全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2010, 37 (1) : 47 - 52
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 07 - 09; 修回日期 : 2009 - 12 - 17
基金项目 : 国家自然科学基金项目 (30871705, 30871704) ; 山东省农业重大应用技术创新项目3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: xfwang@ sdau1edu1cn)
外源 NO对铜胁迫下番茄幼苗生长及其抗氧化酶编
码基因 m RNA转录水平的影响
王丽娜 1 , 杨凤娟 1 , 王秀峰 13 , 史庆华 1 , 魏　珉 1 , 胡向阳 2
(1山东农业大学园艺科学与工程学院 , 作物生物学国家重点实验室 , 园艺作物生物学农业部重点开放实验室 , 山东泰
安 271018; 2 中国科学院昆明植物研究所 , 昆明 650204)
摘 　要 : 研究了水培条件下外源一氧化氮 (NO ) 对 Cu胁迫后番茄幼苗生长及抗氧化酶编码基因
mRNA表达的影响。结果表明 , 015 mmol·L - 1 Cu2 +处理使番茄幼苗株高、茎粗、鲜样质量、干样质量明显
下降 , 抑制了幼苗生长 , 外施 013 mmol·L - 1 SNP (NO供体 ) 能够缓解 Cu2 +对番茄幼苗生长的抑制 , 显著
增加叶片编码过氧化物酶 ( POD )、抗坏血酸过氧化物酶 (APX)、超氧化物歧化酶 ( SOD )、过氧化氢酶
(CAT) 基因 mRNA的表达量 , 而 011 mmol·L - 1 L2NAME [Nω 2nitro2L2arginine methyl ester, 一氧化氮合成
酶 (NOS) 抑制剂 ] 处理的表达量与 Cu胁迫处理相比有所减少 , 幼苗生长受到更加明显抑制 , 表明外源
NO可以通过提高抗氧化酶的表达水平而缓解 Cu胁迫对番茄幼苗的伤害。
关键词 : Cu胁迫 ; 番茄 ; RT2PCR
中图分类号 : S 64112　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2010) 0120047206
Effects of Exogenous N itr ic O x ide on Growth and Tran scr iptiona l Expression
of An tiox idan t Enzym e m RNA in Toma to Seedlings under Copper Stress
WANG L i2na1 , YANG Feng2juan1 , WANG Xiu2feng13 , SH IQ ing2hua1 , W E IM in1 , and HU Xiang2yang2
(1 College of Horticu lture Science and Engineering, Shandong A gricultural U niversity, S ta te Key Laboratory of C rop B iology, The
Key and O pen Laboratory of Horticultural C rop B iology, M inistry of A gricu lture, Taipian, Shandong 271018, Ch ina; 2 Kunm ing
Institu te of B otany, Chinese A cadem y of Sciences, Kunm ing 650204, China)
Abstract: Heavy metal stress badly affect the crop growth and development, assuaging heavy metal
stress to crop show important for crop yield. Here we investigated the effect of SNP ( sodium nitropp russide, an
exogenous nitric oxide donor) on alleviating copper stress and regulating antioxidant gene transcrip tional level
in liquid2culture tomato seedlings. Our results showed that copper at 015 mmol·L - 1 significantly supp ressed
the tomato seedlings growth including p lant height, stem thickness, p lant fresh weight and p lant dry weight, as
well as imp roved the transcrip tional levels of antioxidant genes encoding peroxidase ( POD ) , ascorbate peroxi2
dase (APX) , superoxide dismutase ( SOD) and catalase (CAT). Exogenous app lication of 013 mmol·L - 1
SNP remarkably alleviated copper2inhibition to tomato growth and further enhanced these antioxidant genes
transcrip tion, however, additional L2NAME (Nω 2nitro2L2arginine methyl ester) , the special inhibitor of nitric
oxide synthase (NOS) obviously aggravated copper2induced inhibitory effect on tomato growth and reduced an2
tioxidant enzyme gene transcrip tional level. Basing on these results we p ropose that tomato NOS enzyme2medi2
ated NO is necessary for tomato responding to copper stress and NO app lication lessen copper stress to tomato
growth via enhancing antioxidant enzyme gene transcrip tional levels.
Key words: copper stress; tomato; RT2PCR
园 　　艺 　　学 　　报 37卷
铜既是植物生长发育必需的微量营养元素 , 又是环境污染的重金属元素 , 污水灌溉 , 施用污泥和
含 Cu杀菌剂、农药 , 开矿等使土壤中的 Cu含量过高会对植物造成危害 , 甚至会通过食物链危害人
体健康。
NO是生物体中一种重要的氧化还原信号分子和毒性分子 , 也是一种活性氮 ( reactive nitrogen
species, RNS)。研究表明 , NO广泛存在于植物组织中 , 并参与植物呼吸作用、光形态建成、种子萌
发、衰老、对胁迫的响应以及抗病防御反应等过程 , 而且还能够调控植物对生物和非生物胁迫下的应
激反应 (Magdalena & Lorenzo, 2007)。NO缓解植物逆境胁迫的作用是近年来的研究热点 (韩小娇
等 , 2008)。但到目前为止 , 人们对 NO在 Cu胁迫生理过程中的作用机理还了解不多 , 在园艺作物上
的研究报道甚少。本试验中以番茄为试材 , 采用水培方法 , 研究外源 NO对 Cu胁迫番茄幼苗生长及
转录水平上编码抗氧化物酶基因 mRNA的表达情况的影响 , 为了解外源 NO缓解 Cu胁迫的作用机理
提供理论基础。
1　材料与方法
111　供试材料与试验设计
试验于 2008年 2—5月在山东农业大学玻璃温室进行。供试番茄 (L ycopersicon escu len tum M ill. )
品种为 ‘中蔬 4号 ’。按常规方法催芽育苗 , 待幼苗长到 3叶 1心时选取生长一致的健壮幼苗移栽于
装有 8 L营养液的方盒中 , 每盒栽培 6株。营养液参照日本山崎配方 , 每 4 d更换一次。每天用气泵
充气 2次 , 每次 2 h。
当植株长到 6～7片真叶时进行以下营养液处理 : (1) 加入 015 mmol·L - 1 Cu2 + ; (2) 加入 015
mmol·L - 1 Cu2 + + 013 mmol·L - 1 SNP; (3) 加入 015 mmol·L - 1 Cu2 + + 011 mmol·L - 1L2NAME; 正常
营养液为对照。每处理 6株 , 3次重复。处理期间每天更换营养液。分别于处理后 6、12、24、48、
72、96和 120 h取第 2片功能叶 , 液氮速冻后保存于 - 70 ℃备用。处理结束后测定株高、茎粗 , 然
后收集根和地上部 , 自来水冲洗 3遍 , 蒸馏水洗净吸干 , 称鲜样质量后放入烘箱中 110 ℃下杀青 5
m in, 再在 80 ℃下烘干 , 称其干样质量。
用 SPSS统计软件对平均数用 Duncanpis新复极差法进行多重比较。
112　RNA的分离与 cD NA第一链的合成
番茄叶片总 RNA的提取采用异硫氰酸胍法 (Han et al. , 1987)。反转录按宝生物工程 (大连 )
有限公司 RNA PCR Kit (AMV ) Ver1310的说明书 , 取 500 ng总 RNA合成第一链 cDNA , 用作 RT2
PCR模版。
113　引物
根据 NCB I GenBank登录的基因序列设计特异性引物 (表 1) , 参照 Magdalena和 Lorenzo (2007)
的引物 Actin2F : AAGAGYTAYGARYTNCCW GATGG; Actin2R: TTRATCTTCATGCTRCTW GGAGC作为
内参对照 , 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
114　RT2PCR反应体系
25μL PCR反应体系中加 cDNA 1μL, 上游和下游引物 (10μmol·L - 1 ) 各 1μL, MgCl2 (25
mmol·L - 1 ) 2μL, 缓冲液 (10 ×) 215μL, dNTP (2 mmol·L - 1 ) 2μL, Taq酶 ( 1 U·μL - 1 ) 1
μL ( TAKARA公司产品 )。反应条件为 : 94 ℃变性 2 m in, 94 ℃ 20 s, 退火温度 30 s, 72 ℃ 30 s, 30
个循环 ; 72 ℃延伸 10 m in。反应结束后取 10μL产物进行琼脂糖凝胶电泳 , 紫外凝胶成像系统对结果
进行鉴定拍照。
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　1期 王丽娜等 : 外源 NO对铜胁迫下番茄幼苗生长及其抗氧化酶编码基因 mRNA转录水平的影响 　
表 1　用于特异性表达片段鉴定的引物序列
Table 1　Pr im er sequences used for iden tif ica tion of spec ia l expression of m RNA
序列号 NCB I 引物Primers
序列 Sequence
(5′- 3′)
扩增片段长度 / bp
Product size
退火温度 /℃
Annealing temperature
X7159311 L i2POD2F GGTCCAACATGGCAAGTTCT 250 5115
L i2POD2R ACATCTTGCCCTTCCAAATG
DQ09942011 APX12F GGCTCTCCTTTGTGATCCTG 250 5110
APX12R CAGCAAAAACAACAGCTCCA
AF527880 SOD2F AATTCATCATTGTGGCAGCA 250 5115
SOD2R GCCCTTAAGGACAGCAACAG
X1404111 Cu, Zn2SOD2F CTGGACTTCACGGGTTTCAT 250 5210
Cu, Zn2SOD2R TTTGGACCGGTCAATGGTAT
M9371911 CAT12F AGAAGCTCGCGACATTTGAT 250 5018
CAT12R CTTGACAGCAAAACCACGAA
AF11236811 CAT22F TGCTCCAAAGTGTGCTCATC 250 5310
CAT22R AGCGGTACCTTTCTCCTGGT
2　结果与分析
211　外源 NO对 Cu胁迫下番茄幼苗生长势的影响
由表 2可知 , 在 015 mmol·L - 1 Cu2 +胁迫条件下 5 d后 , 番茄幼苗的株高、茎粗、鲜样质量、干
样质量较正常生长的分别降低 12110%、9198%、9119%和 9106% , 说明 Cu处理明显抑制了番茄幼
苗的生长。而在施 Cu的同时加入 013 mmol·L - 1 SNP能够缓解 Cu对番茄幼苗生长的抑制作用 , 株
高、茎粗、鲜样质量、干样质量均显著增加。Cu加 L2NAME处理比单纯 Cu处理株高、茎粗、鲜样质
量、干样质量分别降低 12190%、16106%、6152%和 5143%。
表 2　外源 NO供体 SNP及 NO S抑制剂 L 2NAM E对 Cu胁迫下番茄幼苗生长势的影响
Table 2　Effects of exogenous n itr ic ox ide and L 2NAM E on the plan t growth of toma to seedlings under Cu stress
处理 / (mmol·L - 1 ) Treatment
Cu2 + SNP L2NAME 株高 / cmPlant height 茎粗 /mmStem thickness 单株鲜样质量 / gPlant fresh weight 单株干样质量 / gPlant dry weight
0 0 0 41183 ±0175a 4191 ±0109a 68142 ±1104a 4186 ±0108a
015 0 0 36177 ±0197c 4142 ±0114c 62112 ±1144c 4142 ±0114c
015 013 0 39199 ±0185b 4171 ±0117b 66103 ±1132b 4170 ±0111b
015 0 011 32103 ±0178d 3171 ±0113d 58107 ±1119d 4118 ±0115d
　　注 : 不同小写字母为差异达显著水平 ( P < 0105)。
Note: The different small letters indicated significant difference at 0105 level
212　外源 NO 对 Cu胁迫下番茄叶片 POD 编码
基因 m RNA表达的影响
由图 1可知 , 随 Cu处理时间延长 , 转录水平
上编码 L i2POD ( lignin peroxidase) 基因 mRNA的
表达量逐渐增加 , 在同一处理阶段 , 显著高于对
照 , 加入 SNP 处理后表达量更高 , 而加入
L2NAME后抑制了表达 , 但在同一处理时期仍然
高于对照。对照中其表达没有随时间表现出明显
变化。
图 1　番茄叶片 lign in POD编码基因 RT2PCR扩增图
F ig. 1　RT2PCR am plif ied products for the detection
of lign in POD in toma to leaves
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园 　　艺 　　学 　　报 37卷
213　外源 NO对 Cu胁迫下番茄叶片 APX1编码
基因 m RNA表达的影响
由图 2 可知 , Cu 处理下编码 APX1 基因
mRNA的表达量明显高于对照 , 且随时间延长表
达量逐渐增加 , 72 h时表达量达到最高。加入
SNP的处理表达量明显高于单独 Cu处理 , 在处
理 12 h时表达量就达到最高 , 随后维持在较高水
平。加入 L2NAME的处理表达量明显低于单独 Cu
处理 , 24 h前表达量较少 , 48 h后表达量略有增
加 , 96 h时达到最高值。对照中的表达量随时间
延长无明显变化。
图 2　番茄叶片 APX1编码基因 RT2PCR扩增图
F ig. 2　RT2PCR am plif ied products for
the detection of APX1 in toma to leaves
214　外源 NO对 Cu胁迫下番茄叶片 SOD及同工酶编码基因 m RNA表达的影响
由图 3可知 , 编码基因 SOD和同工酶 Cu, Zn2SOD mRNA表达量的变化趋势基本一致 , 都随时间
延长呈增加的趋势。Cu处理下 SOD在 12 h时达到并维持在较高水平 , Cu, Zn2SOD在 48 h时达到并
维持在较高水平。外加 SNP处理明显提高了 Cu胁迫下编码 SOD和 Cu, Zn2SOD mRNA的表达量 , 使
SOD的表达量在 6 h时就达到并维持在较高水平 ; Cu, Zn2SOD在 72 h后达到并维持在较高水平。
L2NAME处理的表达量较少。
图 3　番茄叶片 SOD编码基因 RT2PCR扩增图
F ig. 3　RT2PCR am plif ied products for the detection of SOD in toma to leaves
215　外源 NO对 Cu胁迫下番茄叶片 CAT及同工酶编码基因 m RNA表达的影响
由图 4可知 , 各处理转录水平上同工酶 CAT1和 CAT2都有明显的表达 , 可以看出表达量是 Cu +
图 4　番茄叶片 CAT编码基因 RT2PCR扩增图
F ig. 4　RT2PCR am plif ied products for the detection of CAT in toma to leaves
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　1期 王丽娜等 : 外源 NO对铜胁迫下番茄幼苗生长及其抗氧化酶编码基因 mRNA转录水平的影响 　
SNP处理 > Cu处理 > Cu +L2NAME处理 >对照。加 SNP的处理在 6 h时就达到较高的水平 , CAT1在
处理 48 h时表达量达到最高 , CAT2在处理 96 h时表达量达到最高。Cu处理 CAT1的表达量在 24 h
时达到较高水平 , 而 CAT2则在 48 h达到较高水平。加 L2NAME的处理表达量在 48 h和 72 h时有所
增加 , 但随时间延长又呈减少趋势。
3　讨论
植物受 Cu胁迫常出现的症状为生长受到抑制 , 植株出现萎蔫、皱叶、失绿等 (甄泉 等 ,
2006)。本试验中 Cu处理的番茄植株矮小 , 叶片瘦弱且失绿 , 而外源 NO缓解了 Cu胁迫对番茄幼苗
生长的抑制作用 , Cu毒害症状消失 , 株高、茎粗、鲜样质量和干样质量与单独 Cu胁迫均差异显著。
在 NO缓解小麦 (王松华 等 , 2007)、辣椒 (陈世军 等 , 2009) 等重金属胁迫研究中均得到相似的
结果。这与 NO可通过质外体直接作用于细胞壁组分 , 使细胞壁松弛 , 以及作用于膜的磷脂双分子
层 , 增强膜的流动性 , 从而促进细胞扩展、植株生长有关 (Leshem & Haramaty, 1996)。
当植物受到重金属等胁迫时 , 活性氧平衡受到破坏 , 其清除系统尤其是抗氧化酶类则会表现出相
应的应激反应 (L idon & Teixeira, 2000)。Lombardi和 Sebastiani (2005) 认为 , 过量的 Cu明显提高
抗氧化物酶在转录水平上的表达 , 诱导同工酶的表达 , 以及对酶蛋白结构进行加工与修饰 , 提高酶的
总活性 , 这与本试验的研究结果一致。NO是一种重要的信使分子 , 适当浓度的 NO可减轻盐害、干
旱、重金属等胁迫对植物的伤害 , 其生理效应往往与其对 ROS代谢的调控有关 , 并涉及有关的信号
转导 (Lamattina et al. , 2001) ; SOD、POD、CAT和 APX是植物细胞中抗氧化胁迫的关键酶 , 也是
植物体内清除 H2 O2的重要酶类。段凯旋等 (2007) 研究发现 NO可提高铜、镉胁迫下平邑甜茶根和
叶 POD、SOD的活性。Bartosz (1997) 研究表明 NO还可提高镉胁迫下向日葵 CAT、APX、GR的活
性 , 从而可清除过量的过氧化氢。本试验中 , 外源 NO显著提高了 Cu胁迫下番茄幼苗叶片保护酶
POD、SOD、CAT、APX编码基因 mRNA 的表达量 , 诱导同工酶 Cu, Zn2SOD 和 CAT1、CAT2的表
达 , 提高了植株抵御 Cu毒害的能力。吴雪霞等 (2009) 和 Zhang等 (2009) 的研究表明外源 NO提
高了 NaCl和铜胁迫下番茄幼苗叶片保护酶 SOD、POD、CAT、APX的活性 , 提高了植株抵御逆境胁
迫的能力 , 这与本试验的结果一致。在黄瓜逆境胁迫的研究中也有类似的结果 (樊怀福 等 , 2008)。
但是 NO对抗氧化酶的影响亦有相反的报道 , 如 Clark等 (2000) 发现 , NO能与血红素中的 Fe结合
而可逆抑制烟草叶片 CAT、APX和 POD等血红素酶活性。这可能与 NO的浓度及处理方式不同有关。
L2NAME作为 NOS专一性的抑制剂 , 可以阻断部分内源 NO的产生 (V ito et al. , 2002)。Massimo等
(1998) 的研究表明 L2NAME抑制了逆境胁迫下植株内源 NO的产生 , 降低了抗氧化酶和 NADPH2d的
活性。本试验进一步印证了此研究结果 , L2NAME处理消除了内源 NO的调节作用 , 抑制了转录水平
上编码抗氧化物酶基因的表达 , 加重了 Cu对植株的伤害。以上结果说明 NO参与了对植物生长发育
的调节 , 促进了编码抗氧化物酶基因的表达 , 但 NO如何通过信号转导对相关基因的表达进行调控 ,
尚需进一步研究。
References
Bartosz G. 1997. Oxidative stress in p lants. Acta Physiol Plant, 19: 47 - 64.
Chen Shi2jun, ZhangM ing2sheng, W ei Mei2yu. 2009. Physiological response of Capsicum fru tescens L. var. longum bailey seedling with SNP to
Cd2 + stress. Plant Physiology Communications, 45 (3) : 229 - 232. ( in Chinese)
陈世军 , 张明生 , 韦美玉. 2009. SNP处理的辣椒幼苗对 Cd2 +胁迫的生理响应. 植物生理学通讯 , 45 (3) : 229 - 232.
Clark D, Durner J, Navarre D A. 2000. N itric oxide inhibition of tobacco catalase and ascorbate poroxidase. Mol Plant2M icrobe Interact, 13
(12) : 1380 - 1384.
Duan Kai2xuan, Yang Hong2qiang, Ran Kun, J iang Q ian2qian, You Shu2zhen. 2007. Effect of nitric oxide on reactive oxygen metabolism ofM alus
15
园 　　艺 　　学 　　报 37卷
hupehensis Rehd. seedlings under copper and cadm ium stress. Chinese Agricultural Science Bulletin, 23 (10) : 104 - 109. ( in Chinese)
段凯旋 , 杨洪强 , 冉　昆 , 姜倩倩 , 由淑贞. 2007. 一氧化氮对铜、镉胁迫下平邑甜茶幼苗活性氧代谢的影响. 中国农学通报 ,
23 (10) : 104 - 109.
Fan Huai2fu, Guo Shi2rong, Duan J iu2ju, Du Chang2xia, Sun J in. 2008. Effects of nitric oxide on the growth and glutathione dependent an tioxi2
dative system in cucumber (Cucum is sa tivus L. ) seedlings under NaCl stress. Acta Ecologica Sinica, 28 (6) : 2511 - 2517. ( in Chinese)
樊怀福 , 郭世荣 , 段九菊 , 杜长霞 , 孙　锦. 2008. 外源 NO对 NaCl胁迫下黄瓜 ( Cucum is sa tivus L. ) 幼苗生长和谷胱甘肽抗氧
化酶系统的影响. 生态学报 , 28 (6) : 2511 - 2517.
Han J H, Stratowa C, RutterW J. 1987. Isolation of full2length putative rat lysophosphipase cDNA using imp roved methods for mRNA isolation
and cDNA cloning. B iochem isty, 26: 1617 - 1625.
Han Xiao2jiao, Yang Hong2qiang, You Shu2zhen, Duan Kai2xuan, Zhang Xin2rong, Zhao Hai2zhou. 2008. Adventitious shoot regeneration from
leaves of M alus hupehensis and effects of nitric oxide. Acta Horticulturae Sinica, 35 (3) : 419 - 422. ( in Chinese)
韩小娇 , 杨洪强 , 由淑贞 , 段凯旋 , 张鑫荣 , 赵海洲. 2008. 平邑甜茶叶片不定芽再生及 NO的效应. 园艺学报 , 35 (3) : 419 -
422.
Lamattina L, BeligniM V, GarciaM C. 2001. Method of enhancing the metabolic function and the growing conditions of p lants and seeds. United
State Patent, 6: 242 - 384.
Leshem Y Y, Haramaty E. 1996. The characterization and contrasting effects of the nitric oxide free radical in vegetative stress and senescence of
Pisun sativun L inn foliage. Plant Physiol, 148: 258 - 263.
L idon F C, Teixeira M G. 2000. Oxy radicals p roduction and control in the chlorop last of Mn2treated rice. Plant Science, 152: 7 - 15.
Lombardi L, Sebastiani L. 2005. Copper toxicity in Prunus cerasifera: Growth and antioxidant enzymes responses of in vitro grown p lants. Plant
Sci, 168: 797 - 802.
Magdalena Graziano, Lorenzo Lamattina. 2007. N itric oxide accumulation is required formolecular and physiological responses to iron deficiency in
tomato roots. The Plant Journal, 52: 949 - 960.
Massimo D, Xia Y, D ixon R A, Chris L. 1998. N itric oxide functions as a signal in p lant disease resistance. Nature, 394: 585 - 588.
V ito De G C, Giuseppe R, Antonello E R, Sara B, Barbara M, Ferruccio B , Eugenio E M. 2002. Enalap ril and quinap ril imp rove endothelial
vasodilator function and aortice NOS gene exp ression in L2NAME2treated rats. European Journal of Pharmacolog, 450: 61 - 66.
W ang Song2hua, Zhou Zheng2yi, He Q ing2yuan, W ang Xiao2peng, Song L i2hong, Lu Xiao2m ing. 2007. N itric oxide alleviates the nickel toxicity
in wheat seedlings. Acta Botanica Yunnanica, 29 (1) : 115 - 121. ( in Chinese)
王松华 , 周正义 , 何庆元 , 王晓鹏 , 宋李红 , 陆晓明. 2007. 一氧化氮对小麦叶片镍毒害的缓解作用. 云南植物研究 , 29 ( 1 ) :
115 - 121.
W u Xue2xia, Chen J ian2lin, Zha D ing2shi, Zhu W ei2m in. 2009. Effects of exogenous nitric oxide on reactive oxygen metabolism in tomato seed2
lings under NaCl stress. Plant Nutrition and Fertilizer Science, 15 (2) : 422 - 428 . ( in Chinese)
吴雪霞 , 陈建林 , 查丁石 , 朱为民. 2009. 外源一氧化氮对 NaCl胁迫下番茄幼苗活性氧代谢的影响. 植物营养与肥料学报 , 15
(2) : 422 - 428.
Zhang Yi2kai, Han Xiao2jiao, Chen Xiu2ling, J in Hong, Cui Xiu2m in. 2009. Exogenous nitric oxide on antioxidative system and ATPase activities
from tomato seedlings under copper stress. Scientia Horticulturae, 123 (2) : 217 - 223.
Zhen Quan, Yan M i, Yang Hong2fei, L iu Deng2yi, W ang You2bao. 2006. Coercion and damage of Cu pollution on A rtem isia lavandulaefolia
growth. Chinese Journal of App lied Ecology, 17 (8) : 1505 - 1510. ( in Chinese)
甄　泉 , 严　密 , 杨红飞 , 刘登义 , 王友保. 2006. 铜污染对野艾蒿生长发育的胁迫及伤害. 应用生态学报 , 17 ( 8) : 1505 -
1510.
25