全 文 ：第 v{卷 第 x期
u s s u年 | 月
林 业 科 学
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鞭角华扁叶蜂保幼激素滴度的动态 3
王满囷 李周直
k南京林业大学森林资源与环境学院 南京 utssvzl
摘 要 } 用高效液相色谱法k‹°≤l测定了鞭角华扁叶蜂k Χηινολψδα φλαγελλιχορνισl末龄幼虫及滞育预蛹血淋巴中
保幼激素2 ¶k‹ ¶l的滴度 ∀结果表明 o末龄幼虫血淋巴中 ‹ ¶的滴度虽呈明显下降趋势 o但仍保持较高的水平
ktz ±ª#°ptl ~滞育预蛹血淋巴中 ‹ ¶的滴度达 us ±ª#°pt左右 o而在化蛹前一天则可达 vs ±ª#°pt以上 ∀表
明 ‹对鞭角华扁叶蜂预蛹滞育起调节作用 ∀
关键词 } 鞭角华扁叶蜂 o保幼激素 o高效液相色谱法
收稿日期 }usst2sv2uz ∀
基金项目 }国家自然科学基金资助项目k‘²qv||zsyt{l ∀
3 在试虫采集时 o得到浙江仙居县森防站工作人员的帮助 o特此致谢 ∀
ΧΗΑΝΓΕΣ ΟΦ ϑΥς ΕΝΙΛΕ ΗΟΡ ΜΟΝΕ ΤΙΤΡΕΣ ΟΦ ΧΗΙΝΟΛΨ∆Α ΦΛΑΓΕΛΛΙΧΟΡΝΙΣ
• ¤±ª ¤±´ ∏± ¬«²∏½«¬
k Χολλεγε οφ Φορεστρψ Ρεσουρχεσ & Ενϖιρονµεντo Νανϕινγ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Νανϕινγutssvzl
Αβστραχτ } ׫¨ ·¬·µ¨¶²©«¤¨ °²¯¼°³«­∏√¨ ±¬¯¨ «²µ°²±¨ k‹ ¶l ²©·«¨ ¤¯¶·¬±¶·¤µ¤±§§¬¤³¤∏¶¬±ª³µ¨³∏³¤²©·«¨ ¶¤º©¯¼ Χηι2
νολψδαφλαγελλιχορνισ º¨ µ¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ «¬ª«³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼k‹°≤l qŒ±·«¨ ¤¯¶·¬±¶·¤µo·«¨ ·¬·µ¨¶²©‹
¶ §µ²³³¨§¶«¤µ³¯¼o¥∏·¶·¬¯¯ °¤¬±·¤¬±¨ §¬± °¬§2·¬·µ¨¶k¤¥²∏·tz ±ª#°ptl q׫¨ ·¬·µ¨¶²©‹ ¶ ²©§¬¤³¤∏¶¬±ª³µ¨³∏³¤ °¤2
¬±·¤¬±¨ §¬± ¤«¬ª«¨µ¯ √¨¨ k¯¤¥²∏·us ±ª#°ptl o¤±§²√¨ µvs ±ª#°pt ¬±·«¨ §¤¼ ¥¨©²µ¨ ³∏³¤·¬²±qŒ·¶¨ °¨¨ §·«¤··«¨ §¬¤2
³¤∏¶¨ ²© Χηινολψδαφλαγελλιχορνισ º¤¶µ¨ª∏¯¤·¨§¥¼‹ q
Κεψ ωορδσ} Χηινολψδαφλαγελλιχορνισo∏√¨ ±¬¯¨ «²µ°²±¨ o ‹°≤
保幼激素k­∏√¨ ±¬¯¨ «²µ°²±¨ o‹l属于半倍萜类化合物 o它包括 ‹ ´k十八碳l !‹ µk十七碳l和 ‹ ¶
k十六碳l o此外尚有少量的 ‹s !‹…v 与 w2甲基 ‹ ´等 ∀它由昆虫的咽侧体分泌 o具有变态和调节生殖
器官发育的作用 ∀许多研究证实 ‹对昆虫的滞育特别是幼虫的滞育起着调节作用k≠¬± ετ αλqot|z{ ~
≠¤ª¬ετ αλqot|zw ~赵章武等 ot||xl ∀但由于 ‹在昆虫体内含量甚微ktsp z ∗ tsp | °²¯l o且不易于脂类物
质分离 o使得在生理水平上测定‹的滴度很困难 ∀对昆虫体内‹的测定 o最早只能采用生物测定的方
法 o其中使用最为广泛的是对大蜡螟k Γαλλερια µελλονελλαl或黄粉甲k Τενεβριο µολιτερl蛹的/蜡伤测试法0 ∀
由于生物测定法的特异性和灵敏性较差 ous世纪 zs年代以后逐步发展了气相色谱 p质谱分析法kŠ≤2
≥法l !放射免疫法k•Œ„l以及高效液相色谱法k‹°≤l o或通过放射化学法k• ≤l测定保幼激素酯酶k­∏2
√¨ ±¬¯¨ «²µ°²±¨ ¶¨·¨µ¤¶¨ o‹∞l来反映昆虫体内‹滴度k‹·¬·µ¨l的变化k王智翔 ot|{| ~王宗舜等 ot|{{ ~杨亦
桦等 ot||z ~云自厚等 ot||u ~龚国玑等 ot||y ~戴华国等 ot||zl ∀研究表明 ‹°≤ 测定法无需制备衍生物 o
最小检测量可达 ts ±ªo是一种较为简便易行的测定方法 ∀为探讨 ‹对鞭角华扁叶蜂发育及滞育的调
控作用 o利用 ‹°≤技术测定了鞭角华扁叶蜂不同发育阶段 ‹的滴度 ∀
t 材料与方法
111 供试昆虫
鞭角华扁叶蜂幼虫在自然条件下 o以水培柏木当年生枝叶饲养 ∀虫龄以幼虫脱皮次数来记数 o本试
验确定 x龄晚期幼虫头壳从前胸背板上脱落起计为 y龄 s «∀
112 血淋巴的收集
y龄幼虫 s «开始 o每隔 tu «收集 t次血淋巴 o预蛹期以入土为起点 o每隔 t个月收集 t次血淋巴 ∀
每一样品用虫 ts头 o加苯基硫脲晶体数粒 o置 p u| ε 下保存备用 ∀
113 试剂
甲醇为色谱醇 ~正己烷 !乙醚为国产分析纯试剂 o经室内重蒸后使用 ~标准品 ‹ ¶为 ≥¬ª°¤公司产
品 ∀
114 仪器
美国 • ¤·¨µ¶²§¨¯xts型液相色谱 o2w|s型可调波长可见2紫外检测器 oŽ…uuts型记录仪 ∀
115 样品制备
将一定量的血淋巴加一定比例的提取液甲醇Β乙醚ktΒtΠ∂Β∂l超声波振荡提取 v ∗ x °¬±o加入 u °
正己烷 o再超声振荡 ts °¬±o以 w sssµ#°¬±pt离心 ts °¬±取上清液 ∀用己烷反复提取 x次 o汇总上清液 o
上机前用高纯 ‘u 吹干 o流动相定容 ∀
116 仪器及色谱条件
¬¦«µ²¶³«¨µ≤t{柱 !Œ⁄wxΛ° !w1y °° ≅ txs °° o流动相为甲醇Β水kzxΒuxΠ∂Β∂l o流速为 s1y °#°¬±pt o
紫外检测 Κ€ ut{ ±° o进样量为 us ˏ∀以外标k峰面积l法定量 ∀
u 结果与分析
211 ϑΗ标样和试虫血淋巴 ϑΗ图谱
‹标准品及样品高效液相色谱检测图谱见图 t和图 u ∀
图 t ‹ ¶标准品 ‹°≤色谱图
ƒ¬ªqt ‹°≤ ©¬ª∏µ¨ ²©¶·¤±§¤µ§¶¤°³¯¨²©‹ ¶
图 u 预蛹血淋巴提取物色谱图
ƒ¬ªqu ‹°≤ ©¬ª∏µ¨ ²© ¬¨·µ¤·²µ¶¬± «¨¤°²¯²ª¼
标样和样品上机检测的结果表明 o标样和血淋巴的提取物出峰稳定 o‹ ¶的保留时间为 t| °¬±us¶
左右 o本实验的检测条件可用于 ‹ ¶滴度的测定 ∀
212 末龄幼虫血淋巴中 ‹的滴度
鞭角华扁叶峰末龄幼虫血淋巴中‹滴度变化如图 v ∀从图中可以看出 o‹的滴度在末龄幼虫血淋
巴中呈明显的下降趋势 ∀在末龄幼虫初期 ‹滴度较高 o可达 yw ±ª#°pt左右 ouw «后便迅速降低为 vu
±ª#°pt左右 o之后虽也呈现出下降的趋势 o但血淋巴中 ‹滴度仍保持较高的水平 o可达 tz ±ª#°pt以
上 ∀
213 预蛹血淋巴中 ϑΗ的滴度
鞭角华扁叶蜂预蛹血淋巴中 ‹滴度如图 w ∀从图中可以看出 o在鞭角华扁叶峰整个滞育期间 o血
淋巴中 ‹的滴度较高 o同末龄幼虫血淋巴中 ‹的滴度差别不大 o雌雄预蛹分别可达 t{和 tz ±ª#°pt
以上 ∀在滞育期间 o无论雌雄预蛹 o‹滴度保持较为平稳的状态 o只是在入土后 tvx §kts月 uu日l有一
个较为明显的下降趋势 o雌雄预蛹‹滴度分别为 t{1|y ±ª#°pt和 tz1wy ±ª#°pt左右 o之后又呈现上升
趋势 o到 t{w§ktu月 ts日l达最高值 o雌雄预蛹分别为 uv1|v ±ª#°pt和 ux1|s ±ª#°pt o这就表明在滞育
w{ 林 业 科 学 v{卷
期间 o鞭角华扁叶蜂的咽侧体仍保持较高的活性 o调控血淋巴中‹的滴度 o协调机体其它的生理生化变
化 o以适应周围环境的变化 ∀
图 v 末龄幼虫血淋巴中 ‹滴度
ƒ¬ªqv ‹ ·¬·µ¨¶²©«¤¨ °²¯¼°³«¬± ¤¯¶·¬±¶·¤µ¯¤√¤¨
图 w 滞育预蛹血淋巴中 ‹滴度
ƒ¬ªqw ‹ ·¬·µ¨¶²©«¤¨ °²¯¼°³«²©³µ¨³∏³¤
) ) )σ 雌预蛹 ƒ °¨¤¯¨~222222υ 雄预蛹 ¤¯¨q
图 x 鞭角华扁叶蜂化蛹前一周血淋巴中 ‹滴度
ƒ¬ªqx ׫¨ ‹ ·¬·µ¨¶²©«¤¨ °²¯¼°³«¬±·«¨ ³µ¨³∏³¤¥¨©²µ¨
³∏³¤·¬²± ²© Χηινολψδαφλαγελλιχορνισ
) ) )σ 雌预蛹 ƒ °¨¤¯¨~222222υ 雄预蛹 ¤¯¨q

214 化蛹前一周血淋巴中 ϑΗ的滴度
鞭角华扁叶蜂化蛹前 t周血淋巴中 ‹ 滴度如图 x ∀
从图中可以看出 o雌雄预蛹血淋巴中 ‹滴度在化蛹前的 t
周开始 o与滞育期间预蛹相比较 o血淋巴中 ‹滴度在一开
始有一个较为明显的下降趋势 o雌雄预蛹分别从 t|1sx ±ª#
°pt和 ut1sz ±ª#°pt降低为 tw1wy ±ª#°pt和 tt1tz ±ª#
°pt左右 o之后的几天中一直保持较低的滴度 ∀对  ‹滴
度测定的结果表明 o此时  ‹ 滴度出现第一次高峰 o此时
为预蛹皮层开始溶离 o出现蛹的皮细胞和相应的表皮tl ∀
tl王满囷 q鞭角华扁叶蜂滞育机理的研究 q南京林业大学博士学位论文 qusss
到化蛹前的第 u §时 o‹ 滴度又有所升高 o到化蛹前 t §
时 o雌雄预蛹可分别达 vz1wu ±ª#°pt和 u|1xv ±ª#°pt左
右 o此时为  ‹滴度降至最低 o鞭角华扁叶蜂开始化蛹 ∀
v 讨论
从本质上看 o昆虫滞育受到内分泌系统的调控 o但激
素对于滞育的起始 !维持及终止的调控机制在不同的昆虫种类中有所不同 ∀一般地 o促前胸腺激素
k°×׋l和脱皮激素k ‹l分泌受到抑制是导致大多数末龄幼虫滞育的关键k‘¬­«²∏·ot||xl ∀对鞭角华扁
叶蜂末龄幼虫血淋巴中 ‹滴度测定的结果表明 o在 y龄幼虫初期 o血淋巴中 ‹滴度迅速下降 o但之后
仍保持较高滴度的 ‹k血淋巴中 ‹ ¶的滴度可达 tz ±ª#°pt以上l o至使 °×׋和  ‹的分泌活动受到
抑制 o诱导鞭角华扁叶蜂滞育 ∀这同大多数滞育幼虫末龄血淋巴中 ‹ 滴度研究的结果相一致k≠¤ª¬ ετ
αλqot|zw ~≤«¬³³¨ ±§¤¯¨ot|zz ~≠¬± ετ αλqot|zw ~t|zy ~t|z|l ∀
同时 o对鞭角华扁叶蜂滞育预蛹 ‹ ¶滴度测定的结果表明 o同多数滞育幼虫相似 o在滞育期间 o其
预蛹血淋巴中 ‹ ¶的滴度达 us ±ª#°pt左右 o这就表明 o在鞭角华扁叶蜂滞育期间 o预蛹咽侧体k≤„l仍
保持较高的活性 o通过分泌 ‹来调节 °×׋和  ‹分泌活动 o维持鞭角华扁叶蜂的滞育 ~对化蛹前 t周
血淋巴中 ‹ ¶滴度测定的结果表明 o推测从化蛹前 t周左右开始 o预蛹咽侧体k≤„l的活性受到抑制 o‹
的生物合成停止 o血淋巴及组织中残存的‹被激活的酯酶和环氧化物水解酶分解 o导致‹滴度降到预
蛹脱皮化蛹的阈值 o分泌  ‹ 的前胸腺被激活 o机体开始蜕皮化蛹 ∀ k≤«¬³³¨ ±§¤¯¨ot|zz ~≠¤ª¬ ετ αλqo
x{ 第 x期 王满囷等 }鞭角华扁叶蜂保幼激素滴度的动态
t|zw ~≠¬± ετ αλqot|zw ~t|zy ~t|z| ~⁄¨ Ž²µ·ετ αλqot|{t ~∏¶½¼±¶®¤2°¼·¨¯ ετ αλqot||v ~王荫长 ousstl ∀这种
变化同对鞭角华扁叶蜂的内分泌系统解剖观察的结果也相一致 o在滞育期间 o鞭角华扁叶蜂预蛹的各分
泌器官未见任何萎缩的迹象k王满囷等 ousssl ∀
但对于 ‹如何同  ‹协调来调节鞭角华扁叶蜂滞育的确切机制 o还需要通过外源激素的处理以及
机体的结扎等试验来加以进一步的证实 ∀
参 考 文 献
戴华国 o程 薇 o吴晓毅等 q稻褐飞虱保幼激素酯酶活性的测定 q南京农业大学学报 ot||z ouskwl }ts{ ∗ tts
龚国玑 o杨春龙 o韩航如 q‹°≤检测粘虫保幼激素以及灭幼脲对保幼激素滴度的影响 q南京农业大学学报 ot||y ot|ktl }tsx ∗ tsz
王满囷 o李周直 q鞭角华扁叶蜂预蛹神经内分泌系统的解剖 q南京林业大学学报 ousss ouwkul }ut ∗ uw
王荫长 q昆虫生物化学 q北京 }中国农业出版社 ousst
王智翔 q昆虫保幼激素分析方法进展 q昆虫知识 ot|{| oktl }xz ∗ x|
王宗舜 o郑文惠 o郭 郛 q蓖麻蚕蛹期血淋巴中保幼激素滴度的测定 q科学通报 ot|{{ otx }tt{u ∗ tt{y
杨亦桦 o戴国华 o韩航如等 q用 ‹°≤测定稻褐飞虱体内的保幼激素 q华东昆虫学报 ot||z oykul }uw ∗ uz
云自厚 o杨轶帆 o姜在阶等 q用 ‹°≤测定长角血蜱中的保幼激素 q北京师范大学学报k自然科学学报l ot||u ou{kul }uss ∗ usu
赵章武 o黄永平 q昆虫滞育及其调控机制 q山西大学学报k自然科学版l ot||x ot{ktl }tsx ∗ tt{
≤«¬³³¨ ±§¤¯¨ Š  q ‹²µ°²±¤¯ µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ¤¯µ√¤¯ §¬¤³¤∏¶¨ q „±±∏ • √¨ ∞±·²°²¯ ot|zz ouu }tut ∗ tv{
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·¬²±qŒ±¶¨¦·°«¼¶¬²¯ ot|z| oux }xtv ∗ xuv
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λαqŒ±¶¨¦·°«¼¶¬²¯ ot|zw ous }t{vv ∗ t{wz
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t|z{ oux }xv ∗ x{
≠¬± ≤  o • ¤±ª ≥ o≤«¤º • ⁄q…µ¤¬± ±¨ ∏µ²¶¨¦µ¨·²µ¼ ¦¨¯¯ ¤±§ ¦¨§¼¶¬²·µ²³¬±¤¦·¬√¬·¼²©·«¨ ±²±2§¬¤³¤∏¶¬±ª¤±§§¬¤³¤∏¶¬±ª ∆ qγραδιοσελλα qŒ±¶¨¦·°«¼¶¬2
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y{ 林 业 科 学 v{卷