全 文 ：影响杏黄兜兰种子萌发的因素!
丁长春!，，虞 泓!，#!!，刘方媛
（! 云南大学生命科学学院生态遗传学实验室，云南 昆明 $%&&’!；# 云南英茂生物技术实验室，
云南 昆明 $%&!&$； 云南英茂生物农业有限公司，云南 昆明 $%&&!）
摘要：通过在不同条件下杏黄兜兰（!#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+）种子萌发的观察，对影响其
萌发的诸因子报道如下：!）果实的生长期与种子的萌发率有关。实验表明种子采自生长期
为 $& (的果实，发芽率为 )%*，采自 !#& (的果实，发芽率为 +&*，采自 !,& (的果实，发
芽率为 !,)*。#）培养基也会影响到种子的萌发，种子在 !-%./内培养，萌发率明显高于
培养于 ./，01和改良 2345678 95)!内的种子。）培养基（!-%./）掺入添加物也会影响到
种子的萌发率，如掺入 !&*椰子水会促使种子的萌发率达到很高的水平，掺入马铃薯泥（%&
:-;）或胰化胨（# :-;），种子的萌发率会达到较高的水平，而掺入香蕉泥则会对种子的萌发
率产生负面影响，掺入活性炭（# :-;）会促使种子萌发和幼苗发育。+）与固态培养基相比，
种子在液体悬浮培养基内的萌发速度更快，幼苗更为整齐划一。
关键词：杏黄兜兰；蒴果成熟度；种子萌发；快速繁殖
中图分类号：< ’+% 文献标识码：= 文章编号：&#% > #?&&（#&&+）&$ > &$? > &%
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U56(MSM56R，SD7 TEUS5PR 5T (MP7US 7TT7US 56 SD7 R77( :7PLM6ESM56 EP7 P745PS7( ER T5VV5WR：BP5WSD 4DER7 5T SD7
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云 南 植 物 研 究 #&&+，23（$）：$? Z $??
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!! 通讯作者：虞泓，教授，博士导师。O7V：（&,?!）,#??$?，JE8：（&,?!）,#??$!，1 > LEMV：TMRD7P[4GYVMU)\L)36)U6
收稿日期：#&&+ > &+ > !’，#&&+ > &$ > &接受发表
作者简介：丁长春（!’?% >）男，云南文山人，硕士研究生，从事植物生态遗传与物种保护研究。
1 > LEMV：UUF(M6:[ 3ED55) U5L) U6
基金项目：云南大学省级生物技术人才培养基地资助项目，云南大学植物学博士点基金资助项目
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由于杏黄兜兰有较高的园艺价值，人为破坏严重，已被野生濒危动植物国际贸易公约
（B./5/($./ ./ @/(3/4($./40 E34# $/ F/#4/23# 96-$9 .8 G$0# H4%/4 4/# H0.34，B@EFC）列入
I66/#$&!保护种类，严格管制进出口。我们在对其遗传结构的研究中发现，杏黄兜兰具
有较高的遗传多样性水平，只要保护好其原生生境，减轻采集压力，是完全可以恢复的
（丁长春，=++J）。开展杏黄兜兰的人工繁殖技术研究，无疑可以减轻采集压力，对进行原
地和迁地保护以及商业性开发也具有一定的意义。
对于兰科植物的无菌萌发技术，前人已经作了许多有益的探讨。兜兰的无菌萌发技术
较为困难（I3#$(($ K F3/9(，*LLM）。在对 ! N .))&/*+ 和 ! N .%)%&),’ 的研究中发现有萌发率偏
低的情况，原球体发育异常，并褐化死亡等问题（C($!43( K I9-)3，*LO*；P$3$1 等，
*LOO）。蒴果成熟度和培养基浓度等对兰花无菌萌发具有重要的影响（I3#$(($，*LQR）。在
对 ! N %-/%0-’ 的研究中发现，蒴果的采收期对提高种子萌发率具有明显影响，以授粉后
*L: S =++ #者萌发率最佳（T4249)$!4，*LO=）。培养基中添加有机物可以促进兰科植物蝴
蝶兰的生长（F3/9(，*LQR）。添加活性碳对兰花种子的萌发和幼苗的生长有促进作用
（F3/9(，*LRJ）。在培养方式上，发现液体培养能提高部分兰花的萌发率（B)% K U%#2，
*LLJ）。可见，蒴果成熟度、培养基无机盐浓度和培养方式等都对兰花种子的无菌萌发具
有较大的影响。因此，本研究从这几个方面入手，对如何建立杏黄兜兰的人工繁殖技术体
系进行了初步研究。
) 材料与方法
)*) 材料
本试验所用的材料杏黄兜兰 !#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ C? B? B)/ ( H? V? <$%，来自云南英茂生物农
业公司的兰花种质资源圃。开花时在同种异株间进行人工授粉。蒴果采收后，先以 R+,乙醇进行表面灭
菌 M+ S Q+ 9，再用氯化汞（* 2;<）进行表面灭菌 *+ S *: !$/，于无菌操作台内将蒴果剖开后，用镊子将种
子刮入无菌水中，摇匀后用吸管将种子吸出，注入培养基内。
除了培养基无机盐浓度实验外，基本培养基采用 *;:UC。除培养基添加物实验外，均添加椰子乳
*+,（5;5），蔗糖 *: 2;<，琼脂粉 Q 2;<，6W值为 :N: X +N*。每种处理设 :个重复。培养环境为 =: X =Y，
日光灯照明每天 *Q )，光照强度为 M +++ 0&。
种子分别在培养 J、O、*=、*Q周后随机采取 *++粒种子置于解剖显微镜下观察胚的萌发率。萌发标
准为胚吸水膨大，并形成白色原球体（63.(.-.3!）。浅层液体静置培养，先将其摇匀，再用吸管吸出，置
于培养皿内镜检。
)*+ 种子成熟度试验
采杏黄兜兰授粉后 Q+、O+、*++、*=+、*J+、*Q+、*O+ #之蒴果，平均每处理取 :个蒴果，交叉试验，
JRQ 云 南 植 物 研 究 =Q卷
以降低蒴果间差异性所造成的影响。除本试验外，其他试验均以授粉 !# $的蒴果进行播种。
!# 培养基组分试验
无机盐浓度试验：以 %&培养基为基本盐类组成，将大量元素浓度降低为标准浓度的 !’、!’(以及
!’!#，其他成分不变。
此外，以 !’(%&为对照，比较 )*（*+,-.，!/01）和 2345,67 859!培养基对种子萌发的影响。
有机添加物试验：以授粉后 !# $之蒴果进行，基本培养基为 !’(%&，使用的添加物分别为：椰子水
!#:（;’;），马铃薯泥（(# <’=），香蕉泥（(# <’=）与胰化胨（ <’=）。
活性碳添加试验：基本培养基为 !’(%&，添加 <’=活性碳，以不添加活性碳的培养基作为对照。
!$ 液体浅层静置培养与固体培养之比较试验
浅层液体静置培养以 !’(%& >椰子水 !#:（;’;）>蔗糖 !( <’= >活性碳 <’=为培养基，42为 (9( ?
#9!。固体培养基组成同上，仅添加琼脂 @ <’=将培养基固化。
表 ! 蒴果成熟度对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
ABCD6 ! *EE6F. 5E FB4-GD6 HB.G+I.3 5, -66$ <6+HI,B.I5, 5E
!#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ %- /%0,& J
KB4-GD6 HB.G+I.3
（LB3- BE.6+ 45DDI,B.I5,）
M66N- BE.6+ -5OI,<（P6+HI,B.I5, +B.6’:）
1 Q ! !@
@# #91 !9R !9Q R9(
Q# 91 @90 Q9 !#9R
!## @90 !091 !/9@ 9R
!# !R9@ R@9Q RQ9! 1#9@
!1# !!90 /9(@ R!9! R9Q
!@# /9R !91( 91 190
!Q# Q9 !/9@ !9R 9/
% 试验结果
%! 蒴果成熟度试验
杏黄兜兰授粉后 @# $，在播种后 !!
$蒴果内种子萌发率仅达到 R9(:。而授
粉后 !# $的蒴果在培养 !! $后种子萌
发率达到 1#9@:。种子萌发率与蒴果成
熟度呈正相关。但是，在 !# $之后，种
子萌发率则随着蒴果成熟度的增加而降
低（表 !）。
%% 培养基无机盐浓度试验
杏黄兜兰的种子适宜在较低盐浓度下萌发，以 !’(%&为最佳，培养 !! $达到 19(:，
其次为 !’!#%&，!’%&较差（表 ）；与其他培养基比较，仍以 !’(%&最好，培养 !! $萌
发率达 R09/:，其次为 2345,67 !9( <’=，而 )*相对较差（表 R）；有机添加物对种子萌发
有明显影响，效果以椰子水（!#:，;’;）最好，马铃薯泥（(# <’=）和胰化胨（ <’=）也
具有一定的作用，且彼此间区别较小，而香蕉泥（(# <’=）则对萌发起抑制作用（表 1）；
添加活性碳（ <’=）对萌发具有显著的促进作用（表 (）。
表 % 不同浓度的&’培养基对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
ABCD6 *EE6F. 5E .S6 F5,F6,.+B.I5, 5E %& HBF+56D6H6,.- 5, -66$
<6+HI,B.I5, 5E !#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ %- /%0,& J
K5,F6,.+B.I5, 5E
%& HBF+56D6H6,.-
M66N- BE.6+ -5OI,<（P6+HI,B.I5, +B.6’:）
1 Q ! !@
!’%& R9 /9R !R9@ !(9Q
!’(%& !#90 R091 R/9! 19(
!’!#%& @91 19@ Q9R R!91
表 # 不同培养基对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
ABCD6 R *EE6F. 5E HBT5+ -BD. F5H45-I.I5, 5, -66$ <6+HI,B.I5,
5E !#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ %- /%0,& J
K5H45-I.I5, 5E
HBT5+ -BD.
M66N- BE.6+ -5OI,<（P6+HI,B.I5, +B.6’:）
1 Q ! !@
!’(%& !!91 RR9 R@90 R09/
)* @9R !R91 !@9( !Q91
2345,67 859! 09 !09 #9 R9!
（!9( <’=）
%# 浅层液体静置培养对种子萌发的影响
试验表明：浅层液体静置培养可加快杏黄兜兰种子萌发速度，且萌发整齐一致，利于
将来炼苗移栽管理。
(0@@期 丁长春等：影响杏黄兜兰种子萌发的因素
表 ! 有机添加物对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
!#$% & ’((%)* +( +,-./) 0122$%3%.*0 +. 0%%4 -%,3/.*/+. +( !#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ %- /%0,& 5
6,-./) 0122$%3%.*0
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K..（HE -;I） DC? >ECJ >DC@ >&CL
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表 活性碳对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
!#$% H ’((%)* +( )*/F*%4 )N,)+$ +. 0%%4 -%,3/.*/+.
+( !#$%&#’(%)*+ ,+’-%.*+ %- /%0,& 5
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表 # 浅层液体静置培养对杏黄兜兰种子无菌萌发的影响
!#$% @ ’((%)* +( )1$*1,% 3%*N+4 +. 0%%4 -%,3/.*/+. +(
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$ 讨论
$%& 蒴果成熟度对种子无菌萌发的影响
兰科植物成熟蒴果内所含的种子极为细小，不含胚乳，胚未分化，只达到球形胚阶
段，无子叶、胚根、胚芽。当球形胚沿纵轴有大小细胞之区别后，经培养（即无菌播种），
在人工培养基上迅速发育形成幼小植株（I%%，>LLE）。可见，胚的发育阶段对兰花种子的
萌发起到至关重要的作用。这在本试验中也得到了很好的证明：蒴果采收期超过 >?E 4
时，种皮颜色加深，种皮细胞加厚，阻碍了胚对营养物质的吸收，导致萌发率降低。因
此，在兰花的胚培养过程中，应根据具体的物种，找出最适采收期。当然，如果采收时期
已超过最适期，也有一些物理或化学的补救办法：如用超声波处理种子，击破种皮，使得
水分和养分得以进入胚细胞，进而提高萌发率，或用化学物质（如氢氧化钠）浸泡，以溶
解一些抑制种子萌发的物质（Q. 4%, B/.4%,%.，>L=J）。
$%’ 培养基对种子无菌萌发的影响
从培养基无机盐种类和浓度上看，低浓度盐类的 RP培养基（>;H或 >;>ERP）能较好
地适应杏黄兜兰种子萌发的营养需求，得到较高的萌发率，可见它对盐类的需求浓度较
低。S’配方和 TM2+.%U V+C>配方也有一定的萌发率，但不太理想，这可能与它们的营养
成分不太全面有关。
从有机添加物上看，椰子水对杏黄兜兰的胚萌发具有显著的促进作用，表现为种子发
芽速度快且整齐。椰子水为椰子的液态胚乳，富含胚发育所需的营养成分，对许多植物的
幼胚培养具有促进作用（Q. 6F%,#%%8 等，>L&>）；添加马铃薯对萌发也有较为明显的作
用，且原球体的颜色浓绿色，这与 P*%%$%（>LLH）的结果类似；胰化胨与马铃薯有着类似
的作用，可见，胚的发育对氨基酸和维生素有一定需求。而添加香蕉则对胚的萌发起抑制
作用，这与 G/%,/8等（>L==）的观察结果一致。
活性碳的有无对杏黄兜兰胚的萌发起重要作用，即使到幼苗形成后的生长也有明显的
@J@ 云 南 植 物 研 究 ?@卷
促进作用。未添加活性碳的植株基部容易发生褐化现象。可见，杏黄兜兰胚培养过程中会
分泌较多的酚类物质，除了添加活性碳外，还可添加一些抗氧化的物质，如抗坏血酸、
!!等，可能减轻褐化程度。
!! 浅层液体静置培养对种子萌发的影响
相对固体培养而言，液体培养的萌发速度快而整齐，这与 #$% 和 &%’()（*++,）、
-./($和 !01213$（*+45）的结果一致。固体培养基表面以下的透气情况不好，物质的流动
性差，导致营养物质分布不均匀以及有毒物质不能及时得到稀释，这些因素使得培养效果
下降。本试验采用浅层液体静置培养，较好地解决了这一问题。当然，这种培养方式使用
的营养液较少，应注意及时更换新的培养液，或将原球体转入固体培养。
综上所述，采收杏黄兜兰 *67 ’的蒴果，经浅层液体静置培养约 *7周后转入固体培养。
基本培养基为 *85&-，添加椰子水 *79，（:8:），蔗糖 *5 (8;，活性碳 6 (8;。转入固体培养
基，经过约 *<5 ’，即可形成幼苗，再经过数个月的壮苗培养和驯化炼苗后，可出瓶种植。
〔参 考 文 献〕
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AA@@期 丁长春等：影响杏黄兜兰种子萌发的因素