全 文 ：园 艺 学 报 2014，41（4）：621–630 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2014–01–13；修回日期：2014–03–17
基金项目：农业部公益性行业（农业）科研专项（201203075-07）；重庆市科技攻关计划项目（CSTTC，2007AA1018）
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：gy_zhong@163.com）
柑橘半胱氨酸蛋白酶基因 CsCysP 的分离、亚细
胞定位及表达分析
马岩岩 1，张 军 1，陈 娇 1，张凌云 1，朱世平 1，闫树堂 1，钟广炎 2,*
（1西南大学园艺园林学院/中国农业科学院柑桔研究所，重庆 400715；2广东省农业科学院果树研究所，广州 510640）
摘 要：以‘奥林达’夏橙[Citrus sinensis（L.）‘Olinda’]为材料，采用 RT-PCR 结合 RACE 技术
从果萼离层中分离到 1 个半胱氨酸蛋白酶类基因，命名为 CsCysP（GenBank 登录号：KJ093387）。该基
因的 cDNA 全长为 1 485 bp，开放阅读框（ORF）为 1 083 bp，推测可编码 360 个氨基酸残基的多肽。其
基因组序列与 cDNA 比对后显示有 3 个内含子。分析发现，CsCysP 属于 papain-like（木瓜蛋白酶，C1A）
家族的半胱氨酸蛋白酶，与拟南芥、大豆、烟草、杨树等的同源蛋白有 73% ~ 83%的相似性。亚细胞定位
结果显示 CsCysP 蛋白定位在细胞壁上。qRT-PCR 结果表明 CsCysP 在老叶、成熟果实果萼离层和花中的
表达量明显高于幼苗的根、茎、叶。CsCysP 的表达被脱落酸、高盐和 PEG6000 诱导，低温、乙烯、芸薹
素内酯、水杨酸和甲基茉莉酸可抑制其表达。利用基因工程手段获得了柑橘过表达 CsCysP 的 5 个转基因
株系。
关键词：柑橘；半胱氨酸蛋白酶；逆境；基因表达
中图分类号：S 666 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）04-0621-10

Isolation，Subcellular Localization and Expression Analysis of a Citrus
Cysteine Protease Gene，CsCysP
MA Yan-yan1，ZHANG Jun1，CHEN Jiao1，ZHANG Ling-yun1，ZHU Shi-ping1，YAN Shu-tang1，and
ZHONG Guang-yan2,*
（1College of Horticulture and Landscape Architecture，Southwest University/Citrus Research Institute，Chinese Academy of
Agricultural Sciences，Chongqing 400715，China；2 Institution of Fruit Tree Research，Guangdong Academy of Agricultural
Sciences，Guangzhou 510640，China）
Abstract：A cysteine protease gene，CsCysP（KJ093387），was cloned from the fruit abscission zone
of sweet orange[Citrus sinensis（L.）‘Olinda’] using RT-PCR and RACE. The 1 485 bp full-length cDNA
of CsCysP contains a 1 083 bp open reading frame（ORF）encoding a protein of 360 amino acid residues.
Comparison between cDNA and genomic DNA sequences showed that the gene contains three introns.
The phylogenetic analysis placed the gene into papain-like（C1A）group. BLASTp analysis showed that
CsCysP protein shared 73%–83% amino acid identities with CPRs from Arabidoposis thaliana，soybean，
tobacco，Populus trichocapa and other species. Transient expression of a 35S-CsCysP-GFP fusion gene

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in onion epidermal cells revealed that CsCysP protein was localized in cell wall. Quantitative Real-time
PCR results showed that the expression of CsCysP was higher in senescent leaves，fruit abscission zone
cells and flowers than in leaves，stems and roots of young seedlings. CsCysP was induced by salt，
PEG6000 and ABA but repressed by low temperature，ethylene（ET），brassinolide（BR），methyl jasmonic
acid（MeJA）and salicylic acid（SA）. Five transgenic citrus lines overexpressing CsCysP were also
obtained in this study and will be further characterized.
Key words：citrus；cysteine protease；stress；gene expression

半胱氨酸蛋白酶（CPR）是一类重要的蛋白水解酶（van der Renier et al.，2004），主要参与植物
生长和发育进程中蛋白的降解，在种子萌发（Toyooka et al.，2000）、果实发育和成熟（Priolo et al.，
2000）、器官衰老与脱落（Smart et al.，1994）中起重要作用。半胱氨酸蛋白酶也参与植物对外界生
物和非生物胁迫的响应以及细胞程序性死亡（Esteban-García et al.，2010）。Rawlings 等（2010）把
半胱氨酸蛋白酶大致分为 15 个家族，分属于 5 大类。包括 C1：Papain，木瓜蛋白酶；C2：Calpain，
钙依赖半胱氨酸蛋白酶；C12：催化蛋白去泛素化的半胱氨酸蛋白酶；C13：Legumain，豆类天冬氨
酸蛋白内切酶；C14：天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶；C19：蛋白酶体（Basset et al.，2002；闫
龙凤 等，2005；Rawlings et al.，2010）。
Papain-like 蛋白家族（C1A）是植物半胱氨酸蛋白酶的主要成员，定位在液泡或者细胞壁上（闫
龙凤 等，2005）。近年来在拟南芥（Beers et al.，2004；Watanabe & Lam，2005）、大豆（Nong et al.，
1995；Esteban-García et al.，2010）、烟草（Beyene et al.，2006）和水稻（Lee et al.，2004）等植物
中对这类基因已有大量研究，但是在多年生木本植物中报道较少。Papain-like 半胱氨酸蛋白酶主要
是从衰老器官中分离，如老化的叶片（Drake et al.，1996）、花（Eason et al.，2002）和成熟的果实
（Priolo et al.，2000）等。Beyene 等（2006）在烟草成熟叶片中分离到了 C1A 家族基因 NtCP2，并
研究了该基因在不同逆境下的差异性表达，发现其可能在程序性死亡过程中起作用。
本试验以‘奥林达’夏橙[Citrus sinensis（L.）‘Olinda’]果萼离层细胞为材料，通过 RT-PCR
和 RACE 技术获得了 1 个半胱氨酸蛋白酶基因，研究了该基因在不同非生物胁迫和外源激素处理条
件的表达模式，还利用洋葱表皮细胞瞬时转染技术对该基因的蛋白进行了亚细胞定位。同时还获得
了柑橘过表达该基因的转基因植株。
1 材料与方法
1.1 植物材料及处理
于 2012 年 4—5 月在中国农业科学院柑桔研究所资源圃，取多年生‘奥林达’夏橙植株的花、
老叶（前 1 年秋梢叶片）和成熟果实（切取果萼离层），并将由种子萌发生长 1 个月的幼苗分离为根、
茎、叶，速冻于液氮中并在–80 ℃下保存备用。
‘奥林达’种子依次用 1 mol · L-1 的 NaOH 处理 30 min，3%次氯酸消毒 30 min、无菌水清洗 3 ~
5 遍，然后将种子播于 MS 培养基上，在 28 ℃、16 h 光照/8 h 黑暗条件下培养 4 周。
分别用 20 μmol · L-1 BR、20 μmol · L-1 GA3、2 mmol · L-1 MeJA 和 100 μmol · L-1 SA 处理幼苗 12 h。
取幼苗放入含约 20 mg · L-1 乙烯的密闭容器（50 L）中处理 4、12、24、48 h。
另外取幼苗分别用 100 μmol · L-1 ABA、4 ℃低温、250 mmol · L-1 NaCl、20%的 PEG6000 处理
0、2、4、8、12 和 24 h。每个处理重复 3 次。
4 期 马岩岩等：柑橘半胱氨酸蛋白酶基因 CsCysP 的分离、亚细胞定位及表达分析 623

收集上述各处理的幼苗并立即用液氮速冻、–80 ℃保存。
用于转基因试验的‘奥林达’种子按上述方法消毒处理，在 28 ℃的黑暗条件下培养 3 周，然
后在 16 h 光照/8 h 黑暗条件下培养 1 周备用。
1.2 DNA 和 RNA 的提取与 cDNA 的合成
利用 CTAB 法提取‘奥林达’夏橙叶片的 DNA（Cheng et al.，2003）。使用天根公司 RNAprep pure
Kit 试剂盒提取‘奥林达’夏橙植株的花、老叶、果萼离层，1 个月龄幼苗的根、茎、叶及处理后幼
苗的总 RNA。使用 TaKaRa 公司 PrimeScriptTM RT reagent Kit 反转录试剂盒合成 cDNA。
1.3 基因克隆与序列分析
根据本实验室前期工作分析得到的柑橘基因组芯片数据（Citrus Genome Array，Affymetrix），
发现 1 个半胱氨酸蛋白酶类似基因的表达（探针号为 Cit.4078.1.S1-at）受乙烯抑制（张凌云，2010）。
利用 HarvEST Citrus1.25 EST 数据库中查找该探针号对应的 EST 序列，根据 EST 序列设计基因特异
性引物 A1 和 B1（表 1），并结合 5′和 3′RACE 技术扩增获得该基因的全长，操作过程按照 SMARTTM
RACE cDNA Amplification Kit 的说明进行。
用 BLASTp（http： //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）分析氨基酸序列同源性。用在线软件
Conserved Domains（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/cdd）分析蛋白保守结构域。用 DNAStar 分析蛋白
的相对分子量和等电点。多重序列比对分析使用 MEGA5.1。
1.4 实时荧光定量分析
CsCysP 基因表达模式分析采用该基因特异引物 C1/C2，用作内参的基因为柑橘 Actin，引物为
D1/D2（表 1）。定量实时 PCR 使用 SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Perfect Real Time）（TaKaRa，大连）
试剂盒，在 iCycler® Thermal Cycler 荧光定量 PCR 仪（Bio-RAD，USA）上进行。PCR 反应体系（20
µL）包含 10 µL Premix Ex Taq（2×）、0.5 µL 正向引物（10 µmol · L-1）、0.5 µL 反向引物（10 µmol · L-1）、
1 µL 总 cDNA。PCR 反应程序为 95 ℃变性 90 s 后按如下参数循环 40 次：95 ℃ 10 s、60 ℃ 15 s、
72 ℃ 20 s，循环完成后在 72 ℃下延伸 90 s。分析溶解曲线，以检测引物是否可用。设置 3 次生物
学重复和 3 个计数重复。数据分析按照公式：2-∆∆Ct，∆Ct = CtCsCysP–CtActin 计算。使用 Spass19.0 软
件进行数据统计分析。
1.5 亚细胞定位载体的构建和定位分析
根据 CsCysP 的 ORF 序列（去除终止密码子）设计分别含有 BamHⅠ，SamⅠ酶切位点的引物
E1/E2（表 1），利用双酶切把该片段插入到含有报告基因 GFP 的 PBI121 载体中，构成含有 35S-
CsCysP-GFP 的融合表达载体，把该载体转化到农杆菌 LBA4404 中。
采用 Sun 等（2007）报道的农杆菌介导洋葱表皮细胞瞬时表达蛋白定位方法，将上述带融合载
体的农杆菌侵染洋葱表皮，并将侵染后的洋葱表皮置于 23 ℃下黑暗培养 36 h 左右，然后在荧光共
聚焦显微镜下观察荧光蛋白的亚细胞定位。
1.6 过量表达载体构建以及转基因检测
使用 pFGC5941 来构建 CsCysP 的超表达载体。将 CsCysP 的全长 cDNA 利用 SamⅠ，AscⅠ（克
隆引物 F1/F2 上的酶切位点）（表 1）处理，正向插入到同样消化后的载体中。
用冻融法把构建好的载体导入农杆菌 LBA4404 中，转化奥林达无菌苗茎段（Boscariol et al.，
2003），用 15 mg · L-1 草甘磷除草剂（PTT）筛选转基因再生芽。将抗性芽嫁接到砧木上，待植株长
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出 4 ~ 5 片新叶后提取叶片 DNA，用 PCR 检测是否含有 T-DNA 插入区的 Bastar 抗性位点序列（引
物 G1/G2），及 qRT-PCR 检测 CsCysP 在转基因植株中的表达量。

表 1 本研究所用引物
Table 1 Primers used in this study
引物名称
Primer name
引物序列（5′–3′）
Primer sequence（5′–3′）
用途
Use
A1 CCTCAACGATTCCCAGAACCAAAGC 5′RACE
B1 GCAACAAACCCAACAGGACCTTCAG 3′RACE
C1 TTGGTTCTGGGAATCGTTGAG qRT-PCR
C2 TTGTAAGGCTTGTCCATCTTGTTAG qRT-PCR
D1 CCCCATCGTTACCGTCCAG qRT-PCR
D2 CGCCTTGCCAGTTGAATATCC qRT-PCR
E1 GGATCCGCCAGGTCGTTCTTGCCAGTATCAGCC CsCysP ORF
E2 CCCGGGGAGCTCATCCTTAGGATAATCTGAAGGTCCTGTTG CsCysP ORF
F1 GGCGCGCCGCCAGGTCGTTCTTGCCAGTATCAG 过表达载体构建 Overexpression vector construct
F2 CCCGGGAAGCCAAAGACAATAGTGAACCGTG 过表达载体构建 Overexpression vector construct
G1 ACAAAGACAGATAAAGCCACGCACA 转基因植物鉴定 Identified transgenic plants
G2 GCACCATCGTCAACCACTACATCG 转基因植物鉴定 Identified transgenic plants
注：下划线部分 GGATCC、CCCGGG 和 GGCGCGCC 分别添加 BamHⅠ、SamⅠ和 AscⅠ酶切位点。
Note：The underlined sequences‘GGATCC’，‘CCCGGG’and‘GGCGCGCC’in the primers represent restriction enzyme sites of BamHⅠ，
SamⅠand AscⅠ，respectively.
2 结果与分析
2.1 奥林达夏橙果萼离层 CsCysP 基因克隆及序列分析
根据前期工作中柑橘基因组芯片数据，发现一个半胱氨酸蛋白酶类似基因的表达受乙烯抑制，
其探针号为Cit.4078.1.S1-at（张凌云，2010）。根据探针号信息在柑橘数据库（HarvEST Citrus1.25 EST）
找到对应的 EST 序列，利用 EST 序列结合 RACE 技术获得该基因的 cDNA 全长，并命名为 CsCysP
（GenBank 登录号：KJ093387）。CsCysP 的 cDNA 全长是 1 485 bp，开放阅读框长 1 083 bp，预测
所编码的蛋白含 360 个氨基酸残基，分子量 39.9 kD，等电点 6.8。CsCysP 的 cDNA 的序列与基因组
序列比对发现，其含有 3 个内含子（图 1）。
图 1 CsCysP 基因组序列结构
Fig. 1 The genomic structure of the CsCysP gene

生物信息分析显示，CsCysP 蛋白不但含有半胱氨酸家族的保守区域，而且还含有 Papain-like
蛋白家族共有的 4 个活性位点相关氨基酸残基 Gln-Cys-His-Asn/Asp，以及 ERFNIN 和 KDEL-tail 保
守位点（图 2）。
使用 MEGA5.1 构建 CsCysP 蛋白和拟南芥 C1A 类蛋白的氨基酸序列进化树，显示 CsCysP 聚类
到 C1A-2 组（图 3）。
4 期 马岩岩等：柑橘半胱氨酸蛋白酶基因 CsCysP 的分离、亚细胞定位及表达分析 625

图 2 CsCysP 与其他物种半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列比对
下划线：保守区；* 催化位点；方框：ERFNIN 保守区；折线：半胱氨酸残基形成二硫键桥连接位置；波浪线：C 端 KDEL 保守位点。
Fig. 2 Amino acid sequence alignment between CsCysP and its homologous cysteine protease proteins from other species
The underlined is the conservative region；* indicates catalysis pocket；Rectangular box represents the ERFNIN motif；Connecting lines showed the
cysteine residues involved in the formation of disulfide bridges. Break line：KDEL domain in C terminus.
图 3 柑橘 CsCysP 与拟南芥相似蛋白氨基酸序列的系统进化树分析
分支处的数值表示支持率；标尺为分支长度标准。
Fig. 3 Phylogenetic tree of Citrus CsCysP and its homologs from Arabidopsis thaliana
Numbers beside the branches indicate the support rate；The scale indicates the branch length standard.
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图 6 CsCysP 基因在不同外源激素处理下的表达量
Fig. 6 Changes in expression of CsCysP gene under
treatments of exogenous plant hormones
* P < 0.05；** P < 0.01.
2.2 CsCysP 蛋白的亚细胞定位
35S-CsCysP-GFP 融合表达载体转化细胞的细胞壁有激发荧光，而表达 35S-GFP 载体的细胞在
整个细胞中都有分散荧光信号（图 4），说明 CsCysP 蛋白定位在细胞壁上。
图 4 CsCysP 和 GFP 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达
A、B：白光下；C、D：荧光显微镜下，CsCysP-GFP 和 GFP 蛋白的绿色荧光信号；E：A 和 C 的重叠图像；F：B 与 D 的重叠图像。
Fig. 4 The transient expression of CsCysP and GFP in onion cells
A，B：Bright-field images；C，D：Fluorescent images of the cells expressing CsCysP-GFP and GFP respectively；
E：Image overlaying A and C；F：Image overlaying B and D.
2.3 CsCysP 基因表达分析
2.3.1 CsCysP在各个组织器官的表达特异性和外源激素处理对 CsCysP表达的影响
利用实时荧光定量 PCR 技术分析了 CsCysP 在柑橘不同组织中的表达，结果（图 5）显示 CsCysP
在成熟果实的果萼离层、老叶和花中表达量较高，而在 1 个月龄幼苗的根、茎、叶中的表达很低。
甲基茉莉酸（MeJA）、水杨酸（SA）、芸薹素内酯（BR）处理 12 h 在一定程度上抑制了 CsCysP
的表达，而赤霉素（GA3）对 CsCysP 的表达没有明显的影响（图 6）。



图 5 CsCysP 基因在不同组织中的相对表达量
Fig. 5 Relative expression levels of CsCysP gene
in different tissues
* P < 0.05；** P < 0.01.
4 期 马岩岩等：柑橘半胱氨酸蛋白酶基因 CsCysP 的分离、亚细胞定位及表达分析 627

如图 7 所示，CsCysP 表达在乙烯处理 4 ~ 24 h 时被明显抑制， 48 h 时恢复到正常水平；脱落
酸（ABA）处理，CsCysP 的表达迅速上升，12 h 升至最高，并维持该水平至 24 h。
图 7 CsCysP 在乙烯和 ABA 处理下的表达量
Fig. 7 Changes in expression of CsCysP gene under treatments of ethylene and ABA
* P < 0.05；** P < 0.01.
2.3.2 外界非生物胁迫条件下 CsCysP的表达
在 4 ℃冷害胁迫下，CsCysP 表达在 4 h 降至最低，至 12 h 后恢复正常（图 8）。在脱水胁迫（20%
PEG6000）下，CsCysP 在前 8 h 内小幅下降，12 h 骤然升高并维持至 24 h。在 250 mmol · L-1 的 NaCl
处理下，CsCysP 响应在前期较慢，8 h 后大幅升高，较对照上升 4 倍，处理至 24 h 时还呈上升趋势。
图 8 非生物胁迫下 CsCysP 的相对表达量
Fig. 8 Changes in expression of CsCysP gene under various abiotic stresses
* P < 0.05；** P < 0.01.
2.4 CsCysP 转基因植株的鉴定和表达分析
为了进一步了解 CsCysP 的功能，构建了 CsCysP 的超表达载体，通过农杆菌介导转化，获得
28 个嫁接成活的抗性芽（图 9）。PCR 检测结果显示 5 株呈转基因阳性，转化率在 10% ~ 20%之间
（图 10）。实时荧光定量 PCR 分析显示，与非转基因株系（WT）相比，转基因株系中的 CsCysP 表
达量显著提高（图 11）。
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图 9 CsCysP 转基因柑橘植株
Fig. 9 CsCysP transgenic plants by PCR and the expression of CsCysP gene in transgenic plants




















3 讨论
本试验中得到的 Papain-like 半胱氨酸蛋白酶的 cDNA 全长，其氨基酸序列具有 Papain-like 蛋白
的保守结构，且与木本植物毛果杨中半胱氨酸蛋白酶 CPR 的相似性最高，达到 83%。植物界中的
Papain-like 半胱氨酸蛋白酶可以划分为 9 个亚家族（Richau et al.，2012），CsCysP 属于 C1A-2 亚组。
C1A-2 类蛋白的主要特点是在 C–端含有 KDEL 保守序列，KDEL 是内质网（ER）滞留信号
（Okamoto et al.，2003）。CPRs 蛋白多被报道定位在液泡或细胞壁上。本试验证实 CsCysP 定位在
细胞壁上，表明该蛋白酶的作用位点在胞外，但这与带 KDEL 的蛋白在蛋白分拣时回流内质网的一
般规律似乎矛盾。最近有报道，Lilium longiflorum LlCYP 蛋白在幼叶中的确定位在内质网中，但在
花衰老时定位在液泡，故液泡是 LlCYP 的作用位点，删除 KDEL 后叶片表现早衰（Battelli et al.，2014）。
Papain-like 半胱氨酸蛋白酶基因家族成员众多，表达的组织特异性强（Ling et al.，2003；Richau
et al.，2012）。茄属中的 SmCP 在叶片衰老、果实脱落、珠心细胞退化以及其他的衰老过程中都有表
达（Xu & Chye，1999）。Beyene 等（2006）报道两个烟草 C1A 亚家族基因 NtCP1 和 NtCP2 在不同
组织中差异表达，NtCP1 被认为是衰老特异基因，主要在老化的叶片中表达，而 NtCP2 的表达只在
成熟的绿叶中检测到，被认为有可能与细胞程序性死亡相关。与 CsCysP 一样，NtCP2 含有 KDEL，
图 10 CsCysP 转基因柑橘植株的 PCR 鉴定
P1 和 P2 是空载转基因株系，V 代表载体质粒对照，WT 是非转
基因植株，1、5、12、13、21 是阳性转基因株系，下同。
Fig. 10 Identification of CsCysP transgenic plants by PCR
P1/P2：Lines transformed with empty vector；V：Plasmid as PCR
control；WT：Non-transgenic plant；1，5，12，13，21：Transgenic
lines containing CsCysP transgene. The same below.
图 11 转基因柑橘植株中 CsCysP 的表达
以 WT 株系的数据作为基数进行比较；
* P < 0.05；** P < 0.01。
Fig. 11 The expression of CsCysP gene in transgenic plants
The date of WT line was used as basis for relative comparison；
*P < 0.05；** P < 0.01.
.
4 期 马岩岩等：柑橘半胱氨酸蛋白酶基因 CsCysP 的分离、亚细胞定位及表达分析 629

属于 C1A-2 家族。本研究中的 qRT-PCR 结果显示 CsCysP 在老叶、成熟的花瓣和脱落果萼离层中表
达量较高，而在幼苗中表达量低，说明 CsCysP 应是一个衰老或者程序性死亡相关的蛋白酶基因，
可能在器官脱落中起重要作用。
Papain-like 半胱氨酸蛋白酶基因不仅与植物的衰老相关，同时也参与信号传导响应外界环境中
的生物和非生物胁迫（Grudkowska & Zagdanska，2004；Chen et al.，2010；Parrott et al.，2010；Martínez
et al.，2012）。拟南芥 RD19 的表达受高盐和渗透胁迫的强烈诱导（Koizumi et al.，1993；Xiong et al.，
2002；Bernoux et al.，2008），RD19 的同源基因 BoCP4 也强烈应答脱水胁迫，但是受水淹胁迫和高
糖的抑制（Coupe et al.，2003）。甘薯的 Papain-like 基因 SPCP2 被认为与衰老相关，过表达该基因
的拟南芥植株表现出营养生长到生殖生长的进程加快，伴有耐盐和耐旱能力的增强（Chen et al.，
2010）。在本试验中，CsCysP 同样受高盐和脱水胁迫诱导，但受冷处理抑制。激素是重要的信号传
导诱发因素，如甘薯 SPCP2 被 ET、ABA 和 SA 诱导（Chen et al.，2010）。在本试验中 CsCysP 强烈
响应 ABA 信号，但是被 ET、SA 和 MeJA 抑制，说明 CsCysP 可能通过正调控或者负调控参与多重
信号传导途径。
CsCysP 在幼嫩组织或细胞中基本不表达，只有在细胞衰老时才大量表达，对逆境也有积极响应，
其蛋白又定位在细胞壁，表明其可能参与衰老进程中的蛋白质降解，但具体功能仍不甚明了。今后
将利用已获得的柑橘转基因植株研究 CsCysP 的功能。

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