全 文 ：第 v{卷 第 y期
u s s u年 tt 月
林 业 科 学
≥≤Œ∞‘׌„ ≥Œ∂ „∞ ≥Œ‘Œ≤„∞
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‘²√ qou s s u
乐昌含笑不同类型鉴定的 Œ≥≥•2°≤• 分析 3
邱英雄 傅承新
k浙江大学生命科学学院 杭州 vtssu|l
何云芳
k浙江省林业厅种苗管理站 杭州 vtssu|l
摘 要 } 利用¬±·¨µp简单重复序列kŒ≥≥• l标记对乐昌含笑 y种类型的遗传变异进行了研究 o从 vs个引物中
筛选出 tu个多态性引物用于正式扩增 o共扩增出 tvw条 ⁄‘„带 o其中多态性 ⁄‘„带 yz条 o占 xs h o平均每个
引物扩增的 ⁄‘„带的数目为 tt1tyz条 ∀其中引物 Œ≥≥• ty !Œ≥≥• t|能区分全部类型 ∀引物 Œ≥≥• ty !Œ≥≥• t|和
Œ≥≥• u在不同的类型中扩增出了一些特有条带 o对乐昌含笑类型和品种鉴定以及检验品种的真实性方面非常
有价值 ∀本研究对 Œ≥≥• 分析技术的关键步骤进行了讨论 o并利用 ⁄‘„扩增结果对供试类型进行了聚类分
析 ∀
关键词 } 乐昌含笑 o类型鉴定 oŒ≥≥•2°≤•
收稿日期 }usst2s{2uz ∀
基金项目 }国家重点基础发展规划项目 ∀
3 浙江森禾种业有限公司研发部许绍远教授 o中国林科院亚热带林业研究所盛能荣研究员提供材料 o特致谢忱 ∀
Ι∆ΕΝΤΙΦΙΧΑΤΙΟΝ ΟΦ ΜΙΧΗΕΛΙΑ ΤΣΟΙ ΤΨΠΕΣ ΥΣΙΝΓ ΙΣΣΡ2ΠΧΡ ΜΑΡ ΚΕΡ ΑΣΣΑΨΣ
±¬∏≠¬±ª¬¬²±ª ƒ∏≤«¨ ±ª¬¬±
k Χολλεγε οφ Λιφε Σχιενχεσo Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ Ηανγζηουvtssu|l
‹¨ ≠∏±©¤±ª
k Μαναγεµεντ Στατιον οφ Σεεδ ανδ Σεεδλινγ oΖηεϕιανγ Φορεστρψ Βυρεαυ Ηανγζηουvtssu|l
Αβστραχτ } …¤¶¨§²±¬±·µ²§∏¦·¬²± ¤±§¶¨¯¨ ¦·¬√¨ ¥µ¨ §¨¬±ª²© Μιχηελιατσοι oª¨ ±¨·¬¦√¤µ¬¤·¬²±¶²©y Μqτσοι·¼³¨¶º¨ µ¨ §¨2
·¨µ°¬±¨ §∏¶¬±ªŒ≥≥• °¤µ®¨µ¤¶¶¤¼¶qtu ³µ¬°¨ µ¶º¨ µ¨ ¶¦µ¨ ±¨¨ §©µ²° vs ³µ¬°¨ µ¶o¤±§·²·¤¯ tvw ⁄‘„ ¥¤±§¶º¨ µ¨ ¤°³¯¬©¬¨§o
yz ²©º«¬¦«kxs h l º¨ µ¨ ³²¯¼°²µ³«¬¦q׫¨ ¤√¨ µ¤ª¨ ±∏°¥¨µ²© ⁄‘„ ¥¤±§¶¤°³¯¬©¬¨§¥¼ ¤¨¦«³µ¬°¨ µº¤¶tt qtyz q⁄‘„
³µ²©¬¯¨ ¶¥¤¶¨§²±Œ≥≥•ty oŒ≥≥•t| ¤±§Œ≥≥•u «¤√¨ µ¨√¨ ¤¯ §¨³²·¨±·¬¤¯ §¬¤ª±²¶·¬¦©¬±ª¨µ³µ¬±·¶¤±§¶³¨¦¬©¬¦¥¤±§¶©²µ√¤µ¬²∏¶
·¼³¨¶q׫¨ Œ≥≥• ¶³¨¦¬©¬¦¥¤±§¶¤µ¨ ∏¶¨©∏¯ ©²µ·«¨ ¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²± ²©¦∏¯·¬√¤·¨§ª¨µ°³¯¤¶°o¤±§·¨¶·¬±ª·µ∏¨±¨ ¶¶²©¦∏¯·¬√¤µ¶q
Ž¨¼ ¶·¨³¶²©Œ≥≥•2°≤• ¤±¤¯¼¶¬¶·¨¦«±¬´∏¨¶¤±§¤³³¯¬¦¤·¬²±·²·¨¶·¬±ª·µ∏¨±¨ ¶¶¤±§³∏µ¬·¼²© Μqτσοι·¼³¨¶º¨ µ¨ §¬¶¦∏¶¶¨§q
„ §¨±§µ²ªµ¤° º¤¶¦²±¶·µ∏¦·¨§¥¼ ∏¶¬±ª˜°Š„ ¤¯ª²µ¬·«°q
Κεψ ωορδσ} Μιχηελιατσοι ⁄¤±§¼o×¼³¨¶¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²±oŒ≥≥•2°≤•
us世纪 |s年代以来 o⁄‘„分子标记技术的出现为在 ⁄‘„分子水平上鉴定果树品种提供了强有力
的工具k贾继增 ot||y ~栾雨时等 ot||| ~‹∏ ετ αλqot|||l ∀ ¬¨·®¬¨º¬¦½等kt||wl提出了锚定 ≥≥• 的新策略 o
简称 Œ≥≥• ∀Œ≥≥• 类似于 • „°⁄o但利用包含重复序列并在 v.或 x.锚定的单寡聚核苷酸引物对基因组进
行 °≤• 扩增 ∀它可用于品种鉴定和居群遗传学研究 ∀近年来Œ≥≥• 分析技术在品种鉴定 !种质资源和遗
传多样性研究中得到广泛应用k钱韦等 ousss ~Š¬¯¥¨µ·ετ αλqot||| ~°µ¨√²¶·ετ αλqot|||l ∀
乐昌含笑k Μιχηελια τσοι ⁄¤±§¼l又名南方白兰花 o木兰科含笑属 o是南方常绿阔叶林的主要组成树种
之一 ∀水平分布西起贵州西北部 o东抵福建北部 o北至江西北部 o南达广东北部 o以南岭山系地区为中心
分布区 o一般分布在海拔 vss ∗ t xss °的深山沟谷两侧的常绿阔叶林中 ∀中国林科院亚热带林业研究
所从上世纪 zs年代后期 o对乐昌含笑的自然分布区进行实地考察 o并在浙江长乐林场进行了引种试验 o
共收集 y个种源 ovx个家系 ∀通过 ts ¤优株选育和大批量繁殖实验 !品种和新类型的比较实验 o选育出
y个株型 !叶型和花期差异大的类型k盛能荣等 ot||yl ∀本研究在已有工作的基础上 o利用 Œ≥≥• 分析技
术对乐昌含笑的 y种类型进行确定 o对新类型在 ⁄‘„水平的遗传变异进行了分析 o并筛选出分辨率高 !
重复性好 o而且能扩增出特有条带的引物 ∀
表 1 供试乐昌含笑的 6 个类型
Ταβ .1 6 τψπεσ οφ Μ . τσοι τψπεσ
植株代码 °¯ ¤±·¦²§¨ 类型 ×¼³¨¶
t 细叶稠密型 ‘¤µµ²º2¯ ¤¨√ §¨¤±§§¨±¶¨2¯ ¤¨√¨ §·¼³¨
u 皱叶紧密型 ≤µ¬¶³¨ §2¯ ¤¨√ §¨¤±§¦²°³¤¦·2¦µ²º±¨ §·¼³¨
v 大叶稠密型 ¤µª¨ 2¯ ¤¨√ §¨¤±§§¨±¶¨2¯ ¤¨√¨ §·¼³¨
w 枝叶稀疏型 ≥³¤µ¶¨2¥µ¤±¦«¨ §¤±§¶³¤µ¶¬©²¯¬∏¶·¼³¨
x 普通型 ≤²°°²±·¼³¨
y 早花型 ∞¤µ¯¼ ©¯²º µ¨¬±ª·¼³¨
t 材料和方法
1 .1 植物材料
试验所用的材料为乐昌含笑的 y个变
型k表 tl ∀
1 .2 ⁄‘„提取
采取新鲜叶片 o硅胶彻底干燥 o称取
s1t ª干叶 o≤ׄ…法k⁄²¼¯¨ ετ αλqot|{zl提
取各类型总 ⁄‘„ o用 t1s h琼脂糖电泳检
测 ⁄‘„质量 o图 t为乐昌含笑的 y种类型的 ⁄‘„ 电泳结果 o⁄‘„ 的纯度和浓度通过紫外吸收法测定
k邹喻苹等 ousstl ∀
1 .3 Œ≥≥• 反应条件及程序
图 t 乐昌含笑 y个类型的基因组
⁄‘„电泳结果
ƒ¬ªqt ׫¨ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶µ¨¶∏¯·²©ª¨±²°¨
⁄‘„ ²©y Μιχηελιατσοι·¼³¨¶
表 2 ΙΣΣΡ 引物序号与序列 ≠
Ταβ .2 Λιστ οφΙΣΣΡ πριµερσ ανδ
τηειρ σεθυενχεσ υσεδ ιν τηεστυδψ
引物 °µ¬°¨ µ 序列 ≥¨´ ∏¨ ±¦¨kxχ2vχl
Œ≥≥• u kŠ„≤„lw
Œ≥≥• w …⁄…k≤„ly
Œ≥≥• x ∂ ‹∂kŠ×lz
Œ≥≥• | k≤×l{ • ≤
Œ≥≥• tx ≤≤≤kŠ×ly
Œ≥≥• ty Š≥ŠkŠ×ly
Œ≥≥• t| ŠŠ„kŠ×Šlw
Œ≥≥• us ≤≤„kŠ×Šlw
{ts kŠ„l{×
{uw k×≤l{ Š
{y{ kŠ„„lx
{zw k≤≤≤×lw
≠ … € ≤ЊΠ× o⁄ € „ΠŠΠ× o∂ € „Π≤Њ o‹ € „Π≤Π× o
≥ € ŠΠ≤ o• € „Π× o‘€ „ΠŠΠ≤Π× o• € „ΠŠ q
Œ≥≥•2°≤• 扩增反应是在英国 ‹¼¥¤¬§公司生产的 ≥°• ×sst
型 °≤• 仪上进行 o反应条件确定为 }ux ˏ的 °≤• 反应液内含 }
模板约 ys ±ªot˜·¤´ 酶 ot qx °°²¯ #pt ª≤¯ u ow 种 §‘×° 各 s q
ux°°²¯#pt os1v Λ°²¯#pt引物 os1x °°²¯#pt亚精胺 ou h甲酰
胺 ∀°≤• 扩增条件 }|w ε 预变性 x °¬±o然后进行 wx个循环 }|w ε
变性 t °¬±oxu ∗ xx ε 复性 wx¶ozu ε 延伸 u °¬±o循环结束后 zu ε
延伸 x °¬±∀°≤• 产物在 u1s h琼脂糖ks1x Λª#°ptl上电泳 o∞°2
≥’‘紫外自动成像仪照相 ∀
1 .4 引物筛选
Œ≥≥• 引物是根据加拿大 …µ¬·¬¶« ≤²¯∏°¥¬¤大学公布的序列
设计 o由上海生工公司合成 ∀从 vs个引物中选出 tu个扩增条
带较多 !信号强 !背景清晰的引物用于 Œ≥≥•2°≤• 反应k表 ul o变性温度根据引物的 Τ°值变化 t ∗ v ε o
Œ≥≥• ty oŒ≥≥• t|和 Œ≥≥• u的变性温度均确定为 xu ε ∀
1 .5 扩增产物和差异带的分析方法
t qx qt 带的记录 电泳图谱的每条带k⁄‘„片段l o均为一个分子标记k¤µ®¨µl o代表一个引物的结合
位点 ∀根据各分子标记的迁移率及其有无统计所有的二元数
据 ~有带k显性l记作 t o无带k隐性l记为 s o强带和弱带的赋值
均为 t ∀对于多态位点 o仅在重复实验中能稳定出现的差异带
用于数据分析 ∀
t qx qu 数据的统计分析方法 利用 ⁄°≥统计软件的欧氏可变
类平均法构建类型之间的分子系统树k唐启义等 ot||zl o并计
算两个类型之间的遗传距离 ∀
u 结果与分析
2 .1 ⁄‘„扩增结果和基因组多样性程度分析
表 v结果表明 o所选用的 tu个引物对所有样品进行 °≤•
扩增 o共计扩增出 tvw条 ⁄‘„条带 o其中 o多态性 ⁄‘„条带 yz
条 o占总带数的 xs h o每个引物扩增的 ⁄‘„带的数目在 u ∗ tw
条 o平均 x qx{v条 ∀扩增出的 ⁄‘„带的大小在 vss ∗ u xss¥³∀
2 .2 ⁄‘„扩增的特异性条带分析
通过 vs个引物的筛选 o检测了乐昌含笑的基因组 tvw个
sx 林 业 科 学 v{卷
表 3 12 个有效引物的扩增情况
Ταβ .3 Αµπλιφιχατιονσ οφ 12 εφφεχτιϖεΙΣΣΡ πριµερσ
引物
°µ¬°¨ µ
扩增带数
ײ·¤¯ ¤°³¯¬©¬¨§
¥¤±§¶
多态性条带数
‘∏°¥¨µ²©
³²¯¼°²µ³«¬¦¥¤±§¶
多态带的百分率
°¨ µ¦¨±·¤ª¨ ²©
³²¯¼°²µ³«¬¦¥¤±§¶Πh
Œ≥≥• u tw tu {x qz
Œ≥≥• w | v vv qv
Œ≥≥• x | z zz q{
Œ≥≥• | ts v vs qs
Œ≥≥• tx tt w vy qw
Œ≥≥• ty ts y ys qs
Œ≥≥• t| t{ tw zz q{
Œ≥≥• us tt w vy qw
{ts | u uu qu
{uw { v vz qx
{y{ tv w vs q{
{zw tu x wt qz
总数 ײ·¤¯ tvw yz
平均 „√ µ¨¤ª¨ tt qtyz x qx{v xs qs
表 4 类型的特有 ΙΣΣΡ 标记
Ταβ .4 Τψπε2σπεχιφιχ µαρκερσ οφ ΙΣΣΡ
代号
≤²§¨
标记k引物号2分子量l
¤µ®¨µk°µ¬° µ¨‘²q2°²¯ ¦¨∏¯¤µ¶¬½¨ l
t Œ≥≥• t| p t tus
u Œ≥≥• t| p {ss
w Œ≥≥• ty p yxs oŒ≥≥• u p t xss
x Œ≥≥• t| p yss oŒ≥≥• u p w{s
y Œ≥≥• ty p xws oŒ≥≥• t| p u sss oŒ≥≥• u p wxs
位点 o大部分类型均有特有条带产生 o可作为
重要的分子性状用于早期品种或类型鉴定和
早期性状预选 ∀y种类型仅大叶稠密型无特
有条带 o其它 x种类型能根据其特有条带可
各自区分开k图 ul ∀有特有条带的类型占供
试类型的 {v qy h k表 wl ∀
2 .3 品种间遗传关系分析
从图 v可知 o乐昌含笑的 y个类型在遗
传距离约为 v1y处被明显分为两大类 o其中 o
细叶稠密型 !皱叶紧密型和大叶稠密型聚为
一类 o而枝叶稀疏 !普通和早花型聚为一类 ∀
枝叶稀疏和普通型之间的遗传距离最近 u q
{v o其次是皱叶紧密型和大叶稠密型 o遗传距
离为 v qty ∀
v 讨论
3 .1 关于乐昌含笑类型的划分
乐昌含笑选育的 y种类型在叶形 !株型
和花期等性状方面出现了明显的变异 ∀如 }
细叶稠密型的树冠圆锥状 o分枝角度中等 ~叶
倒卵状椭圆形 ~叶排列稠密 ~顶芽 !嫩枝 !侧芽
具细短毛 ∀皱叶紧密型的树冠呈卵形 o分枝
角度小 ~叶倒卵形 o叶面波皱明显 ∀大叶稠密
型的树冠呈卵圆形 o分枝角度中等 ~叶片长圆
状倒卵形 o先端尖头钝 o叶面波皱明显 ∀枝叶稀疏型的树冠松散 o分枝角度大 ~树皮灰白色 ~叶面平展 ∀
普通型的树冠呈卵圆形 o分枝角度中等 ~树皮褐色 ~叶片长圆状倒卵形 o叶缘微皱 ∀早花型的树冠紧密 ~
嫩枝 !芽 !叶柄具褐色短毛 ~叶倒卵形 ~始花期早 ∀经过 Œ≥≥• 分析 o这 y种类型在 ⁄‘„水平也出现了一
定程度的遗传分化 o因此可以作为新类型应用于园林绿化树种 ∀
图 u 乐昌含笑 y个类型的 Œ≥≥•2°≤• 扩增带谱k箭头示特异性扩增产物l
ƒ¬ªqu Œ≥≥•2°≤• ³µ²©¬¯¨ ¶²©y Μq τσοι·¼³¨¶k„µµ²º¶¬±§¬¦¤·¨¶³¨¦¬©¬¦¤°³¯¬©¬¦¤·¬²± ³µ²§∏¦·¶l
t∗ y为类型代码 o }⁄‘„标准分子量 ‘∏°¥¨µt∗ y¶·¤±§©²µ·¼³¨¶q ¬±§¬¦¤·¨¶⁄‘„ ¶·¤±§¤µ§°²¯ ¦¨∏¯¤µº¨¬ª«·q„qŒ≥≥•tyo…qŒ≥≥•t|o≤ qŒ≥≥•uq
tx 第 y期 邱英雄等 }乐昌含笑不同类型鉴定的 Œ≥≥•2°≤• 分析
3 .2 Œ≥≥• 分析技术用于类型或品种鉴定的可行性
本实验的研究结果表明 oŒ≥≥• 技术在对乐昌含笑 y种类型鉴定的研究中 o具备分辨率高和多态性
强的特点 o多态性条带百分率达 xs h ∀从 vs个引物中筛选出的引物 Œ≥≥• u !Œ≥≥• ty和 Œ≥≥• t|在乐昌含
笑的 x种类型中产生了特有条带 ∀对于不同类型的 Œ≥≥• 扩增的特有条带 o还可进行切胶 !回收 o以及克
隆和测序 o通过序列和软件分析 o设计出一对互补到 Œ≥≥• 片段两端的引物 o将其转化为品种和类型的特
异引物 ∀由于不同引物的扩增带型差异较大 o因此筛选引物非常有必要 ∀本实验筛选的能扩增特有条
带的引物在生产实践中具有较高的应用价值 o可为以后鉴定和检测乐昌含笑类型或品种的真实性 !品种
的苗期鉴定提供客观 !准确的技术保证 ∀
图 v 乐昌含笑 y个类型的 Œ≥≥•
聚类分析树状图
ƒ¬ªqv ⁄¨ ±§µ²ªµ¤° ²©Œ≥≥• ¦¯∏¶·¨µ¤±¤¯¼¶¬¶
©²µy·¼³¨¶²© Μqτσοι
Œ≥≥• 技术的操作过程简单 o快捷 ∀但有 v点值得注意 }一要保证
模板 ⁄‘„的质量 ∀二对于不同的引物的退火温度应根据引物的 Τ°
值要略有变动 ∀三是 Œ≥≥• 扩增的带型背景较强 o应在 °≤• 反应体系
中增加一些化学物质 o使背景颜色减弱 o条带清晰 ∀Œ≥≥• 引物的长度
一般都在 tx ∗ uw ¥³o反应的退火温度 xu ∗ xx ε 比 • „°⁄的 vy ∗ ws ε
高 o因此对 °≤• 反应的敏感性低于 • „°⁄~Œ≥≥• 引物中包含有一定长
度的重复序列 o与它结合的目标序列在 ⁄‘„复制的过程中存在滑动
和不均等交换现象 o使得它们在不同品种或个体间的重复次数存在
较大差异 o更易于导致引物结合位点和两结合位点间的片段长度产
生差异kŠ¬¯¥¨µ·ετ αλqot||| ~钱韦等 ousssl ∀因此 Œ≥≥• 在反应的稳定
性和检测 ⁄‘„遗传变异能力方面较 • „°⁄分析技术更高 ∀在 Œ≥≥• 反
应体系中加入 u h甲酰胺能够降低由于引物滑动而引起的背景模糊 o
加入 u h ∗ w h ⁄≥’能提高反应的特异性k²¶«¬ετ αλqousssl ∀
综上所述 oŒ≥≥• 分析技术将在 ⁄‘„ 水平上 o为检测和鉴定品种
苗木的真实性 !登录新品种 !保护育种产权提供科学和准确的技术保
障 ∀
参 考 文 献
贾继增 q分子标记种质资源鉴定和分子标记育种 q中国农业科学 ot||y ou|kwl }t ∗ ts
栾雨时 o安利佳 o黄百渠等 q用 ≥≥• 探针进行番茄品种的 ⁄‘„指纹分析 q园艺学报 ot||| ouyktl }t ∗ w
钱 韦 o葛 颂 o洪德元 q采用 • „°⁄和 Œ≥≥• 标记探讨中国疣粒野生稻的遗传多样性 q植物学报 ousss owukzl }zwt ∗ zxs
盛能荣 o刘昭息 o丁 林 q乐昌含笑的分布与引种 q浙江林业科技 ot||y otykvl }uw ∗ vs
唐启义 o冯明光 q实用统计分析及其计算机处理平台 q北京 }中国农业出版社 ot||z
邹喻萍 o葛 颂 o王晓东 q系统与进化植物学中的分子标记 q北京 }科学出版社 ousst
⁄²¼¯¨ o⁄²¼¯¨q„ µ¤³¬§⁄‘„ ¬¶²¯¤·¬²± ³µ²¦¨§∏µ¨ ©²µ¶°¤¯¯ ∏´¤±·¬·¬¨¶²©©µ¨¶«¯¨ ¤©·¬¶¶∏¨ q°«¼·²¦«¨ ° …∏¯¯ot|{z ot| ott ∗ tx
Š¬¯¥¨µ·∞o¨º¬¶• …o • ¬¯®¬±¶²±   ετ αλq ⁄¨ √¨¯²³¬±ª¤± ¤³³µ²³µ¬¤·¨ ¶·µ¤·¨ª¼·²¤¶¶¨¶¶ª¨ ±¨ ·¬¦√¤µ¬¤¥¬¯¬·¼¬± ³¯¤±·ª¨µ°³¯¤¶° ¦²¯¯¨ ¦·¬²±¶q׫¨ ²µ„³³¯
Š¨ ±¨ ·ot||| o|{ ottux ∗ ttvt
‹∏o ±∏¬µ²¶≤ ƒ qŒ§¨±·¬©¬¦¤·¬²± ²©¥µ²¦¦²¯¬¤±§¦¤∏¯¬©¯²º µ¨¦∏¯·¬√¤µ¶º¬·« • „°⁄ °¤µ®¨µ¶q°¯¤±·≤¨¯¯ • ³¨²µ·¨µot||| ots oxsx ∗ xtt
²¶«¬≥ ° oŠ∏³·¤ ∂ ≥ o„ªª¤µº¤¯ • Žo•¤±­¨®¤µ° Žo…µ¤µ⁄≥ qŠ¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼¤±§³«¼¯²ª¨ ±¨ ·¬¦µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³¤¶µ¨√ ¤¨¯ §¨¥¼¬±·¨µ¶¬°³¯¨¶¨ ∏´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·
kŒ≥≥• l ³²¯¼°²µ³«¬¶°¬±·«¨ ª¨ ±∏¶ Ορψζα q׫¨ ²µ„³³¯ Š¨ ±¨ ·ousss otss otvtt ∗ tvus
°µ¨√²¶·„ o • ¬¯®¬±¶²±  q„ ±¨ º ¶¼¶·¨° ²©¦²°³¤µ¬±ª°≤• ³µ¬° µ¨¶¤³³¯¬¨§·²Œ≥≥• ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª²©³²·¤·²¦∏¯·¬√¤µ¶o׫¨ ²µ„³³¯ Š¨ ±¨ ·ot||| o|{ otsz
∗ ttu
¬¨·®¬¨º¬¦½ ∞o•¤©¤¯¶®¬„ o¤¥∏§¤⁄qŠ¨ ±²°¨ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª¥¼¶¬°³¯¨¶¨ ∏´¨ ±¦¨ µ¨³¨ ¤·k≥≥• l2¤±¦«²µ¨§³²¯¼°¨ µ¤¶¨ ¦«¤¬±µ¨¤¦·¬²± ¤°³¯¬©¬¦¤·¬²±q Š¨ ±²°2
¬¦¶ot||w ous otzy ∗ t{v
ux 林 业 科 学 v{卷