全 文 ：园 艺 学 报 2003，30(6)：719～721
Aeta Horticulturae Sireca
苹果离体 茎尖超低温保存方法的比较
赵艳华 周锡 明 吴永杰
(河北省农林科学院昌黎果树研究所 ，昌黎 066600)
摘 要 ：以苹果离体茎尖为试材 ，对 4种超低温保存方法 (两步降温法 、玻璃化法 、包埋干燥法和小滴
冰冻法)从操作程序、存活率 、再生率及恢复生长速度等方面进行 比较 ，确定包埋干燥法为最佳保存方法。
关键词 ：苹果 ；超低温 ；方法；
中图分类号 ：S 661．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：0513—353X (2003)06-0719—03
1 目的、材料与方法
超低温保存作为一种长期保存方式 已逐步得到人们的认可。苹果离体茎尖两步降温法 、玻璃化
法、包埋干燥法及小滴冰冻法等 4种超低温保存方法均有报道L1“]。但这些研究仅限于某一种方法保
存某几个品种 ，并未对几种方法进行系统比较。本试验拟从操作程序、存活率 、有效存活率及恢复生
长速度等方面人手 ，筛选出一种简便 、可靠 、有效的苹果超低温保存方法。
试验着重选择了不同苹果类型 ，包括品种和砧木 (表 1)。材料为继代培养 70 d、5c光照培养箱
低温驯化21 d的试管无性系。继代培养基为 MS+BA 1．0 ms／L+NAA 0．05 mg／L+糖 3O L+琼脂 5
L，pH 5．6。(25±2)c、光照强度 2000 lx条件下培养。利用包埋干燥法 j、小滴冰冻法 j、玻璃化
法L2]和两步降温法⋯保存的茎尖在液氮中保持 24 h后，在 25％水浴中化冻后再培养。每处理 20个茎
尖 ，3次重复。化冻后形成新植株的茎尖数 占茎尖总数的百分数为存活率。
2 结果与分析
2．1 超低温保存方法对苹果离体茎尖存活率的影响
用4种超低温方法保存苹果离体茎尖，均获得较高的存活率，24个品种 (系)存活率 75％ ～95％
(表 1)。但由于小滴冰冻法操作过程复杂，且每个冷冻管处理的茎尖数太少 (仅 10个)，所以被淘汰。
表 1 超低温保存方法对不同苹果离体茎尖存活率的影响
Table 1 The efect ofdiferent cryopreservalion methods On the shoot lips regeneration
注：sF两步降温法；V 玻璃化法；E1)．包埋干燥法 ；D．小滴冰冻法 Note：SF．Two—step~V．Vitrifcation；E1)．En。ap ∞；D．D呷
收稿 日期：2002—12—20；修回 日期：2003—02—24
基金项目：国际植物遗传资源研究所资助项 目
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720 园 艺 学 报 30卷
2．2 超低温保存方法对苹果离体茎尖再生率的影响
利用包埋干燥法、两步降温法和玻璃化法 3种方法保存 了5个苹果品种。结果 ，玻璃化和两步降
温法保存后的茎尖 ，除金标品种外 ，其余 4个品种均有不同比例的愈伤组织产生；但用包埋法保存后
5个品种直接形成植株 ，无愈伤组织产生 ，只是八棱海棠和金标品种存活率略有下降 (表 2)。
表 2 3种超低温保存方法对苹果离体茎尖再生率的影响
Table 2 The efect ofthree cryopreservationmethods onthe shoottips regeneration (％)
2．3 茎尖剥取的大小
在试验过程中，两步降温法要求剥取的茎尖非常小 ，仅为 1．0 mil，这样不仅操作时间长，容易
污染，而且化冻后生长缓慢。玻璃化法剥取茎尖的大小居中，约 1．5 mil。包埋干燥法最大 ，约 2～
2．5 mil，相比来说操作简单 ，再培养生长迅速。
2．4 观察存活需要的时间
乔纳金 、八棱海棠、富士和金标 4个品种经 3种超低温方法保存后 ，化冻再培养。通过对其存活
的观察发现 ，两步降温法生长缓慢 ，平均 12．3 d才能看出茎尖存活，玻璃化法和包埋干燥法分别为
9．3和 3．8 d。另外，经包埋干燥法超低温保存的八棱海棠茎尖化冻后整个保持绿色，不需要恢复期。
品种和方法对存活率均有影响，同一个方法不同品种存活率不同，也就是说单单就存活率来考
虑 ，品种不同所适宜的方法不同，而联系到有效存活率和材料的遗传稳定性 ，我们认为，包埋干燥法
可以最大限度地降低遗传变异 ，因为在整个超低温保存过程中无引起遗传变异的外源物质存在，另外
再生后基本不形成愈伤组织，且由茎尖直接形成植株。
两步降温法和玻璃化法由于要求茎尖较小，操作时间相对延长 ，不仅增加污染，而且超低温保存
后外部叶片全部死亡 ，只有微小茎尖或顶端分生组织存活 ，因此再生困难，需要较长的恢复期。包埋
干燥法可以剥取较大的茎尖 ，操作简单。茎尖化冻后整个保持绿色，不需要恢复期。因此 ，综合考虑
操作程序、存活率 、有效存活率、及恢复生长速度等 ，我们认为包埋干燥法为超低温保存苹果离体茎
尖的最佳方法。
参考文献：
1 常永健 ，陈霜莹，赵艳华 ，等 ．苹果茎尖超低温保存的研究．见：北京中国科学技术协会首届青年学术年会 ，北京：中国科学技
术出版社，1992．461—464
2 赵艳华 ，陈霜莹，吴永杰 ，等 ．玻璃化法超低温保存苹果离体茎尖．见：北京中国科学技术协会第二届青年学术年会 ，北京：中
国农业大学出版社 ，1995．406—409
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6期 赵艳华等 ：苹果离体茎尖超低温保存方法的比较 721
3 赵艳华．吴永杰 ，陈霜莹，等 ．包埋干燥超低温保存苹果离体茎尖 ．园艺学报 ，1998，25(1)：93～95
4 Zhao Yanhua，Wu Yon0ie．Cryopreservation of apple in vitro shoot tips by the droplet freezing method Cryo-letter．1999，(20)：109—112
of Four M ethods for Apple Shoot Tips in Vitro Freezing
Zhao Yanhua，Zhou Ximing，and Wu Yongjie
(Ch,~ i Institute ofPomology，Hebei AccMemy ofAgricultural and Forestry Sciences，Changli 0666OO，China)
Abstract：In this paper，we compared four techniques(two—step freezing，vitrification，encapsulation，
droplet)for freezing apple shoot tips in vitro and concluded that encapsulation was the best method in considering
ope ration protocol， survive rate，regeneration rate an d regrowth speed．
Key words：Apple； Cryopreservation； Method
黄瓜嫩果皮色与色素含量的关系
孙小镭 王 冰 顾 三军 王志峰 (山东省农业科学院蔬菜研究所
Correlations of Immature Skin Co lor and Pigments in Cucumber
Sun Xiaolei，Wang Bing，Gu Sanjun，and Wang Zhifeng (Institute ofVegetable
ences，Jiruns 250100，Ch／na)
关键词：黄瓜 ；果皮；颜色；叶绿素；类胡萝 卜素
济南 250100)
ShandongAccMemy ofAgricultural Sci一
中图分类号 ：S 642．2 文献标识码：A 文章编号 ：0513—353X (2003)06-0721—01
试材为不同皮色的8个黄瓜品种和以其为亲本配制的 10个组合。将上述材料设区种植，每小区 30株。先按果色差异对
照色谱 目测分类，再随机抽样测定色素含量。雌花开花至商品瓜成熟 (约 7～10 d)取样 ，沿果实纵向削下宽 1 cm，厚 0．2
cm左右的表皮，用打孔器 (直径 0．56 cm)取圆片 20片，在 80％的丙酮液中遮光浸提 24 h，用 721型分光光度计比色。
测定结果表明，黄瓜嫩果果皮色素总含量随绿色的加深而增加，即深绿皮 70～80 rng／g，绿皮 、黄绿斑驳 41～55
rng／g，浅绿皮 30～40 rng／g，黄绿皮 20 rng／g左右 ，黄 白皮 、白皮 5 rng／g以下。色素主要 由叶绿素和类胡萝 卜素组成，
大致为 1：1(白皮材料除外 )。t测验结果证明 ，两种色素含量 的相关系数 为 0．991一 。叶绿 素 a与叶绿素 b含量的比
值为 1：1．7，因此 ，叶绿素 b含量对果色影响较大 ，在实际应用 中可只测一种 色素的含量表示 黄瓜 嫩果果 色的特性
(表 1)。
表 1 黄瓜果皮颜色与不同色素含量的关系
Table1 Relativity offruit colorswith diferent pigmentsin cucumber (mg／gFM)
收稿 日期 ：2O02—07—18；修 回日期 ：2003—11—26
基金项目：国家 “八五”、“九五”科技攻关项目 *现工作单位 Dcpartn~t ofAgronomy andHorticulture，University ofNebraska Lincoln
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