全 文 ：第 源怨 卷 第 圆 期
圆 园 员 猿 年 圆 月
林 业 科 学
杂悦陨耘晕栽陨粤 杂陨蕴灾粤耘 杂陨晕陨悦粤耘 灾燥造郾 源怨袁晕燥郾 圆云藻遭援 袁圆 园 员 猿
凿燥蚤院员园援员员苑园苑 辕 躁援员园园员鄄苑源愿愿援圆园员猿园圆园远
收稿日期院 圆园员圆 原 园苑 原 圆缘曰 修回日期院 圆园员圆 原 员员 原 员缘遥
基金项目院 国家林业局野怨源愿冶引进项目渊圆园园怨鄄源鄄圆源冤曰 国家自然科学基金青年项目渊猿园怨园员员缘远袁猿员员苑园远员怨冤曰 江苏高校自然科学基金项目
渊园怨运允粤圆圆园园园员冤曰 江苏省高校优势学科建设工程资助项目遥
鄢施季森为通讯作者遥
植物磺肽素在杂交鹅掌楸体胚发生中的作用鄢
陈金慧摇 张艳娟摇 吴亚云摇 王鹏凯摇 王光萍摇 施季森
渊南京林业大学森林资源与环境学院摇 林木遗传与生物技术省部共建教育部重点实验室摇 南京 圆员园园猿苑冤
摘摇 要院 摇 植物磺肽素渊孕杂运冤袁是近年来发现的一种新型植物肽类生长调节物质袁具有促进单细胞的分裂增殖等生
理功能遥 以杂交鹅掌楸未成熟胚来源的体胚发生体系为材料袁探索 孕杂运鄄琢 在植物体胚发生中的作用遥 研究发现
孕杂运鄄琢能够促进细胞分裂和增殖袁有利于胚性细胞的形成遥 在杂交鹅掌楸体胚发生初期添加 园郾 员 皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢
可提高未成熟胚的脱分化率并能有效改善培养细胞的状态曰 园郾 缘 皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢能够促进胚性愈伤组织的形成和
增殖曰 体胚形成后期添加 园郾 愿 皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢利于其正常发育以及再生植株的培养遥
关键词院 摇 杂交鹅掌楸曰 体细胞胚胎发生曰 胚性愈伤组织曰 再生植株曰 植物磺肽素
中图分类号院 杂苑员愿郾 源远摇 摇 摇 文献标识码院 粤摇 摇 摇 文章编号院 员园园员 原 苑源愿愿渊圆园员猿冤园圆 原 园园猿猿 原 园远
耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 孕澡赠贼燥泽怎造枣燥噪蚤灶藻 燥灶 贼澡藻 杂燥皂葬贼蚤糟 耘皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣
蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽渊蕴援 糟澡蚤灶藻灶泽藻 伊 蕴援 贼怎造蚤责蚤枣藻则葬冤
悦澡藻灶 允蚤灶澡怎蚤摇 在澡葬灶早 再葬灶躁怎葬灶摇 宰怎 再葬赠怎灶摇 宰葬灶早 孕藻灶早噪葬蚤摇 宰葬灶早 郧怎葬灶早责蚤灶早摇 杂澡蚤 允蚤泽藻灶
渊运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 云燥则藻泽贼 郧藻灶藻贼蚤糟泽 葬灶凿 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 燥枣 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 耘凿怎糟葬贼蚤燥灶摇
悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼 砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁晕葬灶躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园猿苑冤
粤遭泽贼则葬糟贼院 摇 孕澡赠贼燥泽怎造枣燥噪蚤灶藻 渊 孕杂运冤袁 葬 灶藻憎 贼赠责藻 燥枣 责造葬灶贼 早则燥憎贼澡 则藻早怎造葬贼燥则袁 澡葬泽 皂怎造贼蚤责造藻 遭蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 遭藻泽蚤凿藻泽
责则燥皂燥贼蚤灶早 泽蚤灶早造藻 糟藻造造 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶援 陨灶 贼澡蚤泽 责葬责藻则袁 憎藻 蚤皂增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 贼澡藻 则燥造藻 燥枣 孕杂运鄄琢 凿怎则蚤灶早 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣
蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽渊蕴援 糟澡蚤灶藻灶泽藻 伊 蕴援 贼怎造蚤责蚤枣藻则葬冤 怎泽蚤灶早 蚤皂皂葬贼怎则藻 扎赠早燥贼蚤糟 藻皂遭则赠燥泽 葬泽 藻曾责造葬灶贼泽援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼
孕杂运鄄琢 憎葬泽 葬遭造藻 贼燥 蚤皂责则燥增藻 糟藻造造 凿蚤增蚤泽蚤燥灶 葬灶凿 责则燥造蚤枣藻则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 蚤灶凿怎糟藻 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟藻造造泽 枣燥则皂葬贼蚤燥灶援 粤贼 贼澡藻 藻葬则造赠 泽贼葬早藻 燥枣
泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽袁 园郾 员 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 贼澡藻 则葬贼蚤燥 燥枣 糟葬造造怎泽 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 枣则燥皂 藻曾责造葬灶贼泽 葬灶凿 蚤皂责则燥增藻凿 糟藻造造 泽贼葬贼藻曰
园郾 缘 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 蚤灶凿怎糟藻凿 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽 枣燥则皂葬贼蚤燥灶曰 葬灶凿 园郾 愿 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 憎葬泽 蚤灶 枣葬增燥则 燥枣 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥
凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 早则燥憎贼澡 燥枣 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 责造葬灶贼造藻贼泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院 摇 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽曰 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽曰 藻皂遭则赠燥早藻灶蚤糟 糟葬造造怎泽曰 责造葬灶贼造藻贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶曰 孕杂运
摇 摇 员怨怨远 年袁 酝葬贼泽怎遭葬赠葬泽澡蚤 和 杂葬噪葬早葬皂蚤 用芦笋
渊粤泽责葬则葬早怎泽 燥枣枣蚤糟蚤灶葬造蚤泽冤叶肉细胞悬浮培养时袁发现其
中存在一种活性因子袁通过高压液相色谱渊匀孕蕴悦冤
和快速原子轰击质谱法渊酝杂冤鉴定了其分子结构袁命
名为植物硫酸酯化激动素渊 孕杂运冤袁后来研究发现
孕杂运包括 圆 种短肽类物质要要要磺化的四肽 孕杂运鄄茁和
五肽 孕杂运鄄琢渊酝葬贼泽怎遭葬赠葬泽澡蚤 藻贼 葬造援袁 员怨怨远冤遥 孕杂运 又称
植物磺肽素袁近几年对于 孕杂运鄄琢 的研究较多袁研究
表明 孕杂运鄄琢 在植物的生长尧发育尧生殖以及对外界
环境的响应中具有重要的调节作用袁并且与细胞生
长素及分裂素介导的信号转导途径密切相关
渊酝葬贼泽怎遭葬赠葬泽澡蚤 藻贼 葬造援袁 员怨怨愿冤遥 孕杂运鄄琢 还具有促进细
胞分裂尧分化袁调节花粉萌发袁提高植物抗性袁促进遗
传转化以及刺激次生物质产生等作用渊关春峰等袁
圆园园缘曰 杨书珍等袁 圆园园苑曰 陈德西等袁 圆园员园冤遥 另外通
过对水稻 渊 韵则赠扎葬 泽葬贼蚤增葬 冤 及拟南芥 渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼澡葬造蚤葬灶葬冤中 孕杂运鄄琢 基因的克隆研究发现袁无论是在
植物生长中还是离体培养中袁孕杂运鄄琢 的存在都能有
效促进细胞增殖渊再葬灶早 藻贼 葬造援袁 员怨怨怨曰 圆园园员冤遥
体细胞胚胎发生技术被认为是 圆员 世纪木本植
物快速高效繁殖的最有效手段渊施季森袁 圆园园园冤遥 近
十多年来杂交鹅掌楸 渊 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 糟澡蚤灶藻灶泽藻 伊 蕴援
贼怎造蚤责蚤枣藻则葬 冤尧 落 叶 松 渊 蕴葬则蚤曾 冤尧 马 尾 松 渊 孕蚤灶怎泽
皂葬泽泽燥灶蚤葬灶葬冤等多种重要树种成功建立了体细胞胚
胎发生体系并逐渐实现了产业化应用渊陈金慧等袁
圆园园猿曰 齐力旺等袁 圆园园园曰 施季森等袁 圆园员园冤袁但是大
林 业 科 学 源怨 卷摇
部分木本植物体胚发生体系还很难建立起来遥 有研
究表明植物磺肽素能够提高植物的体细胞胚胎发生
能力袁如能够成功促进野胡萝卜 渊阅葬怎糟怎泽 糟葬则燥贼葬冤
渊运燥遭葬赠葬泽澡蚤 藻贼 葬造援袁 员怨怨怨曰 匀葬灶葬蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园园冤尧日本柳
杉渊悦则赠责贼燥皂藻则蚤葬 躁葬责燥灶蚤糟葬冤 渊 陨早葬泽葬噪蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园猿冤的体
胚发生遥 但是关于 孕杂运 对阔叶树体细胞胚胎发生
能力的影响还未见报道遥
杂交鹅掌楸是于 员怨远猿 年由我国著名林木遗传
育种学家叶培忠教授培育袁它表现出明显的杂种优
势袁广泛用于园林绿化和山地造林遥 本研究以已建
立的杂交鹅掌楸体胚发生体系为基础袁向不同发育
阶段的培养基中添加一定浓度的 孕杂运鄄琢袁通过细胞
学观察确定 孕杂运鄄琢 对杂交鹅掌楸体胚发生能力的
影响遥 本研究能够为杂交鹅掌楸优良种质资源的规
模化应用提供基础袁并且可能有助于其他木本植物
高频体细胞胚胎发生体系的建立遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
试验材料分别为 圆园园苑 年和 圆园园怨 年建立的杂交
鹅掌楸体胚发生体系遥 自 圆 个年度的 苑 月 员 日起袁
每周从南京林业大学下蜀林场采集未成熟的杂交鹅
掌楸聚合翅果袁连续采集 苑 次袁样品采集后按照杂交
组合以及采集批次注明基因型置于冰箱备用遥 体胚
诱导时将聚合翅果剖开袁取单粒未成熟胚进行体胚
诱导遥
研究中所使用的 孕杂运鄄琢 为上海华肽生物科技
有限公司合成尧纯度为 怨苑郾 缘豫的晶体遥 用双蒸水定
容为浓度 园郾 愿 皂早窑蕴 原员的母液袁然后分别配成不同浓
度梯度的培养基遥
员郾 圆摇 研究方法
以已经建立的杂交鹅掌楸体胚发生体系为基础
渊陈金慧等袁 圆园园猿冤袁参照文献渊陈志等袁 圆园园苑曰 李婷
婷等袁 圆园园苑曰 施季森等袁 圆园员员冤描述的方法进行体细
胞胚的诱导袁具体过程包括愈伤组织诱导尧悬浮培养
体系建立尧体细胞胚的诱导尧体胚的发育及萌发等遥
员郾 圆郾 员摇 孕杂运鄄琢 对未成熟胚脱分化率的影响摇 外植
体愈伤组织诱导培养基为 猿 辕 源酝杂 垣 圆袁源鄄阅 圆郾 园 皂早窑
蕴 原员 垣 远鄄月粤 园郾 圆缘 皂早窑蕴 原员 垣蔗糖 猿园 早窑蕴 原员 垣琼脂 缘郾 园
早窑蕴 原员袁向其中添加一定浓度的 孕杂运鄄琢渊园袁园郾 员袁园郾 缘
皂早窑蕴 原员冤袁记录下能够形成愈伤组织的未成熟胚数
量以及接种的未成熟胚总量袁观察其是否有利于提
高外植体的脱分化率遥 未成熟胚的脱分化率为每皿
形成愈伤组织块数 辕接种的未成熟胚外植体总个数袁
统计时间为 员 个生长周期渊圆愿 天冤遥
员郾 圆郾 圆摇 孕杂运鄄琢 对愈伤组织细胞状态的影响摇 固体
与液体悬浮培养使用相同的培养基袁具体配方为
猿 辕 源酝杂 垣圆袁源鄄阅 圆郾 园 皂早窑蕴 原员 垣 远鄄月粤 园郾 圆缘 皂早窑蕴 原员 垣
蔗糖 猿园 早窑蕴 原员遥 分别向固体培养基渊每升培养基加
入 缘郾 园 早的琼脂冤和液体培养基渊不加琼脂冤中添加
适量的 孕杂运鄄琢渊园袁园郾 员袁园郾 缘 皂早窑蕴 原员 冤袁观察细胞状态
的变化袁推测 孕杂运鄄琢对细胞状态的影响遥
员郾 圆郾 猿摇 孕杂运鄄琢 对胚性愈伤组织发生的影响摇 不同
浓度的 孕杂运鄄琢渊园袁园郾 员袁园郾 缘 皂早窑蕴 原员冤加入胚性愈伤组
织发生培养基中袁配方为 酝杂 垣圆袁源鄄阅 员郾 园 皂早窑蕴 原员 垣
远鄄月粤 园郾 圆 皂早窑蕴 原员 垣 蔗糖 猿园 早窑蕴 原员 垣 琼脂 缘郾 园
早窑蕴 原员遥 员 个继代周期后统计具备胚性愈伤组织细
胞特点的愈伤组织块数袁观察其是否提高胚性愈伤
组织的发生频率遥 胚性愈伤组织发生频率为胚性愈
伤组织块数 辕愈伤组织总块数遥
员郾 圆郾 源摇 不同 孕杂运鄄琢浓度对体胚诱导和发育的影响
将悬浮培养的杂交鹅掌楸细胞袁按相对应的 孕杂运鄄琢浓
度渊园袁园郾 园愿袁园郾 愿袁源郾 园袁愿郾 园 皂早窑蕴 原员冤袁分别置于培养基粤
渊酝杂 垣粤月粤 缘郾 园 皂早窑蕴 原员 垣 郧粤 圆郾 园 皂早窑蕴 原员 垣蔗糖 猿园
早窑蕴 原员 垣活性炭渊粤糟冤圆 早窑蕴 原员 垣琼脂 缘郾 园 早窑蕴 原员 冤和培
养基 月渊酝杂 垣 运栽 园郾 缘 皂早窑蕴 原员 垣蔗糖 猿园 早窑蕴 原员 垣 粤糟 圆
早窑蕴 原员 垣琼脂 缘郾 园 早窑蕴 原员冤渊陈金慧等袁 圆园园猿冤袁观察不
同 孕杂运鄄琢浓度下培养细胞的发育情况袁记录下体胚发
生过程中各阶段渊李婷婷等袁 圆园园苑冤的细胞团总数袁球
型胚尧心型胚尧鱼雷胚尧子叶胚以及畸形胚的个数袁确
定 孕杂运鄄琢对体胚诱导的影响遥
员郾 圆郾 缘摇 不同 孕杂运鄄琢浓度对体胚萌发和植株再生的
影响 摇 体细胞胚的成熟培养利用成熟培养基院
酝杂 垣粤月粤 员郾 园 皂早窑蕴 原员 垣蔗糖 猿园 早窑蕴 原员 垣 粤糟 圆 早窑蕴 原员 垣
琼脂 缘郾 园 早窑蕴 原员袁在培养基中添加对应浓度的 孕杂运鄄琢
渊园袁园郾 园愿袁园郾 愿袁源郾 园袁愿郾 园 皂早窑蕴 原员 冤袁将上述早期子叶
胚接种于成熟培养基上进行培养遥 将发育至子叶胚
时期的体胚转接到萌发培养基袁即不含任何激素的
酝杂基本培养基中袁观察体细胞胚的萌发率遥
在体胚发育及萌发过程中袁以子叶肥厚尧乳白色
渊象牙色冤尧浅黄色到黄绿色不透明袁下胚轴粗壮并
延伸成胚根尧长度为 缘 耀 愿 皂皂 的体胚作为杂交鹅掌
楸成熟体胚的标准袁观察记录各处理下体胚的生长
状况袁分别观察记录成熟胚总数尧在萌发过程中再生
植株数以及最早成苗时间袁以此来统计体胚成熟率
并分析 孕杂运鄄琢的作用遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 孕杂运鄄琢对未成熟胚脱分化率的影响
从图 员 中可以看出袁加入 孕杂运鄄琢 后袁未成熟胚
源猿
摇 第 圆 期 陈金慧等院 植物磺肽素在杂交鹅掌楸体胚发生中的作用
的脱分化率明显提高袁不同基因型的诱导率存在较
大的差别袁园郾 员 皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢 即可有效提高未成
熟胚的愈伤组织诱导率遥
图 员摇 孕杂运鄄琢对杂交鹅掌楸不同基因型的
未成熟胚脱分化率的影响
云蚤早援 员摇 栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 孕杂运鄄琢 燥灶 凿藻凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 枣则藻择怎藻灶糟赠 燥枣
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 早藻灶燥贼赠责藻泽 燥枣 蚤皂皂葬贼怎则葬造 扎赠早燥贼藻 藻皂遭则赠燥泽 燥枣
蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽
圆郾 圆摇 孕杂运鄄琢对细胞状态的影响
在研究中分别对液体悬浮培养和固体培养的细
胞进行 孕杂运鄄琢 的对照试验袁在显微镜下观察细胞状
态袁发现在有些基因型中适当浓度的 孕杂运鄄琢 有利于
胚性细胞的形成遥 在 孕杂运鄄琢 的作用下细胞内含物
变多袁细胞形状变得规则遥 在研究中发现从未成熟
胚诱导来的愈伤组织中会出现一些快速分裂的愈伤
组织袁它们的增殖能力很强袁在细胞形态结构上类似
于非胚性细胞袁加入 孕杂运鄄琢 后能够抑制这种非胚性
细胞的发生袁促进胚性细胞的形成和增殖遥
图 圆 中的 粤袁月袁悦 分别是在固体培养中加入 园袁
园郾 员袁 园郾 缘 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢时的细胞状态袁阅袁耘袁云是相
应 孕杂运鄄琢浓度下悬浮培养条件下的细胞状态遥 从
图中可以看出袁加入 孕杂运鄄琢 后细胞最显著的变化就
是细胞团变得紧密袁内含物增多袁细胞体积变小袁细
胞呈圆球形遥 这些变化符合杂交鹅掌楸胚性愈伤组
织细胞的特点渊陈金慧等袁 圆园员圆冤袁说明 孕杂运鄄琢 有助
于胚性细胞的形成遥
图 圆摇 不同浓度 孕杂运鄄琢处理下的杂交鹅掌楸细胞状态
云蚤早援 圆摇 栽澡藻 糟藻造造 泽贼葬贼藻 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽 糟怎造贼怎则藻凿 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 孕杂运鄄琢
粤袁 月袁 悦院 孕杂运鄄琢 园袁 园郾 员袁 园郾 缘 皂早窑蕴 原员下固体培养的细胞曰 阅袁 耘袁 云院 孕杂运鄄琢 园袁园郾 员袁 园郾 缘 皂早窑蕴 原员下液体培养的细胞遥
粤袁 月袁 悦院 悦藻造造泽 蚤灶 泽燥造蚤凿 皂藻凿蚤怎皂 憎蚤贼澡 园袁 园郾 员袁 园郾 缘 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢曰 阅袁 耘袁 云院 悦藻造造泽 蚤灶 造蚤择怎蚤凿 皂藻凿蚤怎皂 憎蚤贼澡 园袁 园郾 员袁
园郾 缘 皂早窑蕴 原员孕杂运鄄琢援
圆郾 猿摇 不同浓度 孕杂运鄄琢对诱导胚性愈伤组织的影响
从图 猿 中可以看出袁加入 孕杂运鄄琢 可以促进胚性
愈伤组织的诱导袁孕杂运鄄琢 对不同基因型的细胞作用
存在差异遥 整体上来看袁园郾 缘 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 的作用
优于 园郾 员 皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢袁在这 圆 种浓度的 孕杂运鄄琢
作用下袁胚性愈伤组织的诱导率相对于对照都有明
显提高袁其中对基因型 圆 伊 远 和 猿 伊 远 效果最为显著遥
圆郾 源摇 不同浓度 孕杂运鄄琢对杂交鹅掌楸体胚形成的
影响
由液体培养转固体培养后袁跟踪观察各种浓度
孕杂运鄄琢处理细胞的生长发育情况遥 当转到固体体胚
诱导培养基上培养 猿园 天后袁低浓度 孕杂运鄄琢渊园袁园郾 园愿
皂早窑蕴 原员冤处理的细胞袁只有少数为透明或半透明的
晶莹尧湿润的胚性细胞团袁其周围愈伤组织水分含量
缘猿
林 业 科 学 源怨 卷摇
图 猿摇 不同浓度 孕杂运鄄琢对诱导杂交鹅掌楸胚性愈伤组织的影响
云蚤早援 猿摇 栽澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 孕杂运鄄琢 燥灶 藻皂遭则赠燥灶蚤糟 糟葬造造怎泽
蚤灶凿怎糟贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽
下降袁大部分颜色变深袁呈浅褐色褪变袁增殖速度不
高遥 少数的胚性细胞团需每 源缘 天用相同培养基继
代培养 员 次袁经 员 耀 圆 次继代以后袁胚性细胞团变白
或淡黄色袁逐渐发育成为成熟体胚遥
与低浓度 孕杂运鄄琢 处理的细胞相比袁经适宜浓
度的 孕杂运鄄琢渊园郾 愿 皂早窑蕴 原员 冤处理的细胞袁诱导出的
体细胞胚大部分形态正常袁色泽鲜亮遥 在分化培
养基上袁胚性细胞继续分裂袁到第 员缘 天左右时袁能
观察到淡黄色的球形胚渊图 源粤冤曰 猿园 天时袁体细胞
胚继续发育袁数量多袁也容易从愈伤组织上分离出
来渊图 源月冤曰 第 源缘 天时袁已经有部分子叶胚开始萌
发渊图 源悦冤遥
随着 孕杂运鄄琢浓度升高渊源郾 园 皂早窑蕴 原员冤袁会诱导出
一些畸形的体细胞胚袁表现为发育停止渊图 缘粤冤袁 多
图 源摇 孕杂运鄄琢浓度 园郾 愿 皂早窑蕴 原员时杂交鹅掌楸的细胞状态
云蚤早援 源摇 悦藻造造 泽贼葬贼藻 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽 泽怎责责造藻皂藻灶贼藻凿 憎蚤贼澡 园郾 愿 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢
粤院 培养 员缘 天后的球型胚曰 月院 培养 猿园 天后的鱼雷胚及早期子叶胚曰 悦院 培养 源缘 天的成熟子叶胚遥
粤院 郧造燥遭怎造葬则 泽贼葬早藻 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥泽 糟怎造贼怎则藻凿 枣燥则 员缘 凿葬赠泽曰 月院 栽燥则责藻凿燥 葬灶凿 藻葬则造赠 糟燥贼赠造藻凿燥灶 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥泽 糟怎造贼怎则藻凿 枣燥则 猿园 凿葬赠泽曰
悦院 悦燥贼赠造藻凿燥灶 泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥泽 糟怎造贼怎则藻凿 枣燥则 源缘 凿葬赠泽援
数体胚不能发育至子叶胚时期袁并伴随褐化现象的
产生曰 当 孕杂运鄄琢浓度达到 愿郾 园 皂早窑蕴 原员时袁体细胞胚
的发育完全停止袁无任何子叶胚产生渊图 缘月冤遥 以上
研究结果说明尽管 孕杂运鄄琢 对体胚诱导有促进作用袁
但浓度不能过高遥
图 缘摇 高浓度 孕杂运鄄琢培养 猿园 天后的杂交鹅掌楸细胞状态
云蚤早援 缘摇 杂燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥泽 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽 泽贼燥责责蚤灶早 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼
葬枣贼藻则 猿园 凿葬赠泽 糟怎造贼怎则藻凿 憎蚤贼澡 澡蚤早澡 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 孕杂运鄄琢
粤院 源郾 园 皂早窑蕴 原员 曰 月院 愿郾 园 皂早窑蕴 原员 援
摇 摇 体胚发生结果如表 员 所示院 高浓度渊园郾 愿袁源郾 园袁
愿郾 园 皂早窑蕴 原员冤孕杂运鄄琢 处理后袁体胚成熟率尧体胚发生
率高于低浓度渊园郾 园愿 皂早窑蕴 原员 冤 孕杂运鄄琢 处理和未经
孕杂运鄄琢处理过的细胞曰 园郾 愿 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 处理的胚
性细胞团其体胚发生率尧成熟率均最高袁畸形胚发
生率最低曰 未经 孕杂运鄄琢 处理的细胞畸形胚发生率
较高遥
圆郾 缘摇 不同浓度 孕杂运鄄琢对固体培养的杂交鹅掌楸细
胞体胚萌发的影响
从固体培养条件下体胚的萌发及植株再生结果
可以看出袁体胚再生植株萌发率尧成苗速度等与
孕杂运鄄琢的浓度相关袁当浓度为 园郾 愿 皂早窑蕴 原员时成苗速
度最快遥 推测与 孕杂运鄄琢 促进细胞的分裂能力有关遥
因此袁在保证出苗速度和质量的情况下袁使用 园郾 愿
皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢有利于体胚的成熟和萌发袁提高体胚
植株再生率袁并能显著促进再生植株生长渊表 圆冤遥
远猿
摇 第 圆 期 陈金慧等院 植物磺肽素在杂交鹅掌楸体胚发生中的作用
表 员摇 不同 孕杂运鄄琢浓度下杂交鹅掌楸细胞固体培养 猿园 天的体胚发生情况
栽葬遭援 员摇 杂燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽 葬枣贼藻则 猿园 凿葬赠泽 糟怎造贼怎则藻凿 蚤灶
泽燥造蚤凿 皂藻凿蚤怎皂 憎蚤贼澡 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶泽 燥枣 孕杂运鄄琢
孕杂运鄄琢浓度孕杂运鄄琢糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕
渊皂早窑蕴 原员 冤
观察细胞渊团冤数晕怎皂遭藻则 燥枣糟葬造造怎泽
球形胚渊个冤数晕怎皂遭藻则 燥枣早造燥遭怎造葬则藻皂遭则赠燥泽
心形和鱼雷
形胚渊个冤数晕怎皂遭藻则 燥枣 澡藻葬则贼葬灶凿 贼燥则责藻凿燥泽贼葬早藻 藻皂遭则赠燥泽
畸形胚渊个冤数晕怎皂遭藻则 燥枣葬遭灶燥则皂葬造藻皂遭则赠燥泽
成熟胚渊个冤数晕怎皂遭藻则 燥枣皂葬贼怎则藻藻皂遭则赠燥泽
体胚发
生率杂燥皂葬贼蚤糟藻皂遭则赠燥早藻灶藻泽蚤泽枣则藻择怎藻灶糟赠渊豫 冤
体胚成
熟率云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣泽燥皂葬贼蚤糟 藻皂遭则赠燥皂葬贼怎则葬贼蚤燥灶渊豫 冤
畸形胚
发生率云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣葬遭灶燥则皂葬造 泽燥皂葬贼蚤糟藻皂遭则赠燥泽渊豫 冤
园 缘愿缘 员苑 园 猿园 园 圆郾 怨园 园 缘援 员猿
园郾 园愿 缘怨怨 源愿 圆源 员缘 苑怨 圆苑郾 苑员 员猿郾 员愿 圆郾 缘园
园郾 愿 远员圆 苑愿 缘缘 猿 猿圆圆 苑源郾 愿猿 缘圆郾 远员 园郾 源怨
源郾 园 远园员 苑员 源远 远 圆苑缘 远远郾 圆圆 源缘郾 苑远 园郾 怨怨
愿郾 园 缘怨远 远猿 源怨 员员 圆缘猿 远猿郾 园怨 源圆郾 源源 员郾 愿缘
表 圆摇 孕杂运鄄琢处理过的杂交鹅掌楸细胞的再生植株转化情况淤
栽葬遭援 圆摇 孕造葬灶贼造藻贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴蚤则蚤燥凿藻灶凿则燥灶 澡赠遭则蚤凿泽 葬枣贼藻则 糟怎造贼怎则藻凿 憎蚤贼澡 孕杂运鄄琢
孕杂运鄄琢浓度孕杂运鄄琢 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 辕
渊皂早窑蕴 原员 冤
观察胚渊个冤数晕怎皂遭藻则 燥枣燥遭泽藻则增藻凿 藻皂遭则赠燥泽
再生植株渊株冤数晕怎皂遭藻则 燥枣则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼造藻贼泽
再生植株率云则藻择怎藻灶糟赠 燥枣则藻早藻灶藻则葬贼藻凿 责造葬灶贼造藻贼泽渊豫 冤
最早观察到苗的时间栽澡藻 贼蚤皂藻 燥枣 责造葬灶贼造藻贼枣燥则皂葬贼蚤燥灶 辕 憎藻藻噪
成苗速度砸藻造葬贼蚤增藻 泽责藻藻凿 枣燥则责造葬灶贼造藻贼 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶
园 源苑 员源 圆怨郾 苑愿 怨 垣
园郾 园愿 员远远 员员苑 苑园郾 源愿 苑 垣 垣
园郾 愿 源缘愿 猿园怨 远苑郾 源远 源 垣 垣 垣 垣
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愿 猿苑远 圆圆愿 远园郾 远猿 缘 垣 垣 垣
摇 摇 淤 垣越多表示越快袁将 孕杂运鄄琢 园 皂早窑蕴 原员时的成苗速度记为 垣 袁其他以此作为基准遥 栽澡藻 皂燥则藻 耶 垣 爷 贼澡藻 枣葬泽贼藻则 则藻早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼造藻贼泽袁 憎澡蚤造藻糟燥皂责葬则藻凿 憎蚤贼澡 园 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢渊 垣 冤援
猿摇 讨论
猿郾 员摇 孕杂运鄄琢对杂交鹅掌楸胚性细胞形成的作用
在用杂交鹅掌楸的未成熟胚诱导愈伤组织过程
中会出现未成熟胚发育停滞等现象袁无法获得愈伤
组织曰 另外在其体胚发生的研究中袁胚性愈伤组织
的获得率也相对较低袁需要通过一些处理使得原本
非胚性的愈伤组织细胞转变为胚性愈伤组织渊陈金
慧等袁 圆园园猿冤遥 本研究拟通过添加 孕杂运鄄琢 提高愈伤
组织及胚性愈伤组织的诱导率遥 本研究发现在外植
体诱导愈伤组织的过程中袁低浓度的 孕杂运鄄琢 渊园郾 员
皂早窑蕴 原员冤能够有效改善外植体的响应袁提高愈伤组
织的诱导率曰 在胚性愈伤组织形成和增殖阶段袁园郾 缘
皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢 能够有效促进杂交鹅掌楸培养细
胞的增殖袁有利于胚性愈伤组织的形成遥
在悬浮培养体系中加入 孕杂运鄄琢 有利于改善杂
交鹅掌楸的细胞状态袁而 孕杂运鄄琢 的使用浓度对细胞
状态的影响并不是很大袁加入低浓度的 孕杂运鄄琢 即能
有利于后续的体细胞胚的形成遥 在含有 孕杂运鄄琢 的
液体培养基中悬浮培养 苑 天后袁对杂交鹅掌楸培养
细胞进行显微镜观察发现袁未添加 孕杂运鄄琢 的液体培
养基中培养的细胞内含物少袁有较大的液泡袁以非胚
性细胞居多曰 而在 园郾 愿 皂早窑蕴 原员 孕杂运鄄琢 的液体培养
基中悬浮培养的细胞具有胞质浓厚尧淀粉粒多尧核仁
区域着色较深等胚性细胞的特点 渊陈新建等袁
圆园园缘冤遥 由此说明在阔叶树的体细胞胚胎发生研究
中袁添加适当浓度的 孕杂运鄄琢 有助于胚性细胞的
形成遥
猿郾 圆摇 孕杂运鄄琢对杂交鹅掌楸体胚发生的作用
孕杂运 能够有效促进日本柳杉 渊 陨早葬泽葬噪蚤 藻贼 葬造援袁
圆园园猿冤以及胡萝卜渊匀葬灶葬蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园园冤的体胚发生袁
还能有效改善细胞状态提高遗传转化效率
渊酝葬贼泽怎遭葬赠葬泽澡蚤 藻贼 葬造援袁 圆园园源冤等遥 而杂交鹅掌楸的体
细胞胚的发育可大致分为单细胞尧细胞团尧胚性细胞
团尧球形原胚尧球形胚尧鱼雷胚及子叶胚等阶段遥 本
研究表明 孕杂运鄄琢 的处理除了能够提高未成熟胚的
脱分化率及促进胚性愈伤组织的形成外袁还能够有
效抑制次生胚和畸形胚的产生遥 另外袁添加 园郾 愿
皂早窑蕴 原员的 孕杂运鄄琢还能够促进体细胞胚的成熟和萌
发袁提高了杂交鹅掌楸体细胞胚的植株再生率袁促进
了体胚再生植株的生长遥
以上研究结果表明袁孕杂运鄄琢 的存在确实能够促
进杂交鹅掌楸的体细胞胚胎发生袁这一研究利于进
一步改善和优化木本植物的体胚发生技术体系袁从
而对其进行更深入的理论研究和规模化应用遥
参 考 文 献
陈德西袁李仕贵袁向运佳袁等援 圆园员园援 植物硫激素 孕杂运鄄琢 在水稻花药
培养中作用初步研究援西南农业学报袁圆猿渊缘冤院 员源源苑 原 员源缘园援
苑猿
林 业 科 学 源怨 卷摇
陈金慧袁施季森袁诸葛强袁等援 圆园园猿援杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生研究援
林业科学袁猿怨渊源冤院 源怨 原 缘源援
陈金慧袁张艳娟袁李婷婷袁等援 圆园员圆援杂交鹅掌楸体胚发生过程的起源
及发育过程援南京林业大学学报袁猿远渊员冤院 员远 原 圆园援
陈新建袁杨艳会袁陈军营袁等援 圆园园缘援 植物新型肽类生长调节物质要植
物磺肽素援植物生理学通讯袁源员渊缘冤院 远远怨 原 远苑猿援
陈摇 志袁陈金慧袁李婷婷袁等援 圆园园苑援杂交鹅掌楸胚性细胞悬浮系的建
立援分子植物育种袁缘渊员冤院 员猿苑 原 员源园援
关春峰袁葛志强袁元英进援 圆园园缘援植物肽生长因子 孕杂运鄄琢的研究进展援
植物学通报袁圆圆渊月园愿冤院 苑缘 原 愿员援
李婷婷袁施季森袁陈金慧袁等援 圆园园苑援 悬浮培养条件下体细胞胚发育的
同步化调控援分子植物育种袁缘渊猿冤院 源猿远 原 源源圆援
齐力旺袁韩一凡袁李摇 玲袁等援 圆园园园援华北落叶松体细胞胚胎发生及遗
传转化实验系统的建立援 实验生物学报袁猿猿渊源冤院 猿缘苑 原 猿远缘援
施季森援 圆园园园援 迎接 圆员 世纪现代林木生物技术育种的挑战援 中国农
业科技导报袁圆渊员冤院 猿远 原 源员援
施季森袁李婷婷袁陈金慧援 圆园员员援 杂交鹅掌楸体胚发生同步化控制方
法援中国专利院 悦晕员园圆园猿苑愿怨远粤袁圆园员员 原 园缘 原 园源援
施季森袁高摇 燕袁席梦利袁等援 圆园员园援 诱导马尾松未成熟种子胚性胚
柄 细 胞 团 再 生 植 株 的 方 法援 中 国 专 利院
悦晕员园员愿源怨缘园缘粤袁圆园员园 原 员园 原 园远援
杨书珍袁丰明乾袁潘思轶袁等援 圆园园苑援 植物多肽生长因子 孕杂运 的特性
与功能研究进展援 西北植物学报袁圆苑渊圆冤院 源园园 原 源园远援
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渊责任编辑摇 徐摇 红冤
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