全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2470 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–07–11
基金项目：农业部引进国际先进农业技术计划项目（2009-Z18)
* 通信作者（E-mail：cyh@jaas.ac.cn；Tel：025-84390224）
杜梨类钙调磷酸酶 B 亚基蛋白基因克隆及胁迫
表达
李 慧 1,2，丛 郁 3，常有宏 1,2,*，蔺 经 1，盛宝龙 1
（1江苏省农业科学院园艺研究所，南京 210014；2国家农业科技华东（江苏）创新中心——高效园艺作物遗传改良
实验室，南京 210014；3中国科学院南京土壤研究所，土壤与农业可持续发展国家重点实验室，南京 210008）
Ca2+作为最基本的第二信使，几乎参与了植物生长、发育和逆境胁迫应答的所有过程。类钙调
磷酸酶 B亚基蛋白（Calcineurin B-like protein，CBL）是植物中一类重要的钙离子传感器，在钙信
号的传递转导过程中起着重要的调控作用。杜梨原产中国，为梨生产栽培中普遍应用的砧木，具备
抗寒、抗旱、耐涝、耐盐碱等综合抗性，是梨属植物重要的抗性种质资源。克隆获得 CBL基因序列，
并研究该基因对不同胁迫的转录响应，可为阐明 Ca2+介导的杜梨抗逆过程提供重要信息。
杜梨种子经层积后，播种于石英砂基质盆钵中，待幼苗长出 4 片真叶后，浇灌 100 mL 1/2MS
液体培养基配制的 100 mmol · L-1 CaCl2、250 mmol · L-1 NaCl2或 100 µmol · L-1 ABA，或进行叶片机
械损伤、整株吹干或 4 ℃处理，不同处理的植株均在 4 h后采集叶片，保存于–70 ℃冰箱待用。采
用 RT-PCR、RACE和 PCR技术克隆 CBL基因的 cDNA和 DNA，并通过跨内含子引物进行半定量
RT-PCR研究该基因在逆境下的表达情况。
PbCBL基因编码区 cDNA长度为 801 bp，编码的多肽由 266个氨基酸组成。该多肽预测的等电
点（pI）为 4.56，估计的相对分子质量为 30.45 kD。其对应基因组 DNA序列长 1 980 bp，包括 9个
外显子和 8个内含子。PbCBL基因编码的多肽具有 1个钙调磷酸酶 A亚基结合位点（196 ~ 214位
氨基酸）和 4个钙离子结合域 EF手形结构（101 ~ 112、135 ~ 146、173 ~ 184和 217 ~ 228位氨基
酸）。PbCBL与杨树 PtCBL6（ABO43665）蛋白同源性最高（83%），并与其亲缘关系最近。PbCBL
基因在未处理杜梨植株叶片中并无表达，100 mmol · L-1 CaCl2、250 mmol · L-1 NaCl2、100 µmol · L-1
ABA、机械损伤、整株吹干或 4 ℃处理 4 h后其表达量明显上调，表明 PbCBL对钙离子、盐碱、
ABA、伤害、干旱和低温均存在转录响应，参与杜梨应对生物或非生物胁迫的转录调节。

关键词：梨；杜梨；类钙调磷酸酶 B亚基蛋白；序列特征；胁迫响应
中图分类号：S 661.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2470-01