全 文 ：第 v|卷 第 w期
u s s v年 z 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
∂²¯1v| o‘²1w
∏¯ qou s s v
杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生研究 3
陈金慧 施季森 诸葛强 黄敏仁
k南京林业大学林木遗传和基因工程重点实验室 南京 utssvzl
摘 要 } 以杂交鹅掌楸幼胚为外植体 o进行体细胞胚胎发生研究 ∀比较了亲本基因型 !发育阶段 !培养条件 !
生长调节物质和渗透压等对体细胞胚胎发生的影响 ∀结果表明 }在以 tΠu≥培养基为基本成分 o添加 u1s ∗
v1s °ª#ptu ow p ⁄的培养基上能够成功诱导胚性愈伤组织 ∀以蔗糖为渗透剂 o提高渗透压有利于体细胞胚胎
发生 ~以 ≥为基本培养基附加 × t1s ∗ w1s °ª#pt对体细胞胚胎诱导最有效 ~„…„的使用能有效控制畸形胚
的产生 ~基因型 !幼胚发育阶段及光照条件对体胚发生起着重要作用 ∀
关键词 } 杂交鹅掌楸 o体细胞胚胎发生 o胚性愈伤组织
收稿日期 }ussu p tu p tu ∀
基金项目 }国家/ |w{0项目资助课题k|{ p w p uzl o江苏农业/三项工程0项目部分资助 ∀
3 施季森为通讯作者 ∀
ΣΤΥ∆ΙΕΣ ΟΝ ΤΗΕ ΣΟΜΑΤΙΧ ΕΜΒΡΨΟΓΕΝΕΣΙΣ ΟΦ ΛΙΡΙΟ∆ΕΝ∆ΡΟΝ
ΗΨΒΡΙ∆Σk ΛqΧΗΙΝΕΝΣΕ ≅ Λq ΤΥΛΙΠΙΦΕΡΑl
≤«¨ ±¬±«∏¬ ≥«¬¬¶¨± «∏ª¨ ±¬¤±ª ‹∏¤±ª ¬±µ¨±
k ΚεψΛαβορατορψοφ Φορεστρψ Γενετιχσ ανδ Γενε Ενγινεερινγ oΝανϕινγ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Νανϕινγutssvzl
Αβστραχτ } ≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶º¤¶¶∏¦¦¨¶¶©∏¯¯ ¼ §²±¨ ¬± Λιριοδενδρον «¼¥µ¬§¶º¬·«·«¨ ¬°°¤·∏µ¨ ½¼ª²·¬¦ °¨¥µ¼²¶¤¶ ¬¨2
³¯¤±·¶q≥²°¨ ©¤¦·²µ¶º¨ µ¨ ·¨¶·¨§¤¥²∏··«¨¬µ ©¨©¨¦·¶²±¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬±·«¬¶µ¨¶¨¤µ¦«o¶∏¦«¤¶ª¨±²·¼³¨ o§¨ √¨ ²¯³2
°¨ ±·¤¯ ¶·¤ª¨ o¦∏¯·∏µ¨ ¦²±§¬·¬²±o³¯¤±·ªµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¤±§²¶°²·¬¦³²·¨±·¬¤¯ q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤··«¨ °¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¤¯2
∏¯¶º¤¶¶∏¦¦¨¶¶©∏¯¯ ¼¬±§∏¦¨§º«¨ ±·«¨ ¬¨³¨µ¬°¨ ±·¤¯ °¤·¨µ¬¤¯¶º¨ µ¨ ¦∏¯·∏µ¨§²±tΠu °¨ §¬∏°¶∏³³¯ °¨¨ ±·¨§º¬·«u ow p ⁄u1s
∗ v1s °ª#pt q≥∏¦µ²¶¨ ¦²∏¯§¥¨ ∏¶¨§¤¶²¶°²·¬¦¤±··²¬°³µ²√¨ ²¶°²·¬¦³²·¨±·¬¤¯ ²©·«¨ °¨ §¬∏°¤±§¬·º¤¶ ©¨©¨¦·¬√¨ ©²µ¶²2
°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶q׫¨ ¬±§∏¦·¬²± ²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²¶º¤¶¥¨¶·º«¨ ±·«¨ °¨¥µ¼²±¬¦¦¤¯ ∏¯¶º¤¶¦∏¯·∏µ¨§²± ≥ °¨ §¬∏°
¶∏³³¯ °¨¨ ±·¨§º¬·«t1s ∗ w1s °ª#pt × qŒ·º¤¶¤¯¶²³µ²√¨ §·«¤·¤³µ²³¨µ¤°²∏±·²©„…„ ¦²∏¯§¯¨¶¶¨±·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©
¤¥±²µ°¤¯ °¨¥µ¼²¶qŒ±¤§§¬·¬²±o·«¨ ª¨ ±²·¼³¨ o§¨ √¨ ²¯³°¨ ±·¤¯ ¶·¤ª¨ ²©¬°°¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶¤±§ ¬¯ª«·¦²±§¬·¬²± º¨ µ¨ ¬°³²µ·¤±·
·²¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶q
Κεψ ωορδσ} Λιριοδενδρον «¼¥µ¬§¶o≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶o∞°¥µ¼²±¬¦¦¤¯ ∏¯¶
木兰科k¤ª±²¯¬¤¦¨¤¨ l鹅掌楸属kΛιριοδενδρονl植物 o现仅存 u个种 o即鹅掌楸k Λq χηινενσεl和北美鹅
掌楸kΛq τυλιπιφεραl o分隔在中国和北美洲大陆 ∀由于地理隔离 o天然状态下 o未见有种间杂交种的报道 ∀
u个种间杂交种于 t|yv年由我国已故著名林木遗传育种学家叶培忠教授创造 o并表现出明显的杂种优
势k南京林产工业学院林学系育种组 ot|yvl ∀杂交鹅掌楸树形美观 o叶形奇特 o花大鲜艳 o象郁金香 o因
此是一种重要的庭院绿化树种 ∀另外 o据李周歧kusstl !季孔庶kusstl报道 ot ¤生杂交鹅掌楸生长速度
比中国鹅掌楸快 vs h左右 ou ¤生时可快 ys h ox ¤生时高达 tss h ∗ uss h o杂种优势十分明显 ∀成年鹅
掌楸树体高大 o可达 ys ° o也是一种重要的造林树种和用材树种 ∀在美国 o北美鹅掌楸木材大量用作装
饰材 !工业胶合板面材或芯材 !造纸等k µ¨®¯¨ ετ αλqot|{yl ∀杂交鹅掌楸虽然有许多优越性 o但杂交制
种受到季节限制 o影响了杂交鹅掌楸的推广应用 ∀自 us世纪 zs年代以来 o许多学者对杂交鹅掌楸的组
织培养和快繁技术进行了一些探索 o但始终没有突破性进展 o至今未能形成生产性大规模应用k沈惠娟 o
t||u ~陈金慧等 oussul ∀林木的体细胞胚胎发生研究始于 us世纪 zs年代后期 o|s年代初得到迅速的发
展 o并获得了极大的成功 ∀自从 t|{x年挪威云杉体细胞胚胎发生首次报道以来kŠ∏³·¤ ετ αλqot|{xl o已
有 ws多种木本植物获得了体细胞胚 o并且火炬松k Πινυσταεδαl !挪威云杉k Πιχεα αβιεσl !花旗松k Πσευδοτ2
συγα µενζιεσιιl和辐射松k Πινυσραδιαταl等树种的体细胞胚诱导和植株再生已成功应用于生产实践k施季
森 ousssl ∀由于植物体细胞胚具有数量多 !一旦形成体细胞胚就能够快速发育成再生植株的特点 o以体
细胞胚胎发生技术快速繁殖种子来源困难的杂交鹅掌楸 o具有重要的理论意义和应用价值 ∀本研究在
国家/ |w{0项目的资助下 o成功利用杂交种体细胞 o建立了杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生技术和快速成苗
体系 o开辟了杂交鹅掌楸产业化开发的新途径 ∀
t 材料与方法
111 材料来源及处理
选用鹅掌楸 v个基因型 o代号为 ‘oƒ和 ÷{ o于花期用北美鹅掌楸花粉进行人工控制授粉 ∀在南京
地区授粉后约 {周 o开始采样 o以寻找最佳取样时间 ∀采下的聚合翅果于 w ε 条件下低温冷藏 o接种时
剖开聚合果并除去种翅 ∀去翅材料以洗洁精预处理去表面油污 o自来水冲洗 vs °¬±o蒸馏水冲洗 v次 o
zx h的乙醇处理 us¶os1t h的氯化汞表面灭菌 x °¬±o无菌水冲洗 w次 ∀无菌状态下剥去种皮 o将胚性材
料或胚接种于诱导培养基 ∀
112 胚性愈伤组织诱导
诱导培养分别以 ≥ otΠu≥培养基为基本培养基 o附加激素是浓度分别为 t1s ou1s ov1s ow1s ox1s
°ª#pt的 u ow p ⁄os1t os1u os1x °ª#pt的 y p苄胺基嘌呤ky p …„l ∀另加 xss ∗ t sss °ª#pt的天然复
合物水解酪蛋白 o蔗糖 ws ª#pt ∀杂交鹅掌楸含有较多的单宁类物质 o培养过程中培养物容易褐变 o在
培养基中加入 t ∗ x °ª#pt的维生素 ≤能有效防止褐变发生 ∀培养基以 y1x ª#pt的琼脂粉作固化剂 o
³‹ x1{ otut ε 高温高压灭菌 ty °¬±∀
将试验材料接入诱导培养基 o每个培养皿接种 w个 o分别置光照与黑暗条件下培养 o温度 uu ∗ uz ε o
每 us §更换一次培养基 ∀
113 胚性细胞状态调整
待培养物长出白色透明愈伤组织后 o在无菌条件下将其切开 o转至愈伤组织调整培养基 ∀调整培养
基中无机盐浓度 o改用 ≥基本培养基 o提高蔗糖浓度以改变渗透压 o蔗糖浓度分别为 ws oxs oys ozs o{s ª
#pt ∀培养基其它成分同诱导培养基 ∀接种物全部转移至光照条件下培养 o光照 tu «#§pt o光照度为
t uss ¬¯o室温为 uu ∗ uz ε ∀
114 体细胞胚胎发生
在状态调整培养基上培养 w ∗ y周后 o胚性愈伤组织逐渐变得紧密 o渐呈颗粒状 ∀转至体胚发生培
养基上 o采用 ≥基本培养基 o附加的激素组合分别是 s1x ot1s ou1s ow1s ox1s °ª#pt的 × os os1t o
s1x ot1s °ª#pt的 Œ„„ o蔗糖浓度 ws ª#pt ∀uu ∗ uz ε 光照培养 ∀
115 体胚发育及植株再生
„…„可以促进体细胞胚的成熟和发育过程 o将胚性培养物分别在含有 s os1st os1sx os1t os1x ot1s
°ª#pt „…„的培养基中培养 o每种浓度各接种 v个培养皿 ous §后转入 ≥培养基使其继续发育 o球形
胚经过近 u个月的发育 o会依次经过球形胚 !心形胚 !鱼雷胚和子叶胚阶段而发育成苗 ∀统计每皿发育
正常的幼苗平均数 ∀
u 结果与分析
211 亲本基因型与外植体发育状况对体胚发生的影响
在参试的 v个基因型中k表 tl o÷{号亲本上采集的聚合果各个发育阶段试材均未能诱导出体细胞
胚 o而亲本 ‘和亲本 ƒ的诱导频率较高 o胚性愈伤组织诱导出来以后 o多数能顺利产生体细胞胚 ∀
从采样时间看 o南京地区 z月 t|日至 {月 u日期间采集的样品 o诱导胚性愈伤组织和体细胞胚的
sx 林 业 科 学 v|卷
效果都较好 ∀说明采样时间即幼胚发育阶段对体细胞胚胎的诱导起着至关重要的作用 o球形期至子叶
前期的幼胚对体胚诱导都有效k图版 ´ p tl ∀但是采样时间过早幼胚发育不好或过迟胚胎已经发育成
熟 o都不利于体胚的诱导 ∀
表 1 基因型及发育阶段对体胚发生的影响 ≠
Ταβ . 1 Εφφεχτ οφ γενοτψπε ανδ δεϖελοπ µενταλσταγε ον σοµατιχ εµ βρψογενεσισ
基因型
Š¨ ±²·¼³¨
采样时间k月 p日l ≤²¯¯¨ ¦·¬²± §¤·¨k°²±·«p §¤¼l
sy p u{ sz p sy sz p tv sz p t| sz p uy s{ p su s{ p s| s{ p ty
÷{ p ~p p ~p p ~p p ~p p ~p n ~p p ~p p ~p
‘ p ~p p ~p p ~p n ~n n ~n n ~n p ~p p ~p
ƒ p ~p p ~p p ~p n ~n n ~p p ~p p ~p p ~p
≠ n表示能够诱导 op 表示不能诱导 ∀ n o¦¤³¤¥¯¨²©¬±§∏¦·¬²±~ p o¬±¦¤³¤¥¯¨²©¬±§∏¦·¬²±q
212 培养条件的选择
木本植物胚性愈伤组织的诱导一般在黑暗条件下进行 ∀在试验中发现k表 ul o杂交鹅掌楸在黑暗
与光照条件下均能诱导胚性愈伤组织产生 o但黑暗条件下的诱导频率远远高于光照培养的诱导频率 ∀
另外 o试验发现 o培养温度是影响杂交鹅掌楸体胚发生的另外一个关键因素 o温度超过 vs ε o胚性
愈伤组织将会永久失去体细胞胚胎发生能力 ∀
表 2 培养条件对胚性愈伤组织诱导的影响
Ταβ . 2 Ινδυχτιον εφφεχτ οφ χυλτυρε χονδιτιον
培养条件
≤∏¯·∏µ¨ ¦²±§¬·¬²±
接种数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
胚性愈伤组织数
‘∏°¥¨µ²©
°¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¤¯ ¬¯
诱导频率
Œ±§∏¦·¬²±
©µ¨ ∏´¨ ±¦¼Πh
光照培养 ¬ª«·¦∏¯·∏µ¨ u{{ |y vv1v
暗培养 ⁄¤µ®¦∏¯·∏µ¨ w|y u|{ ys1t
合计 ײ·¤¯ z{w v|w xs1u
表 3 2 ,4 − ∆浓度与诱导频率的关系
Ταβ . 3 Χορρελατιον βετωεεν χονχεντρατιον οφ 2 ,4 − ∆ ανδ ινδυχτιον φρεθυενχψ
u ow p ⁄浓度 ≤²±¦¨±·µ¤·¬²±
²©u ow p ⁄Πk°ª#ptl
接种数
‘∏°¥¨µ²©
¬¨³¯¤±·¶
胚性愈伤组织数
‘∏°¥¨µ²©
°¨¥µ¼²ª¨ ±¬¦¦¤¯ ¬¯
诱导频率
Œ±§∏¦·¬²±
©µ¨ ∏´¨ ±¦¼Πh
t1s txy vu us1x
u1s tyt |w x{1w
v1s tw| zw w|1z
w1s txx xz vy1z
x1s tyv vx ut1z
213 培养基成分与胚性愈伤组织
的诱导
幼胚接入诱导培养基后约 tx §
开始启动 o长出的愈伤组织晶莹 !透
明 ∀ux §左右 o有些发生少许褐变 o
经继代后 o褐变停止 o并开始长出白
色 !快速增殖的胚性愈伤组织 ots §
左右的时间 o即可长满整个培养瓶 ∀
这种愈伤组织在解剖镜下观察 o发
现细胞多为圆球状 o水分含量多 o细
胞质稀薄 o结构较松散 ∀
培养基中外源激素的配比对胚
性愈伤组织的诱导及生长有很大的
影响 o特别是 u ow p ⁄的浓度起着
至关重要的作用k表 vl ∀虽然在各
种 u ow p ⁄浓度的培养基上都能诱
导出胚性愈伤组织 o但诱导率存在
很大差异 ∀当 u ow p ⁄浓度为 t1s
°ª#pt时 o诱导率低 o愈伤组织生
长较慢 o一个月以后会有褐变现象产生 ∀当 u ow p ⁄浓度为 x1s °ª#pt时 o诱导率也较低 o愈伤组织生长
迅猛 o到了细胞状态调整阶段以后 o由于生长素的后续效应 o细胞多为胞质稀薄的薄壁细胞 o不利于体细
胞胚胎发生 ∀当 u ow p ⁄浓度分别为 u1s ov1s °ª#pt时 o胚性愈伤组织诱导频率较高 o细胞生长状态容
易调整 o体细胞胚胎发生相对比较容易 ∀
214 渗透压改变与胚性细胞状态调整
试验证明 o渗透压对体细胞胚胎的形成起着重要的作用 ∀在裸子植物的体细胞胚胎发生研究中 o通
常利用肌醇k黄健秋等 ot||xl或聚乙二醇k¬ετ αλqot||zl作渗透剂 o提高培养基的渗透压 ∀在研究中发
tx 第 w期 陈金慧等 }杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生研究
现 o利用蔗糖作渗透剂 o对于胚性细胞的伤害较小 ∀随着渗透压的提高 o愈伤组织含水量逐渐降低而变
得干燥 !紧密 o培养一个月后 o会形成颗粒状的愈伤组织 o进而发育成体细胞胚k图版 ´ p ul ∀说明随着
渗透压的提高 o体胚诱导能力增强 ∀但是渗透压过高 o超出一定范围 o其诱导体细胞胚胎的能力反而下
降 o在本研究中 o蔗糖浓度 ys ª#pt时的渗透压为最适渗透压 ∀
另外值得一提的是 o及时将胚性愈伤组织转移至光照条件下培养非常重要 o因为光照培养条件下 o
能有效控制细胞的分裂速度 ∀
215 细胞分裂素在体细胞胚胎发生中的作用
经蔗糖渗透调节后的胚性细胞 o细胞质逐渐变得浓厚 o细胞新陈代谢旺盛 o细胞中沉积大量的淀粉
粒 o为体细胞胚胎发生做准备 ∀当培养细胞接种到以细胞分裂素为主的体胚发生培养基上 o培养基中高
浓度的细胞分裂素会缓和愈伤组织诱导阶段生长素的后续效应 o改善细胞状态 o经过一段时间的培养 o
来源于胚性愈伤组织表面的胚性细胞便会分化成为球形胚k图版 Œp v owl ∀
细胞分裂素 ×是鹅掌楸体细胞胚胎发生过程中的关键因素 ∀随 ×浓度升高 o体细胞胚胎发生频
率亦随之上升 o但浓度过高也会有副作用产生 o即细胞中容易沉积叶绿素 o导致其老化死亡 ∀ ×浓度为
t1s ou1s ow1s °ª#pt时 o都能诱导体细胞胚胎发生 ∀
216 体细胞胚的发育和成熟
表 4 ΑΒΑ对体细胞胚成熟的作用
Ταβ . 4 Εφφεχτσ οφ ΑΒΑ ον µατυρατιον οφ σοµατιχ εµ βρψοσ
„…„ 浓度
≤²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©
„…„Πk°ª#ptl
总幼苗数
ײ·¤¯ ±∏°¥¨µ
²©¶¨ §¨¯¬±ª¶
平均幼苗数
„√¨ µ¤ª¨ ±∏°¥¨µ
²©¶¨ §¨¯¬±ª¶
s {z u|1s
s1st twx w{1v
s1sx ux| {y1v
s1t utt zs1v
s1x usu yz1v
t1s t{{ yu1z
体细胞胚胎发生研究中最大的困难就是
畸形胚的发生 ∀在有些裸子植物的研究中 o
培养基中加入适当浓度的 „…„ o胚发育不正
常的情况 o如子叶合生 !早熟发芽等会受到抑
制k唐巍等 ot||yl ∀在本研究中发现k表 wl o
加入适量的 „…„ks1sx °ª#ptl o不仅能够抑
制畸形胚的产生k图版 Œp xl o而且能够提高
体细胞胚的萌发率 ∀
研究表明 o一旦球形胚形成以后 o立即转
入不含任何激素的 ≥培养基 o也能有效减
少畸形胚的发生 ∀并且体细胞胚具有两极
性 o比较容易形成发达的根系 o有效解决了鹅掌楸常规组织培养中丛芽不生根或生根难的问题k图版 Œ
p y ∗ {l ∀
v 结论与展望
研究证明 o体细胞胚胎发生能力与外植体的发育状态有着极为显著的联系 o而胚胎的发育与当年积
温有关 ∀所以在采集外植体时 o应该根据当年积温 o选取球形期至子叶前期材料为好 ∀
在植物材料发育的不同阶段 o有着不同的营养需求 o需要不同的基本培养基 o这可能与氮元素 !钙离
子等的吸收有关 ∀本试验在愈伤组织诱导阶段 o使用 tΠu≥培养基 o而到了胚性组织的诱导阶段 o提高
无机盐的用量 o改用 ≥基本培养基 o一方面是因为在此阶段 o培养物的营养需求旺盛 o另一方面 o也可
以提高培养基的渗透压 o利于体细胞胚胎发生 ∀
本试验建立的杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生体系 o不仅繁殖系数高 o再生植株移栽成活率高 o而且稳
定性好 o已经连续 v ¤获得了再生植株 ∀近 v万株再生植株的田间试验结果表明 o再生植株保持了明显
的杂种优势 o并在生长势 !株型结构上明显优于同期扦插苗 ∀
进一步研究利用生物反应器大规模生产杂交鹅掌楸体细胞胚 o这样可以节约生产成本 o提高生产效
率 ~由于体胚发生体系较为稳定 o可以在分子水平上研究胚胎发生的机理 ~体细胞胚胎发生系统是遗传
转化研究的良好受体系统 o利用农杆菌介导的转化方法 o可以转入有用抗性基因 o进行遗传改良研究 ∀
ux 林 业 科 学 v|卷
参 考 文 献
陈金慧 o施季森 o诸葛强 q杂交鹅掌楸的不定芽诱导及植株再生 q植物生理学通讯 oussu ov{kxl }wx|
黄健秋 o卫志明 q针叶树体细胞胚胎发生的研究进展 q植物生理学通讯 ot||x ovtkul }{x p |s
季孔庶 o王章荣 q鹅掌楸属植物研究进展及其繁育策略 q世界林业研究 ousst otwkul }{ p tw
李周歧 o王章荣 q鹅掌楸属种间杂种苗期生长性状的遗传变异与优良遗传型选择 q西北林学院学报 ousst otykul }x p |
南京林产工业学院林学系育种组 q亚美杂种马褂木的育成 q林业科技通讯 ot|zv oktul }ts p tt
沈惠娟 q木本植物组织培养技术 q北京 }中国农业科技出版社 ot||u }x{ p yz
施季森 q迎接 ut世纪现代林木生物技术育种的挑战 q南京林业大学学报 ousss ouwktl }t p y
唐 巍 o杨映根 o桂耀林等 q松柏类植物体细胞胚胎发生的研究与应用 q植物学通报 ot||y otvktl }ux p vt
Š∏³·¤° Ž o⁄∏µ½¤± ⁄q°¯ ¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± √¬¤¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶©µ²° ¶∏¥¦∏¯·∏µ¨§¦¤¯ ∏¯¶²© °¤·∏µ¨ °¨¥µ¼²¶²© Πιχεα αβιεσk‘²µº¤¼ ¶³µ∏¦¨l qŒ±
∂¬·µ² ≤¨¯ ∏¯¯¤µ¤±§ ⁄¨ √¨¯²³° ±¨·¤¯ …¬²¯²ª¼ 2°¯ ¤±·ot|{y ouu }y{x p y{{
‹¤®°¤± Œo√²± „µ±²¯§≥ q°¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±·«µ²∏ª«¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬± Πιχεα αβιεσk‘²µº¤¼ ¶³µ∏¦¨l q°¯ ¤±·°«¼¶¬²¯ ot|{x otut }tw| p tx{
¬÷ ≠ o ‹∏¤±ªƒ ‹ oŠ¥∏µ∞ ∞q°²¯¼¨ ·«¼¯ ±¨¨ ª¯¼¦²¯2³µ²°²·¨§§¨√¨¯²³° ±¨·²©¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²¶¬± ²¯¥¯²¯ ¼¯ ³¬±¨ k Πινυσταεδα ql qŒ± ∂¬·µ² ≤¨¯ ∏¯¯¤µ¤±§
⁄¨ √¨ ²¯³°¨ ±·¤¯ …¬²¯²ª¼ 2°¯ ¤±·ot||z ovvkvl }t{w p t{|
 µ¨®¯¨≥ „ o≥²°°¨ µ‹ ∞q≥²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶¬±·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ²© Λq τυλιπιφερα q≤¤± ƒ²µ• ¶¨ot|{y oty }wus p wuu
vx 第 w期 陈金慧等 }杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生研究