全 文 ：园 艺 学 报 2014，41（6）：1096–1104 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2014–01–23；修回日期：2014–05–12
基金项目：国家自然科学基金项目（31171957）；广东省自然科学基金团队项目（S2011030001410）；广东省教育厅重点实验室项目
（KBL11008）
* 对本文同等贡献者
** 通信作者 Author for correspondence（E-mail：yhzhao15-503@scau.edu.cn；Tel：020-85283281）
番茄青枯病抗性两个相关基因功能的初步鉴定
汪国平 1,*，褚 梦 2,*，孔 杰 2，陈馥莹 2，陈 煜 2，赵亚华 2,**
（1 华南农业大学园艺学院，广州 510642；2 华南农业大学生命科学学院，广州 510642）
摘 要：对抗性番茄材料‘Hawaii 7996’分别接种强致病力青枯菌（RsH）和中等致病力青枯菌（RsM）
后，利用双向电泳技术找到了两个差异表达蛋白质——谷胱甘肽 S 转移酶 L3 和 Remorin 1 蛋白。在利用
携带八氢番茄红素脱氢酶基因 PDS 的 TRV 重组病毒载体通过叶片浸润法证明 VIGS 体系可行后，进一步
利用该技术沉默上述两个蛋白质的对应基因 GST-L3 和 Rem-1，并用半定量 RT-PCR 检测沉默效果。结果
表明，分别沉默 GST-L3 和 Rem-1 的番茄植株抗性减弱，在接种中等致病力青枯菌（RsM）后青枯病发病
率和病情指数都明显高于对照植株，说明基因 GST-L3 和 Rem-1 与番茄对青枯病的抗性相关。
关键词：番茄；青枯病；抗病性；双向电泳；VIGS
中图分类号：S 641.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1096-09

Studies of Two Genes Related to Bacterial Wilt Resistance in Tomato
WANG Guo-ping1,*，CHU Meng2,*，KONG Jie2，CHEN Fu-ying2，CHEN Yu2，and ZHAO Ya-hua2,**
（1College of Horticulture，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；2College of Life Sciences，
South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China）
Abstract：Two-dimensional electrophoresis（2-DE）was employed to analyze the comparative
proteome from stems of resistant tomato‘Hawaii 7996’plants inoculated with medium virulent strain RsM
and high virulent strain RsH. Two differentially expressed proteins were identified to be Glutathione
S-transferase L3 and Remorin 1 and the function of corresponding genes，GST-L3 and Rem-1，were further
studied. After confirming the effectiveness of VIGS system with TRV carrying the Phytoene Desaturase
gene（PDS），two targeted genes were individually silenced in Hawaii 7996 using VIGS method and their
expression levels were checked by semi-quantitative RT-PCR. The results showed that the average disease
incidence and disease index of bacterial wilt on GST-L3 or Rem-1 silenced plants increased significantly
when challenging with RsM strain，indicating that these two genes are involved in the resistance of tomato
to bacterial wilt disease.
Key words：tomato；bacterial wilt；resistance；two-dimensional electrophoresis；VIGS

番茄青枯病（bacterial wilt）是番茄生产上的一种重要病害，其病原菌为青枯雷尔氏菌（Ralstonia
solanacearum）。番茄植株受到青枯菌侵染后，首先可观测到植株出现萎蔫，然后整株植物会迅速枯

6 期 汪国平等：番茄青枯病抗性两个相关基因功能的初步鉴定 1097

萎死亡（Allen，2007）。青枯病在世界各地均有发生，以热带、亚热带地区更为严重，中国长江以
南尤其是华南地区发生较为普遍，严重时可导致番茄等相关作物绝产，造成巨大的经济损失，已成
为番茄生产的制约因素（汪国平 等，2004）。明确寄主的抗病机理对病害防治、抗病育种具有重要
的指导意义。
病毒诱导的基因沉默（Virus-Induced Gene Silencing，VIGS）是一种快速检测基因功能的技术，
即通过构建携带目标基因的重组病毒载体，沉默内源基因的表达（Lu et al.，2003）。该方法具有无
需全长的基因序列、无需转基因植株、获取表型快等诸多优点，可高效、高通量地分析基因功能，
已被广泛应用于植物基因功能的研究，在烟草、番茄、辣椒和豆类等植物中均已成功建立了 VIGS
体系（徐幼平 等，2008）。目前，基于烟草脆裂病毒（TRV）的 VIGS 载体已经在番茄的叶片（Ekengren
et al.，2003）、花（Fu et al.，2006）和果实（Fu et al.，2005）中获得良好的沉默效果。
本研究中首先通过双向电泳技术分离和分析了抗性番茄材料‘Hawaii 7996’在接种强致病力的
青枯菌（RsH）和中致病力青枯菌（RsM）后蛋白质表达的差异，再利用基于 TRV 病毒的 VIGS 体
系，沉默在双向电泳分析中得到的差异蛋白所对应的基因，观察番茄植株的青枯病抗性是否发生变
化，验证这些基因是否为番茄青枯病抗性相关基因。
1 材料与方法
1.1 材料
番茄抗性材料‘Hawaii 7996’种植于光照培养室（温度 25 ~ 28 ℃，每日光照 12 h）。VIGS 载
体 TRV1（Liu et al，2002）和 TRV2-LIC（Dong et al.，2007）来自于 Arabidopsis Biological Resource
Center，由美国耶鲁大学 Dinesh-Kumar S P 惠赠。中等致病力青枯菌（RsM）和强致病力青枯菌（RsH）
保藏于本实验室，最初从广东省番茄产区病株分离，农杆菌 GV3101 由中国农业大学王国英教授惠赠。
1.2 方法
1.2.1 双向电泳
取青枯菌 RsH 或 RsM 侵染 24 h 后的抗性番茄‘Hawaii 7996’的茎段，用苯酚法提取全蛋白
（Thiellement，2013）。为增加蛋白量，视植株大小取 10 ~ 12 株混合，将 800 µg 的蛋白样品溶入 450
µL水化上样液（7 mol ∙ L-1尿素，2 mol ∙ L-1硫脲，质量体积百分比为4%的CHAPS，40 mmol ∙ L-1 DTT，
质量体积百分比为 0.002%的溴酚蓝），使用 GE 21cm IPG 3-11 非线性胶条在 GE Ettan IPGphor 3（GE
Healthcare）上进行第一向等电聚焦。
然后将胶条在 Buffer A（0.1 mol ∙ L-1 Tris-HCl，2% SDS，6 mol ∙ L-1尿素，30% 甘油，0.1 mol ∙ L-1
DTT，pH 8.8）中平衡 15 min，在 Buffer B（0.1 mol ∙ L-1 Tris-HCl，2% SDS，6 mol ∙ L-1 尿素，30% 甘
油，0.25 mol ∙ L-1 碘乙酰胺，pH 8.8）中平衡 15 min（Gorg et al.，2000），之后进行 12.5% SDS-PAGE
第二向电泳。用 0.066%考马斯亮蓝 G-250 染色过夜，用水脱色至蛋白点清晰。
完成染色的双向电泳凝胶经过扫描保存图像，图像分析采用 PDQuest（version 8.0，Bio-Rad）
软件进行，选择差异倍数大于 2.0 的蛋白点，委托上海博苑生物科技有限公司进行质谱分析。
1.2.2 VIGS重组载体的构建
用植物总 RNA 提取试剂盒提取番茄叶片的总 RNA，反转录合成 cDNA，根据 NCBI 中提供的
序列信息在 PDS 基因和目的基因（X）的中间部位设计特异性引物（表 1），在上、下游引物的 5′
端分别加上与 TRV2-LIC 相对应的 LIC（ligation-independent cloning）接头序列（Dong et al.，2007）。
1098 园 艺 学 报 41 卷
PCR 扩增体系（总 20 µL）：2 µL 10× PCR buffer，2 µL dNTP（10 mmol ∙ L-1），0.1 µL Taq DNA 聚合
酶（5 U ∙ μL-1），1 µL cDNA，两条引物（10 μmol ∙ L-1）各 1 µL，12.9 µL ddH2O。30 个 PCR 循环。
扩增得到的 PCR 产物电泳后用凝胶回收试剂盒纯化。用 T4 DNA 聚合酶处理回收产物，反应体
系：6 µL 回收产物，0.5 µL dATP（100 mmol ∙ L-1），1 µL 0.1% BSA，1 µL 10× buffer，0.5 µL T4 DNA
聚合酶（5 U ∙ μL-1），1 µL ddH2O。反应条件：22 ℃ 35 min，70 ℃ 20 min。同样用 T4 DNA 聚合
酶处理被 PstⅠ酶切后的 TRV2-LIC 载体，反应体系：6 µL 回收产物，0.5 µL dTTP（100 mmol ∙ L-1），
1 µL 0.1% BSA，1 µL 10× buffer，0.5 µL T4 DNA 聚合酶（5 U ∙ μL-1），1 µL ddH2O。反应条件：22 ℃
35 min，70 ℃ 20 min（Dong et al.，2007）。再将两者进行连接，1 µL 质粒，6 µL 目的片段，65 ℃
2 min，22 ℃ 10 min。将连接产物转化大肠杆菌 DH5α，用质粒 PCR 及测序进行鉴定。挑取阳性克
隆，提取质粒转化农杆菌 GV3101，质粒 PCR 鉴定。
载体 TRV2-LIC-PDS 表示携带 PDS 基因的重组载体，TRV2-LIC-X 表示携带目的基因片段的重
组载体。
表 1 VIGS 引物序列
Table 1 The primer sequences used for VIGS tests
基因
Gene
GenBank 登录号
GenBank No.
引物序列（5′–3′）
Primer sequences
产物长度/bp
Fragment length
F：CGACGACAAGACCCTTTTAGATGGTAATCCTCCTG PDS M88683.1
R：GAGGAGAAGAGCCCTACCAATTCCAACATAGACTG
453
F：CGACGACAAGACCCTTCCGTTTCTTCTACCTGATG GST-L3 XM_004249461.1
R：GAGGAGAAGAGCCCTCATAGAATGCTTATACCAAG
478
Rem-1 NM_001247302.1 F：CGACGACAAGACCCTAGCTCCTAAAGAAGTGGTGG 591
R：GAGGAGAAGAGCCCTACAAAATGCAACTCCCAATC
注：下划线的序列是 LIC 接头序列。
Note：The nucleotides underlined are LIC sequences.

1.2.3 农杆菌接种
将含有 TRV1、TRV2-LIC、TRV2-LIC-PDS 和 TRV2-LIC-X 的农杆菌 GV3101 分别接种入 LB 液
体培养基中，28 ℃、200 r ∙ min-1 过夜培养。取 50 mL 菌液于 4 ℃、5 000 r ∙ min-1 离心 10 min，收
集菌体，加入一定体积的渗透液（10 mmol ∙ L-1 MES，10 mmol ∙ L-1 MgCl2，200 mmol ∙ L-1 乙酰丁香
酮），调节农杆菌悬浮液的 OD600 = 0.5 ~ 0.6。将含有 TRV1 和 TRV2-LIC（或重组载体）的农杆菌悬
浮液按 1︰1 比例混匀，室温放置 3 h 用于叶片浸润（Li et al.，2013）。
取生长 3 周的番茄苗，每组 24 株，设置 3 个重复，进行 TRV 病毒侵染：用 2 mL 去针头的注
射器吸取混合的农杆菌悬浮液，从叶片背面将菌液压注到叶片中，之后将幼苗置于暗处 20 ~ 22 ℃
培养 24 h，再于 20 ~ 22 ℃下光照培养。
1.2.4 青枯菌接种
在农杆菌侵染 15 d 后，对番茄植株进行青枯菌接种。对照组：TRV1 和 TRV2-LIC 空载体混合
菌液浸润过的番茄植株；试验组：TRV1 和 TRV2-LIC-X 混合菌液浸润过的番茄植株。将青枯菌接
种到 TZC 固体培养基[葡萄糖 5.0 g ∙ L-1，蛋白胨 10 g ∙ L-1，酸水解酪蛋白 1 g ∙ L-1，TTC（2,3,5–氯
化三苯基四氮唑）0.05 g ∙ L-1，琼脂粉 17 g ∙ L-1，pH 7.0]上 30 ℃培养 2 d，挑取有致病力的单菌落
接种到 CPG 液体培养基（葡萄糖 5.0 g ∙ L-1，蛋白胨 10 g ∙ L-1，水解酪蛋白 1 g ∙ L-1，pH 7.0）中，
于 30 ℃、180 r ∙ min-1 培养 2 d（刘丹 等，2011）。取菌液在 4 ℃、6 000 r ∙ min-1 离心 10 min，收
集菌体，用无菌水重悬，并调节菌液至 OD600 = 0.3，采用伤根侵染法接种（Lin et al.，2008）。接种
5 d 后开始调查发病程度（0 级：健全；1 级：1 ~ 2 叶片萎蔫；2 级：3 ~ 5 叶片萎蔫；3 级：大部分
叶片萎蔫；4 级：整株萎凋或主干萎蔫，即将枯死），分别在 5、7 和 10 d 调查统计，计算发病率和
病情指数（李海涛 等，2001）。
6 期 汪国平等：番茄青枯病抗性两个相关基因功能的初步鉴定 1099

1.2.5 半定量 RT-PCR检测沉默效果
农杆菌侵染 15 d 后，取番茄植株上部叶片，提取总 RNA，反转录合成 cDNA。对沉默的基因重
新设计引物，保证每对引物中至少有一条引物在 VIGS 目的片段之外（表 2），进行半定量 RT-PCR，
以番茄的 Actin 基因作为内参基因，检测目的基因与对照组相比是否表达量减少。为避免 PCR 产物
量到达平台期造成干扰，试验还分析了不同循环数 PCR 的产物量（Chen et al.，2009）。

表 2 半定量 RT-PCR 的引物序列
Table 2 The primer sequences used for semi-quantitative RT-PCR
基因
Gene
GenBank 登录号
GenBank No.
引物序列（5′–3′）
Primer sequences
产物长度/bp
Fragment length
F：TGCTGGTCACAAACCGATAC PDS M88683.1
R：GAACACCTCATCTGTCACCCT
447
F：ATGCCCTTTTGCACAGCGTC GST-L3 XM_004249461.1
R：CAACGAAGGGAGCATACACG
442
F：CTCGAAAGCACTAGTTGT Rem-1 NM_001247302.1
R：CACACAAATGTAATCTAAC
546
Actin U60480.1 F：GGTATTGTGTTGGACTCTGGTGATG 435
R：GTACCACCACTGAGCACAATGTTTC
2 结果与分析
2.1 双向电泳
图 1 和图 2 分别为 RsM（致病力中等）、RsH（致病力强）侵染后的双向电泳结果。
完成图像采集和软件分析后，切割差异蛋白质点进行质谱分析，结果显示存在多个差异蛋白质，
图1和图2中方框A和B所示的2个差异点分别为Remorin 1蛋白和谷胱甘肽S转移酶L3（Glutathione
S-transferase L3，GST-L3），‘Hawaii 7996’番茄植株中的表达量在 RsM 侵染后明显高于 RsH 侵染
后。图 3 为两张双向电泳图的局部结果对比。因大量文献报道它们与植物的抗病性密切相关，本试
验中选定这两个基因进一步深入研究。

图 1 中等致病力青枯菌（RsM）侵染后番茄植株的蛋白质双向电泳图
A：Remorin 1；B：谷胱甘肽 S 转移酶 L3。
Fig. 1 The 2-DE map of tomato plants inoculated with R. solanacearum strain RsM
A：Remorin 1；B：Glutathione S-transferase L3.
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图 2 强致病力青枯菌（RsH）侵染后番茄植株的蛋白质双向电泳图
A：Remorin 1；B：谷胱甘肽 S 转移酶 L3。
Fig. 2 The 2-DE map of tomato plants inoculated with R. solanacearum strain RsH
A：Remorin 1；B：Glutathione S-transferase L3.



图 3 不同致病力青枯菌侵染后番茄植株的双向电泳图的局部比较
Fig. 3 The local contrast of 2-DE map of tomato plants inoculated with two strains of R. solanacearum

2.2 重组载体的构建
八氢番茄红素脱氢酶基因 PDS（phytoene desaturase）、双向电泳结果中两个蛋白质对应的目的
基因 glutathione S-transferase L3（GST-L3）和 remorin 1（Rem-1）经 PCR 扩增出的特异片段，用 T4
DNA 聚合酶处理后连接到 TRV2-LIC 载体上，经过重组质粒 PCR 鉴定得到与目的基因的特异片段
大小相符的条带，再经测序，结果证明 TRV2-LIC-PDS、TRV2-LIC-GST-L3 和 TRV2-LIC-Rem-1 重
组载体构建成功。
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2.3 VIGS 体系的建立
PDS 是类胡萝卜素生成过程中的关键酶，类胡萝卜素在植物中的生理作用是吸收光能和猝灭多
余的光能，当植物体内缺少类胡萝卜素时，植株将出现光漂白样症状，此表型很容易分辨，因此选
用此基因来构建和评价 VIGS 体系。
番茄植株在浸润 TRV1 和 TRV2-LIC-PDS 农杆菌 1︰1混合菌液 15 d 后顶部叶片开始显现光漂白
现象，20 d 后 VIGS 体系番茄植株上部叶片都出现了光漂白现象（图 4），确认为 PDS 基因沉默后的
表型，说明 VIGS 体系已经成功建立。



图 4 浸润含 TRV2-LIC-PDS 农杆菌的番茄植株 20 d 后的表型
Fig. 4 The phenotype of tomato plant at 20 days after infiltrated with Agrobacterium tumefaciens
strain GV3101 containing TRV2-LIC-PDS

2.4 接种青枯菌后的表型观察
设置的 3 组番茄苗：VIGS-CK、VIGS-GST-L3 和 VIGS-Rem-1，在接种青枯菌 RsM 3 d 后出现
青枯病症状。最初是子叶萎蔫，然后整株逐渐萎蔫。由图 5 可见，GST-L3、Rem-1 基因沉默的番茄
植株在青枯病发病程度上明显高于对照组。

图 5 接种青枯菌（RsM）5 d 后基因沉默及对照番茄植株的表型
Fig. 5 The phenotypes of gene-silenced and control tomato plants at 5 days after inoculated with R. solanacearum strain RsM

本试验中选用的 RsM 是中等致病力的青枯菌，‘Hawaii 7996’番茄对其有很强的抗性，平均发
病率为 11.11%，病情指数仅为 3.82；而沉默基因 GST-L3 和 Rem-1 的番茄植株发病率分别为 61.11%
和 66.67%，病情指数分别为 33.68 和 36.11，发病等级多为 2 级，有整株死亡的情况出现（表 3）。
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表 3 接种青枯菌（RsM）10 d 后基因沉默及对照番茄植株的发病情况
Table 3 The incidence of gene-silenced and control tomato plants at 10 days after inoculated with R. solanacearum strain RsM
发病等级分布
Distribution of disease scales
被沉默的基因
Silenced gene
发病植株/接种总植株
Wilting plant/total plant
1 2 3 4
平均发病率/%
Average disease incidence
病情指数
Average disease index
VIGS-CK 8/72 5 3 0 0 11.11 3.82
GST-L3 44/72 6 26 9 3 61.11 33.68
Rem-1 48/72 8 29 6 5 66.67 36.11

2.5 VIGS 沉默效果的半定量 RT-PCR 鉴定
病毒诱导基因沉默能够引起目的基因的转录后沉默，导致被沉默的基因在转录后其 mRNA 降
解。为了鉴定 VIGS 处理后的番茄植株中相应的目的基因是否被沉默，分别提取试验组、对照组总
RNA 用半定量 RT-PCR 进行比较，循环数为 22、25、28、30，结果如图 6 所示。当对照组与 VIGS
处理的植株 Actin 基因扩增量一致时，VIGS 处理的植株相应目的基因 PDS、GST-L3、Rem-1 的扩增
量明显减少，验证了 VIGS 沉默目的基因的有效性。


图 6 基因沉默的半定量 RT-PCR 检测
M：Marker；22、25、28、30 为 PCR 循环数。
Fig. 6 VIGS-mediated degradation of specific transcripts in tomato
M：Marker；22，25，28，30：PCR cycle number.
3 讨论
‘Hawaii 7996’番茄是目前研究中广泛使用的抗病材料，对中等致病力的青枯菌 RsM 有很强
的抗性，但对强致病力菌株 RsH 表现为感病，所以在被两种不同致病力的青枯菌侵染后的植株中表
达差异的蛋白质，可能与番茄对青枯菌的抗性相关。在双向电泳的结果中，青枯菌株 RsM 侵染的
‘Hawaii 7996’番茄植株中谷胱甘肽 S 转移酶 L3 和 Remorin 1 蛋白表达量上调，表明其对应基因
GST-L3 和 Rem-1 可能参与寄主对青枯病的防御反应；分别沉默基因 GST-L3 和 Rem-1 后，‘Hawaii
7996’植株对青枯病的抗性明显降低，进一步证实了这一推断。
谷胱甘肽 S 转移酶（GST）是一种多功能的氧化还原酶（EC2.5.1.18），其显著功能是它能在细
胞中排出外源性有毒物质和参与氧化应激反应（Marrs，1996）。GST 通过催化某些内源性或外来有
害物质与还原型谷胱甘肽发生亲电取代反应，增加这些物质的疏水性，使其易于穿越细胞膜，通过
选择性的 ABC 转运蛋白转运出去，达到去毒作用（Dixon et al.，2010）。在植物细胞中，GST 的表
达主要发生在植物的发育期（细胞分裂等）以及在细胞受到外界病源体入侵、外界环境的改变和喷
6 期 汪国平等：番茄青枯病抗性两个相关基因功能的初步鉴定 1103

洒化学物质等情况下。Wisser 等（2011）研究发现 GST 基因对灰色叶斑病、玉米大斑病和小斑病这
3 种由真菌引起的玉米病害都有适度的抗性。在本研究中，用 VIGS 的方法沉默 GST-L3 基因导致
‘Hawaii 7996’番茄植株的青枯病抗性明显减弱，表明 GST 不仅在植物对真菌的抗性中起作用，在
番茄对细菌性青枯病的抗性中也起了作用。
Remorin 蛋白是一种植物专一性的蛋白，仅在细胞膜的脂筏上发现，但其结构中不含跨膜域。
单体 Remorin 可形成纤维结构，在细胞骨架和膜骨架中发挥作用。它的另一个重要功能是参与植物
抗性与发育的信号传导途径（Raffaele et al.，2007）。研究发现在体外试验中 Remorin 蛋白能与寡聚
半乳糖醛酸（OGA）结合，在用多聚半乳糖醛酸处理过的马铃薯叶片上，Remorin 蛋白能与质膜结
合并被磷酸化，而 OGA 是一种胞外信号，是植物抗性基因的调节物并参与植物的发育及形态建成，
说明 Remorin 蛋白很可能作用于细胞间信号传导和植物防御。Lefebvre 等（2010）研究发现，Remorin
蛋白能吸附在围绕着病菌的宿主质膜上，从而控制根瘤菌的感染并阻止它释放到宿主细胞质中。
Perraki 等（2012）进一步通过结构—功能法研究发现，Remorin 蛋白的一个短的 C 末端脂锚钩可以
直接绑定到马铃薯细胞的质膜上，从而限制马铃薯病毒 X 在细胞间的运动。结合本研究中 Rem-1 的
VIGS 沉默后番茄植株发病率明显增加这一结果，表明 Remorin 蛋白很可能是通过阻碍青枯菌在细
胞间的运动方式，从而在番茄抗青枯病感染中起到一定的作用。
综上所述，本研究中的这两个基因 GST-3 和 Rem-1 都属于番茄青枯病抗性相关基因，参与了番
茄植株对青枯病的防御反应，但它们在防御反应中具体的分子作用还有待进一步研究。

References
Allen C. 2007. Strategies for managing bacterial wilt diseases of tomato，potato，and export ornamentals. Phytopathology，97 (7)：148–149.
Chen Y Y，Lin Y M，Chao T C，Wang J F，Liu A C，Ho F I，Cheng C P. 2009. Virus-induced gene silencing reveals the involvement of ethylene-，
salicylic acid- and mitogen-activated protein kinase-related defense pathways in the resistance of tomato to bacterial wilt. Physiologia
Plantarum，136 (3)：324–335.
Dixon D P，Skipsey M，Edwards R. 2010. Roles for glutathione transferases in plant secondary metabolism. Phytochemistry，71 (4)：338–350.
Dong Y，Burch-Smith T M，Liu Y，Mamillapalli P，Dinesh-Kumar S P. 2007. A ligation-independent cloning tobacco rattle virus vector for
high-throughput virus-induced gene silencing identifies roles for NbMADS4-1 and -2 in floral development. Plant Physiology，145 (4)：1161–
1170.
Ekengren S K，Liu Y L，Schiff M，Dinesh-Kumar S P，Martin G B. 2003. Two MAPK cascades，NPR1 and TGA transcription factors play a role
in Pto-mediated disease resistance in tomato. Plant Journal，36 (6)：905–917.
Fu D Q，Zhu B Z，Zhu H L，Jiang W B，Luo Y B. 2005. Virus-induced gene silencing in tomato fruit. Plant Journal，43 (2)：299–308.
Fu D Q，Zhu B Z，Zhu H L，Zhang H X，Xie Y H，Jiang W B，Zhao X D，Luo Y B. 2006. Enhancement of virus- induced gene silencing in tomato
by low temperature and low humidity. Molecules and Cells，21 (1)：153–160.
Gorg A，Obermaier C，Boguth G，Harder A，Scheibe B，Wildgruber R，Weiss W. 2000. The current state of two-dimensional electrophoresis with
immobilized pH gradients. Electrophoresis，21 (6)：1037–1053.
Lefebvre B，Timmers T，Mbengue M，Moreau S，Herve C，Toth K，Bittencourt-Silvestre J，Klaus D，Deslandes L，Godiard L，Murray J D，
Udvardi M K，Raffaele S，Mongrand S，Cullimore J，Gamas P，Niebel A，Ott T. 2010. A remorin protein interacts with symbiotic receptors
and regulates bacterial infection. Plant Biology，107 (5)：2343–2348.
Li C，Yan J M，Li Y Z，Zhang Z C，Wang Q L，Liang Y. 2013. Silencing the SpMPK1，SpMPK2，and SpMPK3 genes in tomato reduces abscisic
acid-mediated drought tolerance. International Journal of Molecular Sciences，14 (11)：21983–21996.
Li Hai-tao，Zou Qing-dao，Lü Shu-wen，Mu Xin，Xu Wen-kui. 2001. Suitable identification method for Ralstonia solanacearum in tomato. Liaoning
Agricultural Sciences，(4)：1–7. (in Chinese)
李海涛，邹庆道，吕书文，穆 欣，许文奎. 2001. 番茄抗青枯病的最适鉴定方法研究. 辽宁农业科学，(4)：1–7.
Liu Dan，He Hong，Huang Hai-bo，Xie Jian-hui，Chai Ting-ting. 2011. Isolation of pathogenic Ralstonia solanacearum from Pogostemon cablin and
1104 园 艺 学 报 41 卷
determination of its pathogenicity. Chinese Traditional and Herbal Drugs，42 (8)：1596–1599. (in Chinese)
刘 丹，贺 红，黄海波，谢建辉，柴婷婷. 2011. 广藿香青枯病菌的分离培养及致病性测定. 中草药，42 (8)：1596–1599.
Liu Y L，Schiff M，Dinesh-Kumar S P. 2002. Virus-induced gene silencing in tomato. Plant Journal，31 (6)：777–786.
Lin Y M，Chou I C，Wang J F，Ho F I，Chu Y J，Huang P C，Lu D K，Shen H L，Elbaz M，Huang S M，Cheng C P. 2008. Transposon mutagenesis
reveals differential pathogenesis of Ralstonia solanacearum on tomato and Arabidopsis. Molecular Plant-Microbe Interactions，21 (9)：1261–
1270.
Lu R，Martin-Hernandez A M，Peart J R，Malcuit I，Baulcombe D C. 2003. Virus-induced gene silencing in plants. Methods，30 (4)：1046–2023.
Marrs K A. 1996. The functions and regulation of glutathione S-transferases in plants. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular
Biology，47：127–158.
Perraki A，Cacas J L，Crowet J M，Lins L，Castroviejo M，German-Retana S，Mongrand S，Raffaele S. 2012. Plasma membrane localization of
Solanum tuberosum remorin from group 1，homolog 3 is mediated by conformational changes in a novel C-terminal anchor and required for the
restriction of potato virus X movement. Plant Physiology，160 (2)：624–637.
Raffaele S，Mongrand S，Gamas P，Niebel A，Ott T. 2007. Genome-wide annotation of remorins，a plant specific protein family：Evolutionary and
functional perspectives. Plant Physiology，145 (3)：593–600.
Thiellement H. 2013. Plant proteomics methods and protocols. Shen Shi-hua translated. Beijing：Science Press. (in Chinese)
Thiellement H. 2013. 植物蛋白质组学实验指南. 沈世华译. 北京：科学出版社.
Wang Guo-ping，Lin Ming-bao，Wu Ding-hua. 2004. Classical and molecular genetics of bacterial wilt resistance in tomato. Acta Horticulturae
Sinica，31 (3)：403–407. (in Chinese)
汪国平，林明宝，吴定华. 2004. 番茄青枯病抗性遗传研究进展. 园艺学报，31 (3)：403–407.
Wisser R J，Kolkman J M，Patzoldt M，Holland J B，Yu J M，Krakowsky M，Nelson R J，Balint-Kurti P J. 2011. Multivariate analysis of maize
disease resistances suggests a pleiotropic genetic basis and implicates a GST gene. Agricultural Sciences，108 (18)：7339–7344.
Xu You-ping，Xu Qiu-fang，Song Xiao-yi，Zhang Zhi-xin，Cai Xin-zhong. 2008. Virus-induced gene silencing. Journal of Zhejiang University：
Agriculture and Life Sciences，34 (2)：119–131. (in Chinese)
徐幼平，徐秋芳，宋晓毅，张志新，蔡新忠. 2008. 病毒诱导的基因沉默. 浙江大学学报：农业与生命科学版，34 (2)：119–131.