免费文献传递   相关文献

Spectrum-effect relationship of active fraction from Hedysari Radix on improving immunity

红芪提高免疫功能活性部位的谱效关系研究



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 1期 2016年 1月

·101·
红芪提高免疫功能活性部位的谱效关系研究
崔 方 1,韩增护 1,刘小花 1,杨亚飞 1,兰芝荟 2,封士兰 1*
1. 兰州大学药学院,甘肃 兰州 730000
2. 兰州市第一人民医院,甘肃 兰州 730050
摘 要:目的 研究红芪提高正常小鼠机体免疫功能活性部位与 HPLC指纹图谱的相关性。方法 建立二硝基氟苯(DNFB)
所致小鼠迟发型变态反应(DTH)模型,以 1批甘肃宕昌野生红芪的不同提取部位 ig给药,选择最优部位。HPLC测定条件:
色谱柱为Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈和 0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量为 1.0 mL/min,柱
温为 30 ℃,检测波长为 275 nm;测定 12批红芪药材水提部位的HPLC指纹图谱及其提高免疫功能的活性,采用偏最小二乘
(PLS)法将 HPLC 图谱的各组分峰面积与提高免疫功能药效指标相关联,研究谱效相关性。结果 红芪水提部位提高免疫功
能活性最强,根据 PLS法回归系数大小确定红芪药材水提部位中物质群对提高机体免疫功能的贡献程度,常用于表征红芪质量
的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物均表现为负相关。结论 红芪药材水提部位具有明显的
提高免疫功能活性,不同来源的红芪药材提高免疫功能的活性不同,谱效关系研究表明常用于表征红芪质量的腺苷、芒柄花苷、
金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物对红芪提供免疫功能活性未表现出积极作用。
关键词:红芪;HPLC指纹图谱;免疫功能;谱效关系;偏最小二乘法;腺苷;芒柄花苷;金雀异黄酮;芒柄花素;美迪紫檀素
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)01 - 0101 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.01.015
Spectrum-effect relationship of active fraction from Hedysari Radix on improving
immunity
CUI Fang1, HAN Zeng-hu1, LIU Xiao-hua1, YANG Ya-fei1, LAN Zhi-hui2, FENG Shi-lan1
1. School of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China
2. First People’s Hospital of Lanzhou City, Lanzhou 730050, China
Abstract: Objective To study the correlation of HPLC fingerprint of Hedysari Radix and efficacy of improving immunity of normal mice,
and provide the basis for finding bioactive components and selecting the index composition of quality control. Methods The mice delayed
type hypersensitivity (DTH) model induced by dinitoflruorobenzene (DNFB) was used to study the effect and then to perform ig
administration with different extracts of Hedysari Radix for selecting the best part. To study the correlation between fingerprint and efficacy
and find out the effective substances foundation of improving immunity, the peak area of each common peak from HPLC fingerprint was
associated with the date of improving immunity in the method of partial least square regression (PLS). Results In ear swelling experiment,
water extract of Hedysari Radix was the most effective part which could improve the immunity function. PLS was used to evaluate the
correlation of effect of improving immunity and components of the water extract including adenosine, ononin, genistein, formononeti, and
medicarpin, the index of compounds to characterize the quality of Hedysari Radix, showed the negative correlation with the effectiveness.
Conclusion A new method is established to evaluate the activity of enhancing immunity of Hedysari Radix. It is of practical significance as
an effective approach for controlling quality and exploring the material basis for efficacy of traditional Chinese medicine compounds.
Key words: Hedysari Radix; HPLC fingerprint; immune function; relationship of fingerprint and efficacy; partial least squares regression;
adenosine; ononin; genistein; formononeti; medicarpin

红芪为豆科植物多序岩黄芪 Hedysarum
polybotrys Hand. -Mazz. 的干燥根[1],是甘肃的道地
药材。具有补气固表、利尿排毒、敛疮生肌等功
效[2]。现代药理研究表明,红芪具有提高免疫功能的

收稿日期:2015-05-16
基金项目:兰州大学“中央高校基本科研业务费专项资金”自由探索-小额探索项目(lzujbky-2014-218);甘肃省中药药理与毒理学重点实验
室开放课题项目(ZDSYS-KJ-2013-004)
作者简介:崔 方(1983—),女,河北怀来人,实验师,硕士,研究方向为中草药及中药制剂分离分析。E-mail: cuif@lzu.edu.cn
*通信作者 封士兰(1957—),女,甘肃嘉峪关人,教授,博士生导师,主要从事中药质量控制及中药新药研究。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 1期 2016年 1月

·102·
作用[3]。《中国药典》2010 年版关于红芪的质量控
制只有常规的鉴别和浸出物的检查,中药指纹图谱
能表征中药所含的物质成分,符合中医理论的整体
性和中药作用机制的模糊性,本课题组前期曾进行
红芪指纹图谱的研究[4]。然而,中药作为一个多组
分、多靶点综合作用的复杂整体,其药效的体现与
指纹图谱中化学指标成分的体现并不是完全一致
的,因此仅仅研究药材的化学指纹图谱是远远不够
的。只有将中药指纹图谱中化学成分的变化跟中药
药效结果联系起来建立起有实际意义的中药谱-效
关系,才能为中药的质量控制和药效评价标准提供
规律性的科学依据[5-7]。偏最小二乘回归(partial
least-squares regression,PLS)是一种由数据样本进
行建模的统计回归方法,集多元线性回归、主成分
分析和典型相关分析的基本功能为一体,可以较好
地解决自变量之间多重相关性、样本点容量少于变
量个数等一般回归分析方法无法解决的问题[8]。
本课题组在探讨红芪药材(甘肃宕昌野生)中
不同极性部位提高机体免疫功能作用的同时,发现
红芪水提部位作用最显著,进而研究了另外 12 批
不同产地、不同生长年限红芪药材水提部位的指纹
图谱和提高机体免疫功能的作用,通过 PLS法研究
其谱效关系,为全面评价红芪药材的质量提供技术
支持,也为进一步指导临床合理用药奠定基础。
1 材料与仪器
1.1 实验动物
SPF级昆明小鼠,体质量 18~22 g,由兰州大
学动物实验中心提供,许可证号 SYXK(甘)
2014-0005。
1.2 药物与试剂
红芪药材为甘肃各地采集或购买的种植或野
生红芪,共 13 批,经兰州大学药学院周印锁教授
鉴定均为红芪 Hedysarum polybotrys Hand. -Mazz.
正品;对照品腺苷(购自中国食品药品检定研究院,
批号 110819-200202)、芒柄花苷(购自上海顺勃生
物工程有限公司,批号 201206)、金雀异黄酮(购
自上海源叶生物科技有限公司,批号 20130412)、
芒柄花素(购自中药国体制剂制造技术国家工程中
心,批号 1054-090402)、美迪紫檀素(购于上海一
林生物科技有限公司,批号 130120),质量分数均
大于 98%;乙腈为色谱纯(德国默克公司);水为
超纯水;二硝基氟苯(DNFB,西亚反应研究中心);
硫化钠(天津市恒兴化学试剂有限公司)。
1.3 仪器
2695 高效液相色谱仪,美国 Waters 公司(包
括 717 自动进样器、2996 二极管阵列检测器、
Millennium32 色谱管理站);数据处理软件:
SIMCA13.0软件(Umetrics公司)。
2 方法与结果
2.1 红芪不同提取部位对小鼠机体免疫功能的影响
2.1.1 样品制备 称取红芪药材(甘肃宕昌野生)
300 g,用 6倍量的 95%乙醇回流提取,共提取 3次,
每次 1 h,合并提取液,将提取液减压浓缩至无醇味,
取出 50 mL作为总提取物(出膏率 6.110%);其余
用石油醚萃取,重复 3~5次,分出上层,合并,萃
取液浓缩成浸膏,得到石油醚部位(出膏率 0.775%);
下层溶液用醋酸乙酯萃取,重复 3~5次,分出上层,
合并,萃取液浓缩成浸膏,得到醋酸乙酯部位(出
膏率 0.204%);下层溶液浓缩至干,加乙醇超声溶解
10 min,得到乙醇部位(出膏率 0.649%);乙醇不溶
解部分加水溶解,得水提部位(出膏率 3.433%);其
余 12批药材样品处理过程相同。根据各提取部位出
膏率,按原生药 20 g/kg给药,称取浸膏,加聚山梨
酯 80(0.3%)制成混悬液。
2.1.2 不同提取部位对DNFB诱发小鼠迟发型变态
反应(DTH)的影响 取小鼠 60 只,雌雄各半,
随机分为 6组:对照组,红芪总提取物、石油醚部
位、醋酸乙酯部位、乙醇部位、水提部位组,每组
10 只。对照组 ig 给予生理盐水,红芪各提取部位
(均来自甘肃宕昌野生红芪)组分别 ig 给予相应部
位浸膏混悬液 20 g/kg(生药剂量),每天 1次,连
续给药 15 d。给药第 10天,小鼠腹部皮肤用硫化
钡脱毛,范围 3 cm×3 cm,用 1% DNFB溶液 50 μL
均匀涂抹致敏,5 d后,用 DNFB溶液 10 μL均匀
涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。攻击后 24 h颈
椎脱臼处死小鼠,剪下左右耳壳,用打孔器取下直
径 6 mm的耳片,称质量。用左右耳片质量差值表
示 DTH的程度[9]。结果见表 1。水提部位组左右耳
片质量差值最大,表明其提高免疫功能作用最强,
与对照组比较,差异显著(P<0.05)。故后续实验
研究另 12批红芪药材水提部位的谱效关系。
2.1.3 12 批红芪药材水提部位对 DNFB 诱发小鼠
DTH的影响 取小鼠 130只,雌雄各半,随机分为
对照组和 12 批红芪药材水提部位给药组,每组 10
只,给药组分别给予 12 批不同产地红芪药材水提
部位的混悬液,其余操作与“2.1.2”项下方法相同。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 1期 2016年 1月

·103·
12 批不同产地红芪药材水提部位组左右耳片质量
差值不同,表明红芪药材提高免疫功能的能力也不
尽相同,结果见表 2。其中来自甘肃武都 1、武都
米仓山和陇西县首阳镇红芪药材的水提部位组耳
片质量差值与对照组比较明显增加(P<0.05)。
表 1 红芪不同提取部位对 DNFB 诱发小鼠 DTH 的影响
( x±s, n = 10)
Table 1 Effects of different extract fractions from Hedysari
Radix on DTH of mice induced by DNFB ( x±s, n = 10)
组别 剂量/(g·kg−1) 耳片质量差值/mg
对照 — 1.35±1.37
总提取物 1.222 0 1.83±1.72
石油醚提取部位 0.155 0 1.99±1.12
醋酸乙酯部位 0.040 8 3.24±2.10*
乙醇部位 0.129 8 2.24±1.42
水提部位 0.686 6 3.89±3.04*
与对照组比较:*P<0.05,表 2同
*P < 0.05 vs control group, Table 2 is same
表2 12批红芪药材水提部位对DNFB诱发小鼠DTH的影响
( x±s, n = 10)
Table 2 Effects of aqueous extract from 12 batches of
Hedysari Radix on DTH of mice induced by DNFB ( x±s, n = 10)
样品编号 样品来源 耳片质量差值
对照 — 0.83±0.56
S1 甘肃武都 1(野生) 2.17±1.12*
S2 甘肃武都 5年(野生) 1.47±1.08
S3 甘肃陇南西河 3年(野生) 1.45±0.72
S4 甘肃武都米仓山(种植) 1.43±0.52*
S5 甘肃宕昌哈达铺镇(种植) 1.27±0.79
S6 甘肃陇西县菜子乡(种植) 1.30±0.53
S7 甘肃岷县(野生) 1.49±0.80
S8 甘肃宕昌官亭(种植) 0.82±0.44
S9 甘肃宕昌(野生) 1.30±0.27
S10 甘肃宕昌将台(种植) 0.51±0.56
S11 甘肃陇西县首阳镇(野生) 2.17±1.24*
S12 甘肃武都 2(种植) 1.09±0.69

2.2 HPLC指纹图谱测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Hypersil ODS C18 柱
(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈和 0.1%
甲酸,梯度洗脱:0~10 min,4%~10%乙腈;10~
30 min,10%~40%乙腈;30~65 min,40%~60%
乙腈;65~66 min,60%~100%乙腈;66~70 min,
100%乙腈;体积流量为 1.0 mL/min,柱温为 30 ℃,
检测波长为 275 nm。
2.2.2 对照品溶液制备 精密称取腺苷、芒柄花
苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素对照品适
量,置 10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释制成一定
质量浓度的对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液制备及测定 将提取所得的各
批红芪水提部位浸膏干燥,分别取 2.0 g,精密称定,
加甲醇超声溶解转移至10 mL量瓶中,定容至刻度,
摇匀,即得供试品溶液。用微孔滤膜(0.45 μm)滤
过后备用。按“2.2.1”项下色谱条件进样 20 μL,
得 HPLC图(图 1)。
2.2.4 HPLC图谱峰的归属 按“2.2.1”项下色谱
条件,所得 12批药材水提部位指纹图谱,根据国
家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统》2004年 A版进行相似度评价。以 12批红芪药
材的相对峰面积的均值作为对照模板,由中药色谱
图分析和数据管理软件自动进行峰匹配,确定 26
个共有峰(表 3)。其中 4、18、21、22、24 号峰
分别与对照品腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄
花素、美迪紫檀素的保留时间和紫外光谱图一致。
利用夹角余弦法计算指纹图谱的相似度,结果见表
4。可知,12批红芪药材的相似度在 0.8以上,相
似度较高。以腺苷对应的 4号峰为参照峰(相对保
留时间为 1.00),计算色谱图中各共有峰的相对保
留时间,结果见表 5。


4-腺苷 18-芒柄花苷 21-金雀异黄酮 22-芒柄花素 24-美迪紫檀素
4-adenosine 18-ononin 21-genistein 22-formononeti 24-medicarpin
图 1 12批红芪水提部位 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC of aqueous extract from 12 batches of Hedysari Radix
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
t/min
1
2
3 4
5
6 7
8 9 10 11 12
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25 26
13
14 15
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 1期 2016年 1月

·104·
表 3 共有峰峰面积
Table 3 Peak areas of common peaks
样品
共有峰峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
S1 2 766 318 1 467 744 43 828 156 896 12 026 524 2 682 946 359 324 375 651 303 376 1 409 736 99 091 146 402 639 877
S2 954 314 537 865 58 213 85 923 1 244 800 78 220 33 415 94 433 170 182 1 480 250 312 051 97 005 218 075
S3 1 039 184 779 417 60 867 101 972 1 425 937 49 653 92 824 176 954 454 676 527 514 370 160 122 837 168 160
S4 1 063 269 716 711 59 368 188 893 2 436 358 122 886 70 437 124 753 455 752 451 130 268 926 147 830 258 477
S5 865 301 692 251 68 844 261 083 2 770 823 55 135 229 631 230 062 228 663 1 165 567 391 443 295 854 258 430
S6 558 744 412 178 35 752 128 639 1 687 676 57 975 105 487 56 694 440 891 1 246 456 94 616 126 296 119 098
S7 2 241 759 1 706 353 70 654 245 693 12 058 180 464 225 107 657 915 947 166 299 1 253 381 750 885 185 564 1 093 355
S8 1 540 769 936 077 42 475 196 154 7 477 300 699 345 21 803 707 820 6 771 819 030 814 805 119 041 605 511
S9 954 302 536 163 38 608 171 989 7 665 860 186 332 75 230 109 408 29 200 59 276 135 343 43 122 94 206
S10 1 084 179 682 741 72 891 107 683 2 102 510 146 236 181 220 96 515 223 976 868 223 233 630 85 461 109 064
S11 1 818 422 792 084 41 854 60 776 7 027 934 1 511 735 80 815 397 011 92 319 282 720 336 519 362 445 353
S12 983 019 784 200 54 937 196 743 1 848 157 77 346 40 054 148 762 264 569 1 188 210 359 542 138 686 253 822
样品
共有峰峰面积
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
S1 254 564 215 661 77 208 224 093 674 731 98 913 32 432 3 836 58 675 12 424 9 849 42 753 3 195
S2 141 775 128 060 142 455 123 662 1 130 915 186 770 115 554 32 756 688 747 134 126 234 713 37 667 50 207
S3 103 767 169 419 79 879 92 821 777 404 242 901 119 122 30 670 575 832 61 767 100 992 30 468 18 050
S4 132 765 257 670 103 303 141 951 1 238 276 224 380 62 853 44 106 301 046 83 461 71 695 44 744 20 706
S5 157 322 637 686 329 103 246 244 2 692 366 104 626 38 957 160 298 388 434 26 155 48 717 51 172 31 622
S6 103 657 314 697 280 628 126 692 1 455 124 136 448 26 451 62 555 257 020 62 337 118 003 40 669 50 208
S7 179 115 236 471 63 306 199 872 2 072 554 359 835 34 848 46 956 528 090 175 035 68 680 47 935 29 787
S8 63 778 54 434 42 390 116 609 3 147 080 360 264 21 110 69 754 887 007 225 306 569 391 52 647 76 263
S9 13 271 34 189 7 045 589 76 254 2 157 638 0 10 494 177 987 68 890 0 5 093 70 928 47 539
S10 22 859 183 940 229 118 133 695 1 474 237 233 605 42 491 46 552 500 144 203 219 328 474 71 014 80 980
S11 15 262 17 762 51 883 24 039 7 042 65 480 22 773 542 2 545 1 806 27 260 51 805 1 539
S12 162 380 181 434 146 170 135 286 1 147 693 157 931 18 579 35 669 429 545 73 152 46 112 68 354 66 323

表 4 12批红芪水提部位指纹图谱相似度
Table 4 Fingerprint similarity of aqueous extract from 12
batches of Hedysari Radix
样品 相似度 样品 相似度 样品 相似度
S1 0.96 S5 0.88 S9 0.80
S2 0.80 S6 0.82 S10 0.93
S3 0.89 S7 0.97 S11 0.94
S4 0.96 S8 0.97 S12 0.91
2.3 谱效相关研究
以指纹图谱中代表化学成分各峰的峰面积为自
变量(X),以表 2中耳片质量差值的均数作为因变量
(Y),采用 PLD法,进行谱效相关性分析。结果得到
X关于 Y的回归方程:Y=0.078 1 X1+0.027 7 X2-
0.102 5 X3-0.060 0 X4+0.071 1 X5+0.100 5 X6-
0.033 3 X7+0.046 5 X8-0.025 8 X9-0.020 7 X10-
0.019 8 X11-0.038 2 X12+0.074 2 X13+0.060 1 X14-
0.030 8 X15-0.002 7 X16-0.056 5 X17-0.116 1 X18-
0.097 9 X19+0.073 3 X20-0.049 3 X21-0.099 6 X22-
0.165 0 X23-0.138 7 X24-0.176 5 X25-0.231 9 X26。
在此回归模型中,26个自变量 X对 Y的回归系数有
正也有负,即存在正相关和负相关性。其中 1、2、5、
6、8、13、14、20 号峰所对应的化合物对红芪水提
部位提高免疫功能有贡献,而 4、18、21、22、24
号峰所分别对应的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、
芒柄花素、美迪紫檀素均表现为负相关,其他自变
量对应的化合物结构有待确定。
3 讨论
比较红芪各提取部位提高正常小鼠机体免疫
功能作用,发现水提部位组提高免疫功能的能力最
强,这也与文献报道相一致[10]。进而对 12 批不同
产地或不同生长年限的红芪水提部位进行药效学
考察和HPLC分析,对提取方法、流动相及洗脱梯度、
检测波长等色谱条件进行了优化,构建了红芪药材水
提部位HPLC指纹图谱,并指认了腺苷、芒柄花苷、
金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素指纹峰的位置。
不同来源红芪水提部位提高免疫功能的能力不尽相
同,其中只有甘肃武都 1批、武都米仓山和陇西县首
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 1期 2016年 1月

·105·
表 5 各共有峰相对保留时间
Table 5 Relative retention time of each common peaks
样品 相对保留时间 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
S1 0.66 0.77 0.90 1.00 1.51 2.22 2.91 3.02 3.36 3.82 4.44 4.59 4.70
S2 0.67 0.77 0.89 1.00 1.50 2.20 2.87 3.02 3.41 3.83 4.43 4.59 4.70
S3 0.67 0.77 0.89 1.00 1.51 2.21 2.89 3.04 3.43 3.87 4.48 4.63 4.75
S4 0.67 0.77 0.89 1.00 1.51 2.21 2.88 3.04 3.42 3.86 4.47 4.62 4.74
S5 0.66 0.77 0.88 1.00 1.49 2.19 2.84 2.99 3.39 3.80 4.40 4.54 4.66
S6 0.67 0.77 0.89 1.00 1.51 2.31 2.89 3.04 3.43 3.86 4.48 4.63 4.75
S7 0.67 0.78 0.89 1.00 1.52 2.24 2.90 3.05 3.39 3.86 4.48 4.63 4.75
S8 0.67 0.78 0.89 1.00 1.51 2.22 2.90 3.06 3.46 3.88 4.50 4.65 4.77
S9 0.67 0.77 0.89 1.00 1.51 2.21 2.83 2.94 3.34 3.45 4.48 4.63 4.74
S10 0.66 0.77 0.87 1.00 1.46 2.13 2.84 3.12 3.37 3.79 4.4 4.56 4.66
S11 0.67 0.75 0.89 1.00 1.50 2.20 2.80 3.03 3.37 3.80 4.46 4.63 4.72
S12 0.67 0.77 0.88 1.00 1.50 2.20 2.88 3.03 3.42 3.85 4.46 4.61 4.73
平均值 0.67 0.77 0.89 1.00 1.50 2.21 2.87 3.03 3.40 3.80 4.46 4.61 4.72
RSD/% 0.78 1.08 0.71 0 1.00 1.73 1.16 1.37 1.06 3.07 0.75 0.73 0.74
样品 相对保留时间 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26
S1 4.79 4.83 5.58 6.15 7.02 7.63 8.12 8.21 9.29 9.76 10.12 11.66 12.26
S2 4.80 4.85 5.59 6.16 7.05 7.66 8.09 8.23 9.32 9.80 10.15 11.70 12.30
S3 4.85 4.90 5.65 6.23 7.12 7.74 8.17 8.32 9.42 9.90 10.26 11.75 12.43
S4 4.84 4.89 5.64 6.21 7.10 7.71 8.15 8.29 9.39 9.87 10.23 11.79 12.40
S5 4.75 4.81 5.54 6.10 6.98 7.58 8.01 8.15 9.23 9.70 10.05 11.58 12.18
S6 4.84 4.90 5.65 6.22 7.11 7.73 8.17 8.31 9.41 9.89 10.25 11.81 12.42
S7 4.85 4.89 5.65 6.22 7.11 7.72 8.23 8.31 9.40 9.88 10.24 11.80 12.41
S8 4.87 4.91 5.67 6.24 7.14 7.76 8.29 8.35 9.45 9.93 10.29 11.86 12.47
S9 4.83 4.89 5.55 6.17 7.11 0 8.17 8.31 9.41 0 10.25 11.81 12.42
S10 4.76 4.85 5.59 6.17 7.06 7.68 8.11 8.25 9.34 9.82 10.18 11.72 12.33
S11 4.82 4.86 5.55 6.05 7.04 7.68 8.18 8.26 9.35 9.82 10.06 11.74 12.32
S12 4.83 4.87 5.62 6.19 7.08 7.69 8.13 8.27 9.37 9.85 10.20 11.76 12.36
平均值 4.82 4.87 5.61 6.17 7.08 7.05 8.15 8.27 9.36 9.02 10.19 11.75 12.36
RSD/% 0.74 0.62 0.81 0.92 0.68 2.51 0.85 0.66 0.67 0.69 0.78 0.66 0.69

阳镇药材与对照组比较具显著性差异。中药药效的不
稳定性与其有效成分,乃至有效部位的量是息息相关
的,这也更加说明了谱效关联作为寻找评价中药药效
有效成分或部位的有效手段是很有必要的。
采用 PLS法对红芪水提部位化学组成与提高免疫
功能作用进行相关分析,结果表明HPLC图中 1、2、
5、6、8、13、14、20号峰所对应的化学成分为对提高
免疫功能药效有贡献的药效成分组,应通过进一步的
实验对这些成分进行确认。而常用于表征红芪质量的
腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀
素等指标化合物均表现为负相关,即这些指标化合物
的量越高提高免疫功能药效可能越低,这也对应用于
提高免疫功能药效时,以上述成分控制红芪药材的质
量提出了质疑和参考。PLS 法分析既可以得到红芪水
提部位对提高免疫功能起主要作用的色谱峰,又可以
获得各色谱峰之间相互作用的信息,为研究药物组分
间相互关系提供可能,同时为中药药效物质快速筛选,
合理选择质量控制指标及谱效关系研究提供了参考。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 李广民, 王维宁, 胡妙申. 中药红芪生药学研究 [J].
中药通报, 1987, 12(8): 453-456.
[3] 张李峰, 卫东锋, 赵春燕, 等. 红芪替代复芪止汗颗粒
中的黄芪对免疫抑制小鼠细胞免疫作用的差异研究
[J]. 中成药, 2012, 34(8): 1415-1420.
[4] 封士兰, 胡芳弟, 赵健雄, 等. 高效液相色谱法研究红
芪指纹图谱 [J]. 分析化学, 2004, 32(6): 710-714.
[5] 肖云芝, 于 超, 刘朝勇, 等. 鳖甲药材指纹图谱与其
抗肝纤维化作用的谱效关系研究 [J]. 中草药, 2014,
45(17): 2506-2510.
[6] 耿媛媛, 胡昌江, 潘 新, 等. 二神丸不同提取部位温
脾止泻的谱效关系研究 [J]. 中草药 , 2014, 45(18):
2658-2663.
[7] Sun X J, Liu T T, Zhao Y L, et al. Toxicity of five herbs
in Aconitum L. on tetrahymena thermophila based on
spectrum-effect relationship [J]. Chin Herb Med, 2014,
6(1): 29-35.
[8] 唐启义, 唐 洁. 偏最小二乘回归分析在均匀设计试验建
模分析中的应用 [J]. 数理统计与管理, 2005, 25(5): 45-49.
[9] 增强免疫力功能评价方法 (征求意见稿) [S]. 2012.
[10] 胡 燕, 程卫东, 刘 欣, 等. 红芪和黄芪水提物对小
鼠免疫功能影响的差异 [J]. 北京中医药大学学报 ,
2011, 34(9): 623-625.