliminary
purification of its insecticidal ingredients． Journal of Anhui
Agricultural University，37(1) : 107 － 110． ［in Chinese］)
中国药材公司 ． 1994． 中国中药资源志要 ． 1 版 ． 北京: 科学出版社，
1433 － 1460．
(China national group corporation of traditional ＆ herbal medicine．
1994． Compendium of Chinese Medicinal Material Ｒesources． 1st
ed． Beijing: Science Press，1433 － 1460． ［in Chinese］)
Cao H Q，Yue Y D，Peng Z H，et al． 2004． Evaluation of extracts from
bamboo for biological activity against Culex pipiens pallens．
Entomologia Sinica，11(4) : 267 － 273．
Guo X F，Yue Y D，Tang F，et al． 2008． Flavonoids from the leaves of
Pleioblastus argenteastriatus． Journal of Asian Natural Products
Ｒesearch，10 (9) : 903 － 907．
Wang H B，Yao H，Bao G H，et al． 2004． Flavone glucosides with
immunomodulatory activity from the leaves of Pleioblastus amarus．
Phytochemistry，65: 969 － 974．
(责任编辑 朱乾坤)
49