全 文 ：第 !" 卷 第 # 期
$ % & % 年 # 月
林 业 科 学
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丽江云杉体细胞胚胎发生#
陈6芳&!$6陈少瑜&!$6吴6涛&!$6王寅冰76易善军76宁德鲁&
"&2云南省林业科学院6昆明 "9%$%!# $2国家林业局云南省珍稀濒特森林植物保护和繁育实验室
云南省森林植物培育与利用重点实验室6昆明 "9%$%!# 72西南林学院6昆明 "9%$$!$
关键词’6丽江云杉# 体细胞胚胎发生# 胚性愈伤组织
中图分类号! ’8!"666文献标识码!-666文章编号!&%%& C8!##"$%&%#%# C%&"$ C%"
收稿日期’ $%&% C%! C$%# 修回日期’ $%&% C%" C%#&
基金项目’ 国家(A!#)项目"$%%7 C! C!!$ # 云南省重点新产品开发计划"$%%ADD%%"$ &
#宁德鲁为通讯作者&
2"#-0*9,#8%4"6&(&)*)"12"-+) ("$")#%+#,",
(KLG JFG4&!$6(KLG ’KF0X3&!$6=3 ,F0&!$6=FG4 H^GIHG476 H^’KFGl3G76+HG4EL13&
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58)0%-90’6IFPHTULSHFFGS ?1FGQ4R0YQK RL431FQ0RP0G QKLP0UFQHTLUIRX04LGLPHP5,KL0?QHUF1ULSHFV0RQKLP0UFQHTLUIRX04LGLPHPFQ
V03RPQF4LPYLRLPTRLLGLS 03Q’ &$ M" :%29 U4*.
C& "jD-:&29 U4*.C& $!!jEYFP0?QHUF1ULSH3UV0RHGHQHFQHG4P0UFQHT
TF13P# $$ M" :%29 U4*.
C& "jD-:&2% U4*.C& $!!jEYFP0?QHUF1ULSH3UV0RUFHGQFHGHG4FGS ?R01HVLRFQH0G# 7$ M" :$%
U4*.C& -D-YFP0?QHUF1ULSH3UV0RUFQ3RLP0UFQHTLUIRX0P# !$ M" :9 4*.
C& FTQHWFQLS TKFRT0F1:9 4*.C& P34FRYFP
0?QHUF1ULSH3UV0R4LRUHGFQH0G5
:&4 ;"%<)’6 8&9+# A&?&#$’+$,&,# P0UFQHTLUIRX04LGLPHP# LUIRX04LGHTTF13P
66体细胞胚胎发生是细胞工程中植株再生的重要
途径之一!可作为基因工程的受体系统!同时也是研
究细胞全能性%细胞分化及其形态建成的理想试验
体系& 在应用上!体细胞胚胎发生是一种有效的大
规模无性繁殖方法 "郭奕明等!$%%7# 贾彩凤等!
$%%"# ’QFP01F+-#A!$%%7# ’3Q0G!$%%$$& 在目前已
成功诱导体胚形成的植物中!草本植物占了大多数&
已有 !% 多种木本植物获得了体细胞胚!尤其是用常
规无性繁殖技术很难生根的针叶树的体胚发生研究
取得了令人瞩目的进展!$% 多种不同的针叶树的外
植体成功诱导出体细胞胚 "施季森! $%%% $& 自
@F\UFG 等"&A#9$首次报道欧洲云杉 "8&9+# #@&+,$
未成熟合子胚培养的体细胞胚胎发生和植株再生以
来!白云杉 "8!’A#79#$ "MFR\ +-#A5!&AA7$%黑云杉
"8!3#*&#$#$",F3Q0R3P+-#A5!&AA%$%塞尔维亚云杉
"8!)3)*&?#$ "D3SHUHR+-#A5!&AA$ $%北美云杉 "8!
,&-96+$,&,$";F1L+-#A5! $%%#$%火炬松"8&$7,-#+K#$
"M31UFG +-#A5! $%%$# .H+-#A5!&AA#$%意大利松"8!
2&$+#$"(FRGLR0P+-#A5!$%%A$等树种的体细胞胚诱导
和植株再生已经应用于生产!并把控制木质素合成
的基因转化到黑云杉体胚中!部分研究成果已进入
中试& 美国火炬松%新西兰辐射松 "8&$7,*#K&#-#$
已应用于生产!并进行了人工种子生产!仅新西兰一
家公司就利用体细胞再生年产 $%% 万株辐射松苗
"施季森!$%%%$&
我国木本植物体细胞胚胎发生研究开展虽然较
晚!但 也 取 得 了 很 大 的 进 展! 马 尾 松 " 8&$7,
3#,,)$&#$#$"黄健秋等!&AA9F# 杨艳等!$%%8$%云南
松"8&$7,.7$$#$+$,&,$ "黄健秋等!&AA9I$%华北落
叶松 " O#*&<2*&$9&2&,S*722*+96-&$ "齐力旺等!$%%!$%
日本落叶松" O#*&皮松 " 8&$7,@7$’+#$# $ " 李 茜 等! $%%" $% 杉 木
"J7$$&$’6#3&# A#$9+)A#-#$ "席梦利等!$%%"$%长叶
松"8&$7,2#A7,-*&,$ "吴丽君!$%%#$%红豆杉 ";#<7,
96&$+$,&,$和南方红豆杉";#<7,96&$+$,&,WFR53#&*+&$
"邱德有等!&AA#$等针叶树种利用成熟或未成熟胚
诱导体细胞胚胎发生!实现了植株再生# 云杉属树
种青’ "8&9+# X&A,)$&$ "李映红等! &AA% $%白’
6第 # 期 陈6芳等’ 丽江云杉体细胞胚胎发生
"8&9+# 3+.+*&$ "杨金玲等!&AA8 $%红皮云杉 "8&9+#
?)*#&+$,&,$"刘宝光等!$%%A$利用其成熟或未成熟胚
诱导体细胞胚胎发生!这些成果为无性系林业的发
展提供广阔的前景&
丽江云杉 "8&9+# A&?&#$’+$,&,$是我国西南地区
重要的寒温性针叶树种!具有生长快%材质优良的特
点! 是其分布区的主要造林树种! 也被作为庭园观
赏树种普遍栽培& 目前人工造林及庭院绿化用苗主
要是通过实生繁殖! 但丽江云杉结实较晚! 种子成
熟率很低!致使丽江云杉良种苗供不应求! 远远不
能满足造林需求"王军辉等!$%%"$& 扦插%组织培
养等繁殖方法已成为繁育丽江云杉绿化造林苗木的
重要途径& 丽江云杉通过体细胞胚途径再生植株在
国内外目前尚无报道& 本文以丽江云杉成熟合子胚
培养直接诱导体细胞胚胎发生和植株再生!为丽江
云杉离体快速繁育及基因遗传转化提供必要的技术
支撑!为丽江云杉工厂化育苗提供了一条新途径&
&6材料与方法
&2&6材料6丽江云杉成熟种子采自云南丽江的丽
江云杉天然林!根据植株表型选择生长较好%树干通
直的 8 个单株作为采种林木!每株分别采 9% _"% 个
球果!阴晾 &% _&9 天后剥取种子&
&2$6外植体接种培养6在试验室挑选干净%饱满丽
江云杉成熟种子!用商用消毒液消毒 &% UHG!无菌水
冲洗 7 次!在超净工作台上剥取完整胚"图 &F$!置
入诱导培养基进行培养&
&276胚性愈伤组织诱导培养基6&$基本培养基的
筛选6选用改良 M" "M31UFG +-#A5!&AA&$%&f$<’ 及
.M".H+-#A5!&AA#$为基本培养基!设计诱导培养基 7
组’ " M" :"jD-%29 U4*.
C& :$!!jE&2% U4*.C&#
(&f$<’ :"jD-%29 U4*.C& :$!!jE&2% U4*.C&#
..M:"jD-%29 U4*.C& :$!!jE&2% U4*.C& "表
&$& 每组 &% 瓶!每瓶放置剥取的完整胚 &% 粒&
$$生长调节剂的筛选6在基本培养基筛选试
验完成后!为筛选较适宜的生长调节剂!设计诱导培
养基 # 组! 即以 M" 为基本培养基! 分别添 加
"jD-%29!%29!%29!%29!%2&!&2%!&29!$29 U4*.C&#
$!!jE&2%!&29!$2%!$29!&29!&29!&29!&29 U4*.C&
"表 $$& 每组 &% 瓶!每瓶 &% 粒胚&
以上培养基均加入蔗糖 7% 4*.C&!谷氨酰胺
!9% U4*.C&!水解酪蛋白 9%% U4*.C&!琼脂9 4*.C&!
?@92#& 在 $$ _$9 b下暗培养&
&2!6胚性愈伤组织保持与增殖培养基6设计培养
基 7 组’ " M" :"jD-%29 U4*.
C& :$! !jE
&2% U4*.C&# ( M" :"jD-%29 U4*.
C& :$! !jE
&29 U4*.C&# . M" :"jD-%29 U4*.
C& :$! !jE
$2% U4*.C&& 此 7 组培养基均加入蔗糖 7% 4*.C&!
谷氨酰胺 !9% U4*.C&!水解酪蛋白 9%% U4*.C&!琼
脂 9 4*.C&& ?@92#!$$ _$9 b下暗培养&
&296体细胞胚成熟培养基6设计培养基 7 组’
"M" :-D-&% U4*.
C&# (M" :-D-&9 U4*.
C&#
. M" :-D-$% U4*.
C&& 以上培养基均加入蔗糖 "%
4*.C&! M*;!%%% &%% U4*.C&! 琼 脂 9 4*.C&&
?@92#!$$ _$9 b下暗培养&
&2"6体细胞胚萌发培养基6以 M" 为基本培养基!
不加激素!附加活性炭 9 4*.C&!蔗糖 9 4*.C&!琼脂
9 4*.C&!?@92#!$$ _$9 b下暗培养 8 天后!移入全
光培养室&
&286观察记录6丽江云杉体细胞胚诱导的各个阶
段!分别记载胚性%非胚性愈伤组织%体细胞胚发生
数量!在 .LHTF显微镜和解剖镜下进行镜检!观察胚
性愈伤组织%体细胞胚的形态&
$6结果与分析
$2&6胚性愈伤组织的诱导6丽江云杉成熟合子胚
在诱导培养基培养 7% 天后!先后从合子胚的胚根
端%下胚轴表面和上胚轴与子叶区形成白色半透明
的愈伤组织"图 &I$!!% _9% 天后继代 & 次后!愈伤
组织增殖较快!此时转入增殖保持培养基中继续培
养并增殖!&% _&! 天继代 & 次!经 $ _! 次继代后将
形成 7 类明显可辨的愈伤组织’ 第 & 类为白色或淡
黄色!颗粒状疏松或结构紧密的愈伤组织!逐渐变黄
而至褐色死亡# 第 $ 类为浅白色水浸状的粘性愈伤
组织!这类愈伤组织在继代培养中生长最快!但无形
态发生!在光照条件下易变褐死亡"图 &T$# 第 7 类
为白色%半透明%晶莹%有粘性的丝状物"图 &S$!在
显微镜下观察可见其细胞核大%细胞质浓!清晰可见
胚头"即胚细胞$和细丝状胚柄细胞团 "图 &L$!为
发育较好的丽江云杉胚性愈伤组织&
$2$6不同基本培养基的胚性愈伤组织诱导结果68
个单株的混合种子的胚接种在 7 组基本培养基附加
"jD-%29 U4*.C& :$!!jE&2% U4*.C&上!!% 天转接 &
次!"% 天后进行观察!统计其诱导结果"表 &$& 7 组
培养基的诱导率差异较大’ &f$ <’ 没有胚性愈伤
组织分化# .M为 #o# M" 比较适宜丽江云杉胚性愈
伤组织的诱导!诱导率可达 &#o!这在针叶树种上
是较高的诱导率&
$276不同激素配比的诱导结果68 个单株的混合
7"&
林 业 科 学 !" 卷6
种子胚接种在 M" 基本培养基附加不同浓度 "jD-及
$!!jE上!!% 天转接 & 次!&$% 天后观察!统计其诱
导结果"表 $$&
表 =?不同基本培养基诱导结果!
B-8C=?,#8%4"6&(*99-./)*(<*11&%&(08-)*9#&<*-
培养基
"U4*.C& $
"L "T "GT "I
诱导率
)GS3TQH0G
VRL]3LGTXfo
M" :"jD-%29 :$!!jE&2% &%% &# 89 8 &#
&f$<’ :"jD-%29 :$!!jE&2% &%% % A$ # %
.M:"jD-%29 :$!!jE&2% &%% # #8 9 #
66""L’ 接种数 +3UILR0VLg?1FGQP# "T’ 胚性愈伤组织数 +3UILR
0VLUIRX04LGHTTF1H# "GT’ 非 胚 性 愈 伤 组 织 数 +3UILR0VG0Gj
LUIRX04LGHTTF1H# "I ’ 褐坏数 +3UILR0VIR0YG GLTR0PLP5下同& ,KL
PFULIL10Y5
表 @?不同激素配比的诱导结果
B-8C@?,#8%4"6&(*99-./)*(<*11&%&(0$.-(0’"%#"(&)
培养基
"U4*.C& $
"L "T "GT "I
诱导率
)GS3TQH0G
VRL]3LGTXfo
M" :"jD-%29 :$!!jE&2% &%% &# 89 8 &#
M" :"jD-%29 :$!!jE&29 &%% $% 8& A $%
M" :"jD-%29 :$!!jE$2% &%% " #" # "
M" :"jD-%29 :$!!jE$29 &%% & #A &% &
M" :"jD-%2& :$!!jE&29 &%% & A$ 8 &
M" :"jD-&2% :$!!jE&29 &%% &% 89 &9 &%
M" :"jD-&29 :$!!jE&29 &%% # #% &$ #
M" :"jD-$29 :$!!jE&29 &%% ! A% " !
66培养基中外源激素的配比对胚性愈伤组织的诱
导及生长有很大的影响!特别是 $!!jE的浓度起着
至关重要的作用!虽然在各种 $!!jE浓度的培养基
上都能诱导出胚性愈伤组织!但诱导率存在很大差
异& 从表 $ 可看出!在 M" 基本培养基中! "jD-
%29 U4*.C&下!胚性愈伤组织诱导数量在$!!jE&29
U4*.C&时较高!随着附加 $!!jE质量浓度的增加!
诱导率逐渐下降# 而在 $!!jE&29 U4*.C&下!胚性愈
伤组织诱导数量随 "jD-浓度的增加!诱导率逐渐
增加!至 "jD-&2% U4*.C&时达到临界值!其浓度再
增加!诱导率随之下降!而低于 "jD-%2& U4*.C&诱
导率也很低& 综合观察 "jD-和 $!!jE的交互作用
及后期体胚的成熟质量!选择出丽江云杉胚性愈伤
组织较适宜的诱导培养基M" :"jD-%29 U4*.
C& :
$!!jE&29 U4*.C&&以该培养基作为诱导培养基!能获得
较好胚性愈伤组织!后期体胚成熟时畸形胚较少&
$2!6不同单株诱导结果6大量文献资料"黄健秋
等!&AA9I# ,FG4+-#A!$%%&# NFHG +-#A!&AA9$表明!
针叶树种体胚诱导单株个体差异较大!为此进行了
丽江云杉不同单株体胚诱导效果的试验& 在以上试
验的基础上!选用 M" :"jD-%29 U4*.
C& :$!!jE
&29 U4*.C&!分别对 8 个单株进行试验"表 7$& 由
表 7 可看出!参试的 8 个单株中!胚性愈伤组织诱导
单株差异较大!" 号达 &#o!而 & 号为 %& 可见基因
型对其体细胞胚诱导频率的影响很大!这和其他针
叶树种体胚诱导情况类似&
表 A?不同单株胚性愈伤组织诱导结果
B-8CA?,#8%4"6&(*99-./)*(<*11&%&(0$.-(0*(<*+*单株号
;LG0QX?L
"L "T "GT "I
诱导率
)GS3TQH0G
VRL]3LGTXfo
& 9% % !$ # %
$ 9% 9 7# 8 &%
7 9% $ !& A !
! 9% & !7 " $
9 9% 7 !% 8 "
" 9% A 7$ A &#
8 9% ! 7A # #
$296胚性愈伤组织的保持与增殖6胚性愈伤组织
增殖培养 & _$ 次后!愈伤组织不断增殖& 在显微镜
下可看到由 & 个长形薄壁细胞组成的胚柄!胚柄上
部是一群团状细胞形成的胚性细胞团!在适宜的培
养条件下!不断地无序分裂!其细胞系得以正常继
代& &% _&! 天继代 & 次!如果不及时继代!将会导
致培养物胚性的丧失!且这种丧失是不可逆转的&
选用生长较好的 $ 个细胞系分别放入 7 组培养基
"" M" :"jD-%29 U4*.
C& :$! !jE&2% U4*.C&#
(M" :"jD-%29 U4*.
C& :$! !jE&29 U4*.C&#
.M" :"jD-%29 U4*.
C& :$!!jE$2% U4*.C&$进行增
殖试验&
试验结果表明胚性细胞系均能增殖!但在添加
$2% U4*.C&$!!jE的培养基中!其细胞团生长过快!
在后期成熟体胚诱导中!不能诱导出成熟体胚!即使
诱导出!也是畸形胚& 而在其余 $ 组培养基中继代
培养!表现较好!&2% U4*.C&$!!jE在成熟体胚诱导
中!较 &29 U4*.C&$!!jE成胚率更高&
$2"6体细胞胚胎成熟诱导结果6待丽江云杉胚性
愈伤组织大量增殖后!即可接入体胚成熟培养基中&
-D-目前已被广泛用于促进针叶树的子叶胚发育
成熟的培养基中!一般认为!-D-的作用是防止产
生裂生多胚!因而促进胚胎单个化并进一步发育成
熟!但不同物种所需 -D-浓度不一& 本次试验分别
添加 -D-&%!&9!$%!$9 U4*.C&"表 !$& 结果表明以
添加 -D-$% U4*.C&的处理效果较好!成胚数量较
!"&
6第 # 期 陈6芳等’ 丽江云杉体细胞胚胎发生
多!且体细胞胚质量较好!偶见畸形胚"图 &V$&
表 K?不同浓度 5Y5处理体胚成熟效果
B-8CK?Z-0/%*(6 $&%1"%#-(9&"1)"#-0*9%4")
/(<&%<*11&%&(05Y59"(9&(0%-0*"()
-D-质量浓度
(0GTLGQRFQH0G 0V-D-f
"U4*.C& $
接种量
+3UILR0V
Lg?1FGQPf4
成熟体胚数
+3UILR0V
UFQ3RLLUIRX0P
&% $29A !
&9 $28" #
$% $2#& &9
$9 $287 9
$286成熟体胚的萌发6待体细胞胚成熟后!可清晰
见到形成的子叶!而发育到子叶胚期时!将胚轻轻挑
出!转至无激素的体细胞胚发育培养基中!放置在光
强 & %%% _& "%% 1g下培养& &9 _$% 天后!体细胞胚
萌发!呈绿色!下胚轴伸长!白色胚根向下延伸!根尖
正常分化"图 &4!K!H$# 9% _"% 天后!形成完整小植
株& 待苗长到 7 _! TU时!移到自然光下练苗 8 天!
用清水洗净!即可移到营养袋中!放入温室"图 &l$&
本试验移栽成活率达到 9!o& 待小苗长出新叶!生
长至 $% _7% TU时即可移到大田&
图 &6丽江云杉体细胞胚胎发生
JH45&6’0UFQHTLUIRX04LGLPHP0V8&9+# A&?&#$’+$,&,
F5刚剥的成熟合子胚# I5刚开始形成的胚性愈伤组织# T5水浸状的愈伤组织# S5发育较好的胚性愈伤组织# L5清晰可见的胚头和胚柄# V5
体胚成熟# 45体胚开始萌发# K5刚分离的成熟体胚# H5体胚苗伸长# l5再生植株&
F5mX40QHTLUIRX0?LL1LS 0V# I5)GHQHFQHG4LUIRX04LGHTTF13P# T5@XSR0jTF13P# S5*UIRX04LGHTTF13P4R0YHG4YL1# L5*UIRX0GF1KLFS FGS
P3P?LGP0RPXPQLU# V5M1FGQ1LQRL4LGLRFQLS5
76结论与讨论
选择合适的外植体是诱导体细胞胚发生的第一
步!也是成功的关键& @F\UFG 等 "&A#9$首次以欧
洲云杉的幼胚为外植体诱导体细胞胚获得成功!愈
伤组 织 诱 导 率 几 乎 达 到 &%%o! 而 W0G -RU01S
"&A#8$ 以其成熟胚为材料诱导愈伤组织!诱导率仅
为 9%o# 在白云杉中!.3 等"&A#8$以幼胚为材料诱
导率达 "%o!,RLUI1FX"&AA%$以成熟胚为材料诱导
率仅为 &%o# D3SHUHR等 "&AA$ $以塞尔维亚云杉
&% _$& 天的幼苗为材料诱导体胚!通过调节细胞分
裂素浓度!最高诱导率达 A2"o# 李映红等 "&AA%$
对青’进行体胚诱导!结果只从幼胚中诱导出体细
胞胚# 杨金玲等"&AA8$在总结前人经验的基础上以
9"&
林 业 科 学 !" 卷6
白’成熟胚为材料得到了较好的结果!诱导率达
A"o# 刘宝光等"$%%A$以红皮云杉未成熟胚为材料
进行诱导!研究了基本培养基%光照条件%胚采集时
间!最后得到较高诱导率 #&29o&
基因型是影响体细胞胚胎发生的内在因素!其
个体遗传基础!决定了离体培养的反应能力 "即再
生能力$& 不同种的植物甚至同种植物的不同品
种%不同地理来源%不同家系个体之间!其个体基因
型都存在差异!这就决定了不同的体细胞胚胎发生
能力明显不同 "#A5! $%%#$& 黄健秋等"&AA9I$以云南松云南%广西
$ 个种源成熟胚为材料!同时放入 $ 种培养基中!诱
导率为 %2#o _792#o# 唐巍等"&AA#$以火炬松成
熟胚 # 个基因型为材料!放入 A 种培养基中分别培
养!结果发现各基因型差异较大!诱导率为 % _
#&2"o# ,FG4等"$%%&$以 $! 个基因型火炬松为材
料诱导胚性愈伤组织!诱导率最高达 8828o!最低
仅为 $o# 塞尔维亚云杉的 9 个品种在外植体大
小和培养条件完全相同的情况下诱导体胚!体细胞
诱导频率最高达 o! 最低只有 &27o "NFHG +-
#A5!&AA9$& 为了使取材时间不受胚发育时间的限
制!本试验以丽江云杉成熟胚为材料!分别从 8 个单
株上采集进行培养!诱导率为 % _&#o& 这一结果
表明丽江云杉基因型对体细胞胚胎发生有较大影
响!这方面的机制还有待深入研究!为提高体胚诱导
率下一步可以尝试以不同发育期的胚作为外植体进
行培养&
丽江云杉体细胞胚胎发生过程可分为 ! 个阶
段!每个阶段所用培养基中激素类型和浓度配比的
组合比较复杂& 从本试验看!诱导阶段 $!!jE起主
导作用!而在成熟培养阶段!-D-是关键因子!这与
目前已成功进行体胚再生的其他针叶树种相似& 通
过试验筛选出 & $胚性愈伤组织诱导培养基 M" :
"jD-%29 U4*.C& :$!!jE&29 U4*.C&# $$胚性愈伤
组织保持与增殖培养基 M" :"jD-%29 U4*.
C& :
$!!jE&2% U4*.C&# 7$成熟体胚诱导培养基 M" :
-D-$% U4*.C&# !$体胚萌发培养基 M" :9 4*.
C&活
性炭 :蔗糖 9 4*.C&&
胚性愈伤组织增殖培养 & _$ 次后!愈伤组织不
断增殖!在显微镜下可看到由 & 个长形薄壁细胞组
成的胚柄!胚柄上部是一群团状细胞形成的胚性细
胞团!在适宜的培养条件下!分散的多胚就会不断地
无序分裂!细胞系得以正常继代& &% _&! 天继代 &
次!如果不及时将胚性愈伤组织从非胚性愈伤组织
中挑选出来进行培养!将会导致培养物胚性丧失!而
且这种丧失是不可逆转的# 继代培养时最好把
$!!jE浓度降低!这有利于保持其胚性&
本试验成功建立了丽江云杉体细胞胚胎发生体
系!扩大规模!与生产结合进行规模化种苗生产!利
用生物反应器大规模生产丽江云杉体细胞胚还有待
进一步完善和研究& 由于体细胞胚发生体系较为稳
定!可以在分子水平上研究其胚胎发生的机制& 利
用农杆菌介导等转化方法!在胚性愈伤组织阶段进
行侵染!导入目的基因!进行遗传改良!可以缩短丽
江云杉育种周期&
参 考 文 献
郭奕明!杨映根!郭6毅!等5$%%72落叶松体细胞的胚胎发生5植物
生理学通讯!7A"9$ ’ 97& C9795
黄健秋!卫志明!许智宏5&AA9F5马尾松成熟合子胚的体细胞胚胎发
生和植株再生5科学通报!!%"&$ ’ 8$ C895
黄健秋!卫志明5&AA9I5云南松成熟胚的体细胞胚胎的发生研究5实
验生物学报!$#"!$ ’ 78& C78"5
贾彩凤!李6悦5$%%"2华山松胚性愈伤组织诱导与幼胚离体培养5
植物学通报!$7"$$ ’ &#" C&A&5
李6茜!张存旭!郑瑞杰5$%%"2白皮松胚性愈伤组织诱导因素的研
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李映红!郭仲琛5&AA%2青’在不同条件下的体细胞胚胎发生及苗的
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刘宝光!李成浩!王伟达!等5$%%A2红皮云杉胚性愈伤组织诱导技术
研究5植物研究!$A"&$ ’ "A C875
吕守芳!张守攻!齐力旺!等5$%%92日本落叶松体细胞胚胎发生的研
究5林业科学!!&"$$ ’ !# C9$5
齐力旺! 韩一凡! 韩素英!等5$%%!2麦芽糖%+--及 -D-对华北落
叶松体细胞胚成熟及生根的影响5林业科学! !%"&$ ’ 9$ C985
邱德有!李如玉!李6玲5&AA#2红豆杉及南方红豆杉体细胞胚胎发
生研究5林业科学!!7""$ ’ 9% C9!5
施季森5$%%%2迎接 $& 世纪现代林木生物技术育种的挑战5南京林
业大学学报!$!""$ ’ & C"5
唐6巍!欧阳潘5&AA#2火炬松胚性愈伤组织诱导和植株再生的研
究5林业科学!7!"7$ ’ &&9 C&&A5
王军辉!张建国!张守攻! 等5$%%"2丽江云杉硬枝扦插技术与生根
特性研究5西北农林科技大学学报!7!"8$ ’ A8 C&%95
吴丽君5$%%#2长叶松优良家系的体胚发生研究5福建林学院学报!
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席梦利!施季森5$%%"2杉木合子胚愈伤组织的诱导及植株再生5南
京林业大学学报! 7%"$$ ’ " CA5
杨6艳!李志辉!丁贵杰!等5$%%82马尾松幼胚培养愈伤组织诱导的
初步研究5湖南环境生物职业技术学院学报!&7"&$ ’ " CA5
杨金玲!桂耀林!杨映根!等5&AA82白’体细胞胚胎发生及其植株再
生5植物学报!7A"!$ ’ 7&9 C7$&5
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!责任编辑6徐6红"
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