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Tissue Culture Technique of Taxus media ‘Hecksii’

曼地亚红豆杉的组织培养快繁技术


以曼地亚红豆杉扦插苗当年生枝的带芽茎段为外植体,进行腋芽增殖再生植株育苗试验。结果表明:MS+6-BA0.05mg·L-1+NAA0.5mg·L-1是曼地亚红豆杉腋芽增殖启动培养的适宜培养基,启动率89.55%。6-BA对芽的启动是必需,但浓度稍高启动率便极显著下降。生长调节物质对芽的启动有利但抑制芽的生长,不添加生长调节物质的MS(有机物加倍)培养基是曼地亚红豆杉侧芽继代培养的适宜培养基,有效芽率为72.73%,平均芽长3.3cm。曼地亚红豆杉组培生根不定根的诱导比较困难,生根率最高27.78%。不定根的发生需要在植物体内建立一个最佳的细胞分裂素和生长素的平衡,而不仅是需要生长素。用IBA1000mg·L-1作生根促进剂处理30s进行瓶外生根,生根率达到58.33%,是进行曼地亚红豆杉组培无根苗生根诱导的适宜处理方式。

Young stem section with buds of cutting plantlets of Taxus media ‘Hicksii’ was used as explants for armpit bud multiplication plantlet regeneration experiment. The results showed, MS+6-BA 0.05 mg·L-1 +NAA 0.5 mg·L-1 is the optimal culture medium for startup culture, the startup rate is 89.55%. 6-BA is indispensable for startup, but the concentration of it should be low. The growth regulators were beneficial for the startup of the buds, but harmful for the growth of it. MS (double organic matter) culture medium with no growth regulators was suitable for buds to grow on. The valid buds rate is 72.73%; mean length of buds is 3.3 cm. The induction of adventitious roots needed to establish a suitable balance of auxin and cytokinin in the plantlet. Retting cuttings in IBA liquor (1 000 mg·L-1) 30 s was a fit means for root induction; the rooting rate is 58.33%.


全 文 :第 wv卷 第 z期
u s s z年 z 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
∂²¯1wv o‘²1z
∏¯ qou s s z
曼地亚红豆杉的组织培养快繁技术 3
马 均 马明东
k四川农业大学都江堰分校 都江堰 ytt{vsl
摘 要 } 以曼地亚红豆杉扦插苗当年生枝的带芽茎段为外植体 o进行腋芽增殖再生植株育苗试验 ∀结果表明 }≥
n y2…„ s1sx °ª#pt n ‘„„ s1x °ª#pt是曼地亚红豆杉腋芽增殖启动培养的适宜培养基 o启动率 {|1xx h ∀y2…„对
芽的启动是必需 o但浓度稍高启动率便极显著下降 ∀生长调节物质对芽的启动有利但抑制芽的生长 o不添加生长
调节物质的 ≥k有机物加倍l培养基是曼地亚红豆杉侧芽继代培养的适宜培养基 o有效芽率为 zu1zv h o平均芽长
v1v ¦° ∀曼地亚红豆杉组培生根不定根的诱导比较困难 o生根率最高 uz1z{ h ∀不定根的发生需要在植物体内建立
一个最佳的细胞分裂素和生长素的平衡 o而不仅是需要生长素 ∀用 Œ…„ t sss °ª#pt作生根促进剂处理 vs ¶进行
瓶外生根 o生根率达到 x{1vv h o是进行曼地亚红豆杉组培无根苗生根诱导的适宜处理方式 ∀
关键词 } 曼地亚红豆杉 ~组培 ~腋芽增殖 ~植株再生
中图分类号 }≥zuv1tvu 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kusszlsz p ssvs p sx
收稿日期 }ussy p s| p st ∀
基金项目 }四川省教育厅重点研究项目kussv„suvl ∀
3 马明东为通讯作者 ∀
Τισσυε Χυλτυρε Τεχηνιθυε οφ Ταξυσ µεδια −Ηεχκσιι.
¤∏± ¤ ¬±ª§²±ª
k ∆υϕιανγψαν Χαµπυσ οφ Σιχηυαν Αγριχυλτυρε Υνιϖερσιτψ ∆υϕιανγψαν ytt{vsl
Αβστραχτ} ≠²∏±ª¶·¨° ¶¨¦·¬²± º¬·«¥∏§¶²©¦∏·¬±ª³¯¤±·¯¨·¶²© Ταξυσ µεδια − ‹¬¦®¶¬¬. º¤¶∏¶¨§¤¶ ¬¨³¯¤±·¶©²µ¤µ°³¬·¥∏§
°∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²± ³¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ¬¨³¨µ¬°¨ ±·q ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §o ≥ n y2…„ s qsx °ª#pt n ‘„„ s qx °ª#pt ¬¶·«¨
²³·¬°¤¯ ¦∏¯·∏µ¨ °¨ §¬∏°©²µ¶·¤µ·∏³¦∏¯·∏µ¨ o·«¨ ¶·¤µ·∏³µ¤·¨¬¶{| qxx h qy2…„¬¶¬±§¬¶³¨ ±¶¤¥¯¨©²µ¶·¤µ·∏³o¥∏··«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±
²©¬·¶«²∏¯§ ¥¨ ²¯º q ׫¨ ªµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¶º¨ µ¨ ¥¨ ±¨ ©¬¦¬¤¯ ©²µ·«¨ ¶·¤µ·∏³²©·«¨ ¥∏§¶o¥∏·«¤µ°©∏¯ ©²µ·«¨ ªµ²º·«²©¬·q ≥
k§²∏¥¯¨²µª¤±¬¦°¤·¨µl ¦∏¯·∏µ¨ °¨ §¬∏° º¬·«±²ªµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¶º¤¶¶∏¬·¤¥¯¨©²µ¥∏§¶·²ªµ²º ²±q׫¨ √¤¯¬§¥∏§¶µ¤·¨¬¶zu q
zv h ~ °¨ ¤± ¯¨ ±ª·«²©¥∏§¶¬¶v qv ¦°q׫¨ ¬±§∏¦·¬²± ²©¤§√¨ ±·¬·¬²∏¶µ²²·¶±¨ §¨¨§·² ¶¨·¤¥¯¬¶«¤¶∏¬·¤¥¯¨¥¤¯¤±¦¨ ²©¤∏¬¬± ¤±§
¦¼·²®¬±¬±¬±·«¨ ³¯¤±·¯¨·q• ·¨¬±ª¦∏·¬±ª¶¬±Œ…„ ¬¯´∏²µkt sss °ª#ptl vs¶º¤¶¤©¬·°¨ ¤±¶©²µµ²²·¬±§∏¦·¬²±~·«¨ µ²²·¬±ªµ¤·¨
¦x{ qvv h q
Κεψ ωορδσ} Ταξυσ µεδια −‹ ¦¨®¶¬¬. ~·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ~¤µ°³¬·¥∏§°∏¯·¬³¯¬¦¤·¬²±~³¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±
曼地亚红豆杉k Ταξυσ µεδια −‹ ¦¨®¶¬¬. l 又称直立杂种紫杉 o是美国于 t|t{年发现的以欧洲红豆杉k Τq
βαχχαταl为父本与东北红豆杉k Τqχυσπιδαταl为母本的一个天然杂交种k张照喜 oussxl ∀多为常绿灌木 o主根
不明显 o侧根发达 o萌发力强 o耐修剪 o耐寒 o能耐 p ux ε 以下低温 o生长速度快 o对环境适应性强 ∀实测年高
为国内红豆杉的 v ∗ z倍 o生长优势明显 ∀v ∗ w ¤生物量积累为 vss ∗ wss ª#株 p t¤p t ox年生时产干原料 t ®ª#
株 p tk蒲春林等 oussxl ∀曼地亚红豆杉紫杉醇含量高且稳定 o为 s1sv h ∗ s1sy h o是中国红豆杉品种含量的 {
∗ ts倍k王占和 oussxl ∀且可全株利用 o枝叶含量可达 s1swy h o相当于一般红豆杉属植物干树皮含量的 u ∗
w倍k李守玉 oussxl ∀经比较研究认为曼地亚红豆杉是筛选出的紫杉醇含量高的优良种k毛锁云等 oussul ∀
因而进行曼地亚红豆杉快繁育苗技术体系的研究意义重大 ∀目前对红豆杉的研究主要集中在 }细胞培养k刘
佳佳等 ot|||l !发酵培养k陈毅坚等 oussvl !化学合成k邓先珍等 oussul !遗传转化k李云等 oussvl等方面 ∀虽
都取得了一定的试验进展 o但都还未达到商业化生产的要求 ∀而且无论是直接提取还是半合成 o均离不开其
资源植物红豆杉k张钢民等 ot||{l ∀因而解决紫杉醇的需求问题只能依靠快繁育苗发展药用原料林 ∀目前
生产上主要采用扦插繁殖来培育红豆杉 o而对红豆杉组织培养快繁育苗的研究还未见系统报道 ∀以东北红
豆杉芽苞和茎尖为外植体 o在添加 y2…„和 ‘„„的培养基上能诱导芽的发生和生长 o将芽体转到含 Œ…„的生
根培养基上 ou月后可诱导不定根的发生 ∀但生根时间长 o生根率低k程广有等 ousssl ∀红豆杉属植物能获
得较高的愈伤组织诱导率k刘涤等 ot||z ~李景原等 ot||z ~马均等 oussyl o但愈伤组织的再分化困难k刘丽萍
等 ot||{l o以云南红豆杉当年生枝段为外植体诱导的愈伤组织分化出了不定芽 o但分化率低 o芽体生长速度
慢 o还远达不到快繁育苗的要求 ∀基于以上情况 o以曼地亚红豆杉当年生枝的带芽茎段为外植体进行了腋芽
增殖再生植株育苗技术的研究 o以期实现曼地亚红豆杉高效快速的繁殖 o为药用原料林的培育提供优质
壮苗 ∀
t 材料与方法
111 植物材料
试验材料为四川农业大学都江堰分校实习苗圃的 x年生曼地亚红豆杉扦插苗 ∀
112 启动培养
于晴朗午后采健壮母株上的当年生枝条 o在洗衣粉溶液中清洗浸泡 vs °¬±ovx ε 温水浸泡 vs °¬±o剪切
成 t1x ¦°左右的带芽茎段 o然后在无菌操作台上用 zx h的酒精消毒 vs¶o无菌水清洗 v次 os1t h新洁尔灭消
毒 ts °¬±o无菌水冲洗 v次 os1t h的 ‹ª≤¯ u 连续 u次消毒共 tu °¬±o无菌水清洗 x次 o作为组织培养的外植体
接种于表 t所示的正交试验的培养基上 ∀每处理接种 vs个外植体 o重复 v次 ∀接种后置全自动光照培养箱
进行培养 o培养温度kux ? tl ε o光照时间 tu «#§pt o光照强度 t xss ¬¯∀培养 ws §后统计启动率 ∀启动率
k h l € k腋芽己萌发的外植体数r无菌外植体数l ≅ tss ∀
113 继代培养
启动培养获得的无菌苗转接到表 u所示的继代培养基上生长 o以获得生长健壮的无根苗 ∀同时 o以不添
加生长调节物质的不同基本培养基k见表 vl进行继代培养 o每处理 vs个外植体 o重复 v次 ∀培养 vs §后统
计有效芽率 !平均苗高 ∀有效芽率k h l € k苗高  u1s ¦°苗数r接种苗数l ≅ tss ~平均芽长k¦°l €有效苗高总
和r有效苗数 ∀
114 生根培养
t1w1t 组织培养生根 继代培养得到的生长健壮 !苗高 u ¦°以上的芽接种到生根培养基上 ∀每处理 vs个
外植体 o重复 v次 ∀接种 v个月后统计生根率 !根长 !根数 ∀
t1w1u 瓶外生根 将继代培养得到的生长健壮 !苗高 u ¦°以上的无根苗从培养瓶中取出 o洗净基部培养
基 o分别用 „…× !Œ…„作生根促进剂 o浓度 t sss °ª#pt !xss °ª#pt o速浸 vs ¶后插入经高压灭菌后的蛭石
上 ∀每处理插 vs个无根苗 o重复 v次 ∀扦插后置室内 o自然光照 o经常喷水保湿 ∀u个月后统计生根率 ∀
u 结果与分析
211 曼地亚红豆杉腋芽的启动萌发
表 1 曼地亚红豆杉启动培养 ≠
Ταβ .1 Σταρτυπ χυλτυρε οφ Τ . µεδια −Ηεχκσιι.
试验号
‘²q
y2…„Π
k°ª#ptl
‘„„Π
k°ª#ptl
启动率
Œ±§∏¦·¬²±µ¤·¨Πh
t
u
v
w
x
y
z
{
|
tks1sxl¤„
t
t
uks1tl¥…
u
u
vks1txl¦≤
v
v
tks1xl¤„
uks1zxl¤„
vkt1sl¥…
u
v
t
v
t
u
{|1xx¤„
{w1tx¤„
yv1v{¦…≤
zt1ys¥…
x{1t|¦≤⁄
yt1z|¦…≤
yv1{v¦…≤
ys1zy¦≤
xs1x|§⁄
≠表中标注字母为 ⁄∏±¦²±新复极差分析结果 o小写字母表示显著性
|x h o大写字母表示显著性 || h ∀ „¦¦²µ§¬±ª·² ⁄∏±¦¤± °∏¯·¬³¯¨µ¤±ª·¨¶·o·«¨
§¬©©¨µ¨±·√¤¯∏¨¶ º¬·«¶°¤¯¯ ¯¨ ·¨µ¶¤µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¬©©¨µ¨±·¤··«¨ s1sx ¯¨ √¨¯ o·«¨
§¬©©¨µ¨±·√¤¯∏¨¶º¬·«¦¤³¬·¤¯ ¯¨ ·¨µ¶¤µ¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¬©©¨µ¨±·¤··«¨ s1st ¯¨ √¨ ¯q下同 ∀
׫¨ ¶¤°¨ ¥¨ ²¯º q
曼地亚红豆杉带芽茎段接种后 ts §侧芽开
始萌动 o芽膨大 o芽鳞张开 o同时茎段切口处开始
膨大 o产生愈伤组织 ∀
从表 t可以看出 o生长调节物质的不同浓度
和配比对芽的启动有极显著影响 ∀一般认为细胞
分裂素与生长素比值高有利于芽的萌发 o但曼地
亚红豆杉芽萌发的适宜细胞分裂素浓度很低 ∀
y2…„的 v个浓度水平对芽启动的影响有极显著差
异 os1sx °ª#pt的启动率为 {|1xx h o极显著地高
于其他两水平 o细胞分裂素与生长素的适宜比例
为 tΒts o这可能是由于曼地亚红豆杉内源细胞分
裂素水平较高 ∀ ‘„„ 的 s1x °ª# pt 和 s1zx
°ª#pt两水平间启动率没有显著差异 o都较适合
于曼地亚红豆杉的启动培养 o应选用 s1x °ª#pt ∀
tv 第 z期 马 均等 }曼地亚红豆杉的组织培养快繁技术
|个试验处理中 o处理 t和处理 u之间启动率没有显著差异 o但都极显著地高于其他处理 ∀从节约药品 !降
低成本的角度从发 o处理 t }y2…„ s1sx °ª#pt n ‘„„ s1x °ª#pt是比较适宜的芽启动培养的激素配方 ∀
212 继代培养
u1u1t 生长调节物质组合对曼地亚红豆杉继代培养的影响 以 ≥作基本培养基 o采用 y2…„和 ‘„„不同
浓度的多种组合进行继代培养生长调节物质组合的筛选 o试验结果见表 u ∀
表 2 不同生长调节物质组合对继代培养的影响
Ταβ .2 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ γροωτη ρεγυλατορ χοµ ποσιτιον
ον γροωτη οφ χυλτυρε
试验号
‘²q
y2…„Π
k°ª#ptl
‘„„Π
k°ª#ptl
有效芽率
∂¤¯¬§¶³µ²∏·µ¤·¨Πh
平均芽长
 ¤¨± ¶³µ²∏·¯ ±¨ª·«Π¦°
t
u
v
w
x
y
z
{
|
)
)
s1sx
s1sx
s1t
s1t
s1t
s1x
t1s
)
s1x
t1s
u1s
s1x
t1s
t1ux
t1s
t1s
ys1xz¤„
t{1zx¥…
tt1xw¦§…≤
tw1u{¥¦…≤
ts1ux¦§…≤
{1ux¦§≤
ts1vv¦§…≤
z1y{¦§≤
w1{|§≤
u1z¤
u1x¤¥
u1v¤¥
u1t¥
u1t¥
u1u¤¥
u1t¥
u1u¤¥
u1v¤¥
表 3 不同基本培养基对继代培养的影响
Ταβ .3 Εφφεχτσ οφ διφφερεντ βασιχ χυλτυρε
µεδιυµ ον γροωτη οφ χυλτυρε
基本培养基
…¤¶¬¦°¨ §¬∏°
有效芽率
∂¤¯¬§¶³µ²∏·µ¤·¨Πh
平均芽长
 ¤¨± ¶³µ²∏·¯ ±¨ª·«Π¦°
≥
≥k铁盐加倍 ⁄²∏¥¯¨ °²¯¼¶¬·¨l
≥k有机物加倍 ⁄²∏¥¯¨²µª¤±¬¦°¤·¨µl
tΠu≥
• °
tΠu • °
ys1xz¥…
xz1{|¥…
zu1zv¤„
xy1zt¥…
wu1vu¦≤
vt1vu§⁄
u1z¥…
u1v¦≤
v1v¤„
u1x¥¦…≤
u1u¦≤
u1u¦≤
由表 u可以看出 o激素组合对继代培养
嫩梢的伸长有极显著影响 ∀不添加任何激素
的处理的培养基有效芽率极显著地高于其他
所有添加激素的处理 ∀这说明生长调节物质
对曼地亚红豆杉芽的诱导启动有利 o但对芽
的生长有抑制作用 o这与李胜等kusswl的观
点一致 ∀在添加激素的处理中 oy2…„浓度低
的处理有效芽率极显著地高于 y2…„ 浓度高
的处理 o而 ‘„„各浓度间规律不明显 ∀这说
明 o细胞分裂素对芽生长的抑制作用明显 o浓
度稍高 o有效芽率明显下降 ∀而生长素对芽
伸长的抑制作用不明显 ∀有效芽长在各种处
理间差异不大 o且规律不明显 o这可能是由于
芽的伸长生长量受着外植体本身营养状况的
影响较大 ∀由此 o应选择不添加任何激素的
基本培养基作为继代培养基 ∀
u1u1u 不同基本培养基对曼地亚红豆杉继
代培养的影响 生长调节物质对曼地亚红豆
杉芽的诱导有效 o但对芽的生长有抑制作用 ∀
选用不添加激素的培养基作为曼地亚红豆杉
的继代培养基 ∀由表 v可以看出 o不同的基
本培养基类型对曼地亚红豆杉芽的伸长生长
作用有极显著差异 ∀ ≥k有机物加倍l的有效芽率和平均芽长都极显著地高于 ≥k铁盐加倍l !≥ !tΠu≥
• ° 和 tΠu • ° ∀所以 ≥k有机物加倍l是曼地亚红豆杉继代培养的适宜培养基 ∀
213 生根培养
表 4 生根培养不定根发生情况
Ταβ .4 Σιτυατιον οφ αδϖεντιτιουσ ροοτ ινδυχτιον ιν ροοτ ινδυχτιον χυλτυρε
培养基
≤∏¯·∏µ¨ ° §¨¬∏°
生根率
• ²²·¬±ªµ¤·¨Πh
平均根数
 ¤¨± ±∏°¥¨µ²©µ²²·¶
平均根长
 ¤¨± ¯¨ ±ª·«²©µ²²·¶Π¦°
• ° n y2…„s1sx n ‘„„t1s
• ° n y2…„s1t n ‘„„t1s
• ° n y2…„s1sx n ‘„„u1s
≥ n y2…„s1sx n ‘„„t1s
tΠu≥ n Œ…„t1s
tΠu≥ n Œ…„u1s
• ° n Œ…„s1x n ‘„„s1t
• ° n Œ…„u1s n ‘„„s1t
• ° n Œ…„w1s n ‘„„s1t
• ° n ‘„„u1s
uz1z{
uv1s{
tt1tt
ut1wu
s1s
s1s
s1s
s1s
s1s
s1s
u1z
v1z
u1x
w1z
)
)
)
)
)
)
t1s|
t1uw
s1wu
s1vw
)
)
)
)
)
)
u1v1t 组织培养生根 将继代培养得到的长于 u ¦°的无根苗转接到生根培养基上 ou个月后长出不定根 ∀
生根培养基配方和不定根发生情况如见表 w ∀
由表 w可以看出 o曼地亚红豆杉不定根的诱导比较困难 o生根率较低 o最高只有 uz1z{ h ∀生根时间长 o
根系生长较慢 ∀诱导 u 个月
后 o最长平均根长仅为 t1uw
¦°∀ • ° 和 ≥ 都可作为曼
地亚红豆杉生根诱导的基本培
养基 ∀ • ° 生根率更高 ∀但
在相同激素组合情况下 o≥培
养基上不定根发生数量更多 o
为 w1z 条 o但发根较迟 o接种
xs §后才开始出现乳白色根突
起 ∀从生长调节物质组合来
看 o单独使用生长素的培养基
都没有发生不定根 o而配以低
uv 林 业 科 学 wv卷
浓度细胞分裂素的培养基上都有不定根的发生 ∀这说明曼地亚红豆杉不定根的发生需要在植物体内建立一
个最佳的细胞分裂素和生长素的平衡 o而不仅仅是需要生长素 ∀尽管细胞分裂素被认为对生根有抑制作用 o
但在后期这种抑制作用会消失 o而根原基的发育似乎依赖于细胞分裂素 ∀ • ° n y2…„ s1sx °ª#pt n ‘„„
t1s °ª#pt是曼地亚红豆杉较适宜的生根培养基 ∀
将己经生根的小苗转移到不含激素的 • ° 培养基上 o根系会伸长生长 o并再发生不定根 ∀vs §后 o平均
根数可达 x1x条 o平均根长达 t1y ¦° o最长根长 x1u ¦°o所得全苗如图 t ∀这是因为在根的伸长阶段生长素并
非必需 o而且会抑制根的生长发育 ∀所以 o通常在对木本植物进行生根培养时采用两步法 }即先在富含生长
素的培养基上进行根的发生 o尔后转接到无任何生长调节物质的培养基上进行根的伸长生长k李胜等 o
usswl ∀
表 5 瓶外生根情况
Ταβ .5 Σιτυατιον οφ ροοτινγ ιν ουτ2ϖασε χυλτυρε
生根促进剂
•²²·¬±ª³µ²°²·¨µ
浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²±Πk°ª#ptl
处理时间
×µ¨¤·° ±¨··¬° Π¨¶
生根率
• ²²·¬±ªµ¤·¨Πh
Œ…„
Œ…„
„…×
„…×
t sss
xss
t sss
xss
vs
vs
vs
vs
x{1vv¤„
wy1tx¥…
ux1s¦≤
uv1s{¦≤
u1v1u 瓶外生根 将继代培养得到
的嫩梢用 Œ…„ !„…× 作生根促进剂速
浸处理后插植于灭菌后的蛭石上 o插
植后 u个月开始出现愈伤组织 ov个
月后调查生根率如表 x ∀用 Œ…„作生
根促进剂效果极显著地优于 „…× o且
Œ…„ t sss °ª#pt处理生根率最高 o达
到 x{1vv h o是进行曼地亚红豆杉组
培无根苗生根诱导的适宜处理方式 ∀通过瓶外生根获得的全苗茎基部愈伤组织小 o有利于移栽成活 ∀所得
全苗如图 u ∀
图 t 组培生根的全苗
ƒ¬ªqt °¯ ¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§©µ²°·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨
图 u 瓶外生根的全苗
ƒ¬ªqu °¯ ¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¨§©µ²° ²∏·2√¤¶¨ µ²²·¬±ª¦∏¯·∏µ¨
v 结论
通过选择腋芽增殖启动培养 !继代培养 !生根培养各阶段的最优培养基和培养技术 o可获得完整的曼地
亚红豆杉试管苗 ∀生长调节剂的不同浓度和配比对芽的启动有极显著影响 ∀ ≥ n y2…„ s1sx °ª#pt n ‘„„
s1x °ª#pt是曼地亚红豆杉腋芽增殖启动培养的适宜培养基 ∀细胞分裂素对芽的诱导有利 o但对芽的生长
抑制作用明显 o浓度稍高 o有效芽率便明显下降 ∀生长素对芽伸长的抑制作用不明显 ∀不添加生长调节物质
的 ≥k有机物加倍l培养基是曼地亚红豆杉侧芽继代培养的适宜培养基 o有效芽率为 zu1zv h o平均芽长 v1v
¦°∀曼地亚红豆杉不定根的诱导比较困难 o生根率较低 o最高只有 uz1z{ h ∀生根时间长 o根系生长较慢 ∀
• ° n y2…„ s1sx °ª#pt n ‘„„ t1s °ª#pt是曼地亚红豆杉较适宜的生根培养基 o生根率 uz1z{ h ∀将己经
生根的小苗转移到不含激素的 • ° 培养基上 vs §后 o平均根数可达 x1x条 o平均根长达 t1y ¦°o最长根长
x1u ¦°∀培养条件为光照时间 tu «#§pt o光照强度 t xss ¬¯o培养温度kux ? tl ε ∀用Œ…„ t sss °ª#pt作生根
促进剂处理 vs ¶进行瓶外生根 o生根率达到 x{1vv h o是进行曼地亚红豆杉组培无根苗生根诱导的适宜处理
方式 ∀
vv 第 z期 马 均等 }曼地亚红豆杉的组织培养快繁技术
w 讨论
411 植物生长调节物质对曼地亚红豆杉芽启动培养的影响
植物生长调节物质对曼地亚红豆杉芽的启动有极显著影响 ∀y2…„和 ‘„„的浓度和两者之间的比例都
要在较低的水平上才能获得较高的启动率 ∀尤其是 y2…„的浓度稍微提高都会使启动率下降 ∀这与何碧珠
等kussvl需要用较高浓度kw °ª#ptl的促进芽分化能力最强的细胞分裂素 u ¬³来诱导曼地亚红豆杉芽启动
的结果刚好相反 ∀这可能是由于外源生长调节物质处理就是为了调节外植体达到一个适宜芽启动的生长素
和细胞分裂素水平 ∀而不同品种的外植体材料其内源激素水平可能有较大差异 o所以所需的外源生长调节
物质也就不同 ∀
412 曼地亚红豆杉试管苗的生根培养
在本次试验组培生根和瓶外生根都获得了曼地亚红豆杉组织培养苗的全苗 ∀瓶外生根效果较好 o生根
率较组培生根高 o茎段基部愈伤组织小 o有利于移栽成活 o且减少了炼苗的过程 o避免了污染 o降低了成本 o是
值得继续探索的曼地亚红豆杉组培苗生根方式 ∀但总的来看 o生根率还较低 o生根时间还较长 o这都会阻碍
曼地亚红豆杉组织培养育苗的产业化 ∀因此 o关于曼地亚红豆杉生根过程中枝条的生理变化 !生根机制以及
生根的适宜培养基和培养条件还有待于进一步探索和研究 o以提高生根率 o缩短生根时间 o推动曼地亚红豆
杉组织培养育苗的产业化 ∀
参 考 文 献
陈毅坚 o张 灼 o王 艳 o等 qussv q云南红豆杉内生真菌中产紫杉醇真菌的筛选 q生物技术 otvkul }ts p tt
程广有 o王明启 qusss q东北红豆杉的微繁技术 q东北林业大学学报 ou{kul }tv p ty
邓先珍 o胡春华 qussu q红豆杉资源与开发利用研究综述 q环境科学与技术 ouxk增l }zw p zz
何碧珠 o林义章 o何官榕 o等 qussv q曼地亚红豆杉离体培养及植株再生 q福建农林大学学报 }自然科学版 ovukwl }w{u p w{x
李景原 o王太霞 o张晋豫 o等 qt||z q红豆杉愈伤组织诱导及细胞培养的研究 q河南师范大学学报 }自然科学版 ouxktl }tsw p tsy
李 胜 o杨德龙 o李 唯 o等 qussw q植物试管苗离体生根研究进展 q农业工程学报 ousk增l }vw p wv
李守玉 qussx q曼地亚红豆杉引种试验初报 q林业调查规划 ovsk增l }{u p {x
李 云 o梁庆丰 o曹孜义 qussv q红豆杉体外培养生产紫杉醇研究 q北京林业大学学报 ouxktl }{y p |u
刘 涤 o章国瑛 o王 晓 o等 qt||z q红豆杉资源与紫杉醇生产概况 q植物资源与环境 oyktl }w{ p xv
刘佳佳 o郭 勇 qt||| q红豆杉细胞培养生产紫杉醇研究进展 q经济林研究 otzkul }wy p w{
刘丽萍 o张立莹 o贾景明 o等 qt||{ q东北红豆杉组织培养的研究 q沈阳农业大学学报 ou|kvl }vsu p vsx
马 均 o马明东 o周宇爝 qussy q曼地亚红豆杉愈伤组织诱导试验 q林业科技 ovtktl }tu p tx
毛锁云 o王海珍 qussu q曼地亚红豆杉的栽培利用前景 q江苏林业科技 ou|ktlΒxs p xt
蒲春林 o万 军 o刘世彬 o等 qussx q曼地亚红豆杉繁殖栽培技术 q林业科技开发 ot|kvl }ys p yu
王占和 qussx q曼地亚红豆杉及其市场前景 q特种经济动植物 okvl }vu
张钢民 o张 涛 o杨文利 qt||{ q红豆杉属植物的研究进展 q河北农业大学学报 outkwl }tsw p tsz
张照喜 o喻 泓 o杜化堂 o等 qussx q曼地亚红豆杉径枝生长关系研究 q武夷科学 ouxktl }wz p xu
k责任编辑 郭广荣l
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