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番茄 E8启动子乙烯应答元件克隆及 DNA序列分析
赵凌侠 金丽鑫 李柱刚 曹又方 邱承祥 唐东芹 钱虹妹 唐克轩
( 上海交通大学复旦一交大一诺丁汉植物生物技术研发中心，上海 200030； 上海交通大学农业与生物学院植物生物
技术研究中心，上海 200030)
Cloning and DNA Sequence Analysis of Element Responsive to Ethylene in E8 Promoter
of the Tomato
Zhao Lingxia ’ ，Jin Lixin ，Li Zhugang ，Cao Youfang ，Qiu Chengxiang ，Tang Dongqin ’ ，Qian Hong-
mei ，and Tang Kexuan ( Fudan—SJTU-Notingham Plant Biotechnology R&D Center，Shanghai Jiaotong University，
Shanghai 200030，China； Plant Biotechnology Research Center，School ofAgriculture and Biology，Shanghai Jiaotong Uni—
versity，Shanghai 200030，China)
关键词：番茄；E8启动子；DNA序列
中图分类号：S 641 文献标识码：A 文章编号：0513．353X (2004)02-0204-01
髓 启动子是常用的番茄果实特异表达启动子之一，是指番茄髓 基因5’侧翼近2．2 kb的DNA序列。前人的研究
表明，髓 基因5’侧翼一2181～一1088区段的删除使髓 基因表达量大幅度下降 (仅为完整髓 启动子的1／10)，同时
该区段还是髓 基因对乙烯应答的充分必要区域；这说明了该区段是髓 基因表达调控的重要元件。
为了探究不同遗传型栽培番茄 (Lycopersicon esculentum)E8基因的5’侧翼 一2181一一1088区段 DNA序列是否存
在差异，作者以F1：5-cca agc tg aat tca tt tg aca tc-3’和R1：5-cgc gga tcc cta gat atg ggt ct tct ag-3’为引物，在
DNA聚合酶催化下以3份番茄V06A0751、V06A1519(由中国农科院蔬菜花卉所国家蔬菜种质资源中期库提供)和
‘澳洲明珠’(系本实验室保存)的基因组DNA作模板进行了PCR扩增，反应体系为25 ：其中F1和R1各1 L
(10 I~mol／L)，dNTPs 2 L(每种5 mmol／L)，10×PCR bufer 2．5 L，25 mmol／L MgC12 1．5 L，模板DNA 4 ILL(10
ng／IL)， DNA聚合酶0．5 L(5U／IxL)，ddH2O 12．5 L，混匀后上覆25 L矿物油；在Hybaid PCR仪上扩增，
反应条件为：95oC 3 min，1个循环；94℃ 1 min、56oC 1 min、72oC 1 min 30 S，35个循环；72℃ 8 min，1个循环。
回收1．1 kb目的片段并连入T—easy vector(购自Promega公司)，测序结果依次命名为pE8-4、pE8-7和pE8-10。利用
软件ClustalX 1．81和Ni and Li的方法分别将测序结果与pE8(髓 基因5’侧翼序列一2181～一1088和Zhou等在Gene—
Bank登录的AF515784进行多序列比较和计算序列间相似系数。
研究结果表明，5个不同遗传型栽培番茄髓 启动子乙烯应答区域 (一2181～一1088)间的核苷酸虽然存在一定差
异 (4～27 bp)，但相似系数均在98％以上，说明栽培番茄髓 启动子乙烯应答元件区域具有较高的保守性。现仅对
髓 启动子乙烯应答元件进行了初步的研究，而2．2 kb的番茄髓 启动子其他功能元件、番茄属种间 (如野生种)E8
启动子、番茄不同类型的果实特异表达启动子 [如E8、PG(polygalacturonase)、2Al1]以及与番茄属亲缘关系更远
的如苹果、香蕉、鳄梨果实特异表达启动子间的差异和功能的研究还有待进一步展开，随着研究的不断深入，有望获
得功能更强的适于番茄果实特异表达的启动子。
收稿日期：2003一o9—10；修回日期：2004—02—12
基金项目：国家“十五”计划项目(2002AA206511)；上海科技攻关重大项目(03DZ19310)；上海交通大学农科项目
B M " 博
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