全 文 :园 艺 学 报 2009, 36 (9) : 1365 - 1369
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 05 - 28; 修回日期 : 2009 - 08 - 04
基金项目 : 安徽省高校学科拔尖人才基金项目 (200322)3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: gaozhimou@1261cn)
四种寄主来源的灰葡萄孢对草莓的致病力分化研究
初报
李喜玲 , 高智谋 3 , 李艳梅 , 邱 艳 , 刘小燕 , 彭 梅
(安徽农业大学植物保护学院 , 合肥 230036)
摘 要 : 从合肥、蚌埠、长丰、和县等地采集的番茄、辣椒、草莓、葡萄等发病组织上分离鉴定获得
23个灰葡萄孢菌株 , 采用菌丝块创伤接种法 , 分别测定了这些菌株对草莓果实和叶片的致病力。结果初步
表明 , 所有供试菌株接种草莓果实和叶片后均引起发病 , 但病斑的平均直径有显著差异 , 并在不同草莓品
种上表现也有差异 , 显示灰葡萄孢菌株间对草莓果实和叶片的致病力存在明显的分化。按照在草莓果实和
叶片所致病斑的平均直径大小可将供试菌株划分为致病力较强、中等和较弱 3种类型。总体来说 , 来自草
莓和番茄的菌株对草莓果实和叶片的致病力较强 , 来自辣椒的菌株对草莓果实和叶片的致病力较弱 , 但来
自相同寄主的菌株间致病力也存在差异 , 菌株致病力差异与菌株地域来源无明显相关。
关键词 : 灰葡萄孢 ; 致病力分化 ; 草莓 ; 寄主
中图分类号 : S 66814 文献标识码 : A 文章编号 : 05132353X (2009) 0921365205
Stud ies on D ifferen tia tion of Pa thogen ic ity of B otrytis c inerea Isola tes from
Four Hosts to Strawberry
L I Xi2ling, GAO Zhi2mou3 , L I Yan2mei, Q IU Yan, L IU Xiao2yan, and PENG Mei
(College of P lan t Protection, A nhu i A gricultural U niversity, Hefei 230036, China)
Abstract: Twenty2three isolates of B otry tis cinerea Pers. were obtained from the diseased tissue collected
in Hefei, Bengbu, Changfeng and Hexian, by means of tissue isolating method. The pathogenicity of the iso2
lates of B. cinerea from different hosts to the fruits and leaves of strawberry were investigated by app lying my2
celial block wound inoculation, respectively. The p relim inary results showed that all of the tested isolates
caused occurrence of grey mould on strawberry fruits and leaves, but there be significant difference in the aver2
age diameters of the lesions caused by different isolates and there was difference in the different strawberry va2
rieties, suggesting that there was significant differentiation in pathogenicity of B. cinerea to strawberry fruits
and leaves among isolates. According to the average diameters of the lesions caused to strawberry fruits and
leaves, the pathogenicity of the all isolateswas classified into three categories: strong, intermediate and weak.
In general, the isolates from strawberry and tomato were more strongly pathogenic to the fruits and leaves of
strawberry, and the isolate from cap sicum was weakly pathogenic to strawberry fruits and leaves. However,
there was difference in pathogenicity among the different isolates from the same host, and the pathogenicity
difference was not obviously related to the localities of isolates.
Key words: B otry tis cinerea; pathogenicity differentiation; strawberry; host
灰葡萄孢 (B otry tis cinerea Pers. ) 是寄主范围广 , 经济危害性大的植物病原真菌 (王学英 等 ,
1996; 张中义 等 , 2002; Beever & W eeds, 2004)。由该菌侵染引起的草莓灰霉病是草莓生产中的重
园 艺 学 报 36卷
要病害之一 , 在田间生长期引起草莓死叶、落花、烂果 , 贮运和销售期间继续引起果实腐烂。随着设
施栽培的发展 , 草莓灰霉病发生危害日趋严重 , 一般造成减产 10% ~30% , 重者在 50%以上 , 严重
制约草莓的优质安全生产 (孟祥东 等 , 2007; 张焕柱 , 2007)。目前对草莓灰霉病的发生和防治以
及草莓灰霉病菌的生物学特性等均有一定研究 (任秀云和吕德国 , 1992; 孟祥东 等 , 2007; 张焕柱 ,
2007)。最近作者等测定了不同寄主来源的灰葡萄孢菌对番茄的致病力 (李喜玲 等 , 2008)。结果表
明 , 所有供试菌株接种番茄果实后均引起发病 , 但不同菌株所致病斑的平均直径有显著差异 , 显示灰
葡萄孢菌株间对番茄果实的致病力存在明显分化。按照在番茄果实上所致病斑的平均直径大小可将供
试菌株致病力划分为较强、中等和较弱 3种类型。然而 , 关于来自其他寄主植物的灰葡萄孢菌株能否
侵染草莓 , 不同寄主来源的菌株对草莓的致病力以及对草莓不同品种的致病力是否存在差异 , 目前尚
不甚清楚。而上述问题对于生产上包括草莓灰霉病在内的灰葡萄孢所致植物灰霉病的综合治理至关重
要 , 亟待探明。为此 , 作者对不同寄主来源的灰葡萄孢菌株对草莓的致病力及其分化进行了研究。
1 材料与方法
111 供试菌株和供试草莓
从安徽省合肥、蚌埠、长丰、和县、肥东等市、县采集表现典型灰霉病症状的番茄、辣椒、草
莓、葡萄等发病组织 , 采用组织分离法分离菌株 (方中达 , 1998) , 经鉴定获得 23个灰葡萄孢 (B ot2
ry tis cinerea Pers. ex Fr. ) 菌株 , 其编号、寄主及采集地见表 1。
供试草莓 ( F ragaria ananassa Duch. ) 品种 ‘四季 ’的脱毒苗由长丰县农技推广中心提供 , 种植
于温室内盛有适量营养土的盆钵中 , 常规管理 ; 草莓品种 ‘丰香 ’、‘香菲 ’和 ‘吐德拉 ’果实由安
徽农业大学园艺场提供。
试验于 2008年 3—5月在安徽农业大学植物保护学院温室进行。
112 致病力测定
11211 对草莓果实致病力测定
取大小一致的新鲜草莓果实用自来水冲洗干净 , 置于超净工作台上用微风吹去表面水分 , 喷洒
75%酒精进行表面消毒 , 30 W紫外灯照射 20 m in, 待用。
参照李喜玲等 (2008) 的方法。在无菌条件下 , 将 23个灰葡萄孢菌株分别移植于 PDA培养基
上 , 25 ℃培养 4 d后 , 沿菌落边缘打成直径 5 mm的菌碟 ; 挑取菌碟接种于用牙签刺伤的供试草莓果
实上。每处理 6果 (6次重复 ) ; 以接种空白 PDA培养基块为对照。接种后的草莓果实在 25 ℃下保
湿培养 24 h, 第 3天开始用十字交叉法测量草莓果实病斑直径。根据各处理的平均病斑直径大小来评
价各菌株致病力强弱。
11212 对草莓叶片致病力测定
采用活体接种测定。将供试各菌株分别在 PDA培养基上 25 ℃培养 4 d后 , 沿菌落边缘打成直径
为 5 mm的菌碟 ; 用昆虫针束 (4根小号昆虫针 ) 轻度刺伤叶片表面 , 将菌碟贴于部位、大小均相近
的草莓叶片刺伤处。每个菌株 3个重复 , 每个重复 5张叶片 , 每张叶片一个接种点 , 每菌株共接 15
张叶片 , 15个接种点 , 以空白培养基接种作为对照 , 用脱脂棉蘸水保湿 48 h, 自然条件下培养 , 7 d
后按照十字交叉法测定草莓叶片病斑直径。根据各处理的平均病斑直径大小来评价各菌株致病力的强
弱 (李喜玲 等 , 2008)。
11213 数据分析
采用 SAS统计软件对供试灰葡萄孢菌株引起的病斑直径数据进行方差分析 , 多重比较采用
Duncanpis新复极差检验 (LSR test)。
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9期 李喜玲等 : 四种寄主来源的灰葡萄孢对草莓的致病力分化研究初报
2 结果与分析
211 不同来源的灰葡萄孢对草莓果实的致病力
供试灰葡萄孢菌株接种于不同品种草莓果实后所致病斑直径如表 1所示 , 不同菌株所致病斑直径
有显著差异 , 说明不同寄主来源的灰葡萄孢菌株对草莓果实的致病力存在明显分化。
不同菌株对不同品种的草莓致病力存在差异。
在 ‘丰香 ’品种上 , 菌株 CM、CF8、HF22、HF33、CF2、BB3、BB5、CF3和 PT接种草莓果实
24 h后所致病斑平均直径均在 14 mm以上 , 致病力较强 ; 菌株 CF4、CF5、CF7、HX12接种番茄果实
24 h后所致病斑直径均在 11~14 mm之间 , 致病力中等 , LJ和 CF6接种番茄果实 24 h后所致病斑直
径均在 3 mm以下 , 致病力较弱。
在 ‘香菲 ’品种上 , 菌株 CF8、BB3、CF7、CM、HF22、CF5、CF1和 FD4, 接种草莓果实 24 h
后所致病斑平均直径均在 16 mm以上 , 所致病斑都较大 , 菌株间差异不显著 , 致病力较强 ; CF2、
FD5、CF4、FQ、CF10、HF33、PT与 CF8所致病斑达到显著水平 , 所致病斑直径均在 14~16 mm之
间 , 致病力中等 ; FD1、FD3、HX12与其余菌株达到显著水平 , 接种草莓果实 24 h后所致病斑小于
14 mm, 致病力较弱。
在 ‘吐德拉 ’品种上 , FD3、FD4、BB5、LJ、PT所致病斑与其余菌株达到极显著水平 , 接种草
莓果实 24 h后所致病斑小于 10 mm, 致病力较弱 ; CF1、FD1、BB5与 CM所致病斑差异显著 , 所致
病斑直径均在 10~14 mm之间 , 致病力中等 ; CM与其他菌株 (HF22、CF2、FD5、CF4、FQ、CF8、
BB3、CF5、CF7、FD2、HX12、CF10) 差异不显著 , 所致病斑较大 , 均在 14 mm以上 , 致病力较强。
综合上述 , 菌株 CM、HF22、CF8、BB3在 3个草莓品种上均表现较强致病力 ; LJ、FD3均表现
较弱致病力。但有些菌株在不同草莓品种果实上致病力表现存在差异。例如 , 菌株 FD4、PT在草莓
品种香菲上均表现较强致病力 , 但在草莓品种吐德拉上均表现较弱致病力。
从表 1可以看出 , 供试菌株在不同草莓品种果实的致病力与菌株地域来源并无相关 , 如同是从肥
东、长丰采集分离的菌株 , 致病力存在显著差异。总体来说 , 来自草莓和番茄的菌株对草莓果实的致
病力较强 , 来自辣椒的菌株对草莓果实的致病力较弱 ; 但来自相同寄主的菌株间致病力也存在差异 ,
如 FD1、HX12、FD3在草莓品种香菲上与其他来自番茄的菌株所致病斑相比 , 病斑较小 , 致病力较
弱。
212 不同来源的灰葡萄孢菌对草莓叶片的致病力
由表 1可以看出 , 在草莓叶片上 , 接种后 7 d不同菌株所致病斑有较大差异 ; 方差分析结果显
示 , 不同菌株间所致病斑平均直径的差异达到显著水平。菌株 BB3与其余供试菌株在草莓叶片上所
致病斑差异显著 , 接种番茄果实后所致病斑平均为 16141 mm , 致病力较强 ; CF1、FD1、FD5、CF7、
PT、CF10、LJ、FD2、CF6所致病斑直径与 BB3相比 , 最小相差 11105 mm, 最大相差 14123 mm , 所
致平均病斑直径均较小 , 致病力较弱 ; 其余菌株所致病斑直径在 5196~12 mm之间 , 致病力中等。
213 不同来源的灰葡萄孢菌对草莓果实和叶片的致病力比较
从表 1可以看出 , 不同灰葡萄孢菌株在草莓果实和叶片上的致病力存在差异。在草莓叶片上 ,
CF1、FD1、FD5、CF7、PT、CF10、LJ、FD2、CF6所致病斑直径均较小 , 致病力表现较弱 ; 在草莓
果实上 , CF6、FD4、PT、CF1在 3个草莓品种上有时表现较强致病力 , 有时表现较弱致病力 ; CM、
HF22、CF8、BB3在 3个草莓品种上均表现较强致病力 ; LJ、FD3均表现较弱致病力。菌株 BB3在草
莓果实和叶片上所致病斑都较大 , 均表现较强致病力。
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园 艺 学 报 36卷
表 1 不同寄主来源的灰葡萄孢菌株对草莓的致病力
Table 1 Pa thogen ic ity of the isola tes of B otrytis cinerea from d ifferen t hosts to strawberry
菌株
Isolate
寄主
Host
采集地
Locality
果实上的平均病斑直径 /mm
Average lesion diameter on fruits of different varieties
丰香
Fengxiang
香菲
Xiangfei
吐德拉
Tudela
平均
Mean
叶片上平均病斑
直径 /mm
Average leaf lesion
diameter
CM 草莓 Strawberry 和县 Hexian 19133a 17120abc 19120a 18158a 7195cdef
HF22 番茄 Tomato 合肥 Hefei 14183abcd 17110abc 18110ab 16168 abc 6109defgh
CF2 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 15117abcd 16110bcd 17190ab 16139 abc 6177defgh
FD5 番茄 Tomato 肥东 Feidong No test 15180bcde 17140abc 16160 abc 4141fghi
CF4 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 11167d 15170bcde 16190abc 14176 abcde 9146bcd
FQ 番茄 Tomato 合肥 Hefei 15150abcd 15180bcde 16170abc 16100 abcd 10155bc
CF8 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 18117ab 19100a 16160abc 17192ab 6178defgh
BB3 番茄 Tomato 蚌埠 Bengbu 18100ab 16130abc 16130abc 16139 abc 16141a
CF5 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 14100bcd 17160ab 16130abc 15197 abcd 11173b
CF7 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 12167cd 16140abc 16100abc 15102 abcd 4100ghi
FD2 番茄 Tomato 肥东 Feidong No test 14150cde 15175abc 15113 abcd 2130 ij
HX12 番茄 Tomato 和县 Hexian 12150d 13110ef 14180abcd 13147 abcde 11150b
CF10 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng No test 15150bcde 14116abcde 14183 abcd 3150hi
HF33 番茄 Tomato 合肥 Hefei 16133abcd 15180bcde 13175bcde 15129 abcd 5196defgh
CF6 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 0150e No test 13170bcde 7110f 2118 ij
CF3 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 17183abc 14190bcde 13163bcde 15145 abcd No test
FD1 番茄 Tomato 肥东 Feidong No test 13130def 13110bcdef 13120 abcde 5105fghi
CF1 草莓 Strawberry 长丰 Changfeng 14175bcd 16140abc 12140cdef 14152 abcde 5136efghi
LJ 辣椒 Capsicum 长丰 Changfeng 2183e 15120bcde 10110def 9138ef 3123hij
FD3 番茄 Tomato 肥东 Feidong No test 11150f 9150ef 10150def 8191bcde
BB5 番茄 Tomato 蚌埠 Bengbu 15117abcd 15140bcde 8170gf 13109abcde 6123defgh
FD4 番茄 Tomato 肥东 Feidong No test 17110abc 8160gf 12185bcde 7118cdefg
PT 葡萄 Grape 合肥 Hefei 14175bcd 16100bcd 4180g 11185cdef 3196ghi
CK - - 0 0 0 0 0
注 : CK为不接菌对照。表中同列数字右侧标有相同字母的相互间无显著差异。
Note: CK is the not2inoculating control1Data in the same column followed by the same letters are not significantly different atα = 0105 as
determ ined by Duncanpis LSR test.
3 小结与讨论
本研究采用菌丝块创伤接种法 , 分别测定了不同寄主来源的灰葡萄孢菌株对草莓果实和叶片的致
病力。结果表明 , 所有供试菌株接种草莓果实和叶片后均可引起发病 , 但不同菌株所致病斑平均直径
存在显著差异 , 并在不同草莓品种上致病力也存在差异 , 提示灰葡萄孢菌株间对草莓果实和叶片的致
病力存在明显分化。按照在草莓果实和叶片上所致病斑的平均直径大小可将供试菌株划分为致病力较
强、致病力中等和致病力较弱 3种类型。
总体来说 , 来自草莓和番茄的菌株对草莓果实和叶片的致病力较强 ; 来自辣椒的菌株对番茄果实
的致病力较弱 ; 来自葡萄的菌株在草莓果实不同品种之间和草莓叶片上所致病斑差异较大 , 在草莓品
种丰香和香菲上致病力中等 , 但在吐德拉和草莓叶片上致病力较弱。来自相同寄主的菌株间致病力也
存在差异 , 菌株致病力差异与菌株地域来源无显著相关。
关于灰葡萄孢不同菌株对草莓果实和叶片的致病力存在差异的研究结果与之前不同寄主来源的灰
葡萄孢菌对番茄的致病力分化的报道 (李喜玲 等 , 2008) 一致 , 进一步支持灰葡萄孢不同菌株存在
致病力分化的观点。关于灰葡萄孢不同菌株致病力分化的原因 , Lorenz ( 1983 ) 和 Kersises 等
(1997) 认为可能与异核现象有关。作者也曾采用细胞核染色法观察到部分灰葡萄孢菌株菌丝细胞内
存在多核现象 , 但这种多核现象与异核现象乃至致病力分化之间的关系尚不清楚。试验中发现 , 灰葡
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萄孢菌株致病力强弱与纤维素酶、果胶酶等胞壁降解酶活性有一定的相关性 (另文报道 )。因此 , 有
关灰葡萄孢不同菌株致病力分化的机制尚需进一步研究。
本研究结果指出 , 来自辣椒、草莓、葡萄、番茄等其他寄主植物的灰葡萄孢菌株能够侵染草莓果
实和叶片 , 意味着上述植物上的灰霉病菌 (灰葡萄孢 ) 可以成为草莓灰霉病的侵染来源 , 建议在草
莓灰霉病的综合防治中应予以注意。
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