全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2565 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–07–25
基金项目：广东省基础条件建设项目（2009B060600004，2010B060200029）；广州市科技攻关招标项目（GZCQC0902FG06017-02）
* 通信作者（E-mail：lzhxgdaas@163.com；Tel：020-38469456）
番茄资源 TYCLV 抗性的分子检测
孙保娟，李植良，卢 琳，黎振兴*
（广东省农业科学院蔬菜研究所，广州 510640）
普通栽培番茄本身缺乏对番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow curl leaf virus，TYCLV）的抗性位
点，但可以通过远缘杂交从智利番茄、秘鲁番茄等野生材料导入。目前与番茄 TYCLV抗性位点 Ty-1，
Ty-2，Ty-3 相连锁的诸多分子标记已经被发现。本文介绍应用 1 个 Ty-3 共显性 SCAR 标记及 2 个
Ty-1 CAPS标记对番茄育种材料 TYCLV抗性检测结果。
采用的番茄材料为广东省农业科学院蔬菜研究所多年来自行转育和引进的普通番茄育种系 84
份。从各育种系成株上选取较嫩的叶片混合取样，采用 CTAB法提取 DNA。抗性位点的 PCR检测
在原始报道的基础上略有改变。Ty-3共显性 SCAR标记引物序列：P625F，5′-GGTAGTGGAAATGA
TGCTGCTC-3′；P625R，5′-GCTCTGCCTATTGTCCCATATATAACC-3′。Ty-1的 2个 CAPS引物序列：
JB1F，5′-AACCAT TATCCGGTTCACTC-3′；JB1R，5′-TTTCCATTCCTTGTTTCTCTG-3′；CAPF，
5′-TAATCCGTCGTTACCTCTCCTT-3′；CAPR，5′-CGGATGACTTCAATAGCAATGA-3′。PCR 扩增
体系：2 µL 10  PCR Buffer， 8 µL MgCl2（25 mmol · L-1），上下游引物（10 µmol · L-1）各 2.0 µL，
2.0 µL dNTP（2 mmol · L-1），1 U Taq酶，200 ng模板 DNA，ddH2O补充总体积到 20 µL。P625引
物 PCR反应条件：94 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 60 s，72 ℃ 60 s，35个循环；72℃ 7 min；4 ℃。
JB1引物 PCR反应条件：94 ℃ 10 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 70 s，20个循环；然后 94 ℃ 10 s，53 ℃ 30 s，
72 ℃ 70 s，15个循环；72 ℃ 7 min；4 ℃。CAP引物反应 PCR反应条件：94 ℃ 4 min；94 ℃ 1 min，
64.6 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，35个循环；72 ℃ 7 min；4 ℃。JB1和 CAP的 PCR产物酶切体系：PCR
产物 10 µL，TaqⅠbuffer 2.5 µL，TaqⅠ3 U，ddH2O补充总体积到 25 µL，然后 65 ℃酶切过夜。
番茄成株叶片酚含量较高，会影响 DNA 质量，所以在 CTAB 提取液中要加入 PVPP 抗氧化，
而且要加液氮快速研磨，增加纯化步骤，充分去除蛋白。P625引物在 84份番茄材料中有 38份为杂
合体（ty-3b/Ty-3b）带型扩增，即可以同时扩增到 2条带，为 320 bp的 ty-3位点和 660 bp的 Ty-3b
位点，2份仅有 660 bp的 Ty-3b位点扩增，说明为比较纯合的自交系；其余 44份只有 320 bp的 ty-3
感病位点的扩增。由于是采用育种系内混合取样，因此检测到得杂合体带型较多，若进行单株取样，
可以具体明确单株的基因型。随机抽取其中的 12份材料用 JB1引物和 CAP引物进行 PCR扩增。JB1
引物得到约 1 000 bp的产物，然后采用 TaqⅠ酶切，结果其中 2份材料在 500 bp附近具有抗性位点
带；CAP引物扩增得到约 400 bp的产物，酶切后在上述的 2份材料中可见约 400 bp和 300 bp的 Ty-1
抗性带型，其余仍为 400 bp的单带感病带型，此外这 2份材也具有 Ty-3b抗性位点，说明同一抗性
位点的不同标记间检测结果一致，而且现有番茄资源中有的 TVCLV抗性是多基因位点控制的。
关键词：番茄；黄化曲叶病毒；TYCLV；分子检测
中图分类号：S 641.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2565-01