全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 艺 学 报 , 一
凡
西葫芦软腐病病原的初步研究
李 林 , , 徐作樊 , , 李长松 , ’ , 齐军山’ , 李 凡 , , 郑继法,
山东省农业科学院植物保护研究所 , 济南 ’ 山东农业大学植物保护学院 , 山东泰安
摘 要 一 年 , 在山东省的临淄 、 聊城 、 寿光 、 临沂等 个县市保护地栽培的西葫芦中发
现一种严重危害茎基部的细菌性病害。 从 批次 株西葫芦病株标本中 , 经分离纯化获得 个菌株 ,
从中选出部分菌株按柯赫法则对其进行致病性测定 , 均产生与田间相同症状。 对病原菌形态
、 染色反应 、
培养性状和生理生化等几项试验结果表明 , 病原菌为胡萝 卜软腐欧文氏菌胡萝 卜软腐亚种 、 。 阳
哪 。
关键词 西葫芦 茎基部 软腐病 病原鉴定 胡萝 卜软腐欧文氏菌胡萝 卜软腐亚种
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
’ , 一 ’ , 一 , ’ , 一 ’ , ’ , 一 ,
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哪
近几年 , 随着西葫芦保护地栽培面积的扩大 , 一种主要发生在西葫芦茎基部的细菌性病害逐年加
我们在山东省 个县市调查 , 该病均有不同程度的发生 , 尤以淄博市临淄区发生面积大 , 危害
‘泊重
严重 , 成为影响当地西葫芦生产的突出问题之一 。 该病在植株长至 片叶时 , 在植株下部伤 口
处开始发病 , 发病速度快 , 两周内植株大量死亡 , 一般发病率 一 , 严重的 一 , 甚
至全棚毁灭 。
吕佩坷等 和郑建秋 报道西葫芦软腐病主要危害果实。 而本文报道的这种病害
主要在茎基部发生 , 早期危害严重 , 瓜条腐烂症状并不多见 。
为了确定该病的病原 , 摸清其发病规律 , 从而制定切实可行的防治措施 , 作者进行了病原菌分
离 、 致病性测定和病原菌生理生化测定 , 现将结果报道如下 。
收稿日期 阅 一 一 修回 日期 一 一
基金项目 国家 ‘ 十一五 ’ 科技支撑计划项 目 仪巧 , 创拓 加
通讯作者 一
·
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园 艺 学 报 卷
材料与方法
一 年 , 从山东省临淄 、 寿光 、 青州 、 淄博
、 潍坊 、 阳谷 、 萃县 、 聊城 、 济南 、 平原 、
营县和临沂等
‘
个县市西葫芦大棚分批采集病株标本 批 株 , 经表面消毒后 , 采用平板划线法
分离 , 一 ℃恒温箱培养 。 挑取单个菌落纯化后 , 将获得的菌株转接 斜面培养 , ℃
冰箱保存备用 。
对照菌株为白菜软腐菌 一 二 , 由山东农业大学植保学院细
菌研究室提供。
供试培养基为 培养基 、 培养基 、 金氏 培养基和 肠 培养基 。
病原细菌的分离培养 、 菌体形态观察 、 染色反应
、 培养性状观察 、 致病性测定和生理生化反应等
试验 , 参考方中达 、 、 中国科学院微生物研究所细菌分类组 和王克
的方法进行 。
致病性测定采用注射法接种 。 供试西葫芦品种为 ‘ 玉帅 ’ 。 待西葫芦幼苗长至三叶一心期 , 将供
试菌株在 培养基上培养 , 用灭菌水洗下菌苔 , 配成浓度为 似 的菌悬液
, 在每
株幼苗茎基部注射 一 菌悬液 。
每盆接种 一 株 , 重复 次。 以灭菌水为对照 。 将接种幼苗置于保湿箱内保湿 。 试验温度
为 ℃ 。
结果与分析
症状特点
该病的鉴别性特征为主要危害植株的茎基部。 发病初期 , 病菌从西葫芦茎基部的表皮或伤口侵
人 , 在离地面 一 的茎基部形成不规则水渍状褪绿斑 , 逐渐扩大后呈黄褐色 , 向内发展呈软腐状
图 , 或从地下根茎部侵人 , 沿维管束向上侵染。
第 果穗开花期 , 在去雄花后形成的伤口处或叶柄伤口处出现水浸状淡褐色病斑 , 病部向上下扩
展 , 凹陷软化腐烂 , 流出白色粘稠液并伴有恶臭 , 后期随着病部扩展直至整株萎蔫死亡 图 , 病
组织腐烂成麻状 。
图 西葫芦软腐病症状 图 西葫芦软腐病叶片萎蔫症状
幻
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蛇
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期 李 林等 西葫芦软腐病病原的初步研究
病原菌的分离和致病性测定
采集的标本经分离纯化获得 个细菌菌株 。 其中软腐病菌 、 株 , 占 ,
假单胞菌 株 , 占 。 选取临淄区皇城镇 、 寿光市田柳镇 、 青州谭坊镇 、
淄博市张店区房镇 、 安丘县临语镇 、 阳谷县太平镇 、 聊城市东昌府区 、 济南市遥墙镇
、 临邑县理合
乡 、 营县刘官庄镇代表菌株 , 编号为 一 一 一 。
致病性测定结果表明 , 接种 、 菌株发病后的西葫芦苗茎基部呈水渍状腐烂 , 叶片萎蔫 。
接种 面 的菌株和灭菌水的对照未见发病 。 从接种后初发病的幼苗茎基部再分离 , 获得
的细菌菌株均和原接种 , 菌株性状相同。
病原菌的鉴定
菌体形态与染色反应
从分离纯化菌株中选出 个菌株 , 在 培养基上培养 , 用磷钨酸负染电镜观察 , 发现菌
体为短杆状 , 两端钝圆 , 大小为 一 一 , 鞭毛周生 图 。 按照革兰 氏染
色法和简易法 郑继法 , 区别 , 各菌株均呈阴性反应 , 不形成芽抱 。
图 病原菌电镜照片
加 匆
即 阴 ‘口即 用
培养性状
将菌株在 培养基平板上划线 , ℃ 恒温箱培养 后检查 , 菌落污 白色 , 圆形 , 边缘整
齐 , 有光泽 , 稍隆起 , 表面光滑 , 菌落直径 一 。
在 培养基培养 , 培养液混浊 , 沉淀产生菌膜 。
在金氏 培养基上培养不产生荧光 。
在 培养基上培养生长呈阳性反应 。
生长最适温度为 一 ℃ , ℃ 以上不能生长 。
生理生化测定结果
个供试菌株的生理生化反应和 一 菌株完全一致 。 种糖 、 醇及其他碳水化合物发酵测
定结果 表 表明 , 个供试菌株及对照菌株能利用葡萄糖 、 木糖
、 核糖醇 、 甘露醇等 种物
质 , 不能利用甜醇 、 核糖 、 丙二酸钠和酒石酸钾等 。
耐盐性测定表明 , 个供试菌株及对照菌株在 氯化钠浓度下仍能生长 , 对氧化酶
、 脉酶 、
卵磷脂酶等均呈阴性反应 , 而对马铃薯软腐 、 明胶液化均呈阳性反应 。 供试菌株可产生 , 七叶
灵水解阳性 , 而甲基红 、 试验 、 红霉素敏感性 、 一 甲基葡萄糖昔等测定均呈阴性反应 表 。
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园 艺 学 报 卷
表 供试菌株对糖类、 醇及其他碳水化合物的利用
】 ,
测定项 目
麦芽糖
乳糖 么
纤维二糖
葡萄糖
木糖 一
阿拉伯糖
海藻糖
核糖
核糖醇
山梨醇
甘露醇
甜醇
肌醇
水杨素
丙二酸钠
柠檬酸钠
酒石酸钾
乳酸钠 压
淀粉水解
一 一 一 石 石 一 一 一 一
一
对照
注 表示阳性 一 表示阴性 。
一 ·
表 供试菌株生理生化测定结果
而 肠 奴写 璐
测定项 目
氧化酶
过氧化氢酶
脉酶
卵磷脂酶 比
苯丙氨酸脱氢酶
产生 耐
七叶灵水解
引垛产生
明胶液化
硝酸盐还原
甲基红
试验
℃ 生长 ℃
生长 脚
马铃薯软腐 。
对红霉素敏感性
一 甲基葡萄糖昔 一 一
厌氧生长 。
助脚 培养生长 城 脚
一 一 一 一 石 一 一 一 一
一
对照
注 表示阳性 一 表示阴性。
一
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期 李 林等 西葫芦软腐病病原的初步研究
依据上述染色反应 、 致病性测定 、 培养性状和生理生化测定结果查对有关文献
, 任欣正 , 吕佩坷 等 , 王金生 , , 确定供试 个菌株均为胡萝 卜
软腐欧文氏菌胡萝 卜软腐亚种 百酬 ‘, 嗯
。 沮。
讨论
本文报道的该细菌性病害主要为害西葫芦茎基部 ,
发生时期和危害程度与文献报道的西葫芦软腐病有较大不同 ,
片叶时开始发病 , 其侵害部位 、 病害
但二者均由胡萝 卜软腐欧文氏菌胡萝 卜
软腐亚种 附 、 引起
。
据报道 , 五 刃 、 , 菌寄主范围很广
, 可侵染葫芦科 、 十字花科
、 茄科 、
百合科 、 伞形花科 、 菊科等多种蔬菜 , 主要为害甜瓜 、 西葫芦 、 节瓜的果实 , 为害西葫芦茎基部的报
道不多 俞大级和方中达 , 方中达和任欣正 , , 。 本研究为该病害的识别诊断和防
控技术研究提供了科学依据。
根据近几年的调查 , 该病在保护地栽培中有逐年加重的趋势 。 造成西葫芦茎基部软腐病危害加重
的原因有以下几点 , 一是随冬暖大棚连年种植西葫芦 , 病原细菌逐年积累 二是西葫芦开花结果初期
人工去雄过程中易造成大量伤口 三是冬暖大棚温度波动大 , 湿度高 , 更利于该病的发生蔓延 。
该病的发病规律和防治研究正在进行中。
访 留 , 而
中国科学院微生物研究所细菌分类组 一般细菌常用鉴定方法 北京 科学出版社
, 叮 , 群
一 罗 护 一
方中达 植病研究方法 北京 中国农业出版社 一 住
飞一 , 儿 一 , 一
方中达 , 任欣正 中国植物细菌病名录补志 南京农业大学学报 , 一
一 , 一 幼 , 一
方中达
,
任欣正 中国植物细菌病名录补志 南京农业大学学报 , 巧 一
一 , 们一 , 一 , 一
一
吕佩坷 , 刘文珍 , 段半锁 , 张宝棣 中国蔬菜病虫原色图谱续集 呼和浩特 远方出版社 一
一 谊 成 己 一
任欣正 植物病原细菌的分类和鉴定 北京 中国农业出版社 一
助 脚 吃
一 ,
一
植物病原细菌鉴定实验指南 张克勤译 贵州 贵州人民出版社 一
一 洲洲〕 群 幼 司 一
王金生 以〕 植物病原细菌学 北京 中国农业出版社 一
朋随 邵 弘 , 旧 幼 一
王 克 植物病原细菌分类鉴定 沈阳 沈阳农业大学 一
一 , 一 , 而 卿
,
, 一
俞大级 , 方中达 中国植物病原细菌的初步名录 农业学报 , 一
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园 艺 学 报 卷
一 即 脚 一 一 邵 邵
, 一
郑继法 区别格兰氏阴性菌和阳性菌的简易快速试验 山东农业大学学报 , 巧 一
一 创域
· ·
郑建秋 现代蔬菜病虫鉴定与防治手册 北京 中国农业出版社
小落菜花药培养获得再生植株
冯 辉 ‘ , 刘如娥 , 王超楠 , 李 丹 沈阳农业大学园艺学院
, 沈阳
申 一 一
讨
,
群 八 硫 , 梦 硫 触 ,
关键词 小秘菜 花药培养 单倍体育种
,
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 刁
小秘菜 , 〔召嘟 呷 」在日本普遍栽培近年我国引进其多个品种。 作者拟通过
单倍体育种途径选育小落菜新品种来加快育种进程 。
以引自日本的小秘菜品种 ‘ 蕾用菜 ’ 图版 , 为试材 , 种子经春化处理后穴盘育苗 , 盆栽。 开花后选取健壮
植株花序 , 选择小抱子发育处于单核靠边期至双核早期的花蕾 长 一 , 先用蒸馏水冲洗 , 再用
酒精消毒 , 溶液消毒 , 无菌水冲洗 次 , 每次 。 用灭过菌的镊子取出花药 , 去除花丝 ,
接种到配制好的固体培养基上 , 用 封 口 。 经 ℃ 高温热激处理后 , 置于 ℃ 恒温培养箱中暗培养 , 直至 出
胚。
在 和改良 培养基上培养 周 , 获得了胚状体 图版 , , 两种培养基出胚率分别为 和 胚 蕾
较好的变温处理组合为 “ 低温 高温 ,’ 适宜蔗糖浓度为 。 将 、 和改良 培养基有机成分加倍后 ,
出胚率明显提高。 其中以改良 有机成分加倍的效果最好 , 出胚率达到 胚 蕾 , 说明在胚状体诱导中有机成分起
重要作用。 将上述改良 培养基的有机成分加倍后 , 再分别添加不同浓度的谷氨酞胺和丝氨酸 , 以谷氨酞胺 岁
较好 培养基中添加丝氨酸出胚率反而下降。 经上述试验得到小秘菜 ‘ 蕾用菜 ’ 花药培养的优化培养基配方为 改
良 倍改良 有机物 十 谷氨酞胺 岁 十 蔗糖 琼脂 。
将花药培养获得的子叶型胚转接到 培养基上 , 置于 ℃ , 光照时间 丫 , 光照强度 旧 坟 的培养室中培
养。 一 后 , 胚状体开始变绿 , 胚根伸长并长出根毛 。 在添加和不添加活性炭的培养基上诱导成苗均获得了成功 ,
但添加活性炭对胚状体发育有利 , 幼苗生长较为健壮 图版 , 。
图版说明 ‘ 蕾用菜 ’ 小秘菜植株 小落菜花药培养 周后的胚状体 小箱菜花药培养试管苗。
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收稿 日期 一 一 修回 日期 一 一
基金项目 辽宁省优秀青年科研人才基金项 目 《” 兀旧
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