全 文 ：Protective effect of lycium barbarum polysaccharides against
NMDA-induced retinal damage in rats
BAI Shuang1，YU Xin1，DU Ying-pei1，ZHENG Ping1，2，ZHENG Jie1，2，YAN Lin1，2，DAI Gui-dong2，3
(1． School of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，China;2． Ningxia Engineering ＆
Technology Research Center for Modernization of Hui Medicine，Yinchuan 750004，China;3． Ningxia Research
Institute of Medicine ＆ Pharmacy，Yinchuan 750004，China)
Abstract:Aim To investigate the protective effects of
lycium barbarum polysaccharides (LBP)on N-methyl-
D-aspartate(NMDA)-induced rat retinal damage and
its possible underlying mechanisms．Methods Retinal
injury was induced by intravitreal injection of NMDA in
rats． LBP (100，200 and 400 mg·kg －1)were ad-
ministered orally once a day 7days before NMDA injec-
tion for 14 consecutive days． Retinal damage was exam-
ined by histopathological evaluation，and the protein
expressions were measured by Western blot． Result
Oral administration of LBP (100，200 and 400 mg·
kg －1)attenuated the retinal damage (a decrease in
retinal ganglion cells and in thickness of inner plexi-
form layer) induced by NMDA injection． Moreover，
LBP treatment suppressed the NMDA-induced increa-
ses in protein NMDAR2A and iNOS，and decreases in
protein eNOS． Conclusion Our results indicate that
LBP has protective effects against NMDA-induced rat
retinal damage，and its protective effects may have
been mediated via regulation of NMDAR2A and eNOS /
iNOS expression．
Key words:LBP; NMDA; retina; NMDAR2A;
eNOS;iNOS
网络出版时间: 2013 － 5 － 8 08: 28 网络出版地址: http: / /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20130508． 0828． 018． html
走马胎中皂苷成分 AG4 对 MCF-7
肿瘤细胞增殖的影响及机制研究
郑小丽1，2，董宪喆1，穆丽华1，廖红波1，余冰颖1，3，刘 屏1
( 1．解放军总医院临床药理研究室，北京 100853; 2．天津中医药大学，天津 300193; 3．河北北方学院，河北 张家口 075000)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2013． 05． 018
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2013)05 － 0674 － 06
中国图书分类号:R284． 1;R329． 24;R329． 25;R730． 2
摘要:目的 研究走马胎皂苷成分 AG4 对不同肿瘤细胞株
增殖的影响，检测其对 MCF-7 细胞凋亡、细胞周期、Caspase-
3 和 Caspase-9 的活性、以及 SOD 活性和 GSH、MDA 含量的
影响。方法 终浓度为 0. 51 ～ 8. 13 μmol·L －1的 AG4 作用
于肿瘤细胞株 24 ～ 72 h 后，采用 MTT 比色法检测 AG4 对 9
种肿瘤细胞株增殖的影响;筛选出对 AG4 敏感的细胞株，
Hoechst染色观察细胞形态学变化;采用流式细胞术检测细
收稿日期:2012 － 11 － 27，修回日期:2012 － 12 － 23
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 31000153)
作者简介:郑小丽(1986 －) ，女，硕士生，研究方向:中药药理学，E-
mail:zhengxiaoliky@ 163． com;
刘 屏(1956 －) ，女，博士，研究员，研究方向:神经药理
学、肿瘤药理学，通讯作者，Tel:010-66936676，E-mail:li-
uping126@ 126． com
胞凋亡和周期变化;采用相应试剂盒分别进行 SOD 活性和
GSH、MDA含量的测定;采用 Caspase-3 和 Caspase-9 活性检
测试剂盒对 Caspase-3 和 Caspase-9 活性进行检测。结果
AG4 作用于 A549、BeL-7402、BGC-823、C6、EJ、HeLa、HepG2、
MCF-7、LS180 细胞 24 h、48 h 和 72 h 的 IC50为 3. 67 ～ 11. 1
μmol·L －1，其中 MCF-7 细胞株对 AG4 较为敏感，24 h、48 h
和 72 h 的 IC50值分别为(3. 67 ± 0. 61)、(3. 76 ± 0. 66)和
(4. 03 ± 0. 47)μmol·L －1。高、中两剂量的 AG4 作用 MCF-
7细胞 24 h后，细胞凋亡形态明显，发生早期凋亡;细胞阻滞
在 S 期;SOD 活性和 GSH 含量降低，MDA 含量明显升高;
Caspase-3 和 Caspase-9 的活性均明显高于正常对照组。结
论 AG4 对 MCF-7 细胞的增殖抑制作用最为明显。AG4 干
预 MCF-7 细胞内的氧化还原系统、阻滞周期并通过激活线
粒体凋亡信号转导通路来诱导细胞凋亡。
关键词:走马胎皂苷;抗肿瘤;细胞凋亡;细胞周期;半胱氨酸
蛋白酶;氧化还原系统
·476· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5) : 674 ～ 9
目前，从紫金牛科(Myrsinaceae)紫金牛属植物
走马胎(Ardisia gigantifolia Stapf．缩写为 AG)中提取
分离得到的成分主要有:三萜皂苷类、岩白菜素衍生
物类［1］、挥发油类等［2］。有研究发现［3］走马胎中的
岩白菜素类化合物具有抗氧化活性;张晓明等［4］对
三萜皂苷类成分进行了抗肿瘤活性的筛选，发现三
萜皂苷类化合物对多种肿瘤细胞都有一定的抗肿瘤
活性，并初步研究了化合物之间的构效关系，而且以
西克拉敏 A 为母核以及 C － 3 位连有糖链、C － 16
位 － OH、C －13，28 位环氧桥、C － 30 位 － CHO 的三
萜皂苷类化合物都有一定的抗肿瘤活性。
化合物 AG4 是从走马胎干燥的根茎中提取分
离得到的以西克拉敏 A 为母核的齐墩果烷型五环
三萜皂苷，其化学名为:3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基 －
(1→3)－［β-D-吡喃木糖基 －(1→2) ］-β-D-吡喃葡
萄糖基 －(1→4)－［β-D-吡喃葡萄糖 －(1→2) ］－
α-L-吡喃阿拉伯糖基}－西克拉敏 A，化学结构式见
Fig 1。本实验室前期的研究结果表明［5］，AG4 对人
胃癌细胞 BGC-823、肝癌细胞 HepG2、膀胱癌细胞
EJ及宫颈癌细胞 HeLa 有明显的增殖抑制作用，但
作用机制尚不明确。本文研究了 AG4 对 MCF-7 等
9 种不同的肿瘤细胞的细胞毒作用，进一步明确
AG4 的抑瘤谱，并从诱导凋亡、周期阻滞和氧化还
原系统方面重点研究了其抑制 MCF-7 细胞增殖的
作用机制以及诱导 MCF-7 细胞凋亡的线粒体信号
转导通路。
Fig 1 Structure of AG4
1 材料与方法
1． 1 药品与主要试剂 AG4 由本研究室提供，纯
度 0. 99 以上;RPMI 1640 培养基(Gibco 公司) ;
DMEM/HIGH GLUCOSE 培养基和胎牛血清(Hy-
Clone公司) ;MTT(Solarbio 公司) ;Annexin V-FITC
凋亡试剂盒(碧云天公司) ;碘化丙啶(PI)和核糖核
酸酶(Rnase A 酶) (Sigma 公司) ;蛋白质定量试剂
盒(Bradford 法)、Caspase-3 和 Caspase-9 活性检测
试剂盒(普利莱公司) ;微量还原型谷胱甘肽(GSH)
测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)WST-1 法测定
试剂盒和微量丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京建成
公司)。
1． 2 细胞株 人肺癌细胞 A549、人肝癌细胞 Bel-
7402、人胃腺癌细胞 BGC-823、人膀胱癌细胞 EJ、人
宫颈癌细胞 HeLa、人肝癌细胞 HepG2、人乳腺癌细
胞 MCF-7、人结肠腺癌细胞 LS180 均由中国医学科
学院药用植物研究所药理毒理研究中心毕明刚研究
员惠赠，由本实验室复苏、传代、培养。大鼠胶质瘤
细胞 C6 由 301 医院肿瘤中心提供，由本实验室复
苏、传代、培养。
1． 3 仪器 全波长微孔板光度计(Dynex，美国) ;
二氧化碳培养箱(MCO-15AC，SANYO，日本) ;荧光
倒置生物显微镜(IX51，OLYMPUS，日本) ;低速离心
机(DT5-2，北京时代北利离心机有限公司) ;流式细
胞仪(FCM，FACS Calibur，BD，美国) ;紫外分光光度
计(2800 UV /VIS，UNICO，美国)。
1． 4 方法
1． 4． 1 细胞培养 细胞置于含体积分数为 10%的
胎牛血清的 RPMI 1640 培养基中，在 37℃，5%
CO2，饱和湿度的条件下培养，其中 C6 和 MCF-7 细
胞用 DMEM培养基培养。2 d 换液 1 次，细胞生长
至 70% －80%融合时传代。
1． 4． 2 MTT法检测 AG4 的体外抗肿瘤细胞增殖活
性 取对数生长期细胞消化成单细胞悬液，调整细
胞密度至 5 × 107·L －1，以每孔 90 μl 接种于 96 孔
板内培养 24 h。各组分别加入含有终浓度分别为
0、0. 51、1. 02、2. 03、4. 06 和 8. 13 μmol·L －1 AG4 的
培养基，每组设置 5 个复孔。细胞分别继续培养
24、48 和 72 h，加入终浓度为 5 g·L －1的 MTT，4 h
后弃去培养液，每孔加入 150 μl DMSO，振荡溶解 10
min，在 490 nm处检测光密度值(OD)。根据以下公
式计算细胞抑制率(%) :细胞抑制率 /% = 1 －
［(OD受试药组 － OD 空白组)/(OD 正常组 – OD
空白组) ］× 100%，采用 Excel软件对抑制率和浓度
数据作相关性分析，并采用曲线回归法计算半数抑
制浓度(IC50)值。
1． 4． 3 AG4 对 MCF-7 细胞形态的影响 将处于对
数生长期的细胞消化成单细胞悬液，以 1 × 108·
L －1并接种于 12 孔板中，每孔 500 μl，培养 24 h 后，
更换成等体积的含有终浓度分别为 0、2. 03、4. 06 和
8. 13 μmol·L －1 AG4 培养基，继续常规培养 24 h。
然后向每孔加入 500 μl稀释好的 Hoechst染色液，
·576·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5)
Tab 1 IC50 of AG4 on different tumor cell lines in vitro at different time(珋x ± s，n = 3)
Time /h
IC50 /μmol·L －1
A549 BGC Bel-7402 C6 MCF-7 EJ HeLa HepG2 LS180
24 4． 59 ± 0． 50 4． 70 ± 0． 14 5． 12 ± 0． 12 6． 31 ± 0． 98 3． 67 ± 0． 61 6． 25 ± 0． 09 5． 32 ± 0． 38 5． 63 ± 0． 59 6． 21 ± 1． 59
48 4． 25 ± 0． 19 5． 38 ± 0． 45 5． 91 ± 1． 07 5． 73 ± 0． 57 3． 76 ± 0． 66 6． 07 ± 1． 32 5． 70 ± 0． 44 5． 39 ± 0． 69 7． 56 ± 0． 97
72 4． 51 ± 0． 46 4． 37 ± 0． 38 5． 79 ± 0． 88 4． 59 ± 0． 66 4． 03 ± 0． 47 11． 58 ± 0． 66 5． 97 ± 0． 02 6． 45 ± 0． 51 7． 27 ± 0． 88
37℃培养 30 min 后于荧光显微镜下观察细胞形态
并采集照片。
1． 4． 4 流式细胞仪( FCM) 检测细胞凋亡 将对数
生长期的 MCF-7细胞以 1 ×109·L －1的密度接种于 6
孔板中，每孔 1 ml，培养 24 h，更换成等体积的含有终
浓度分别为 0、2. 03、4. 06 和 8. 13 μmol·L －1 AG4 培
养基，继续培养 24 h，收集细胞。预冷的 PBS 轻轻重
悬细胞两次，离心收集细胞。向各细胞沉淀中加入
195 μl的 Annexin V-FITC结合液重悬细胞，加入 5 μl
的 Annexin V-FITC，轻轻混匀避光，室温孵育 10 min。
1 000 × g 离心 5 min，吸除溶液，加入 190 μl 的 An-
nexin V-FITC结合液，重悬细胞，加入 10 μl碘化丙啶
(PI)染色液，轻轻混匀，流式细胞仪检测。
1． 4． 5 检测 Caspase-3、Caspase-9 的活性 细胞处
理方法同“1. 4. 4”。向各组细胞沉淀中加入等量裂
解液，冰上孵育 10 min，离心收集上清，采用 Brad-
ford 法进行蛋白定量，并根据试剂盒说明书进行
Caspase-3 和 Caspase-9 的活性测定。
1． 4． 6 流式细胞仪检测细胞周期 细胞处理方法
同“1. 4. 4”。细胞沉淀用 70%的乙醇于 － 20℃固定
过夜。离心收集细胞，100 μl RNase A(1 g·L －1)悬
浮细胞，37℃恒温金属浴中孵育 30 min 后加入 400
μl PI(50 mg·L －1) ，4℃避光孵育 30 min，FCM检测
细胞周期。
1． 4． 7 AG4 对 MCF-7 细胞内 GSH、SOD和 MDA含
量的影响 细胞处理方法同“1. 4. 4”。向各组细胞
沉淀中加入等量裂解液，冰上孵育 10 min，离心收集
上清，采用 Bradford 法进行蛋白定量，并根据 GSH、
SOD和 MDA的说明书进行含量测定。
1． 4． 8 数据处理 数据用 珋x ± s 表示。采用 SPSS
19. 0 软件对数据作统计分析。组内数据进行正态
分布检验，组间数据进行方差齐性检验和单因素方
差分析(one-way，ANOVA)。
2 结果
2． 1 AG4 对肿瘤细胞株的增殖抑制作用 不同浓
度的 AG4(0. 51 ～ 8. 13 μmol·L －1)对 9 种肿瘤细胞
株的增殖均有一定的抑制作用，其中 MCF-7 细胞株
对 AG4 相对敏感，24、48 和 72 h 的 IC50值分别为
(3. 67 ± 0. 61)、(3. 76 ± 0. 66)和(4. 03 ± 0. 47)μmol
·L －1;AG4 在 0. 51 ～ 8. 13 μmol·L －1浓度范围内
对 MCF-7 细胞的增殖抑制作用具有浓度依赖性。
见 Tab 1 和 Fig 2。
Fig 2 Antiproliferation activity of AG4 on MCF-7 cell in vitro
2． 2 AG4 对 MCF-7 细胞株形态的影响 正常组
细胞形态规则，轮廓清晰，呈多角形贴壁生长，细胞
核被均匀的染成蓝色。8. 13 μmol·L －1的 AG4 作
用于细胞后，细胞单个散在，细胞间距明显变大，并
且大部分细胞浓染，呈高亮度蓝色荧光。4. 06 μmol
·L －1浓度组部分染色质凝集的细胞发现蓝色荧光。
2. 03 μmol·L －1的 AG4 对 MCF-7 细胞的细胞形态
基本没有影响。见 Fig 3。
2． 3 AG4 对 MCF-7 细胞株凋亡的影响 4. 06、
8. 13 μmol·L －1的 AG4 处理 MCF-7 细胞 24 h 后，
细胞可见早期凋亡，凋亡率分别为 18. 28% ±
5. 40%、50. 86% ± 9. 4%，对照组凋亡率为 1. 83%
±0. 20%。4. 06 和 8. 13 μmol·L －1组与对照组相
比差异有显著性(P ＜ 0. 01) ，2. 03 μmol·L －1组与
对照组相比差异无显著性(P ＞ 0. 05) ，见 Fig 4。
2． 4 AG4 对MCF-7 细胞内 Caspase-3 和 Caspase-
9 蛋白表达的影响 8. 13、4. 06 以及 2. 03 μmol·
L －1组，Caspase-3 的活性均有提高，与正常对照组相
比都有差异;8. 13、4. 06 μmol·L －1两组 Caspase-9
的活性有明显的提高，并且两酶活性的增加都有浓
度依赖性。见 Tab 2。
2． 5 AG4 对敏感细胞周期时相的影响 实验结果
·676· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5)
Fig 3 Morphology of MCF-7 cells treated with
different doses of AG4 for 24h(100 ×)
Hoechst staining A:8． 13 μmol·L －1;B:4. 06 μmol·L －1;C:
2. 03 μmol·L －1;D:control
Tab 2 Influence of various concentrations of AG4 on activities
of Caspase-3 and Caspase-9 of MCF-7 cells for 24h(珋x ± s，n = 3)
Group /
μmol·L －1
Concentration /kU·g － 1 Pro
Caspase-3 Caspase-9
Control 7． 72 ± 1． 51 2． 80 ± 1． 04
2． 03 15． 29 ± 0． 24* 8． 81 ± 0． 63
4． 06 31． 45 ± 3． 95＊＊ 17． 95 ± 2． 78＊＊
8． 13 46． 22 ± 4． 96＊＊ 26． 98 ± 5． 12＊＊
* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control
表明，正常组细胞多分布于 G1 期，约占总细胞数的
56%，S 期和 G2 /M 期各占约 24% 和 19%;4. 06
μmol·L －1的 AG4 作用 MCF-7 细胞 24 h 后，S 期细
胞明显增加，G2 /M期细胞明显减少，与正常对照组
相比差异有显著性(P ＜ 0. 01) ;2. 03 μmol·L －1的
AG4 处理组也表现出 S 期细胞增加，G2 /M 期细胞
减少的趋势，但与正常组相比差异无显著性。见 Fig
5 和 Tab 3。
Fig 4 The apoptotic rate of MCF-7 cells treated with
different doses of AG4 for 24h
A:2. 03 μmol·L －1;B:4． 06 μmol· L －1;C:8． 13 μmol·
L －1 ． ＊＊P ＜ 0. 01 vs control
Fig 5 Effects of various concentrations AG4 treatment for 24h on the MCF-7 cell cycle
·776·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5)
Tab 3 Effects of various concentrations of
AG4 treatment for 24h on MCF-7 cell cycle
Group /
μmol·L －1
Cell cycle distribution /%
G1 G2 /M S
Control 56． 80 ± 4． 37 18． 93 ± 0． 74 24． 26 ± 3． 67
2． 03 55． 80 ± 1． 70 17． 43 ± 0． 50 26． 79 ± 2． 20
4． 06 59． 75 ± 1． 38 1． 05 ± 0． 21＊＊ 38． 77 ± 1． 44＊＊
＊＊P ＜ 0. 01 vs control
2． 6 AG4 对 MCF-7 细胞内 SOD 的活性、GSH 和
MDA 含量的影响 8. 13、4. 06 μmol·L －1的 AG4
分别作用于 MCF-7 细胞 24 h 后，细胞内 SOD 的活
性和 GSH 的含量与正常对照组相比明显降低，
MDA的含量明显升高(P ＜ 0. 01)。而 2. 03 μmol·
L －1组，SOD、GSH和 MDA与正常组相比均没有明显
变化。
Tab 4 Effect of AG4 on activities of SOD，GSH
and MDA content of MCF-7 cells
Group /
μmol·L －1
SOD /
kU·g － 1 Pro
GSH /
mmol·g － 1 Pro
MDA /
μmol·g － 1 Pro
Control 216． 42 ± 1． 73 0． 95 ± 0． 01 0． 40 ± 0． 07
2． 03 205． 64 ± 9． 72 0． 92 ± 0． 07 0． 64 ± 0． 29
4． 06 142． 40 ± 4． 68＊＊ 0． 75 ± 0． 02＊＊ 4． 57 ± 0． 03＊＊
8． 13 73． 77 ± 10． 92＊＊ 0． 15 ± 0． 08＊＊ 5． 93 ± 0． 43＊＊
＊＊P ＜ 0. 01 vs control
3 讨论
研究表明，走马胎所含的皂苷成分，特别是以西
克拉敏 A为母核的三萜皂苷类化合物有明显的抗
肿瘤活性。本实验室从走马胎中分离得到多个以西
克拉敏 A为母核的皂苷类化合物，其中的单体 AG4
表现出较强的体外抑制肿瘤细胞增殖的作用。本文
在课题组前期工作的基础上，研究了 AG4 对 A549、
Bel-7402 等 9 种肿瘤细胞的增殖抑制作用。发现
AG4 对这 9 种肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作
用，对不同类型的瘤株没有明显的选择性，其对细胞
的增殖抑制作用表现出明显的浓度依赖性，但在 72
h没有时间依赖性。这种现象可能与其本身的结构
特征、化学性质和作用机制有关，尚待进一步研究。
大多数药物通过诱导肿瘤细胞凋亡达到抗肿瘤
的目的，而形态学变化是判断细胞凋亡的基础。
Hoechst染色实验及 Annexin V-FITC /PI双染实验结
果均证实，细胞出现了明显的凋亡现象。在细胞凋
亡早期，线粒体膜通透性转换孔(PTP)开放，若 PTP
大量或长时间开放，出现明显的基质肿胀，最终引起
外膜的破裂，导致线粒体不可逆的损伤，从而释放细
胞色素 C等，继而激活 Caspase 级别反应启动细胞
凋亡［6］。其中，Caspase-3 是 Caspase 级联反应中最
末端的效应蛋白酶，其上游的 Caspase-9 是线粒体凋
亡通路中的关键酶［7］。本研究中，AG4 能够使
MCF-7 细胞中 Caspase-3 和 Caspase-9 的活性增加，
明显高于正常对照组。据此可初步推断，AG4 可能
是通过影响线粒体功能，激活线粒体凋亡途径诱导
MCF-7 细胞凋亡。
活性氧(reactive oxygen species，ROS)主要在线
粒体内产生，高于生理水平的 ROS 导致线粒体功能
降低。细胞过氧化损伤时会生成脂质过氧化物
MDA，同时，细胞内的抗氧化酶 SOD 及低分子清除
剂 GSH等会积极清除 ROS 以维持细胞内氧化还原
的平衡。本文研究结果显示，AG4 明显增加 MCF-7
细胞内的 MDA 含量;降低 GSH 含量和 SOD 的活
性。可见 AG4 能明显降低 MCF-7 细胞抗氧化能力，
导致不能维持细胞内氧化还原的平衡，与线粒体功
能损伤共同诱导细胞凋亡。
细胞内的氧化还原系统处于动态平衡状态，平
衡的波动可能会引起细胞周期的调整［8］，而细胞周
期调控过程是控制细胞周期事件的精密调控网络，
肿瘤细胞增殖活跃，其周期比正常细胞的短，因此，
许多抗肿瘤药物通过阻滞肿瘤细胞的细胞周期来实
现对肿瘤细胞选择性的目的。本研究发现 4. 06
μmol·L －1的 AG4 作用细胞 24 h 后，MCF-7 细胞处
于 S期的细胞比例明显高于正常对照组，几乎没有
细胞处于 G2 /M 期;结合细胞增殖抑制实验及细胞
凋亡实验结果，可推断，4. 06 μmol·L －1的 AG4 作
为凋亡诱导因素，作用于 MCF-7 细胞后，导致细胞
DNA损伤，损伤信号激活检测点蛋白，将细胞阻滞
在 S期并招募特定的酶对细胞进行修复;修复好的
细胞将继续进入下一期，同时启动凋亡途径诱导无
法修复的细胞凋亡。而 2. 03 μmol·L －1浓度组的
细胞能通过 S期检测点的检测，从而进入 G2 /M期，
可能是由于 2. 03 μmol·L －1的 AG4 对 MCF-7 细胞
造成的损伤程度较轻，易于修复，同时也说明 AG4
对 MCF-7 细胞的周期影响具有浓度依赖性。
综上所述，走马胎中皂苷成分 AG4 对多种肿瘤
细胞的增殖都有一定的抑制作用。其对人乳腺癌细
胞 MCF-7 的抑制作用，可能是因其破坏细胞内氧化
还原系统的动态平衡，导致细胞代谢产生的 ROS 增
加，而高水平的 ROS引起了细胞的 DNA 损伤，导致
DNA不能正常复制，被阻滞在 S 期，最终启动凋亡
程序。另外，AG4 对 Caspase-3 和 Caspase-9 表达的
影响，也提示其可能通过启动线粒体凋亡信号转导
途径诱导细胞凋亡，而这一信号通路的启动可能与
·876· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5)
细胞内高水平的 ROS损伤线粒体功能有关，具体机
制尚需进一步研究。
参考文献:
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Antiproliferation activity of triterpenoid saponins AG4 from
Ardisia Gigantifolia Stapf． on MCF-7 cells
ZHENG Xiao-li1，2，DONG Xian-zhe1，MU Li-hua1，LIAO Hong-bo1，YU Bing-ying1，3，LIU Ping1
(1． Dept of Clinical Pharmacology，General Hospital of PLA，Beijing 100853，China;2． Tianjin University of Traditional
Chinese Medicine，Tianjin 300193，China;3． Dept of Pharmacy，Hebei North University，Zhangjiakou Hebei 075000，China)
Abstract:Aim To investigate the influence of AG4
derived from Ardisia gigantifolia Stapf． on various
tumor cells，and to detect its impact on cell apoptosis，
cell cycle，and activities of Caspase-3 and Caspase-9，
as well as the activity of SOD，and contents of GSH，
MDA． Methods Nine kinds of tumor cells influenced
by 0. 51 ～ 8. 13 μmol·L －1 AG4 ，24 h-72 h were de-
tected by MTT reduction assay;cells sensitive to AG4
were sifted through and stained，and their morphologi-
cal changes were observed under fluorescent inverted
microscope; their apoptosis and cell cycle changes
were detected by flow cytometry;the activity of SOD，
and contents of GSH and MDA were assayed with cor-
responding kits respectively， and the activities of
Caspase-3 and Caspase-9 were detected as well． Re-
sults The IC50 value of A549，BeL-7402，BGC-823，
C6，EJ，HeLa，HepG2，MCF-7 and LS180 cells pro-
cessed 24 h，48 h，or 72 h with AG4 was 3. 67 ～ 11. 1
μmol·L －1，among which that of MCF-7 cells，the
most sensitive cell to AG4，was (3. 67 ± 0. 61) ，(3. 76
± 0. 66)and (4. 03 ± 0. 47)μmol·L －1，respectively．
24 h later，the apoptosis of MCF-7 cells processed by
the high and middle dose of AG4 was significant;the
obstruction of cell cycle was at the S phase;the activi-
ty of SOD and contents of GSH decreased;MDA in-
creased significantly;and activities of Caspase-3 and
Caspase-9 were much more active than those of the
control group． Conclusions AG4 restricts prolifera-
tion of MCF-7 cells obviously． AG4 induces apoptosis
of MCF-7 cells by interfering the intracellular balance
of redox system，blocking cell and activating mitochon-
drial pathway．
Key words:Ardisia gigantifolia Stapf． ;cancer cells;
apoptosis;cell cycle;Caspase;redox system
·976·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2013 May; 29( 5)