全 文 ：第 19 卷 第 3 期
Vol. 19 No. 3
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
2011 年 5 月
M ay. 2011
红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官、免疫球蛋白
及抗氧化性能的影响
姜义宝1, 2, 王成章2 , 崔国文1*
( 1.东北农业大学动物科学技术学院, 黑龙江 哈尔滨 150030; 2.河南农业大学牧医工程学院, 河南 郑州 450002)
摘要 : 通过在饲料中添加红车轴草( T r if ol ium p retense L. )异黄酮, 研究其对 AA 肉鸡免疫器官、免疫球蛋白及抗
氧化性能的影响。选用 180羽 1日龄 AA 肉仔鸡分成 3 组,即对照组、处理组、处理 组,分别饲喂基础日粮、基
础日粮+ 红车轴草异黄酮( 10 mg kg- 1 )、基础日粮+ 红车轴草异黄酮( 20 mg kg - 1 )。结果表明: 处理组的肉鸡
日增重和免疫器官指数均高于对照组, 饲喂 21 d 后, 处理组血清 IgM 的含量显著高于对照组( P < 0. 05) , 49 d 后,
处理组肉鸡血清 IgG 含量显著高于对照组 ( P < 0. 05) ; 红车轴草异黄酮提高了血清中谷胱甘肽过氧化物酶
( GSHPX)活性, 降低了丙二醛( MDA)含量,处理组和处理组之间差异不显著。红车轴草异黄酮能够明显改
善肉鸡生产性能、调节免疫和提高机体的抗氧化性。
关键词:红车轴草; 异黄酮;肉鸡
中图分类号: S851. 5 文献标识码: A 文章编号: 10070435( 2011) 03052005
Effect of Red Clover Isoflavone on Immune Organs, Igs and
Antioxidation Activity of Broiler Chicks
JIAN G Yibao1, 2 , WANG Chengzhang2 , CUI Guowen1*
( 1. College of Anim al Science an d T echnology, Northeast Agricul tu ral U niversi ty, H arbin, H eilon gjiang Province 150030, China;
2. College of Animal and Veterinary E ngineering, H en an Agricu ltural U nivers ity, Zhengzhou, H enan Province 450002, Ch ina)
Abstract: The effect o f red clov er isof lav one on Immune Organs, Igs and Ant iox idat ion A ct ivity of Bro ilers
w as invest igated. Onedayold AA br oiler Chicks w ere random ly assigned to thr ee g roups ( cont rol, group
1 and gr oup 2) . Basic diet , basic diet+ r ed clo ver isof lavone ( 10 mg kg - 1 ) and basic diet+ r ed clo ver
isof lavone ( 20 mg kg- 1 ) w ere fed to three gr oups r espect ively. Results indicated that red clo ver isof la
vone increased daily w eight and immune org an indexes. IgM contents in serum of bo th g roup 1 and 2 on 21
days af ter feeding w ere higher than contr ol ( P< 0. 05) . IgG contents in serum of group 1 w er e higher than
control on 49 day s af ter feeding ( P< 0. 05) . Red clover isof lav one also enhanced GSHPX act ivity and re
duced MDA content in ser um . Group 1 and group 2 had no signif icant difference. These results show ed
that red clov er isof lavone could modulate grow th per formance and immunity o f bro iler chicks as w el l as in
crease ant ioxidat ion activity of broiler chicks.
Key words: Red Clover; Iso flavone; Broiler
红车轴草( T ri f ol ium p r etense L. )为豆科( Le
gum inosae) 车轴草属( T ri f ol ium L. )多年生草本
植物,南北均有种植,资源丰富,是集草、药兼用于一
体的优良牧草 [ 1, 2] , 其含有黄酮类、异黄酮类、黄酮
醇类、香豆素和酚羧酸类化合物, 还含有水杨酸、叶
酸、5甲酰四氢叶酸、甾醇、甘油酯、C23C31的烷烃、
磷脂和糖脂等成分 [ 3] , 其中最重要的活性物质为异
黄酮。红车轴草中异黄酮含量占干重的 1%, 是大
豆( Gly cine max ( L inn. ) M err)子粒中异黄酮含量
的 10倍,是少数几种含 4种异黄酮(植物雌激素)的
植物之一,红车轴草异黄酮广泛应用于保健食品和
医药行业。近年来由于抗生素、激素等化学合成类
收稿日期: 20101012;修回日期: 20110328
基金项目:公益性行业(农业)科研项目( nyhyzx07022) ;农业部不同区域草地承载力与家畜配置(草畜平衡)项目( 200903060 ) ;河南省重
大科技攻关项目( 0422010300)资助
作者简介:姜义宝( 1976 ) ,男,山东巨野县人,讲师,博士研究生,研究方向为牧草加工与资源开发利用, Email: yibaojian g@ sina. com; * 通
讯作者 Author for cor respond ence, Email : cgw 603@ 163. com
第 3期 姜义宝等:红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官、免疫球蛋白及抗氧化性能的影响
饲料添加剂在畜禽产品中有残留,对人体健康产生
不利影响,已被许多国家限制使用,营养学家们正在
努力寻求绿色安全的替代饲料添加剂, 来提高畜禽
生长性能,减少疾病发生。异黄酮在动物生长、抗氧
化、免疫和生长方面发挥着重要的调节作用,在畜
禽饲料中添加适量的异黄酮, 具有提高饲料利用率,
促进动物生长 [ 4] , 增强机体免疫力[ 5] , 调节动物繁
殖,提高动物泌乳和产蛋率的作用[ 6]。红车轴草异
黄酮原料来源广泛, 具有多种生物学功能,在饲料中
应用具有很好的价格优势和资源优势。本试验以红
车轴草异黄酮为原料,研究其对肉鸡生长性能、免疫
器官指数、免疫球蛋白含量和抗氧化性能的影响, 为
其在畜禽生产上的应用提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 试验动物及试验设计
试验动物:选用 1日龄雄性AA 肉仔鸡 180羽,
随机分为 3 组, 对照组、处理 组和处理 组, 每组
4个重复,每个重复 15只鸡, 自由采食、饮水, 消毒
和防疫按常规程序进行。
1. 2 试验材料
红车轴草异黄酮购于湖南现代九汇有限公司,
总黄酮含量 80. 64% , 其中芒柄花素 ( Formonone
t in) 72. 80%、鹰嘴豆要素 A ( Biochanin A) 7. 04%、
黄豆苷元 ( Daidzein) 0. 23%、染料木黄酮( Genistein)
0 19%。兔抗鸡 IgG, IgM , HRP 羊抗兔购于武汉
博士德生物工程有限公司。
1. 3 试验日粮
参照鸡农业行业饲养标准[ 7] ,配制不同阶段饲
粮,饲粮组成见表 1。对照组饲喂基础日粮, 处理
组饲喂基础日粮+ 红车轴草异黄酮 ( 10 mg
kg
- 1
) ,处理 组喂基础日粮+ 红车轴草异黄酮( 20
mg kg- 1 ) ,试验从 1 日龄开始, 49日龄结束。
1. 4 测量指标与方法
每周一空腹称重各组肉鸡, 计算每阶段平均增
重,每周末记录各组鸡采食量和剩料量,计算出各组
鸡平均采食量及每阶段饲料利用率, 并记录死亡情
况。分别在 21日龄和 49日龄, 取体重相近的鸡进
行测试。
1. 4. 1 免疫器官指数的测定
测量采用称重法, 将鸡称重后处死称量胸腺、脾
脏和法氏囊湿重。免疫器官指数= 免疫器官重( g) /
体重( kg) 100%。
1. 4. 2 血清中 IgG和 IgM 含量的测定
采用间接 ELISA 方法检测, 联苯二胺显色, 以
490 nm 波长在酶标仪上测定光密度值 ( OD 值)。
每个被检样品设 3个重复,同时每个板设空白对照
及阴性对照。
1. 4. 3 抗氧化性能的测定
采抗凝血,离心制备血清;谷胱甘肽过氧化物酶
( GSHPX)、超氧化物歧化酶 ( SOD ) 和丙二醛
( MDA)采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。
表 1 基础饲粮组成及其营养水平(干物质基础)
T able 1 Compositions and nut rient lev els of basic diet ( DM basis)
成份
Ing redients
含量 Conten ts , %
0~ 3周
( 0~ 3 w eeks)
4~ 7周
( 4~ 7 w eek s)
营养指标
Nutrient param eters
含量 Contents, %
0~ 3周
( 0~ 3 w eek s)
4~ 7周
( 4~ 7 w eeks)
玉米 Corn 55. 83 58. 00 粗蛋白 CP 21. 25 20. 00
大豆油 Soybean oil 4. 46 5. 84 ME Mcal k g- 1 3. 0 3. 1
大豆粕 Soybean meal 31. 04 28. 69 粗纤维 CF 3. 13 3. 02
鱼粉 Fish meal 4. 5 3. 61 粗脂肪 EE 7. 02 8. 41
石粉 Limestone 1. 4 1. 11 钙 Ca 1 0. 9
磷酸氢钙 Dicalacium phosphate 1. 05 1. 26 有效磷 AP 0. 42 0. 43
蛋氨酸 DLMet 0. 2 0. 10 食盐 NaCI 0. 2 0. 15
赖氨酸盐酸盐 LysHC I 0. 15 0. 12 赖氨酸 Lys 1. 29 1. 17
* 预混料 Premix 1 1 蛋氨酸 Met 0. 58 0. 45
食盐 Salt 0. 1 0. 07 蛋氨酸+ 胱氨酸( Met+ Cys ) 0. 91 0. 76
氯化胆碱 Cholin e 0. 26 0. 2
注: * 每千克日粮含:铁 100 mg,铜 8 mg,锰 90 mg,锌 75 m g,碘 0. 45 mg,硒 0. 2 mg;维生素 A 6000 IU ,维生素 D 3 2000 IU,维生素 E 20
IU ;维生素K 3 2 m g,硫胺素 1. 8 mg,泛酸 10 m g,烟酸 32 mg,吡哆醇 3. 5 mg,生物素 0. 15 mg,叶酸 0. 55 mg,维生素 B12 0. 01 mg
Note: * Provided per k g of diet : Fe 100 mg , Cu 8 mg , Mn 90 m g, Zn 40 mg , I 0. 45 mg , S e0. 2mg; VA 6000 IU , VD 3 2000 IU , VE
20 IU, VK 3 2 mg, VB1 1. 8 m g, Calcium pan tothenate 10 m g, Niacin 32 mg, Pyridoxine 3. 5 mg, Biot in 0. 15 m g, Folacin0. 55 mg, VB12
0. 01 mg
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草 地 学 报 第 19卷
2 结果与分析
2. 1 红车轴草异黄酮对肉鸡生长性能的影响
由表2可知,日粮中添加红车轴草异黄酮对前期
( 1~ 4周)肉鸡生长有较大影响,与对照组相比处理
组平均日增重提高 2. 67%( P< 0. 05) , 平均日采食量
和料肉比分别降低了 5. 70% ( P< 0. 05)和 8 21%
( P< 0. 01)。处理组平均日增重和平均日采食量提
高 3. 91%( P< 0. 01)和 2. 55% ( P> 0 01) ,料肉比降
低了 1. 54%( P> 0. 05)。处理组除料肉比低于处理
组( P< 0. 05) ,其余差异不显著。
表 2 红车轴草异黄酮对肉鸡生长性能的影响
Table 2 Effect of Red Clover isoflavone on g rowth perfo rmance o f br oilers
项目
Item
对照组
Cont rol g rou p
处理
Group
处理
Group
1日龄重 One day w eigh t, g 39. 28 1. 16aA 39. 73 1. 35aA 38. 97 1. 54aA
1~ 4周 Age ( 1~ 4 w eek s)
日增重 Daily w eight gain , g 32. 19 1. 32bB 33. 05 1. 01aAB 33. 45 1. 49aA
日采食量( DM) Feed consumpt ion, g 62. 83 5. 14aA 59. 25 6. 1bA 64. 43 7. 86aA
料肉比 Feed conversion rat io 1. 95 0. 08aA 1. 79 0. 13bB 1. 92 0. 15aAB
5~ 7周 Age ( 5~ 7 w eeks)
日增重 Daily w eight gain , g 59. 77 4. 23cB 63. 01 3. 19bA 64. 70 2. 89aA
日采食量 Feed con sumpt ion, g 145. 49 13. 68aA 147. 32 15. 36aA 151. 95 19. 76aA
料肉比 Feed conversion rat io 2. 43 0. 06aA 2. 33 0. 13aA 2. 34 0. 20aA
1~ 7周 Age ( 1~ 7 w eek s)
日增重 Daily w eight gain , g 44. 01 2. 56cB 45. 89 1. 94bA 46. 86 2. 09aA
日采食量 Feed con sumpt ion, g 98. 26 8. 8aA 96. 99 10. 07aA 101. 94 12. 97aA
料肉比 Feed conversion rat io 2. 23 0. 07aA 2. 11 0. 13aA 2. 17 0. 18aA
死淘率 Death and clean ratio 8. 3% ( 5/ 60) 5% ( 3/ 60) 5% ( 3/ 60)
注:同一行不同小写字母表示差异显著( P< 0. 05) ;不同大写字母表示差异极显著( P< 0. 01) ,下同
Note: Different small letters in the same row in dicate s ignifi can t diff erence ( P< 0. 05) ; Different large let ters in the same colum n indicate
signif icant dif f erence( P< 0. 01) , th e same as b elow
肉鸡生长后期( 5~ 7周)处理 组和处理 组
的平均日增重分别比对照组提高 5. 42%和 8. 25%
( P< 0. 01) ,平均日采食量高于对照组, 但差异不显
著;料肉比低于对照组,差异不显著。处理组和处
理组日增重差异显著( P< 0. 05)。从整个肉鸡生
长期来看( 1~ 7周) ,处理和处理 的平均日增重
分别比对照组提高 4. 27%和 6. 48%( P< 0. 01) , 死
淘率降低 3. 3%。平均日采食量高于对照组, 但差
异不显著,料肉比低于对照组,但差异不显著。处理
组日增重低于处理 组 ( P< 0. 05) , 其余指标 2
组间差异不显著。
2. 2 红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官指数的影响
由表 3可知, 日粮中添加红车轴草异黄酮 21 d
后,处理 组和处理 组胸腺指数分别比对照组提
高 35. 65%和 28. 23% ( P< 0. 05) , 在 49 d时,处理
组和处理 组分别高于对照组, 但差异不显著。
21 d时处理 组和处理 组脾脏指数分别比对照
组提高 16. 87% ( P> 0. 05)和 31. 33% ( P< 0. 05)。
对法氏囊指数的影响, 21 d和 49 d 时, 处理 和处
理 均高于对照组,但差异不显著。对免疫器官指
数的影响处理和处理 间差异不显著。
表 3 红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官指数的影响
Table 3 Effect o f Red Clover isoflavone on immune org an indexes o f broiler s
项目
Item
对照组 Cont rol group 处理Group 处理 Group
21 d 49 d 21 d 49 d 21 d 49 d
胸腺指数 T hymus index, g kg- 1 4. 18 0. 38bA 3. 99 0. 39aA 5. 67 0. 43aA 4. 21 0. 19aA 5. 36 0. 62aA 4. 48 0. 32 aA
脾脏指数 Spleen in dex, g kg- 1 0. 83 0. 04bA 1. 10 0. 11aA 0. 97 0. 06abA 1. 21 0. 05aA 1. 09 0. 11aA 1. 09 0. 09 aA
法氏囊指数 Bursa of Fabricius index, g kg- 1 2. 60 0. 30aA 3. 38 0. 45aA 3. 16 0. 25aA 3. 56 0. 30aA 2. 70 0. 26aA 3. 49 0. 27 aA
2. 3 红车轴草异黄酮对血清免疫球蛋白的影响
由表 4可知,处理组的 IgG在 21 d时与对照组
相比无明显差异,在 49 d时处理 组高于对照组和
处理 组( P < 0. 05)。IgM 在 21 d时处理组均显
著高于对照组( P< 0. 05或 0. 01) , 49 d时各组间差
异不显著。
522
第 3期 姜义宝等:红车轴草异黄酮对肉鸡免疫器官、免疫球蛋白及抗氧化性能的影响
表 4 红车轴草异黄酮对肉鸡血清免疫球蛋白的影响
T able 4 Effect of Red Clover iso flav one on Igs in serum of bro ilers ( 490 nm OD)
项目
Item
对照组 Con t rol grou p 处理Group 处理 Group
21 d 49 d 21 d 49 d 21 d 49 d
IgG 0. 33 0. 07 aA 0. 58 0. 03bA 0. 34 0. 04aA 0. 59 0. 03bA 0. 33 0. 03aA 0. 69 0. 04aA
IgM 0. 59 0. 03 bB 0. 57 0. 07aA 0. 93 0. 13aAB 0. 60 0. 07aA 1. 01 0. 09aA 0. 55 0. 05aA
2. 4 红车轴草异黄酮对抗氧化性的影响
由表 5可知,处理组血清 GHSPX 活性高于对
照组,并在 21 d后,处理 组明显高于对照组( P<
0. 05)。在 49 d时处理组与对照组比较血清SOD
活性明显提高( P < 0. 05) , 处理组间差异不显著。
21 d时,处理 组和处理 组 MDA 含量显著低于
对照组( P< 0. 01) , 49 d时,处理组显著低于对照
组和处理组( P< 0. 01或 0. 05)。
表 5 红车轴草异黄酮对肉鸡抗氧化性的影响
Table 5 Effect of Red Clover isof lavone on antiox idation activity o f br oilers
项目
Item
对照组 C on tr ol group 处理Group 处理 Group
21 d 49 d 21 d 49 d 21 d 49 d
GH SPX, U 1270. 18 59. 97bA 1566. 75 214. 16aA 1475. 96 32. 25aA 1584. 16 80. 015aA 1277. 81 38. 64bA 1637. 15 105. 37 aA
SOD, U mL- 1 86. 59 6. 82aA 75. 52 3. 97bA 81. 07 5. 29aA 82. 27 3. 64abA 85. 49 4. 70aA 87. 39 5. 32 aA
M DA, nm ol mL- 1 6. 17 0. 16aA 7. 08 0. 37aA 4. 06 0. 65bB 4. 45 0. 63bB 4. 30 0. 12bB 6. 28 0. 54 aAB
3 讨论
3. 1 红车轴草异黄酮对生长性能的影响
有研究表明黄酮类化合物对动物的生长和生产
性能有较大的影响, 朱宇旌[ 8] 在肉鸡日粮中添加 20
mg kg- 1红三叶异黄酮时,使肉鸡平均体增重提高
了 6. 86%, 10 mg kg- 1剂量组使肉鸡饲料转化率
提高了 4. 6%。Jiang[ 9] 在日粮中添加 10 mg kg- 1
和 20 mg kg- 1大豆黄酮饲喂公鸡, 体重分别增加
13. 6% 和 16. 2% , 采食量也各增加了 7. 37% 和
11 2%。本试验在整个饲养期内处理组和处理
组平均日增重分别比对照组提高 4. 27%和 6. 48% ,
降低了料重肉, 与上述研究结果一致。红车轴草异
黄酮具有植物雌激素的作用, 动物摄食后被胃肠道
代谢,并通过与下丘脑和垂体雌二醇受体结合而干
扰雌二醇的反馈调节, 从而在细胞水平与内源雌激
素竞争雌激素受体,影响下丘脑和垂体的神经内分
泌性腺轴和生长轴, 使睾酮、ICF1和 GH 生成释放
增加,进而加速蛋白质合成,促进肌肉生长[ 6]。
3. 2 红车轴草异黄酮对免疫器官指数和免疫球蛋
白含量的影响
胸腺、法氏囊和脾脏是鸡重要免疫器官, 一般认
为免疫器官重量增加是免疫增强的表现, 免疫器官
重量降低是免疫抑制所致 [ 10] , 饲料中添加大豆黄酮
提高了公鸡和蛋鸡的免疫器官指数,增强机体非特
异免疫和体液免疫[ 11, 12]。本试验日粮添加红车轴
草异黄酮在不同生长时期提高了肉鸡的免疫器官指
数,并且在 21 d时,添加 10 mg kg- 1处理显著提
高了胸腺指数, 20 mg kg - 1处理显著提高了胸腺
指数和脾脏指数, 这意味着免疫系统成熟较快, 加强
了对自身机体的保护。免疫球蛋白能够提高动物机
体抵抗疾病和不良环境的能力, 促进动物的生长和
发育,日粮中添加蜂胶黄酮可调节犊牛血液中 IgG
和 IgM 含量,促进犊牛生长[ 13]。本试验中红车轴草
异黄酮能够影响免疫球蛋白的分泌,在 21 d时 2组
处理均显著提高了血清 IgM 的含量, 20 mg kg- 1
处理显著提高了血清 IgG 含量,表明红车轴草异黄
酮能够增强机体的体液免疫,有利于动物抵抗外界
不良刺激,减少疾病的发生,降低死亡率。芒柄花素
雌激素对免疫有明显的调节作用, 适宜剂量可以直
接作用于免疫器官或免疫细胞上的雌激素受体, 增
强免疫性能[ 14] 。
3. 3 红车轴草异黄酮对抗氧化性能的影响
机体在代谢过程中会产生一些氧自由基,使细
胞原生质膜中的不饱和脂肪酸会发生过氧化作用而
产生 MDA , MDA可进一步与蛋白质、核酸、氨基酸
等活性物质交联, 形成不可溶的化合物,使质膜系统
受到伤害, 从而干扰细胞正常生命活动。SOD 和
GSHPX是机体内清除氧自由基的重要酶,对机体
的氧化与抗氧化平衡起着重要作用, 可保护细胞免
受损伤。杨丽珍[ 15] 指出红车轴草异黄酮通过提高
大鼠体内 SOD 活性, 降低 MDA 浓度,达到提高机
体清除氧自由基能力, 从而有效延缓衰老。本试验
523
草 地 学 报 第 19卷
中红车轴草异黄酮可以维持较高血清抗氧化酶活
性,在 21 d 后, 日粮中添加 10 mg kg- 1处理显著
提高了 GPXPX 含量, 49 d 后, 添加 20 mg kg- 1
处理显著提高了 SOD 含量, 降低 MDA 含量, 这表
明红车轴异黄酮能够清除体内氧自由基, 保护细胞
免受氧化损伤, 对维持机体的健康生长具有十分重
要的作用。红车轴草异黄酮具有较强的抗氧化性与
其结构有关,分子苯环结构上酚羟基是其抗氧化作
用的主要活性基团,通过酚羟基与自由基反应起到
供氢的作用,并生成稳定的半醌式中间体,从而终止
自由基链式反应,异黄酮化合物作为金属螯合剂可
抑制超氧诱导的 Fenton 反应, 减少活性氧的产
生[ 16]。
4 结论
本试验在饲料中添加 10 mg kg - 1和 20 mg
kg
- 1红车轴草异黄酮能够提高血清免疫球蛋白含
量、SOD和 GSHPX 抗氧化酶活性, 降低 MDA 含
量,加速肉鸡生长,并且在添加 20 mg kg- 1时肉鸡
日增长速度最快。试验只是对红车轴草异黄酮在鸡
饲料中添加做了初步探讨, 红车轴草异黄酮在生产
上的诸多用途和作用机制有待进一步研究。
参考文献
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(责任编辑 李美娟)
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