全 文 ：Vol131 , No12
pp1 144 - 149 　Feb1 , 2005作 　物 　学 　报ACTA AGRONOMICA SINICA第 31 卷 第 2 期2005 年 2 月 　144～149 页
SSR荧光标记和银染技术的比较分析
郝晨阳　王兰芬 3 　贾继增　董玉琛　张学勇 3 3
(中国农业科学院作物品种资源研究所 ,农业部作物品种资源与生物技术重点实验室 ,北京 100081)
摘 　要 : 应用多重 PCR 简单重复序列 (SSR)荧光标记分析技术和常规的 SSR 银染技术 ,对北方冬麦区 451 份材料 (中国
小麦初选核心种质的一部分)进行分析 ,用相同材料和引物 ,对这两种方法的检测效果进行评价。用 24 对引物扩增 ,银
染法共检测出 235 个等位变异 ,每个位点检测到的等位变异为 3～20 ,平均为 918 个 ,多态性信息指数 PIC 为 0122～0193 ,
平均 0174 ;而荧光标记可检测到 312 个等位变异 ,每个位点检测到的等位变异为 4～24 ,平均为 1310 个 , PIC 为 0132～
0197 ,平均 0175。荧光技术较银染方法在每个位点上多检测到 3 个等位变异 ,检测效果更为理想 ,更适于进行遗传多样
性分析和研究 ;对两种方法的费用和工作效率做了初步分析 ,表明完成 5 000 ×78 个反应在费用基本持平的情况下 ,微卫
星荧光标记技术的检测效率显著高于银染法 (718 倍) 。同时对微卫星荧光标记技术中低成本、高通量多重 PCR 体系的
建立及 Genescan 317、Genotyper 317 软件数据分析中出现的一些具体问题进行了探讨。
关键词 : 小麦 ; 微卫星 ; 荧光 PCR ; 基因组扫描
中图分类号 : S512 ,Q78
Comparison of Fluorescence and Silver2staining Detection Systems of Microsatellite
Markers
HAO Chen2Yang ,WANGLan2Fen 3 ,J IA Ji2Zeng ,DONG Yu2Chen ,ZHANG Xue2Yong 3 3
( Key Laboratory of Crop Germplasm and Biotechnology , Ministry of Agriculture , Institute of Crop Germplasm Resources , Chinese Academy of Agricultural Sciences ,
Beijing 100081 , China)
Abstract :Four2hundred and fifty2one wheat cultivars from Northern Winter Wheat Region were analyzed by fluorescence
based genescan with multiple PCR microsatellite markers and SSR marker technology based on silver staining1 In the same
cultivars and the same set of SSR primers , the detection efficiency of the two systems was compared1 At 24 loci among 451
accessions , total 235 alleles were obtained and average 918 alleles (from 3 to 20) were detected for every pairs of primers
with silver staining system1 However , average 1310 alleles were detected by fluorescent system1 Three more alleles were
detected averagely by fluorescent system than silver2staining at one locus1 With almost equal cost , the efficiency of
fluorescent system was 718 times of silver staining system without consideration of instrument investment1 Some other
strategies , such as building low2cost and high2throughout multiple PCR system and data analysis using Genescan and
Genotyper procedure were also discussed1
Key words :Wheat ; Microsatellite ; Fluorescence2PCR ; Genome scan
　　微卫星 ( microsatellite ) , 亦称简单重复序列
(simple sequence repeats ,简称 SSRs) , 是指一类由
1～6个核苷酸组成的基序 (motif) 或基本重复单位串
联构成的一段 DNA ,广泛分布于生物体基因组中。
SSR 具有信息含量高、呈共显性遗传 , 检测时 DNA
用量少、操作简便、多态性高、重复性好等特点 ,是一
种极具实用价值的标记技术。20 世纪 90 年代以
来 ,SSR 标记在资源的遗传多样性分析、基因组作图
研究等领域展示出很好的应用潜力[1～3 ] ,已成为研
究种质资源遗传多样性、基因组作图的首选标记。
但在 SSR 标记被广泛应用的同时 ,越来越多的科研
工作者认识到 ,尽管 SSR 这种标记技术操作简便 ,
繱基金项目 : 国家重点基础研究项目 ( G1998010202) 。
作者简介 : 郝晨阳 (1974 - ) ,男 ,山西太谷人 ,博士 ,主要从事小麦种质资源遗传多样性研究。3 王兰芬与郝晨阳对此文有同等贡献。3 3 通讯作者 :张学勇。Tel :010262135294 ,E2mail :xueyongz @mail1caas1net1cn
Received(收稿日期) :2004202216 ,Accepted(接受日期) : 20042052301

实验步骤也不繁琐 ,但在大规模、多批次的数据收集
和分析时仍存在相当大的难度 ,如不同等位变异的
准确识别及不同批次反应数据的统一。笔者在建立
中国小麦核心种质的工作中 ,采用了荧光标记技术 ,
利用 ABI3700 DNA 分析仪 ,实现了数据收集和处理
的自动化 ,克服了银染法的不足。
微卫星荧光标记2全自动基因分析 (3700 DNA
Analyzer)技术采用 FAM、VIC 和 NED 3 种不同颜色
的荧光染料标记微卫星引物 ,将不同荧光标记、扩增
片段长度差异较大的 PCR 产物和标准分子量样品
(内标 ) 在同一泳道中电泳 , 通过毛细管电泳 ,
Genescan 317、Genotyper 317 软件进行图像收集和分
析 ,精确计算出微卫星等位变异扩增片段的大小 ,实
现了 SSR 标记与高效、自动化技术的结合。Huang
等应用类似的技术 ,用 24 对微卫星荧光引物对 998
份小麦材料进行了遗传多样性研究与评价[4 ] ,在国
内尚未见其他相关的报道。
本研究应用多重 PCR 简单重复序列 (SSR) 荧光
标记分析技术和银染技术 ,选用 24 对微卫星引物对
451 份普通小麦材料进行了遗传多样性分析 ,对这
两种方法的检测效果作了比较 ;另外对人们普遍关
注的费用和工作效率做了初步评价 ;同时对微卫星
荧光标记技术中低成本、高通量多重 PCR 体系建立
及 Genescan 317、Genotyper 317 软件数据分析中出现
的一些技术问题进行了探讨。
1 　材料与方法
111 　材料
　　北方冬麦区的 451 份初选核心种质[5 ,6 ] ,2001 年
秋种植于河南省洛阳地区农业科学研究所 ,统一观
察记载。
112 　实验方法及数据处理
本实验选用的 24 对微卫星引物及序列详见表
1 ,引物的所有资料来源于 R¨oder 等[2 ] 。银染方法参
照 Bassam et al1 [7 ] 。下面重点介绍基于银染和荧光
微卫星标记的实验流程及数据分析方法。
表 1 SSR引物的编号及序列
Table 1 Catalog No , repeat motif of SSR primers
引物
Primer
所在染色体
Chr. location
退火温度
Tm ( ℃)
重复单元
Repeat motif
引物序列 (左)
Primer sequence (left)
引物序列 (右)
Primer sequence (right)
Xgwm130 7A 60 ( GT) 22 AGC TCT GCT TCA CGA GGA AG CTC CTC TTT ATA TCG CGT CCC
Xgwm149 4B 55 ( GA) 23 CAT TGT TTT CTG CCT CTA GCC CTA GCA TCG AAC CTG AAC AAG
Xgwm155 3A 60 (CT) 19 CAA TCA TTT CCC CCT CCC AAT CAT TGG AAA TCC ATA TGC C
Xgwm161 3D 60 (CT) 15 GAT CGA GTG ATG GCA GAT GG TGT GAA TTA CTT GGA CGT GG
Xgwm182 5D 60 (CT) 18 TGA TGT AGT GAG CCC ATA GGC TTG CAC ACA GCC AAA TAA GG
Xgwm186 5A 60 ( GA) 26 GCA GAG CCT GGT TCA AAA AG CGC CTC TAG CGA GAG CTA TG
Xgwm194 4D 50 (CT) 32 GAT CTG CTC TAC TCT CCT CC CGA CGC AGA ACT TAA ACA AG
Xgwm261 2D 55 (CT) 21 CTC CCT GTA CGC CTA AGG C CTC GCG CTA CTA GCC ATT G
Xgwm292 5D 60 (CT) 38 TCA CCG TGG TCA CCG AC CCA CCG AGC CGA TAA TGT AC
Xgwm294 2A 55 ( GA) 9TA( GA) 15 GGA TTG GAG TTA AGA GAG AAC CG GCA GAG TGA TCA ATG CCA GA
Xgwm3 3D 55 (CA) 18 GCA GCG GCA CTG GTA CAT TT AAT ATC GCA TCA CTA TCC CA
Xgwm304 5A 55 (CT) 22 AGG AAA CAG AAA TAT CGC GG AGG ACT GTG GGG AAT GAA TG
Xgwm333 7B 55 ( GA) 19 GCC CGG TCA TGT AAA ACG TTT CAG TTT GCG TTA AGC TTT G
Xgwm413 1B 60 ( GA) 18 TGC TTG TCT AGA TTG CTT GGG GAT CGT CTC GTC CTT GGC A
Xgwm415 5A 55 ( GA) 25 GAT CTC CCA TGT CCG CC CGA CAG TCG TCA CTT GCC TA
Xgwm428 7D 60 ( GA) 22 CGA GGC AGC GAG GAT TT TTC TCC ACT AGC CCC GC
Xgwm429 2B 50 (CT) 25 TTG TAC ATT AAG TTC CCA TTA TTT AAG GAC CTA CAT GAC AC
Xgwm46 7B 60 ( GA) 2 GC( GA) 33 GCA CGT GAA TGG ATT GGA C TGA CCC AAT AGT GGT GGT CA
Xgwm513 4B 60 (CA) 12 ATC CGT AGC ACC TAC TGG TCA GGT CTG TTC ATG CCA CAT TG
Xgwm570 6A 60 (CT) 14 ( GT) 18 TCG CCT TTT ACA GTC GGC ATG GGT AGC TGA GAG CCA AA
Xgwm583 5D 60 (CA) 27 TTC ACA CCC AAC CAA TAG CA TCT AGG CAG ACA CAT GCC TG
Xgwm645 3D 55 (CT) 23 TGA CCG GAA AAG GGC AGA GCC CCT GCA GGA GTT TAA GT
Xgwm82 6A 60 unknown ACGTTAGAAGGTGCAATGGG AGTGGATGCACCGACTTTG
Xgwm95 2A 60 (AC) 16 GAT CAA ACA CAC ACC CCT CC AAT GCA AAG TGA AAA ACC CG
11211 　SSR 标记银染分析
1121111 　DNA 提取 　　采用酚2氯仿法[8 ,9 ] 。 1121112 　PCR 扩增 　　PCR 反应采用 25μL 反应体系 ,在 PTC2225 (MJ1 Research , Inc) 上进行。模板
541　第 2 期 郝晨阳等 :SSR荧光标记和银染技术的比较分析 　　　

DNA(20 ngΠμL) 4μL ,10 ×PCR buffer 215μL ,Mg2 + (25
mmolΠL) 210μL , Taq 酶 (5 UΠμL) 012μL ,dNTP (25
mmolΠL) 012μL , SSR 引物 (2 μmolΠL) 3 μL , ddH2O
1311μL。反应试剂购自 Promega 上海分公司和北京
鼎国公司。
PCR 反应程序 (以退火温度 55 ℃为例)为 94 ℃5
min、94 ℃1 min、55 ℃1 min、72 ℃1 min、Go to step 2
35 个循环、72 ℃5 min ,4 ℃保存待用。
1121113 　扩增产物的检测 　　PCR 扩增产物中加
入 6～10μL Loading buffer (98 %甲酰氨 ,pH 810、10
mmolΠL EDTA , 0125 %溴酚蓝 , 0125 %二甲苯青 ) ,
95 ℃变性 5 min ,冰上冷却 ,在 6 %的聚丙烯酰胺凝胶
上电泳 50 min 左右 (80W 恒功率 ,不含预电泳 30
min) 。银染检测扩增产物[7 ] 。
1121114 　数据分析方法 　　每个样品 SSR 的扩增
谱带按有无分别赋值 1、0。不同引物对的扩增效果
用多态性信息指数 ( PIC) 表示 , PIC = 1 - ∑pi 2 ,其
中 ,“pi”为任一引物对第 i 个等位变异在所有供试
材料中出现的频率。
11212 　基于荧光标记的 SSR 技术
1121211 　多重 PCR 扩增 　　根据荧光标记引物的
颜色、扩增产物分子量大小及退火温度 ,对引物选择
组合 ,每组引物的数量一般为 4～6 对 ,相同颜色的
引物选择 1～2 个且兼顾具有相同退火温度的原则 ,
组成不同的引物组合 ,对所有材料进行扩增。
PCR 反应体系总体积为 15μL ,其中 DNA 模板
(20 ngΠμL) 2μL ,10 ×PCR buffer (含 20 mmolΠL Mg2 + )
115μL ,dNTP (25 mmolΠL) 0112μL , Taq 酶 (2 UΠμL)
013μL ,单个荧光引物 (2μmolΠL) 1μL ,ddH2O 10108
μL。在实际操作中 ,应根据电泳结果 (峰图的高
低) ,调整 DNA 模板和荧光引物的用量 ,摸索出最佳
扩增反应体系。
PCR 反应程序 :基本与银染体系相同 ,退火温度
略有提高、增加延伸时间。
1121212 　扩增产物的纯化 　　毛细管电泳对 DNA
的纯度要求非常严格 ,应尽量去净残留的盐分、蛋白
质 ,残留的去污剂 (SDS等)及残留的 RNA。
1121213 　扩增产物的检测 　　在 96 孔板的每个孔
中分别加 1μL 纯化的 PCR 产物 ,9μL 甲酰胺和 0118
μL 内标 , 3 000 rΠmin 离心 1 min ;然后 95 ℃变性 5
min ,置冰上 10 min ,离心后用 ABI3700 进行毛细管
电泳。
1121214 　数据分析 　　待电泳完毕 ,对样品的原始
数据用 Genescan 317 和 Genotyper 317 两套软件共同
完成分析任务。用基因扫描程序 Genescan 进行 SSR
原始数据扫描与分析 ,统计 96 个泳道的空道数 ,并
计算每板样品的通过率 (成功率) ,作为检验与校正
仪器电泳效果的依据。一般应将无峰样品的比例控
制在 5 %以内。在峰图扫描过程中 ,将 Genescan 317
程序的两大参数 Size Standard 和 Parameters 分别设置
为 GS50022501szs 与 GS500Analysis1gsp。然 后 用
Genotyper 317 软件对数据进一步分析 ,从而确定不
同样品扩增片段的长度 (单位 : bp) 。对分析的全部
样品而言 ,一些品种扩增产物的变异会超出设定的
预计范围 ,需要对 Genotyper 程序得到的部分数据加
以校正。数据的获得及处理流程如图 1 所示。
图 1 数据获得及处理流程
Fig11 Working chart for data obtaining and processing
2 　结果与分析
211 　SSR荧光法与银染法检测效果的比较
　　在利用银染法分析时 ,不同样品 DNA 的片段大
小 ,要用银染后的带谱与已知分子量的 Marker 作比
较才能获得 (图 2) 。因而 ,同一胶板上所有样品带
谱间相对位置的识别 ,以及不同胶板得到的 SSR 数
据的统一给数据收集和分析带来很大的困难 ,在分
析的材料和位点较多时 ,成为制约数据准确性的主
要因素。因此 ,小麦核心种质的构建工作采用了多
重 PCR 微卫星荧光标记技术 (图 3) ,这种方法通过
Genescan 和 Genotyper 程序的分析 ,可以自动读出目
标 DNA 片段的大小 ,克服了银染法的不足。
641 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

图 2 银染后的 SSR图谱
Fig12 SSR profile after silver staining
图 3 Genotyper 317 软件分析的部分数据
Fig13 SSR profile in ABI3700 processed by Genotyper 317 software
Xgwm635 ( Ⅰ)和 Xgwm219 ( Ⅱ)两位点上扩增的不同等位变异 , Xgwm635 为双位点引物。
Ⅰand Ⅱshow different alleles in the loci Xgwm635 ( Ⅰ) and Xgwm219 ( Ⅱ) 1 Xgwm635 is a two2loci primer1
　　应用多重 PCR 简单重复序列 (SSR) 荧光标记片
段分析技术和 SSR 银染检测技术 ,选用 24 对引物对
北方冬麦区 451 份材料 (中国小麦初选核心种质的
一部分) 进行了扩增和对比分析 (表 2) 。银染法共
检测到 235 个等位变异 ,每个位点的等位变异范围
为 3～20 ,每对引物的平均等位变异为 918 个 ,多态
性信息指数 PIC 范围为 0122～0193 ,平均 0174 ;荧光
标记检测到 312 个等位变异 ,每个位点的等位变异
范围为 4～24 ,平均 13 个 , PIC 范围为 0132～0197 ,
平均 0175。说明荧光技术较银染方法在每个位点
上多检测到 3 个等位变异 ,具有更高的灵敏性 ,更适
于进行遗传多样性分析和研究。
212 　银染法和荧光法检测成本及效率比较
对银染法和荧光法的成本及其工作效率做了比
较 (表 3) 。在不考虑仪器成本的前提下 ,银染法与
荧光法完成一个 SSR 反应的试剂费用分别为 1131
元、1160 元。因此 ,单纯从药品消耗估计经费预算 ,
荧光法高于银染法。但由于微卫星荧光标记技术高
度自动化 ,其检测效率显著高于银染法。在本文的
实验规模和操作系统下 ,它的工作效率是银染法的
718 倍。再考虑到工资成本 ,实际上荧光标记技术
较银染法更为经济。
741　第 2 期 郝晨阳等 :SSR荧光标记和银染技术的比较分析 　　　

表 2 两种检测体系效果的比较(同一套材料、同一套引物)
Table 2 Comparison of the two detection systems at the same SSR loci in the same set cultivars
引　物
Primer
荧光检测　Fluorescence 银染检测　Silver2staining
等位变异数
Allelic No1 多态性信息指数PIC 片段范围Size distribution (bp) 等位变异数Allelic No1 多态性信息指数PIC 片段范围Size distribution (bp)
Xgwm130 17 0146 100 - 136 6 0167 110 - 140
Xgwm149 15 0170 149 - 179 6 0174 140 - 177
Xgwm155 15 0177 116 - 152 11 0180 122 - 149
Xgwm161 7 0159 149 - 171 8 0173 148 - 172
Xgwm182 11 0188 148 - 172 7 0173 156 - 187
Xgwm186 22 0196 112 - 160 18 0187 106 - 178
Xgwm194 6 0169 129 - 143 5 0179 129 - 136
Xgwm261 20 0188 160 - 210 10 0184 162 - 209
Xgwm292 12 0187 200 - 222 12 0186 197 - 223
Xgwm294 11 0170 78 - 110 11 0174 77 - 110
Xgwm3 6 0162 76 - 86 6 0160 76 - 87
Xgwm304 22 0180 192 - 238 16 0189 194 - 225
Xgwm333 10 0172 140 - 164 8 0177 138 - 166
Xgwm413 12 0193 82 - 116 8 0178 87 - 107
Xgwm415 4 0146 130 - 136 3 0148 129 - 138
Xgwm428 10 0197 124 - 142 9 0185 125 - 147
Xgwm429 16 0184 195 - 225 14 0183 189 - 221
Xgwm46 24 0178 142 - 190 18 0186 141 - 189
Xgwm513 7 0188 141 - 155 4 0173 140 - 152
Xgwm570 13 0194 130 - 154 11 0183 129 - 155
Xgwm583 11 0171 148 - 174 9 0183 155 - 182
Xgwm645 22 0188 138 - 180 20 0193 139 - 178
Xgwm82 7 0132 144 - 158 5 0122 147 - 160
Xgwm95 12 0165 107 - 141 10 0148 106 - 142
变异 Variance 4 - 24 0132 - 0197 3 - 20 0122 - 0193
平均 Average 13 0175 918 0174
表 3 银染法和荧光法检测 5000 份样品、78 个位点所需成本与工作效率的比较
Table 3 Comparison of cost and work efficiency for 5000×78 reactions by silver2staining system and fluorescence system
项目 Items 银染方法 Silver2staining 荧光标记 3 Fluorescence
Taq 酶 (元) Taq DNA polymerase (RMB  ) 1120 0112
SSR 引物 (元) SSR primer (RMB  ) 0105 0101
丙烯酰胺 (元) Acrylamide (RMB  ) 0103 0100
甲叉双丙烯酰胺 (元) Bis2acrylamide (RMB  ) 0101 0100
硝酸银 (元) Silver nitrate (RMB  ) 0103 0100
甲酰胺 (元) Formamide (RMB  ) 0100 0103
内标 (元) Marker (RMB  ) 0100 0139
Pop26 胶 (元) Pop26 gel (RMB  ) 0100 0168
Buffer (3700 DNA Sequencer) (元) Buffer (RMB  ) 0100 0129
进口 PCR 96 孔板 (元) PCR plank (RMB  ) 0100 0108
单一反应试剂成本 (元) Cost of single reaction (RMB  ) 1131 1160
5000 ×78 反应试剂成本 (元) Cost of total reactions (RMB  ) 51109 ×104 62140 ×104
6 人每天所能完成的反应数 (个) No1 of finished reaction 400 3072
所需天数 Time needed(d) 975 (2170 年) 126 (0135 年)
折合人年 Person2years needed 1612 211
所需工资成本 (元) Payment needed (RMB  ) 112 ×1612 (19144) ×104 112 ×211 (2152) ×104
总成本 (元) Total cost (RMB  ) 70153 ×104 64192 ×104
　　注 :试剂成本为单一反应所需成本 ; 3 :4 对引物Π反应。
Note : Reagent cost is the cost of single reaction ; 3 : Four primers Πreaction1
　　另外 ,常规的微卫星标记 ,数据收集完全依赖于
人工 ,同一胶板不同等位变异的校对和胶板间数据
的统一是一项量大而复杂的工作。而微卫星荧光标
记技术由于其高度智能化的特点 ,在数据收集、处理
上采用 Genescan 和 Genotyper 软件分析 ,不仅使工作
效率大大提高 ,数据也更加准确。
3 　讨论
311 　多重 PCR体系的建立
　　建立一套理想的多重 PCR 反应体系 , 是保证微
卫星荧光标记实验成功及获得准确数据的关键。在
实际操作中 ,首先应考虑荧光引物的分组与搭配问
题 ,在同一组合里 ,相同颜色标记的引物之间扩增产
物大小相差应在 50 bp 以上 ,以避免不同位点之间
产生混淆 ,每组合引物的数量不得超过 6 对 ;其次是
依据峰图的高低 ,不断优化 PCR 扩增体系 ,主要是
通过调整模板 DNA 和荧光引物的用量 ,摸索出低成
本、高通量、杂带少的反应体系。
312 　精确实验数据的获得
实验数据的准确程度直接影响到研究结论的可
841 　　　　作 　　物 　　学 　　报 第 31 卷 　

靠性。在应用多重 PCR 简单重复序列荧光标记片
段分析技术对中国北方冬麦区 451 份材料完成扩
增 ,得到完整数据后 ,笔者认为 ,该项技术在实验数
据的精确程度方面 ,主要有两个制约因素。一方面
要建立低成本、杂带少的有效的多重 PCR 体系 ,这
个问题上面已经探讨。可以说 ,只有摸索出行之有
效的多重 PCR 实验体系 ,才能得到理想的峰图 ,才
能使 Genotyper 317 软件更加精确地分析出扩增片段 大小 ;另一方面就是实验人员对所选用引物扩增产物分子量变化范围的熟悉程度 ,如若对其估计偏大或偏小 ,就会出现软件对峰型好但非目标片段的图峰进行取值 ,或遗漏掉峰型好又属于本样品的峰值。当然 ,不可否认 ,对于不同类型图峰的识别与取值是一个比较复杂的工作 (图 4 ,箭头所示为读取的峰型) ,面对如此丰富的峰型 ,读取峰值总的原则就是根据峰的高低 ,再考虑引物是否为多位点扩增。
图 4 Genescan 程序扫描的部分样品
Fig14 Scanning for some samples using Genescan procedure
313 　微卫星荧光标记技术的可行性分析
在北方冬麦区 451 份材料分析的基础上 ,结合
中国小麦核心种质构建工作 ,大量实验说明微卫星
荧光标记技术较银染法检测效果更为理想。在实验
费用相差无几的情况下 ,工作效率却大大提高 ,这也
说明分子标记技术正向着简便、快捷、实用、低成本、
高通量、智能化的方向发展。需要强调的是 ,正因为
微卫星荧光标记检测效率的空前提高 ,科研工作者
在采用该项技术时就要重点考虑分析样品的数量问
题 ,若要对数以千计的材料进行全基因组扫描或遗
传多样性分析 ,该项技术是行之有效、比较理想的标
记体系。在分析的材料和位点很少时 ,银染法不失
为一套经济有效的检测体系 ,因为普通引物的合成
比荧光标记引物的合成要便宜许多倍 ,而且适宜长
期保存和利用 ,而后者只能保存半年至一年。
总而言之 ,多重 PCR 简单重复序列 (SSR) 荧光
标记片段分析技术在作物核心种质构建中的应用 ,
使机器自动收集、分析数据代替了银染方法的人工
读取胶板的繁琐工作 ,在很大程度上降低了系统误
差 ,同时提高了工作效率 ,为大规模开展基因组扫描
或基因型分析提供了可能。
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