全 文 ：第 v|卷 专刊 t
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林 业 科 学
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木麻黄根瘤内生菌生物学特性研究 3
李志真tl 谢一青ul 王志洁vl 杨宗武xl
k福建省林业科学研究院 福州 vxsstul
陈启锋wl
k福建农林大学 福州 vxsssul
摘 要 } 对与福建 !广州的细枝木麻黄 !短枝木麻黄和粗枝木麻黄共生的 tz株根瘤内生菌进行了形态培养 !
生理类群 !营养源利用 !代谢酶 !宿主特异性等生物学特性进行了系统研究 ∀结果表明 otz株木麻黄根瘤内生
菌具有分枝状菌丝 !孢囊 !泡囊等 Φρανκια菌的特征性结构 oƒ≤¦yw !ƒ≤¦|u !ƒ≤ v¨v等菌株还具有串珠状菌丝段 ∀
木麻黄内生菌有 „ !… !„…等 v种生理类群 o其中 …群内生菌多 ∀菌株离体培养具有固氮酶活性 o且差异显著 ∀
多数木麻黄内生菌能良好利用吐温 o只有少数菌株可利用葡萄糖等糖类物质 ∀内生菌不同生理类群在碳氮源
利用 !有机酸羧化和代谢酶产生等方面没有明显的对应关系 o表现出丰富的多样性 ∀侵染试验表明木麻黄
Φρανκια菌株不仅可在木麻黄属内种间进行交叉侵染 o还能侵染杨梅 !沙枣和桤木等植物结瘤 ∀
关键词 } 木麻黄 oΦρανκια o生物学特性 o生理类群 o宿主特异性
收稿日期 }ussv p sv p ut ∀
基金项目 }福建省科技厅自然基金项目k…||vsstl资助 ∀
3 tl !ul !vl !wl !xl为作者排序 ∀参加工作的还有王元贞 !郭素珍 !黄琼春 !李朝晖等同志 o在此一并致谢 ∀
ΤΗΕ ΒΙΟΛΟΓΙΧΑΛ ΧΗΑΡΑΧΤΕΡΙΣΤΙΧΣ ΟΦ ΑΧΤΙΝΟΡ ΜΨΧΕΤΕΣ ΦΡΑΝΚΙΑ
ΛΙςΙΝΓ ΙΝ Ρ ΟΟΤΣ ΟΦ ΧΑΣΥΑΡΙΝΑ
¬«¬½«¨ ±tl ÷¬¨ ≠¬´¬±ªul • ¤±ª«¬­¬¨vl ≠¤±ª²±ªº∏xl
k Φυϕιαν Αχαδεµψοφ Φορεστρψ Φυζηουvxsstul
≤«¨ ± ±¬©¨ ±ªwl
k Φυϕιαν Αγριχυλτυρε ανδ Φορεστρψ Υνιϖερσιτψ Φυζηουvxsssul
Αβστραχτ } ≥¼¶·¨°¤·¬¦¶·∏§¬¨¶²©·«¨ ¥¬²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶º¨ µ¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·²±tz Φρανκια¶·µ¤¬±¶¬¶²¯¤·¨§©µ²°·«¨ µ²²·
±²§∏¯ ¶¨²©¤¦·¬±²µ«¬½¤¯ ³¯¤±·¶ Χασυαρινᬱ ƒ∏­¬¤± ¤±§ Š∏¤±ª½«²∏o¬±¦¯∏§¬±ª °²µ³«²¯²ª¼o¦∏¯·∏µ¨ o³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ªµ²∏³o
±∏·µ¬¨±·∏·¬¯¬½¤·¬²±o ±¬·µ²ª¨±¤¶¨ ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§«²¶·¶³¨¦¬©¬¦¬·¼q ׫¨ ²¥¶¨µ√¤·¬²±¶¥¼ °¬¦µ²¶¦²³¼ §¨ °²±¶·µ¤·¨§·«¤·¤¯¯·«¨
¶·µ¤¬±¶·¨¶·¨§¶«²º¨ §¤·¼³¬¦¤¯ Φρανκια °²µ³«²¯²ª¼o º¬·«©¬¯¤°¨ ±·²∏¶«¼³«¤¨ o °∏¯·¬¯²¦∏¯¤µ¶³²µ¤±ª¬¤ ¥²µ±¨ ·¨µ°¬±¤¯ ¼¯ o
¤¯·¨µ¤¯ ¼¯ o²µ¬±¤±¬±·¨µ¦¤¯¤µ¼³²¶¬·¬²±²±¥µ¤±¦«¬±ª«¼³«¤¨ q× µ¨°¬±¤¯ ²µ¯¤·¨µ¤¯ ¥²µ±¨ √¨ ¶¬¦¯¨ ¶º¨ µ¨ ª¨ ±¨ µ¤¯ ¼¯©²µ°¨ §²± ¤¯¦®
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¶³¨¦¬¨¶²µ¤¶¬±ª¯¨³¯¤±·«¤§¤ ∏´¬·¨ §¬©©¨µ¨±¦¨ ²± ¦¯²±¤¯ ¶«¤³¨ o¦²¯²µ¤±§³¬ª°¨ ±·qƒ¬©·¨¨ ± Φρανκιᬶ²¯¤·¨¶º¨ µ¨ ©²∏±§·²
©¤¯¯¬±·²·«µ¨¨³«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ªµ²∏³¶o·º²¬¶²¯¤·¨¶º¨ µ¨ ¥¨ ²¯±ª¨§·²ªµ²∏³ „ o ¬¨ª«·º¨ µ¨ ªµ²∏³ … ¤±§©¬√¨ º¨ µ¨ ªµ²∏³ „…q
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‘¨¤µ¯¼ ¤¯¯·«¨ ¬¶²¯¤·¨¶º¨ µ¨ ¬¯®¨ ¼¯·²∏·¬¯¬½¨ ‘ ¤°¬±¨ o¶²§¬∏° ¤¦¨·¤·¨o¶²§¬∏° ³µ²³¬²±¤·¨ ¤±§×º¨ ±¨p {s o¥∏·³²·¤¶¶¬∏°
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¬¶²¯¤·¨¶q׫¨ ¬±²¦∏¯¤·¬²± ¬¨³µ¬°¨ ±·µ¨¶∏¯·¶«²º¨ §·«¤··«¨ ¶·µ¤¬±¶©µ²° Χασυαρινα ±²·²±¯¼ «¤§¤¥¬¯¬·¼·²¬±©¨¦·Χασυαριναo
¥∏·¤¯¶²·²¬±©¨¦·Μψριχα ρυβραo Ελαεαγνυσ ανγυστιφολι ¤±§ Αλνυσ χρεµαστογψµ q „±§¬·µ¨©¯ ¦¨·¨§·«¤·Φρανκιᬱµ²²·¶²©
Χασυαρινᬱ ≤«¬±¤ °¬ª«·«¤√¨ ¤ º¬§¨ §¬√¨ µ¶¬·¼q
Κεψ ωορδσ} Χασυαριναo Φρανκιαo…¬²¯²ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¬¶·¬¦¶o°«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯ ªµ²∏³o‹²¶·¶³¨¦¬©¬¦¬·¼
木麻黄k Χασυαριναl是我国南方沿海防护林的重要树种 o在防风固沙 !保护农田 !提供薪炭材 !改善生
态环境和发展沿海地区经济等方面发挥着巨大的作用 ∀木麻黄同时也是一类放线菌结瘤植物 o在自然
状态下能与放线菌 Φρανκια共生 o形成根瘤 o固定空气中的氮素 o使树木能够在养分贫瘠的沙地上生长
良好 ∀因此开展木麻黄共生固氮研究 o对于提高木麻黄的共生固氮效率 o促进防护林生长更新有着重要
的理论意义和应用前景 ∀
自 ⁄¬¨°等kt|{ul从木麻黄根瘤上成功分离到 Φρανκια纯培养菌株 ⁄Œt 和 Šu 以来 o各国学者在木麻
黄 Φρανκια的分离培养k«¤±ª ετ αλqot|{w ~蒋建德等 ot|{x ~李志真等 ot||{l !形态特征k李忠伟等 ot|{y ~
黄雅丽等 ot|{|l !生理特性k袁长芳 ot|{z¤~t|{z¥~康丽华等 ot||y ~ײµµ¨¼ ετ αλqot|{w ~«¤±ª ετ αλqot|{x ~
¨¦«¨ √¤¯¬¨µot||wl !同功酶k张道海等 ot|{|l !限制性酶切图谱k‘¤½¤µ¨·ετ αλqot|{|l !宿主侵染k…¤®¨µo
t|{z ~ײµµ¨¼ot|{|l !分子多态性k•²∏√¬¨µετ αλqot||yl等诸方面进行了研究 ∀关于 Φρανκια分类 o现今只
确定至/属0 o尚不能进行/种0的划分k胡传炯等 ot||z ~¨¦«¨ √¤¯¬¨µot||wl ∀木麻黄分布广泛 o生态环境多
种多样 o目前分离培养和研究的 Φρανκια菌株来源及数量有限 o菌株间表现出丰富的差异性 o因此有必
要更广泛地收集 Φρανκια菌株 o开展其生物学特性和共生特性研究 o为深入了解 Φρανκια菌 o正确进行分
类提供基础 ∀基于此 o本文针对福建 !广东沿海和山地生长的木麻黄根瘤内生菌开展了形态培养 !生理
类型 !营养源利用 !代谢酶 !宿主特异性等生物学特性的系统研究 ∀
t 材料与方法
111 试验材料
参试木麻黄根瘤内生菌 tz 株 oty 株分离自福建沿海和山地的细枝木麻黄 k Χασυαρινα
χυννινγηαµιαναl !短枝木麻黄k Χq εθυισετιφολιαl和粗枝木麻黄k Χqγλαυχαl等根瘤 ot株来自广州的短枝木
麻黄 o由中国林业科学研究院热带林业研究所康丽华研究员惠赠 ∀以杨梅k Μψριχα ρυβραl Φρανκια菌株
uutx !ƒµx|和四川桤木kΑλνυσχρεµαστογψνεl Φρανκια菌株 ƒ„¦st为对照 ouutx分离自云南杨梅根瘤 o为中
国科学院微生物研究所刘志恒研究员赠送 oƒµx| !ƒ„¦st分别从福建杨梅 !四川桤木根瘤上分离获得 ∀
各菌株的宿主来源见表 t ∀
112 研究内容和方法
t1u1t 形态特征 tz株木麻黄根瘤内生菌和 v株对照菌株分别接种于 ≥k¨¦«¨ √¤¯¬¨µετ αλqot|{vl !…„°
k∏µµ¼ ετ αλqot|{wl !„k„®®¨µ°¤±¶ ετ αλqot|{vl等 v种液体培养基内 ouz ε 静置培养 w ∗ tu周 o于光学
显微镜和电子显微镜下观察各菌株的形态结构 ∀
t1u1u 培养特征 us株根瘤内生菌接种于 ≥ !…„° !„等液体培养基内 ouz ε 静置培养 w ∗ {周 o观察菌
株在液体培养基中的生长特征 ∀同时观察生长于 ≥斜面培养基上的固体菌落特征 ∀
t1u1v 生理类型 根据 ¨¦«¨ √¤¯¬¨µ等kt|{vl的生理类群划分方法 o将经同期预培养的参试菌株接种于
含 ׺¨ ±¨ p {s和不含 ׺¨ ±¨ p {s的 ts ª#pt葡萄糖的 ‘„≥培养基k分别记作 ts≥和 ts≥ n ×l ouz ε 暗处
静置培养 oy周后测定菌丝体的生长量 o以比较其生理类群 ∀另外就不同类群各取 t个菌株在含 ׺¨¨ ±
p {s和无 ׺¨ ±¨ p {s的 ts ª#pt和 us ª#pt的葡萄糖培养液中培养 u !w !y !{周 o根据菌株生长量进一步
检测其生理类群 }‘„≥基础培养基 o简称 ≥ ~≥ n ts ª#pt葡萄糖 o简称 ts≥ ~≥ n us ª#pt葡萄糖 o记为
us≥ ~≥ n u ª#pt׺¨ ±¨ p {s o简称 × n ≥ ~≥ n u ª#pt׺¨ ±¨ p {s n ts ª#pt葡萄糖 o记为 × n ts≥ ~× n ≥ n u ª#
pt׺¨¨ ±p {s n us ª#pt葡萄糖 o简称 × n us≥ ∀接种时先离心收集预培养菌丝体测定其生物量 o根据生
物量匀浆稀释 o使单位体积含相同重量菌丝体 o等量接种于上述各培养基 ∀
t1u1w 营养源利用 碳源 分别以 ts ª#pt的甘油 !山梨醇 !木糖 !甘露糖 !葡萄糖 !果糖 !乳糖 !蔗糖 !
麦芽糖 !吐温和 t ª#pt可溶性淀粉代替 …„°中的丙酸钠 o其它成分不变 ∀以 t1u1v方法稀释菌体等量
接种 ouz ε 暗处静置培养 w周 o观察菌丝体生长 o加入 ts ª#pt的溴甲酚紫数滴以检测菌株是否利用碳
源产酸 ∀以不含碳源的 …„°培养基菌株生长为对照 ∀有机酸 分别以 u ª#pt的乙酸钠 !丙酮酸钠 !丁
二酸钠 !苹果酸钠 !草酸钠 !苯甲酸钠等 y种有机酸取代 …„°中的丙酸钠 o以加入丙酸钠和不含碳源的
swt 林 业 科 学 v|卷
…„°菌株生长为对照 ∀氮源 以 ts ª#pt的硫酸铵 !硝酸钾 !尿素 !蛋白胨 !牛肉膏 !酪蛋白代替 …„°中
的氯化铵 o其它成分不变 o以不含氮源的 …„°菌株生长为对照 ∀每种处理均设 v次重复 ∀
表 1 参试根瘤内生菌及其来源
Ταβ . 1 Στραινστεστεδ ανδ τηε γεογραπηιχαλ διστριβυτιον οφ χολλεχτιον σιτεσ
菌株 ≥·µ¤¬±¶ 宿主植物 ‹²¶·²©²µ¬ª¬± 采集地点 ²¦¤·¬²± 土壤 ≥²¬¯ 土壤 ³‹ ³‹ ²©¶²¬¯
ƒ≤¦„¦su 福州 ƒ∏½«²∏ 珍珠岩 °¨ µ¯¬·¨ z1us
ƒ≤¦„¦sw 福州 ƒ∏½«²∏ 珍珠岩 °¨ µ¯¬·¨ z1us
ƒ≤¦yw 细枝木麻黄 福鼎 ƒ∏§¬±ª 山地红壤 • §¨¶²¬¯ y1st
ƒ≤¦|t Χqχυννινγηαµιανα 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1wx
ƒ≤¦|u 厦门 ÷¬¤°¨ ± 山地红壤 • §¨¶²¬¯ p
ƒ≤¦|v 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1wx
ƒ≤ t¨| 东山 ⁄²±ª¶«¤± 沿海沙地 ≥¤±§ p
ƒ≤ u¨v 东山 ⁄²±ª¶«¤± 沿海沙地 ≥¤±§ p
ƒ≤ v¨v 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1wt
ƒ≤ v¨z 短枝木麻黄 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1wt
ƒ≤ z¨u Χqεθυισετιφολια 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1u{
ƒ≤ z¨x 惠安 ‹∏¬. ¤± 沿海沙地 ≥¤±§ z1u{
ƒ≤ w¨u 莱舟 ¤¬½«²∏ 山地红壤 • §¨¶²¬¯ x1{v
|xxs 广州 Š∏¤±ª½«²∏ 山地红壤 • §¨¶²¬¯ p
ƒ≤ªsz
ƒ≤ªs{
ƒ≤ªzz
粗枝木麻黄
Χqγλαυχα
东山 ⁄²±ª¶«¤±
东山 ⁄²±ª¶«¤±
福清 ƒ∏´¬±ª
沿海沙地 ≥¤±§
沿海沙地 ≥¤±§
山地红壤 • §¨¶²¬¯
p
p
p
uutx 杨梅 云南 ≠∏±±¤± 山地红壤 • §¨¶²¬¯ p
ƒµx| Μq ρυβρα 福鼎 ƒ∏§¬±ª 山地红壤 • §¨¶²¬¯ w1ws
ƒ„¦st 四川桤木Αq χρεµαστογψνε 莱舟 ¤¬½«²∏ 山地红壤 • §¨¶²¬¯ x1w{
t1u1x 其它生理特性 以无碳源的 …„°为基础培养基进行下列生理试验 ∀纤维素酶 在基础培养基
中加入滤纸条 o如果菌体生长 o说明菌体能分泌纤维素酶 ∀蛋白酶 在基础培养基中加入 t ª#pt酪素 o
如果菌体生长 o说明菌体产生蛋白酶 ∀尿素 在基础培养基中加入 s1x ª#pt丙酸钠和 t ª#pt尿素 o培
养 w周后用酚红作指示剂检测 ∀如果培养液变红为阳性反应 o说明菌株能利用尿素 ∀硫化氢 在基础
培养基中加入 s1x ª#pt丙酸钠 !ts ª#pt胰蛋白胨和 s1x ª#pt柠檬酸钠 o如果培养后有黑色产物出现 o
说明菌体能产生硫化氢 ∀硝酸还原 在基础培养基中加入 s1x ª#pt丙酸钠和 t ª#ptŽ‘’v o培养 w周
后 o加格里斯试剂测定硝酸盐还原反应 ∀苯丙氨酸 在基础培养基中加入 s1x ª#pt丙酸钠和 u ª#pt
的苯丙氨酸 o菌体培养 w周后 o加入 ƒ ≤¨¯ v 观察培养液是否变绿色 o变色的表明菌体能利用苯丙氨酸产生
苯丙酮酸 ∀明胶液化 在基础培养基中加入 s1x ª#pt丙酸钠 !uss ª#pt明胶 o培养 w周后观察明胶是
否液化 ∀每种处理均设 v次重复 ∀
t1u1y 固氮酶活性 将经同期预培养的 us株参试菌株接种于无氮源的 …„°中 ouz ε 暗处静置培养 us
§o收集菌体转移到 | °的玻璃小瓶内 o密封 o注入体积分数为 ts h的乙炔 o振荡培养 x §o用气相色谱仪
测定乙烯生成量k丁鉴等 ot|{yl o同时以考马斯亮兰法测定各菌株菌体蛋白计算其固氮酶活性
k…µ¤§©²µ§ot|zyl ∀
t1u1z 宿主特异性 us株参试内生菌经 …„°或„培养 { ∗ tu周 o离心收集菌体 o匀浆制备成菌液接种
剂 ∀以菌液分别浸泡细枝木麻黄 !短枝木麻黄 !粗枝木麻黄 !杨梅 !四川桤木 !沙枣 k Ελαεαγνυσ
ανγυστιφολιαl等无菌幼苗 u «∀苗木移栽至袋装的灭菌珍珠岩内 ∀每菌株处理 y ∗ tt株 o接种量为每株
s1sx ∗ s1t °ª湿菌体 o每个菌株接菌苗放置在同一育苗框内 o各育苗框单独排放以避免交叉感染 ∀以冷
开水浇育苗木 o每 u ∗ v周浇以 xs ∗ tss °的无氮 ≥¬§¨µ2¼²∏±ª苗木营养液k休伊特等 ot|yxl o接种 w ∗ y
月后调查苗木结瘤状况 ∀
twt 专刊 t 李志真等 }木麻黄根瘤内生菌生物学特性研究
u 结果与分析
211 形态特征
光学显微镜和电子显微镜下的观察结果表明 ous株参试菌株在 w种液体培养基中都具有分枝菌
丝 !孢囊或泡囊等形态特征 ∀
u1t1t 菌丝体 菌丝体呈分枝丝状 o粗细不均 ∀木麻黄根瘤内生菌 ƒ≤¦yw !ƒ≤¦|s !ƒ≤¦|t !ƒ≤¦|u !ƒ≤¦|v !
ƒ≤ t¨| !ƒ≤ u¨v !ƒ≤ v¨v !ƒ≤ v¨z !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ z¨u !ƒ≤ªzz菌丝体粗大 o直径约在 s1xv ∗ t1ss Λ° o波曲不多 ~菌株
ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw !ƒ≤ªsz !ƒ≤ªs{ !|xxs菌丝体中等粗细 o直径约在 s1vv ∗ s1xs Λ° o较多分枝 ~菌株 ƒ≤ z¨x
菌丝体细 o高度分枝波曲 o直径约为 s1us ∗ s1ws Λ°∀对照菌株 uutx !ƒ„¦st的菌丝体较粗大 o直径在
s1vv ∗ s1yz Λ° o而 ƒµx|菌丝体比较细 o波曲高 o分枝多 o直径在 s1vx Λ°以内 ∀同一种菌株在不同培养
液的菌丝体粗细大小略有变化 ∀
u1t1u 孢囊 参试菌株形成孢囊的数量因培养基不同而异 ∀培养 w ∗ y周时 o对照杨梅菌株 ƒµx| !
uutx在 v种培养液内均形成大量的孢囊 o且孢子已成熟 o开始发散 ~桤木菌株 ƒ„¦st仅在 …„°中形成少
量孢囊 o但是在 ≥ !„培养基中孢囊数量较多 ~木麻黄参试菌株在 „ 中可形成孢囊 o而在 …„°中只有
ƒ≤¦yw !ƒ≤¦|u !ƒ≤ v¨v !ƒ≤ v¨z !ƒ≤ w¨u等形成孢囊 ∀该结果说明在 …„°培养液中木麻黄菌株的营养生长时
间长 o在 „内菌株较快进入生殖生长 o形成孢囊 o这可能与 „中富含有机物 !营养生长很快得到满足有
关 ∀孢囊形状多为球型 !草莓型 !纺锤型 !豆荚型 !长棒或短棒型 o有的在棒状孢囊中间凸起或凹入 o形成
不规则孢囊k图 t !ul ∀成熟孢囊的宽度为 t1vs ∗ vt1vs Λ° o长度为 u1yz ∗ wy1xs Λ°∀孢子多呈圆型或卵
型 o边缘先成熟 o成熟时大小约 t1ss ∗ t1yz Λ°∀
图 t ƒµx|的孢囊孢子及泡囊
ƒ¬ªqt ≥³²µ¤±ª¬¤¤±§√¨ ¶¬¦¯¨²©ƒµx|
图 u ƒ≤ªsz不规则孢囊
ƒ¬ªqu Œµµ¨ª∏¯¤µ¯¼ ©²µ° §¨¶³²µ¤±ª¬¤²©ƒ≤ªsz
图 v ƒ≤¦yw的串珠状菌丝
ƒ¬ªqv • ³¨µ²§∏¦·¬√¨ ·²µ∏¯²¶¨ «¼³«¤¨ ²©ƒ≤¦yw
u1t1v 泡囊 多数木麻黄菌株在含氮源的液体培养基中不形成泡囊 o但 ƒ≤¦„≤sw !ƒ≤¦|u !ƒ≤ v¨z !ƒ≤ªzz
等 w株菌株在有氮的 …„°和 ≥培养基中能形成泡囊 ∀杨梅菌株 uutx !ƒµty在含氮的 …„° !≥ !„中都能
形成泡囊 o桤木菌株 ƒ„¦st在含氮的 …„°中不形成泡囊 o在含氮的 ≥ !„则产生泡囊 ∀这些观察结果说
明泡囊的形成受到养分和菌株个体的影响 ∀木麻黄内生菌 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw是从同一环境生长的细枝
木麻黄根瘤中分离得到的 o但是它们在 v种培养基中形成泡囊的能力各不相同 ∀所有参试菌株在无氮
…„°中都可以形成泡囊 ∀泡囊的形状为圆形k图 tl o大小约 s1zs ∗ u1ss Λ°∀菌株来源和培养基成分对
泡囊的形状和大小无甚影响 ∀
u1t1w 串珠状菌丝 在木麻黄内生菌 ƒ≤¦yw ! ƒ≤¦|u !ƒ≤ v¨v的菌丝体中 o发现有部分菌丝形成串珠状菌
丝段k图 vl o其长度不等 o类似于链霉菌上的分生孢子链 ~在一些串珠状菌丝的一端或中间有膨大的椭
圆形结构 ∀目前已报道木麻黄 !胡颓子k Ελαεαγνυσπυνγενσl !马桑k Χοριαρια νεπαλενσισl等部分 Φρανκια存在
串珠状菌丝段k⁄¬¨° ot|{x ~胡传炯 ot||zl o⁄¬¨°认为这种结构是 Φρανκια的另一种繁殖方式 ∀
212 培养特征
uwt 林 业 科 学 v|卷
u1u1t 液体培养特征 参试内生菌菌丝体大多生长在试管的底部 o呈致密颗粒状 !疏松絮状或絮状颗
粒等 o部分菌株如木麻黄 ƒ≤ w¨u !ƒ≤ z¨u !ƒ≤ z¨x以及参考菌株 uutx附着在试管壁上生长 o紧密或松散 ∀
一些菌株能形成菌膜 o如菌株 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw在 ≥培养基中形成菌膜 o但在 …„°和 „中不形成菌膜 ∀
u个菌株在 ≥ !…„°中呈颗粒状 o在 „中则为絮状 o这说明了菌株的培养特征因养分不同而发生变化 ∀
木麻黄内生菌多呈浅白色或荔肉白 o与对照桤木内生菌 ƒ„¦st色泽相似 o杨梅内生菌 uutx !ƒµx|则为
浅红色 ∀参试菌株在 v种培养基中均不分泌可溶性色素 ∀各菌株在不同培养基中的生长表现略有差
异 ∀等量接种及相同条件下培养 o菌株 ƒ≤ªsz !ƒ≤ v¨z在 …„°中生长较差 o其它木麻黄菌株在 v种培养基
中均生长良好 o杨梅菌株在 ≥和 „ !桤木菌株在 …„°和 „中生长良好 ∀
u1u1u 固体培养特征 us个参试菌株在 ≥固体斜面上均不产生气生菌丝 o不分泌可溶性色素 ∀木麻黄
菌落多为灰白色 !灰黄色 o菌落凸起 o光滑致密 o有光泽 ~但是 ƒ≤ v¨v !ƒ≤ z¨u菌落质地松软 ∀杨梅 uutx !桤
木 ƒ„¦st菌落凸起致密 o杨梅 ƒµx|在固体斜面上则呈放射状 o坚韧无光泽 ∀
213 生理类群
¨¦«¨ √¤¯¬¨µ等kt|{vl根据 Φρανκια对葡萄糖的利用状况划分生理类群 ∀无 ׺¨ ±¨ p {s条件下菌株能
良好利用葡萄糖 o׺¨ ±¨ p {s存在使菌株生长受到抑制的为生理 „群 ~缺乏 ׺¨ ±¨ p {s菌株对葡萄糖利
用不良 o加入 ׺¨ ±¨ p {s能明显促进菌株生长的为生理 …群 ∀从表 u结果可知 o加入 ׺¨ ±¨ p {s oƒ≤¦|u !
ƒ≤ w¨u等 u株菌株生长受到抑制 o属生理 „群 ∀ ƒ≤¦|t !ƒ≤¦|v !ƒ≤ u¨v !ƒ≤ v¨v !ƒ≤ v¨z !|xxs !ƒ≤ªsz和 ƒ≤ªs{
等 {株菌株在加入 ׺¨ ±¨ p {s后能更好地利用葡萄糖 o生长得到促进 o为生理 …群 ∀另外 x株菌株无论
׺¨ ±¨ p {s存在与否 o菌丝体都能达到相同的最大生长量 o表明这些菌株同时包含 „群或 …群的特性 o
为 „…混合群 o它们是 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw !ƒ≤ t¨| !ƒ≤ªzz ∀参考菌株杨梅 ƒµx| !uutx和桤木 ƒ„¦st在加入
׺¨ ±¨ p {s后生长更好 o属生理 …群 ∀随机取不同生理类群的 v个菌株 ƒ≤¦|u !ƒ≤¦„≤su和 ƒ≤ u¨v进行 u !
w !y !{周的生长动态观察 o其结果验证了上述生理类群的划分k图 wl ∀
从上述试验结果可知 o木麻黄内生菌属生理 …群的多 ∀在同一种植物的根瘤内有不同生理类群的
内生菌存在 o如细枝木麻黄内生菌 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw属 „…群 oƒ≤¦|u为 „群 oƒ≤¦|t和 ƒ≤¦|v则为 …群 ∀
来自同一地点的同一种木麻黄 o其根瘤内生菌也有不同的生理类群 o如同是来自惠安的短枝木麻黄内生
菌 oƒ≤ v¨v和 ƒ≤ z¨x为 …群 oƒ≤ z¨u则为 „…群 ∀
214 营养源利用
u1w1t 碳源 除了菌株 ƒ≤ z¨x外 o所有木麻黄和参照杨梅 !桤木菌株都能在以吐温为碳源的培养基中
良好生长 ∀个别菌株能利用少数单糖 !双糖或多糖 o如 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦„≤sw能少量利用甘油 oƒ≤¦|u !ƒ≤ u¨v !
|xxs能良好利用葡萄糖 oƒ≤¦|u可稍微利用蔗糖 oƒ≤¦„≤sw !ƒ≤¦yw !ƒ≤¦|u和 |xxs能少量利用淀粉 o参试木
麻黄菌株均不能利用山梨醇 !木糖 !甘露糖 !果糖 !乳糖 !麦芽糖 ∀参考菌株杨梅 ƒµx| 和桤木 ƒ„¦st能
少量利用甘露糖并产酸 ouutx能利用葡萄糖 ∀所有菌株在无碳源的培养基中均不生长 ∀
u1w1u 有机酸 us株参试菌株在以乙酸钠 !丙酸钠 !丙酮酸钠为碳源的培养基中生长良好 ∀少数菌株
能利用丁二酸钠 !苹果酸钠 !草酸钠 !苯甲酸钠等有机酸 o如 ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦|u !ƒ≤ªs{和桤木菌株 ƒ„¦st能
良好利用丁二酸钠 oƒ≤¦|u可较好地利用苹果酸钠 oƒ≤ t¨|和 ƒ≤ w¨u在草酸钠培养基中有一定生长 ∀
ƒ≤ t¨|可少量利用苯甲酸钠 o其它参试菌株则均不利用 ∀
u1w1v 氮源 各菌株利用各种氮源的能力有差异 ∀除了 ƒ≤¦„≤ su和 ƒ≤ªzz外 o其它木麻黄内生菌和 v
株参考菌株均能很好地利用酪蛋白 ∀能同时利用铵态氮 !硝态氮和牛肉膏的菌株有 tt 株 o它们是
ƒ≤¦yw !ƒ≤¦|t !ƒ≤¦|u !ƒ≤ u¨v !ƒ≤ v¨v !ƒ≤ v¨z !ƒ≤ z¨x !|xxs和参考菌株 uutx !ƒµx|和 ƒ„¦st ∀ ƒ≤ªs{可利用
氨态氮 oƒ≤¦|s和 ƒ≤ªsz能利用硝态氮 oƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦|s !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ªsz !ƒ≤ªs{和 ƒ≤ªzz等 y个菌株还能利
用牛肉膏 ∀所有菌株不能利用尿素和蛋白胨 o但在缺乏氮源的培养基中都能良好生长 ∀
vwt 专刊 t 李志真等 }木麻黄根瘤内生菌生物学特性研究
表 2 Τωεεν − 80 对木麻黄根瘤内生菌生长量的影响
Ταβ . 2 Ινφλυενχε οφ Τωεεν − 80 ον γροωτη οφ στραινσ ≈°ª#k x°lpt 
菌 株
≥·µ¤¬±¶
培养基  §¨¬¤
ts≥ × n ts≥
类群
°«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯
ªµ²∏³
菌 株
≥·µ¤¬±¶
培养基  §¨¬¤
ts≥ × n ts≥
类群
°«¼¶¬²¯²ª¬¦¤¯
ªµ²∏³
ƒ≤¦„≤su v1ys v1|s „… ƒ≤ z¨u x1us w1zs „…
ƒ≤¦„≤sw v1xx v1|x „… ƒ≤ z¨x u1ss v1zs …
ƒ≤¦|t u1tx v1vx … |xxs v1vx w1sx …
ƒ≤¦|u w1ss v1ws „ ƒ≤ªsz u1{x v1{s …
ƒ≤¦|v u1zs v1ys … ƒ≤ªs{ v1tx w1yx …
ƒ≤ t¨| v1wx v1xs „… ƒ≤ªzz v1ts v1yx „…
ƒ≤ u¨v u1|s w1us … uutx u1{x w1{s …
ƒ≤ v¨v u1vx w1ts … ƒµx| v1tu w1zs …
ƒ≤ w¨u v1ws u1yx „ ƒ„¦st v1vx w1xx …
≠ ts≥ }‘„≥ ° §¨¬∏°¬±¦¯∏§¬±ªt h ª¯∏¦²¶¨ o× n ts≥ }‘„≥ ° §¨¬∏°¬±¦¯∏§¬±ªt h ª¯∏¦²¶¨ ¤±§s1u h ׺¨¨ ± p {s o׫¨ ¶¤°¨ ¥¨ ²¯º q
图 w v株木麻黄菌株在 y种培养基中的生长
ƒ¬ªqw ׫¨ ªµ²º·«²©·«µ¨¨¶·µ¤¬±¶¬±¶¬¬§¬©©¨µ¨±·°¨ §¬¤
) υ ) × n ≥ o) ω ) × n ts≥ o) σ ) × n us≥ o) τ ) ≥ o) ϖ ) ts≥ o) ρ ) us≥ q
k× }s1u h ׺¨¨ ± p {s ~≥ }‘„≥ ° §¨¬∏° ~us≥ }≥ n u h ª¯∏¦²¶¨l
215 其它生理特性
参试 us个菌株均不能使明胶液化 o不能水解纤维素 o不能产生硫化氢 o不利用苯丙氨酸 o但都能水
解尿素 ∀部分菌株还能水解酪素 o这些菌株为 ƒ≤¦„≤ su !ƒ≤ v¨z !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ªs{ !ƒ≤ªzz和参考菌株 ƒµx| o
能还原硝酸盐的菌株有 ƒ≤¦|u !ƒ≤ t¨| !ƒ≤ªzz !|xxs和参考菌株 uutx !ƒµx|和 ƒ„¦st ∀
木麻黄根瘤内生菌在营养源利用和相关生理特性上的差异反映出 Φρανκια菌表型多样性的特点 ∀
216 固氮酶活性
tz株内生菌在离体培养下的乙炔还原活性见表 v ∀从表中可知 o菌株间固氮酶活性差异很大 ∀
ƒ≤ v¨z的固氮酶活性最高 o达 w1u| Λ°²¯k°ª#«lpt o其次是 |xxs !ƒ≤¦yw !ƒ≤ªzz !uutx和 ƒ≤ t¨| o其它菌株活
性均较低 ∀通过显微镜检查发现 o乙炔还原活性高的菌株 o泡囊形成的数量多 o活性低的菌株泡囊的数
量也少 ∀
217 宿主特异性
来自细枝木麻黄 !短枝木麻黄和粗枝木麻黄的 tt株根瘤内生菌回接 y种放线菌结瘤植物的试验结
wwt 林 业 科 学 v|卷
果见表 w ∀从表中看出 ott株木麻黄内生菌在木麻黄属内种间可以进行交叉侵染 ∀少数木麻黄内生菌
对杨梅 !沙枣 !四川桤木的侵染试验结果表明 o一些木麻黄内生菌能侵染杨梅 !沙枣 !桤木等结瘤 o而一些
木麻黄内生菌则不能感染杨梅或沙枣 o如菌株 ƒ≤ªsz不能侵染杨梅 oƒ≤ªs{不能感染沙枣结瘤 ∀这些试
验结果说明参试木麻黄 Φρανκια菌株有一定的宿主特异性 ∀
表 3 参试菌株的固氮酶活性 ≠
Ταβ . 3 Νιτρογενασε αχτιϖιτψ οφ πυρε χυλτυρεδ Φρανκια στραινσ
菌株 ≥·µ¤¬±¶ ≤u ‹wΠ≈Λ°²¯#k°ª#«l pt  泡囊形成数量 ∂ ¶¨¬¦¯ ¶¨±∏°¥¨µ¶
ƒ≤ v¨z w qu| n n n
|xxs w qs| n n n
ƒ≤¦yw v q{x n n n
ƒ≤ªzz u qyy n n n
ƒ≤ t¨| t qsw n n
ƒ≤¦„≤su s q{| n n
ƒ≤ z¨x s qyt n n
木麻黄 Χασυαρινα ƒ≤ªs{ s qxx n n
ƒ≤¦|u s qxv n n
ƒ≤ v¨v s quv n
ƒ≤¦|t s qut n
ƒ≤ªsz s qut n
ƒ≤¦„≤sw s1ts n
ƒ≤ z¨u s qs| n
杨 梅 uutx t1uy n n
Μqρυβρα ƒµx| s1tu n
桤 木 Αqχρεµαστογψνε ƒ„¦st s qs| n
≠ n n n }多 ∏¦«~n n }中等 ¬§§¯¨~n }少 ¬·¯¨q
表 4 木麻黄内生菌侵染苗木试验
Ταβ . 4 Χροσσινοχυλατιον ον διφφερεντ αχτινορηιζαλ πλαντσ
接种植物
Œ±©¨¦·¨§³¯¤±·¶
试验菌株
× ¶¨·¨§≥·µ¤¬±¶
结瘤率
‘²§∏¯¤·¬²±µ¤·¨Πh
不结瘤菌株
‘² ±²§∏¯¤·¨§≥·µ¤¬±¶
细枝木麻黄
Χq χυννινγηαµιανα ƒ≤¦
„≤su !ƒ≤¦ys !ƒ≤¦|s !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ªsz !ƒ≤ªs{ vz qxs∗ tss1s p
短枝木麻黄
Χqεθυισετιφολια
ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦|s !ƒ≤ t¨| !ƒ≤ u¨v !ƒ≤ v¨v !ƒ≤ w¨u !
ƒ≤ªsz !ƒ≤ªs{
ys1ss
∗ tss1s p
粗枝木麻黄
Χqγλαυχα
ƒ≤¦„≤su !ƒ≤¦ys !ƒ≤ u¨v !ƒ≤ u¨z !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ z¨x !
ƒ≤ªsz !ƒ≤ªs{
xs1ss
∗ tss1s p
杨梅
Μq ρυβρα ƒ≤¦|s !ƒ≤ w¨u !ƒ≤ªsz tss1s ƒ≤ªsz
沙枣
Ε qανγυστιφολια ƒ≤¦|s !ƒ≤ z¨x !ƒ≤ªs{ tss1s ƒ≤ªs{
四川桤木
Αqχρεµαστογψνε ƒ≤ªsz tss1s p
v 小结与讨论
参试木麻黄根瘤内生菌都具有分枝状菌丝 !孢囊或泡囊等 Φρανκια的特征性结构 o菌株 ƒ≤¦yw !
xwt 专刊 t 李志真等 }木麻黄根瘤内生菌生物学特性研究
ƒ≤¦|u !ƒ≤ v¨v等还具有串珠状菌丝段 ∀根据国际上公认的弗兰克氏菌属的定义 o在形态特征方面描述
为/内生菌纯培养呈放线菌样 o在液体培养中产生不动孢子的孢囊 o有可能形成泡囊0k¨¦«¨ √¤¯¬¨µετ αλqo
t|{|l o所以 o本试验研究的 tz株木麻黄根瘤内生菌都是属于 Φρανκια菌的成员 ∀菌株在菌丝体大小 !孢
囊数量 !泡囊形成等方面存在着明显的差异 o并随着培养基成分而变化 ∀但是这些菌株在菌丝体形态 !
色素等培养特征上较为一致 o与桤木参照菌株相近 o但明显不同于杨梅参照菌株 ∀
由 ¨¦«¨ √¤¯¬¨µ等建立的生理类群划分是研究 Φρανκια菌生理学特性的重要方法之一k¨¦«¨ √¤¯¬¨µετ
αλqot|{v ~…¨ ±¶²± ετ αλqot||vl ∀本研究中木麻黄 Φρανκια有 „ !… !„…等 v种生理类群 o其中 u个菌株为 „
群 o{个菌株为 …群 ox个菌株为 „…混合群 ∀国际上从木麻黄根瘤分离获得的 Φρανκια菌株多为生理 „
群k…¨ ±¶²± ετ αλqot||vl o本试验结果却相反 o…群菌株多 o„群菌株少 o这预示着我国南方沿海木麻黄共
生 Φρανκια类群可能不同于其它木麻黄 Φρανκια∀试验结果还表明在同一种植物的根瘤内有不同生理类
群的内生菌共存 ∀
绝大多数参试木麻黄 Φρανκια菌株可以很好地利用吐温 o但只有少量菌株kƒ≤¦|u !ƒ¦¨vu !|xxsl能较
好利用葡萄糖 ov个菌株能少量利用甘油或蔗糖 ∀这与国际上木麻黄菌株在含糖类物质的培养基生长
良好相比有较大的差异k…¨ ±¶²± ετ αλqot||vl o但对有机酸的利用是相同的 o即都能利用乙酸钠 !丙酸钠 !
丙酮酸钠 o这说明木麻黄 Φρανκια菌株之间对有机酸的脱羧作用比较一致 ∀部分参试菌株对酪蛋白 !牛
肉膏等有机氮和对硫酸铵 !硝酸盐等无机氮都能良好利用 o而一些菌株则只能利用某一种氮源 o这显示
出木麻黄 Φρανκια在氮源利用上的差异性 ∀参试菌株在氮源缺乏环境中均能良好生长 o这表明内生菌
在无氮源环境下能够自行固氮 o为菌丝体生长提供氮源 o这一结论可以在无氮诱导的离体培养菌丝体中
检测到固氮酶活性试验得到证实 ∀
所有参试木麻黄 Φρανκια菌株都不能产生纤维素酶 o不利用苯丙氨酸 o能水解尿素 o部分菌株还可
以水解酪素 o还原硝酸盐 ∀各种生理类群的木麻黄 Φρανκια菌株在碳源和氮源利用 !有机酸羧化 !代谢
酶产生等方面没有明显的对应关系 o表现出明显的个体差异和丰富的生物多样性 ∀
离体条件下木麻黄 Φρανκια菌株的固氮活性差异显著 o这种差异与泡囊的数量变化相对应 ∀该结
果与其它研究结论一致 o即固氮酶活性与泡囊的存在呈正相关k¨¨¤·¨µ¶ ετ αλqot|{x ~׬¶¤ ετ αλqot|{z ~
×­¨³®¨ °¤ ετ αλqot|{sl ∀不少试验已经证实了固氮酶位于泡囊上 o其活性随着泡囊的发展增大k‘²µ¬§ª¨
ετ αλqot|{y ~׬¶¤ ετ αλqot|{zl ∀
Φρανκια具有跨越科属侵染植物结瘤的特性 o与根瘤菌宿主专一性强相比有显著不同 ∀本试验参试
木麻黄 Φρανκια菌株可以在木麻黄属内种间进行交叉感染 o一些菌株能侵染杨梅 !沙枣和四川桤木 o但
一些则不能感染杨梅或沙枣结瘤 ∀关于 Φρανκια宿主特异性 o…¤®¨µ建立的宿主特异类群划分获得普遍
认可k…¤®¨µot|{zl ∀他根据交叉侵染试验结果将 Φρανκια 分为 w 个类群 }第 t 类群为侵染桤木属
kΑλνυσl !香蕨木属k Χοµπτονιαl和杨梅属k Μψριχαl植物 o第 u类群侵染木麻黄科k≤¤¶∏¤µ¬±¤l和杨梅属植
物 o第 v类群感染胡颓子属k Ελαεαγυνσl和杨梅属植物 o这三个类群的菌株同时还侵染 Γψµνοστοµα属的
宿主植物 o第 w类群菌株只能侵染胡颓子属植物 ∀ ײµµ¨¼等kt|{|l总结了 us株木麻黄内生菌 !t株异果
木麻黄kΑλλοχασυαριναλεηµαννιαl内生菌和 t株裸孔木麻黄k Γ qπαπυανυµl内生菌的宿主特异性 }能感染原
宿主木麻黄但不能侵染沙枣或水牛果kΣηεπηερδια ανγεντεαl ~不能侵染原宿主木麻黄 o但可以侵染沙枣或
裸孔木麻黄 o所有试验木麻黄菌株均可侵染甜香杨梅k Μqγαλεl和蜡杨梅k Μqχεριφεραl ∀ ⁄∏等kt||ul对
来自中国 !泰国和澳大利亚的 z株木麻黄 Φρανκια菌进行了宿主侵染特性研究 o结果与 ײµµ¨¼等kt||vl
相同 ∀本研究结果表明 o来自中国福建 !广东的木麻黄 Φρανκια菌株 o除了有以上相同的侵染结果外 o还
有不同之处 }一些木麻黄菌株能侵染桤木 o但不能感染杨梅 ∀这一结果初步反映出我国南方木麻黄
Φρανκια菌的宿主侵染特性多样化 ∀由于本研究用于跨科属侵染试验的菌株数量较少 o我国木麻黄
Φρανκια菌株的宿主侵染特性将有待于进一步深入了解 ∀
参 考 文 献
丁 鉴 o张忠泽 o李忠伟等 q用气相色谱法测定 Φρανκια菌的自生固氮活性 q微生物学报 ot|{y }tyu p tyw
ywt 林 业 科 学 v|卷
胡传炯 o周平贞 o周 启 q弗兰克氏菌分类学研究进展和现状 q微生物杂志 ot||z otzktl }wv p w|
黄雅丽 o丁 鉴 o张忠泽等 q不同属宿主来源的 Φρανκια菌株形态特征的研究 q微生物杂志 ot|{| o|kvl }u| p vw
蒋建德 o朱宝琴 q木麻黄根瘤菌内生菌k Φρανκιαl的分离 !培养和感染性 q科学通报 ot|{x ov }uu{ p uvt
康丽华 o•²¶¥µ²²® ° „ o • §¨§¨¯¯ ° q木麻黄根瘤中分离德三株弗兰克氏菌生长与培养方法的研究 q林业科学研究 ot||y o|ktl }wz p xt
休伊特 ∞q崔 微译 q植物营养研究的砂培和水培法 q北京 }科学出版社 ot|yx }|t p |{
李忠伟 o丁 鉴 q木麻黄根瘤共生放线菌 Φρανκια的研究 q微生物学报 ot|{y ouykwl }u|x p vst
李志真 o李朝晖 o俞如礼等 q木麻黄根瘤内生菌分离培养和宿主范围的研究 q福建林业科技 ot||{ ouxkvl }t{ p uv
袁长芳 q木麻黄根瘤内生菌株的变异性研究 q微生物杂志 ot|{z¤ozkvl }t{ p ut
袁长芳 q一株木麻黄根瘤内生菌的培养条件研究 q微生物学报 ot|{z¥ozkvl }uww p uw{
张道海 o苏凤岩 o丁 鉴 qΦρανκια菌同功酶图谱分析和分类 q微生物杂志 ot|{| o|kvl }tx p ut
„®®¨µ°¤±¶„ ⁄o • ²¨ ²¯©¶¨± • o …¯²°  ετ αλq ˜·¬¯¬½¤·¬²± ²©¦¤µ¥²± ¤±§±¬·µ²ª± ¦²°³²∏±§¶¥¼ Φρανκιᬱ¶¼±·«¨·¬¦° §¨¬¤¤±§¬±µ²²·±²§∏¯ ¶¨²© Αλνυσ
γλυτινοσα oΗιπποπηαε ρηαµνοιδεσo¤±§ ∆ατισχα χανναβινα q≤¤± …²·ot|{v oyt }uz|v p u{ss
…¤®¨µ⁄q • ¨¯¤·¬²±¶«¬³¶¤°²±ª³∏µ¨ ¦∏¯·∏µ¨§¶·µ¤¬±¶²© Φρανκια ¥¤¶¨§²± «²¶·¶³¨¦¬©¬¦¬·¼q°«¼¶¬²¯ °¯ ¤±·ot|{z ozs }uwx p uw{
…¨ ±¶²± ⁄ • o≥²¯√¨ ¶·¨µ• …q…¬²¯²ª¼ ²© Φρανκια στραινσo αχτινοµψχετε σψµβιοντσ οφ αχτινορηιζαλπλαντσq ¬¦µ²¥¬²¯²ª¬¦¤¯ • √¨¬¨º¶ot||v oy }u|v p vt|
…µ¤§©²µ§   q „ µ¤³¬§¤±§¶¨±¶¬·¬√¨ °¨ ·«²§©²µ·«¨ ∏´¤±·¬©¬¦¤·¬²± ²© °¬¦µ²ªµ¤° ∏´¤±·¬·¬¨¶²© ³µ²·¨¬± ³µ¬±¦¬³¯¨²© ³µ²·¨¬± §¼¨ ¥¬±§¬±ªq „±¤¯ …¬²¦«¨ ° o
t|zy ozu }uw{ p uxw
⁄¬¨° ‹ Š oŠ¤∏·«¬¨µ⁄o⁄²°° µ¨ª∏¨¶≠ • qŒ¶²¯¤·¬²± ²© Φρανκια©µ²° ±²§∏¯ ¶¨²© Χασυαρινα εθυισελιφολια q≤¤±  ¬¦µ²¥¬²¯ ot|{u ou{ }xuy p xvs
⁄¬¨° ‹ Š o⁄²°°¨ µª∏¨¶ ≠ • qŒ± √¬·µ² ³µ²§∏¦·¬²± ²©¶³¨¦¬¤¯¬½¨ §µ¨³µ²§∏¦µ¬√¨·²µ∏¯²¶¨ «¼³«¤¨ ¥¼ Φρανκια ¶·µ¤¬± ’• ≥sutsst ¬¶²¯¤·¨§©µ²° Χασυαρινα
ϕυνγηυηνιαναµ²²·±²§∏¯ ¶¨q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot|{x ot{z }t p u|
⁄∏⁄¤½«¬o…¤®¨µ⁄ ⁄q„¦·¬±²µ«¬½¤¯ «²¶·2¶³¨¦¬©¬¦¬·¼ ²© ≤«¬±¨ ¶¨ Φρανκια¶·µ¤¬±¶q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot||u otww }ttv p tty
‹∏¤±ª…o«¤²  ≠ o≤«¨ ± Š ÷ ετ αλq ‹²¶·µ¤±ª¨ ²© Φρανκια ±¨§²³«¼·¨¶q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot|{x o{z }yt p yx
¨¦«¨ √¤¯¬¨µ ° qפ¬²±²°¼ ²©·«¨ ª¨ ±∏¶ Φρανκια k Αχτινοµψχεταλεσl qŒ±·≥¼¶·…¤¦·¨µ¬²¯ ot||w owwktl }t p {
¨¦«¨ √¤¯¬¨µ ° o…¤®¨µ⁄o‹²µµ¬¨µ¨ ƒ q°«¼¶¬²¯²ª¼ o¦«¨ °¬¶·µ¼o¶¨µ²¯²ª¼ o¤±§¬±©¨¦·¬√¬·¼ ²©·º² Φρανκιᬶ²¯¤·¨¶©µ²° Αλνυσινχανα¶∏¥¶³qρυγοσα q≤¤± 
…²·ot|{v oyt }u{uy p u{vv
¨¦«¨ √¤¯¬¨µ ° o¨¦«¨ √¤¯¬¨µ ‹ „ q Š¨ ±∏¶ Φρανκια ¥µ∏±¦«²µ¶·t{{y otzw„qŒ±} • ¬¯¯¬¤°¶≥ × o ≥«¤µ³¨  ∞o ‹²¯· Š §¨¶qo …¨ ¼ª¨¼. ¶ °¤±∏¤¯ ²©
¶¼¶·¨°¤·¬¦¥¤¦·¨µ¬²¯²ª¼ q׫¨ • ¬¯¯¬¤°¶ • ¬¯®¬±¶≤²o…¤¯·¬°²µ¨ ot|{| ow }uwts p uwtz
¨¨¤·¨µ¶×  o∂¤±ª¨ ±¨ ¶¨± ≥ × o„®®¨µ°¤±¶„ ⁄ q Šµ²º·«o¤¦¨·¼¯ ±¨¨ µ¨§∏¦·¬²± ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§ ²¯¦¤¯¬½¤·¬²± ²©±¬·µ²ª¨ ±¤¶¨ ¬± µ¨ ¤¯·¬²±·² √ ¶¨¬¦¯¨©²µ°¤·¬²±¬±
Φρανκια¶·µ¤¬±¶≤¦t1tz ¤±§≤³t1u1 „µ¦«q¬¦µ²¥¬²¯ ot|{x otwv }tvz p twu
∏µµ¼  „ oƒ²±·¤¬±¨  ≥ oײµµ¨¼Š qŠµ²º·«®¬±¨ ·¬¦¶¤±§±¬·µ²ª¨ ±¤¶¨ ¬±§∏¦·¬²±¬± Φρανκιᶳq‹ƒ°„Œv ªµ²º±¬± ¥¤·¦«¦∏¯·∏µ¨ q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot|{w o
z{ }yt p z{
‘¤½¤µ¨·≥ o≥¬°²±¨ ·° o‘²µ°¤±§° ετ αλq Š¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼ ¤°²±ª Φρανκιᬶ²¯¤·¨§©µ²° Χασυαρινα ±²§∏¯ ¶¨q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot|{| ott{ }uwt p uwz
‘²µ¬§ª¨ ‘≥ o…¨ ±¶²± ⁄ • qŒ¶²¯¤·¬²± ¤±§±¬·µ²ª¨ ±©¬¬¬±ª¤¦·¬√¬·¼ ²© Φρανκιᶳq¶·µ¤¬± ≤³Œt √ ¶¨¬¦¯ ¶¨q…¤¦·¨µ¬²¯ ot|{y otyy }vst p vsx
•²∏√¬¨µ≤ o°µ¬± ≠ o • §¨§¨¯¯ ° ετ αλqŠ¨ ±¨ ·¬¦§¬√¨ µ¶¬·¼¤°²±ª Φρανκια¶·µ¤¬±¶±²§∏¯¤·¬±ª° °¨¥¨µ¶²©·«¨ ©¤°¬¯¼ ≤¤¶∏¤µ¬±¤¦¨¤¨ ¬± „∏·µ¤¯¬¤µ¨√ ¤¨¯ §¨¥¼ °≤•
¤±§µ¨¶·µ¬¦·¬²±©µ¤ª° ±¨·¯ ±¨ª·«³²¯¼°²µ³«¬¶° ¤±¤¯¼¶¬¶º¬·«¦µ∏¶«¨ §µ²²·±²§∏¯¤¨¶q „³³¯ ∞±√¬µ²±° ¬¦µ²¥¬²¯ ot||y oyu kvl }|z| p |{x
׬¶¤≥ o∞±¶¬ª± ≤ o≤²°³¤µ¤·¬√¨ ³«¼¶¬²¯²ª¼ ²©±¬·µ²ª¨ ±¤¶¨ ¤¦·¬√¬·¼ ¤±§√¨ ¶¬¦¯¨§¨ √¨ ²¯³° ±¨·©²µ Φρανκια ¶·µ¤¬±¶≤³Œt o„≤‘t„Š o∞„‘t³¨¦¤±§ ∞˜‘t©q
…¤¦·¨µ¬²¯ o „µ¦« ¬¦µ²¥¬²¯ ot|{z otwv }tvz p twu
×­¨³®¨ °¤⁄o’µ°¨ µ²§ • oײµµ¨¼ Š q ∂ ¶¨¬¦¯¨©²µ°¤·¬²± ¤±§¤¦¨·¼¯ ±¨¨ µ¨§∏¦·¬²± k±¬·µ²ª¨ ±¤¶¨ ¤¦·¬√¬·¼l ¬± Φρανκιᶳq≤³Œt ¦∏¯·∏µ¨§¬± §¨©¬±¨ §±∏·µ¬¨±·
°¨ §¬¤q‘¤·∏µ¨k²±§²±l ot|{s ou{z }yvv p yvx
ײµµ¨¼ Š qŠµ²º·«®¬±¨ ·¬¦¶¤±§±¬·µ²ª¨ ±¤¶¨ ¬±§∏¦·¬²±¬± Φρανκιᶳq ‹ƒ°„Œv ªµ²º±¬± ¥¤·¦«¦∏¯·∏µ¨ q°¯ ¤±·¤±§≥²¬¯ot|{w oz{ }yt p z{
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