全 文 ：第 29 卷 第 1 期 作　物　学　报 V o l. 29, N o. 1
2003 年 1 月　 25～ 30 A CTA A GRONOM ICA S IN ICA pp. 25～ 30　 Jan. , 2003
小麦硬度主效基因 P ina 和 P inb 的克隆和序列分析Ξ
夏兰芹1　何中虎1, 2, 3 　陈新民1　张庆祝1　周　阳1
(1中国农业科学院作物育种栽培研究所, 国家小麦改良中心, 北京 100081; 2国际玉米小麦改良中心中国办事处, 北京 100081)
摘　要　籽粒硬度是小麦品质改良的重要目标性状。根据已报道的谷类作物中硬度主效基因 P ina 和 P inb 的DNA 序
列, 设计了两对简并引物, 以我国软质小麦品种京 411 基因组DNA 为模板, 进行 PCR 扩增, 分别获得了约 450 bp 的
P ina 和 P inb 基因的全长特异性片段。将其克隆到 pGEM 23Zf (+ ) 上, 重组子和酶切鉴定正确后, 进行序列测定和分
析。结果表明, 与国外已克隆的软质小麦H eron 中 P ina 基因相比较, 京 411 中 P ina 与其核苷酸同源性为 98. 9% , 氨
基酸的同源性为 98% , 其全长为 447 bp , 编码 149 个氨基酸残基, 具有谷类作物中 P ina 所特有 19 个氨基酸的信号肽
序列和WW KWW K 的色氨酸结构域。同样, 与国外已克隆的软质小麦H eron 中 P inb 基因相比较, 京 411 中 P inb 与其
核苷酸同源性为 99. 8% , 氨基酸的同源性为 99. 3% , 其全长为 447 bp , 编码 149 个氨基酸残基, 具有谷类作物中 P inb
所特有 19 个氨基酸的信号肽序列和 KWW K 的色氨酸结构域。硬度主效基因的分离克隆为进行我国小麦品种硬度的
基因工程改良奠定了基础。
关键词　小麦; 籽粒硬度; 基因克隆; 色氨酸结构域
中图分类号: S512　　　文献标识码: A
Clon ing and Sequence Ana lys is of P ina and P inb Genes Con troll ing Gra in Hard-
ness in Comm on W hea t
X IA L an2Q in1　H E Zhong2H u1, 2　CH EN X in2M in1　ZHAN G Q ing2Zhu1　ZHOU Yang1
(T he Institu te of C rop B reed ing and Cu ltiva tion, Ch inese A cad emy of A g ricu ltu ra l S ciences, T he N ationa l W hea t Imp rovem en t Cen ter, B eij ing
100081; C IM M Y T Ch ina Of f ice, B eij ing 100081, Ch ina)
Abstract　Grain hardness is one of the m o st im po rtan t characters in w heat qua lity im p rovem en t. Based on
the hom o logues of P ina and P inb genes, w h ich are m ajo r genes con tro lling the gra in hardness in cerea l
crop s, tw o pairs of degenera te p rim ers w ere designed. T he specif ic fragm en ts of abou t 450 bp in size w ere
ob ta ined, respect ively, after PCR am p lif ica t ion u sing the genom ic DNA of w heat variety J ing411 as tem 2
p la te. T hen they w ere cloned in to vecto r pGEM 23Zf (+ ) , and sequenced after the iden t if ica t ion of the re2
com b inan ts and endonuclease ana lysis. T he resu lts ind ica ted tha t, com pared w ith the P ina gene from
w heat variety H eron, the P ina gene in J ing411 shared 98. 9% and 98% hom o logy in nucleo t ide acid se2
quence and am ino acid sequence, respect ively. T he w ho le leng th of P ina gene w as 447 bp , encoding 149
am ino acid residues, having the signa l pep t ide of 19aa and the tryp tophan2rich dom ain (WW KWW K )
w h ich are specif ic to P ina gene in cerea l crop s. Sim ila rly, the P inb gene shared 99. 8% and 99. 3% ho2
m o logies in nucleo t ide acid sequence and am ino acid sequence respect ively com pared w ith the cloned P inb
gene in soft w heat variety H eron. T he w ho le leng th of P inb gene w as 447 bp , encoding 149 am ino acid
residues, having the signa l pep t ide of 19aa and the tryp tophan2rich dom ain (KWW K) w h ich w ere specif ic
to P inb gene in cerea l crop s. T he iso la t ion of P ina and P inb gene la id a fundam en ta l basis fo r fu rther im 2
p rovem en t of the gra in hardness of w heat variety th rough genet ic engineering.
Key words　W heat; Gra in hardness; Gene clon ing; T ryp tophan2rich dom ain
基金项目: 国家自然科学基金 (39930110)、863 项目 (2001AA 241031)和 948 重大农业国际合作项目的资助, 特此感谢。
作者简介: 夏兰芹 (19662) , 女, 博士, 副研究员, 主要从事植物基因克隆和转基因植物研究。
　 3 通讯联系人: 电话: 010268918547, E2m ail: zhhe@public3. b ta. net. cn
Received on (收稿日期) : 2002202227, A ccep ted on (接受日期) : 2002206207

　　籽粒硬度是小麦品质改良的重要目标性状之
一, 是决定小麦品质优劣、贸易价格和最终用途的
重要指标[ 1 ]。硬度由一个主效基因 (H a)和一些微效
基因控制。主效基因呈显性遗传, 位于染色体 5D
短臂上[ 2 ] , 微效基因位于染色体 5A 和 5D 短臂
上[ 3 ]。H a 编码一个 15 kD 的蛋白复合体, 此复合体
位于糊粉层, 由两个蛋白多肽 pu ro indo line a
(P ina) 和 pu ro indo lineb (P inb) 按 1∶1 比例组成,
两者同源性高达 60% [ 4, 5 ]。它们和淀粉表面易于结
合, 从而影响硬度[ 6, 7 ]。到目前为止, 国外已分离克
隆了大麦、燕麦、黑麦、山羊草和小麦中的 P ina 和
P inb 基因[ 8 ]。研究表明, P ina 基因和 P inb 基因为
小麦族植物特有。在谷类作物中, P ina 基因和
P inb 基因的同源性分别高达 85% 和 90% 以上, 它
们不含内含子, 所编码的蛋白统称为 Indo lines, 是
一类对脂类物质具有较高亲和力的类脂膜蛋白, 其
分子量大约为 13 kD , 含有五个二硫键, 并含有信
号肽, 其类脂结合区域是一个富含色氨酸的结构
域[ 8 ]。研究发现, P ina 基因 (P ina2D ) 不表达或
P inb (P in2D la)的第 46 位氨基酸由甘氨酸突变为丝
氨酸或第 44 位氨基酸由色氨酸突变为精氨酸
(P inb2D ld)或第 60 位亮氨酸突变为脯氨酸 (P inb2
D lc) 及第 39、44 和 56 位氨基酸由色氨酸突变为终
止密码子, 都会导致籽粒表现为硬质[ 6, 7, 9 ]。Kon2
du ru 等 (2001) 利用 P ina 和 P inb 基因转化不含有
此基因的水稻, 转基因水稻的籽粒质地发生变化,
证明了 P ina 和 P inb 基因改变籽粒硬度的功
能[ 10 ]。　　　　　
对硬度的研究在我国尚未引起足够的重视, 分
子生物学研究尚属空白。目前, 我国生产上推广种
植的中优 9507、京 9428 和内乡 188 等优质小麦品
种, 它们的蛋白质含量和面筋强度均达到一级面包
小麦水平, 只是因为其硬度不够, 大大降低了其加
工品质和商业价值。通过常规育种方法很难在短时
间内获得硬质、高蛋白、强筋的优质面包小麦品
种。本研究根据谷类作物中 P ina 和 P inb 基因的保
守序列, 利用保守序列 PCR 克隆的方法, 分离克隆
了我国小麦品种京 411 中 P ina 和 P inb 基因, 旨在
为进一步通过基因工程方法改良我国小麦品种的籽
粒硬度奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　菌株和质粒
受体菌为大肠杆菌 JM 109, 克隆及测序载体为
pGEM 23Z2f (+ )。
1. 2　植物材料
软质小麦京 411 由本课题组保存。
1. 3　试剂与内切酶
限制性内切酶和 T 4DNA 连接酶购自B io lab 公
司, 其它试剂均购自经科公司。
1. 4　引物设计与合成
比较已报道的谷物作物中硬度主效基因 P ina
和 P inb 的氨基酸序列, 根据保守区域, 设计了两
对简并引物, 同时为了方便于克隆, 在引物两端分
别添加了酶切位点。其中
P ina 上游引物 (加B am H É 位点)为:
5′2CGGGA TCCAA CA T GAA GöT GCCCTCT ö
A TCCTCA TA G,
P ina 下游引物 (加 E coR É 位点)为:
5′2CGGAA T TCCA TCA öGCCA GTAA TA ö
T GCCAA TA GT GC;
P inb 上游引物 (加 Kp nÉ 位点)为:
5′2GGGGTA CCCA T öA GAA GA CCT TA T ö
GTCCTCCTA GC,
P ina 下游引物 (加 E coR É 位点)为:
5′2CGGAA T TCCA T öA 2
CA CCA GTAA TA GCCöGA CTA GG;
以上引物由上海博亚生物技术有限公司合成。
1. 5　D NA 提取
质粒DNA 提取按《分子克隆实验指南》方法进
行[ 11 ]。小麦基因组 DNA 提取按 D evo s 和 Sharp
(1992)的方法, 略有改动[ 12 ]。
1. 6　PCR 扩增
采用高保真的 Pfu DNA 聚合酶进行 PCR 扩
增。PCR 扩增条件为 95℃变性 1 m in 后, 然后进行
PCR 循环: 94℃ 30s, 65℃ 1 m in, 72℃ 1 m in, 共
进行 35 个循环, 然后 72℃延伸 10 m in。
1. 7　PCR 产物的克隆与测序
扩增特异性产物经 1% 琼脂糖凝胶电泳分离
后, 回收预期大小的目的条带, P ina 基因的特异性
片段经 E coR É 和B am H É 酶切, P inb 基因的特异
性片段经 E coR É 和 Kp n É 酶切。酶切产物经酚:
氯仿抽提, 乙醇沉淀后, 溶解在超纯水或 T E
buffer 中备用。然后与 pGEM 23Z2f (+ )相应的酶切
大片断于 16℃连接过夜, 转化 JM 109 感受态细胞,
经选择性培养基培养, 挑选白斑重组子进行酶切鉴
定和序列分析。
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2　结果与分析
2. 1　P ina 基因的克隆和鉴定
以京 411DNA 为模板, 利用所设计的 P ina 基
因简并引物, 扩增得到了大小约 450 bp 的特异性
片段, 与预期相符 (图 1)。经片段回收, E coR É 和 B am H É 酶切, 电泳纯化, 然后克隆到 pGEM 23Zf(+ ) 的 E coR É 和B am H É 酶切大片段上, 蓝白斑筛选阳性重组子 pGEM Pa, 进一步分别利用 E coRÉ 和B am H É 进行单酶切和双酶切鉴定, 确定重组子中含有目的片段 (图 2) , 然后进行测序。
图 1　　小麦硬度主效基因 P ina 的特异扩增结果
1. PCR m arker　2～ 7. P ina 基因的特异
性扩增　8. 1 kb ladder
F ig. 1　　T he specific PCR p roducts of P ina gene, one
of the m ajo r genes contro lling grain hardness
lane 1: PCR m arker; lane　2～ 7: the specific PCR
amp lification p roducts of P ina gene;
lane　8: 1 kb ladder
　图 2　　重组子 pGEM Pa 酶切鉴定图
1. 1 kb ladder　2. pGEM 23Z 经 E coR É 和B am H É 双酶切
3～ 6. pGEM Pa 分别经 E coR É 和B am H É 单酶切　7～ 8.
pGEM Pa 经 E coR É 和B am H É 双酶切　9. PCR m arker
F ig. 2　　 Iden tification of the recom binants
pGEM Pa by restrict ion endoenzym e analysis
L ane 1: 1 kb ladder; lane　2: pGEM 3Z digested w ith E coR É and
B am H É , L ane　3～ 6: pGEM Pa digested w ith E coR É o r B am H É
respectively; L ane　7～ 8: pGEM Pa digested w ith E coR É o r
B am H É L ane　9: PCR m arker
2. 2　P ina 基因的序列测定和分析
P ina 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序
列如图 3 所示。序列分析结果表明, P ina 基因全长
447 bp , 编码 148 个氨基酸, 具有谷物作物中 P ina
基因所普遍具有的 19 个氨基酸的信号肽序列、与
脂类易于结合的色氨酸结构域 (WW KWW K) 和 10
个半胱氨酸所形成的 5 个二硫键结构。与国外已克
隆的软质小麦 H eron 中 P ina 基因相比较, 京 411
中 P ina 与其核苷酸同源性为 98. 9% , 氨基酸的同
源性为 98% , 有 5 处发生了单个碱基的替换。在这
5 个碱基的替换中, 其中 3 个为同义突变, 两个为
错义突变, 致使 111 位氨基酸由苯丙氨酸 (F ) 突变
为亮氨酸 (L ) , 136 位氨基酸由脯氨酸 (P) 突变为组
氨酸 (H ) , 但并未影响小麦质地。
2. 3　P inb 基因的克隆和鉴定
以京 411DNA 为模板, 利用所设计的 P inb 基
因简并引物扩增, 得到了大小约 450 bp 的特异性
片段, 与预期相符 (图 4)。经片段回收, E coR É 和
Kp n É 酶切, 电泳纯化, 然后克隆到 pGEM 23Zf (+ ) 的 E coR É 和 Kp nÉ 酶切大片段上, 蓝白斑筛选阳性重组子 pGEM Pb, 进一步利用 E coR É 和Kp nÉ 分别进行单酶切和双酶切鉴定, 确定重组子中含有目的片段 (图 5) , 然后进行测序。2. 4　P inb 基因的序列测定和分析P inb 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列如图 6 所示。序列分析结果表明, P inb 基因全长447 bp , 编码 148 个氨基酸, 具有谷物作物中 P inb基因所普遍具有的 19 个氨基酸的信号肽序列、与脂类易于结合的色氨酸结构域 (KWW K) 和 10 个半胱氨酸所形成的 5 个二硫键结构。与国外已克隆的软质小麦 H eron 中 P inb 基因相比较, 京 411 的P inb 与其核苷酸同源性为 99. 8% , 氨基酸的同源性为 99. 3% , 有一处发生了单个碱基的替换, 并为错义突变, 使其第 46 位氨基酸由甘氨酸 (G)突变为丝氨酸 (S) , 与国外报道的硬质小麦 Cheyenne 中P inb 基因的突变类型完全一样, 但并未影响小麦的质地。
721 期　　　　　　　　　　　夏兰芹等: 小麦硬度主效基因 P ina 和 P inb 的克隆和序列分析　　　　　　　　　　　　　

图 3　　京 411 中 P ina 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列
(氨基酸用单字母表示, 方框内表示信号肽序列, 下划线表示色氨酸结构域, 阴影表示半胱氨酸,
FöL 和 PöH 分别表示由 F 和 P 突变为L 和H。)
F ig. 3　　T he nucleo tide sequence and its deduced am ino acid sequence of P ina gene in J ing 411 w heat variety
(T he am ino acid are rep resen ted by one letter; T he signal pep tide are m arked w ith box; T he tryp tophan2rich dom ain are
underlined; Cystines are shadow ed; FöL and PöH indicate that F and P are m utated in to L and H respectively)
图 4　　小麦 P inb 基因的全长特异性片段的扩增结果
1～ 4. P inb 基因的全长特异性
扩增片段　5. PCR m arker
F ig. 4　　T he specific PCR p roducts of P inb gene,
one of the m ajo r genes contro lling grain hardness
lane 1～ 4: the specific PCR amp lification
p roducts of P inb gene; lane　5: PCR m arker
　
图 5　　重组子 pGEM Pb 的酶切鉴定结果
1. 1 kb ladder　2～ 3. pGEM Pb 分别经 E coR É 和 Kp nÉ 单酶切
4. pGEM Pb 分别经 E coR É 和 Kp nÉ 双酶切　5. PCR m arker
F ig. 5　　 Iden tification of the recom binants pGEM Pb by
restrict ion endoenzym e analysis
L ane 1: 1 kb ladder; lane 2～ 3: pGEM Pb digested w ith E coR É o r
Kp nÉ respectively, L ane　4: pGEM Pb digested w ith E coR É
and B am H É L ane　5: PCR m arker
82　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　作　　物 　　学　　报　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　29 卷

图 6　　京 411 中 P inb 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列
(氨基酸用单字母表示, 方框内表示信号肽序列, 下划线表示色氨酸结构域, 阴影表示半胱氨酸, GöS 表示由 G 突变为 S。)
F ig. 6　　T he nucleo tide sequence and its deduced am ino acid sequence of P inb gene in J ing 411 w heat variety
(T he am ino acid are rep resen ted by one letter; T he signal pep tide are m arked w ith box; T he tryp tophan2rich
dom ain are underlined; Cystines are shadow ed; GöS indicate that G is m utated in to S)
3　讨论
Giroux 等认为, 硬质小麦 Cheyenne 的质地变
化是由于其 P inb 基因的第 46 位氨基酸由甘氨酸
(G)突变为丝氨酸 (S) 造成的[ 6 ]。但是, 京 411 中的
P inb 基因所编码的氨基酸同Cheyenne 一样, 其第
46 位氨基酸由G 突变为 S, 却并未造成小麦质地的
变化。单籽粒硬度测定仪 (SKCS) 测定结果表明,
其硬度为 34. 2, 属于典型的软质小麦类型。我们在
进行 PCR 扩增时, 使用了高保真的 Pf u DNA 聚合
酶, 因此由于 PCR 错误渗入导致恰巧在此位置发
生氨基酸突变的可能性不大。据此结果, 我们认
为, 国外报道的 6 种 P inb 突变类型导致小麦籽粒
硬度的变化尚需进一步验证。同时, 我们也将进一
步通过转基因功能鉴定和互补实验来确定这一点,
这将有利于了解籽粒质地性状形成的机理。
谷类作物籽粒中存在两种类型的脂类结合蛋
白, 一类是脂转移蛋白 (n sL T P) , 另一类是 P ina 和
P inb 基因所编码的 indo lines 蛋白[ 8 ]。研究表明,
n sL T P 为基础蛋白, 内含 4 个二硫键, 分子量分别
为 9 kD (n sL T P1)和 7 kD (n sL T P2)。n sL T P s 蛋白
内具有较大的疏水通道, 形成脂类结合位点[ 13 ]。体
外实验证明, n sL T P 具有抗菌功能, 同时还具有啤
酒泡沫稳定作用, 可用作啤酒添加剂[ 14 ]。由于具有
相似的结构特征, 进一步研究发现, 从面粉中所分
离的 indo lines 不仅具有影响和改变小麦籽粒硬度
的功能, 而且影响面团的流变特性和面包的质地,
同时还具有抑菌功能 (尤其对赤霉病菌)和啤酒泡沫
稳定作用[ 13, 15, 16 ]。因此, 硬度主效基因的分离克隆
对小麦籽粒硬度的基因工程改良、抗病性研究及小
麦食品加工业均具有重要意义。目前, 我们已将这
两个基因克隆到原核生物表达载体上, 在大肠杆菌
中进行诱导表达的工作正在进行中。将来可以利用
表达产物进行抑菌实验, 验证其表达产物的活性和
功能。另一方面, 我们正在构建一系列的高效植物
表达载体, 并转化小麦进行功能互补实验, 验证其
功能, 为将来通过基因工程方法快速改良我国小麦
品种的硬度奠定基础。
921 期　　　　　　　　　　　夏兰芹等: 小麦硬度主效基因 P ina 和 P inb 的克隆和序列分析　　　　　　　　　　　　　

References
[ 1 ]　M o rris C F, Ro se S P. In H enery R J , Kett lew ell P S, eds.
Cerea l Q ua lity. Chapm an H all, L ondon, 1996, 3～ 54
[ 2 ]　M attern P J. L ocation of genes fo r kernel p ropert ies in w heat
variety‘Cheyenne’using ch romo som e substitu tion lines. In:
Sear E R , Sears L M S ( eds). P roc 4th In t W hea t Genet
S ymp. U niversity of M issouri. Co lum bia, 1973, 703～ 707
[ 3 ]　M o rrison W R , L aw C N. T he effect of group25 ch romo som e
on the free po lar lip ids and bread m ak ing quality of w heat. J
Cerea l S ci, 1989, 9: 41～ 51
[ 4 ]　Greenw ell P, Schofield J D. A starch granule p ro tein associ2
ated w ith endo sperm softness in w heat. Cerea l Chem , 1986,
63: 379～ 380
[ 5 ]　Jo lly C J. Characterization of the w heat M r 15000‘grain
softness p ro tein’and analysis of the relat ionsh ip betw een its
accum ulation in the w ho le seed and grain softness. T heor A p2
p l Genet, 1993, 86: 597～ 598
[ 6 ]　Giroux M J , M o rris C F. A glycine to serine change in
puro indo line b is associated w ith w heat grain hardness and
low level of starch2surface friab ilin, T heor A pp l Genet, 1997,
95: 857～ 864
[ 7 ]　Giroux M J , M o rris C F. W heat grain hardness resu lts from
h igh ly conserved m utation in the friab ilin components puro in2
do line a and puro indo line b. P roc N atl A cad S ci U SA , 1998,
95: 6262～ 6266
[ 8 ]　Douliez J P. Structure, b io logy and techno logical functions of
lip id transfer p ro teins and indo lines, the m ajo r lip id b inding
p ro teins from cereal kernels. J ou rna l of Cerea l S cience,
2000, 32: 1～ 20
[ 9 ]　L illemo M , M o rris C F. A leucine to p ro line m utation in
puro indo line b is frequently p resen t in hard w heats from
N o rthern Europe. T heor A pp l Genet, 2000, 100: 1100～
1107
[ 10 ]　Konduru K, M ichael J Giroux. Exp ression of w heat puro in2
do line genes in transgenic rice enhances grain softness. N a2
tu re B iotechnology , 2001, 19: 162～ 166
[ 11 ]　Sam brook J , F ritsch E F, M aniatis T , eds. M olecu lar
C lon ing , A L abora tory M anua l 2nd , Co ld Sp ring H arbo r L ab2
o rato ry P ress, 1989
[ 12 ]　D evo s K M. T he use of random amp lified po lymo rph ic DNA
m arkers in w heat. T heor A pp l Genet, 1992, 84: 567～ 572
[ 13 ]　M arion D , Gautier M F. Structure and founction of w heat
lip id b inding p ro teins. In: P roceed ing of In terna tiona l M eet2
ing on‘W heat K ernel P rotein M olecu lar and F unctiona l A s2
p ects’(V iterbo, Italy) , 1994, 175～ 180
[ 14 ]　C lark D C, W ilde P J. T he p ro tein of beer foam from against
lip id2induced destab ilization. J Inst B rew , 1994, 100: 23～
25
[ 15 ]　D ubreil L. In teraction of puro indo lines w ith w heat flour po2
lar lip ids determ in ing their foam ing p roperties. J A g ri F ood
Chem , 1997, 45: 108～ 116
[ 16 ]　D ubreil L , G abo rit F. Spatial and tempo ral distribu tion of
the m ajo r isofo rm s of puro indo lines ( puro indo line a and
puro indo line b ) and non2specific lip id transfer p ro tein ( ns2
L T Pe) of T riticum aestivum seeds. Relationsh ip s w ith their
in vitro an tifungal p ropert ies. P lan t S cience, 1998, 138: 121
～ 135
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