作 者 ：尹立荣;管长志;陈磊;付任胜
期 刊 ：园艺学报 2009年 36卷 S期 页码：1950-1950
关键词：胡萝卜；游离小孢子培养；
摘 要 ：胡萝卜自交纯合稳定遗传的时间一般需要5年以上，培育一个杂交新品种需要7年以上的时间。加之人们对红色品种的偏爱，又使得可用于育种的资源遗传背景狭窄和数量匮乏。本研究的目的是利用游离小孢培养技术迅速获得胡萝卜纯合的双单倍体,缩短育种周期，并实现胡萝卜种质创新，同时还可用于胡萝卜种质的亲缘关系、性状表达等遗传研究。 试验始于2004年。选用2个黑田类型胡萝卜品种‘长城红玥’和‘宝冠’为试材，于上午9时左右用密闭容器取回整个花序，放入自来水中冲洗5 min，用镊子取下小蕾放入烧杯中，用70％乙醇灭菌50 s，转入0.1％升汞灭菌4 min，无菌水冲洗6次，吸干水分后放入无菌研钵中，加入2倍试材质量的胡萝卜专用液体培养基。用研棒研碎，过400目筛，800 r·min-1离心3 min，调配小孢子1×105个·mL-1，用吸管吸取2 mL进行培养。诱导培养基为W14、MS、HLB（本研究筛选优化出的）、B5、NLN和Witht，在培养基中分别加入不同浓度的2，4-D和IBA，pH调整到6.0。以无激素的为对照。分化培养基为W14、MS和HLB，加入不同浓度的6-BA，KT、IBA、玉米素，pH 6.0。生根培养基为W14和MS，蔗糖含量30 g·L-1，pH 6.0，用1.0 mg·L-1 NAA和IBA。剪取经过驯化的植株根尖0.5 cm，采用改良卡宝染色进行染色体倍性观察。研究结果表明:胡萝卜品种间‘长城红玥’比‘宝冠’更容易进行游离小孢子培养和获得再生植株；花蕾直径为1.0～1.5 mm时，游离小孢子处于单核靠边期，是取样的最佳时间；用0.1％升汞灭菌4 min效果最佳，污染率为0，游离小孢子存活率达到91％，1％次氯酸钠灭菌效果较差；小孢子分离采用800 r·min-1离心3 min比较适宜。筛选出适于胡萝卜游离小孢子培养的诱导胚性愈伤组织培养基HLB+0.5 mg·L-12，4-D，经20 d诱导培养，在显微镜下可以发现细胞增殖， 34 d以后陆续产生胚性愈伤组织；筛选出分化培养基为MS+0.5 mg·L-1 6-BA，经45 d胚性愈伤组织长成完整的茎叶，分化率（再生植株数/胚性愈伤组织总数）达到75％；筛选出生根培养基为MS或W14+1.0 mg·L-1NAA，生根培养20 d陆续长出根系，35 d根系可达到7～11条。成功地获得了胡萝卜游离小孢子再生株系32个，再生植株驯化成活率达到87％。在进行分化诱导培养的同时，用浓度为0.1％的秋水仙素对胚性愈伤组织进行20 min的染色体加倍处理，对获得的32个株系的染色体倍性观察，发现其中46.9％植株是单倍体，53.1％植株是二倍体(DH株)；继续观察表明，15个单倍体株系不能产生有生活力花粉，自交不结实，只能进行继代保存和继续加倍， 17个二倍体株系都获得自交种子，自交1代田间种植基本保持本品种的根形和红色，株高和根形整齐一直，但平均单根质量和产量均低于2个供试品种。