全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 7 期 2015 年 4 月

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HPLC 法同时测定苦丁茶冬青中 7 个三萜皂苷成分的量
杨 滔，谭庆龙，朱锦萍，周劲松，张 蕾，杨 宝，赵钟祥*
广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006
摘 要：目的 建立 HPLC 法同时测定苦丁茶冬青 Ilex kudingcha 中大叶冬青苷 G、大叶冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、大叶冬青
苷 C、苦丁冬青苷 A、苦丁冬青苷 E、苦丁冬青苷 D 7 个三萜皂苷类成分的量。方法 采用 YMC C18色谱柱（YMC-pack ODS-A，
250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，体积流量为 1.0 mL/min，检测波长为 210 nm，柱温为 30 ℃。结
果 7 个三萜皂苷化合物均有良好的分离度，具有良好的线性范围和线性关系（r＞0.999 5），平均加样回收率在 99.25%～
100.80%，RSD＜2%。结论 该方法简单准确，具有良好的重复性和稳定性，可为苦丁茶冬青质量控制提供科学依据。
关键词：苦丁茶冬青；大叶冬青苷 G；大叶冬青苷 H；苦丁冬青苷 G；大叶冬青苷 C；苦丁冬青苷 A；苦丁冬青苷 E；苦丁
冬青苷 D；HPLC
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)07 - 1052 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.07.021
Simultaneous determination of seven triterpenoid saponins in Ilex kudingcha
with HPLC
YANG Tao, TAN Qing-long, ZHU Jin-ping, ZHOU Jin-song, ZHANG Lei, YANG Bao, ZHAO Zhong-xiang
School of Chinese Materia Medica, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China
Abstract: Objective To establish an HPLC method for simultaneously determining latifoloside G, latifoloside H, kudinoside G,
latifoloside C, kudinoside A, kudinoside E, and kudinoside D in Ilex kudingcha. Methods The separation was performed on a YMC
C18 column (YMC-pack ODS-A, 250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with water-acetonitrile as the mobile phase in a gradient elution at a flow
rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 210 nm and the column temperature was 30 . ℃ Results Seven triterpenoid
saponins all have good separating degree, good linear range, and linearity (r > 0.999 5). The average sample recovery rates were
99.25%—100.8%, RSD < 2%. Conclusion The established method is rapid, accurate, and with has repeatability and stability, which
could provides the scientific evidence for the quality control of I. kudingcha.
Key words: Ilex kudingcha C. J. Tseng; latifoloside G; latifoloside H; kudinoside G; latifoloside C; kudinoside A; kudinoside E;
kudinoside D; HPLC

苦 丁 茶 Ilicis Folium 主 要 来 源 冬 青 科
（Aquifoliaceae）苦丁茶冬青 Ilex kudingcha C. J.
Tseng 干燥的叶子，具有散风热、清头目、止头痛
等功效[1-2]。现代药理研究也表明，苦丁茶冬青具有
改善心血管系统、调血脂、降血压、抗氧化、降血
糖、抗菌、抗炎和提高免疫力等作用。苦丁茶冬青
化学成分丰富，主要有皂苷类、黄酮类、多酚类和
挥发油等[3-8]，其中三萜皂苷类化合物是最重要的活
性成分，目前针对苦丁茶冬青中三萜皂苷类成分的
量测定还少有文献报道[9-10]。本实验在前期化学成
分研究基础上，建立了同时测定苦丁茶冬青中 7 个
三萜皂苷类成分的测定方法，可以较为全面地反映
苦丁茶冬青的品质，为其质量控制和临床应用提供
基础研究资料。
1 仪器与材料
LC-20AT 高效液相色谱仪、SIL-20A 自动进样
器、LC solution 色谱工作站（日本岛津）；KQ3200B
超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；
AEG-220 型电子分析天平（日本岛津）。色谱乙腈
（瑞典 Oceanpak 色谱溶剂）；水为超纯水；其他试剂

收稿日期：2014-10-13
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81270054，30901954）；广州市珠江科技新星专项（2011J2200047）；广东省优秀青年教师培养计划
（Yq2013045）；广东省自然科学基金资助项目（9451040701003203）
*通信作者 赵钟祥（1979—），男，教授。Tel: (020)39358072 E-mail: zzx37@163.com
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均为分析纯。
实验药材（共 10 批）购买自广西、广东两省药
材市场或药房，由广州中医药大学周劲松副教授鉴
定为冬青科冬青属植物苦丁茶冬青 Ilex kudingcha
C. J. Tseng 干燥的叶子。大叶冬青苷 G、大叶冬青
苷 H、苦丁冬青苷 G、大叶冬青苷 C、苦丁冬青苷
A、苦丁冬青苷 E、苦丁冬青苷 D 对照品由本实验
室自制，经 HPLC 检测均为单一化合物，质量分数
在 98.0%以上。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
YMC C18色谱柱（YMC-pack ODS-A，250 mm×
4.6 mm，5 μm）；柱温 30 ℃；流动相为乙腈（A）-
水（B），梯度洗脱（0～15 min，25%～33% A；15～
25 min，33% A；25～30 min，33%～40% A；30～
40 min，40% A）；体积流量 1 mL/min；检测波长
210 nm。混合对照品与样品的 HPLC 色谱图见图 1。


1-大叶冬青苷G 2-大叶冬青苷H 3-苦丁冬青苷G 4-大叶冬青
苷 C 5-苦丁冬青苷 A 6-苦丁冬青苷 E 7-苦丁冬青苷 D
1-latifoloside G 2-latifoloside H 3-kudinoside G 4-latifoloside
C 5-kudinoside A 6-kudinoside E 7-kudinoside D
图 1 混合对照品 (A) 与样品 (B) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of a mixed reference substances (A) and I.
kudingcha samples (B)
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液制备 分别精密称取上述 7
个对照品适量，用色谱甲醇溶解，配成大叶冬青苷
G、大叶冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、大叶冬青苷 C、
苦丁冬青苷 A、苦丁冬青苷 E、苦丁冬青苷 D 质
量浓度分别为 0.51、0.48、0.12、0.10、0.59、0.15、
0.11 mg/mL 的混合对照品储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取药材粉末约 1.0 g，精
密称定，置 100 mL 具塞锥形瓶中，精密加入 40 mL
甲醇，称定质量，密塞超声提取 40 min，放冷，再
称定质量，用甲醇补足差量，摇匀，0.45 μm 微孔
滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
在“2.1”项色谱条件下，分别精密吸取 7 种三
萜皂苷混合对照品溶液 2、5、10、20、35、45 μL
进样测定，以进样三萜皂苷对照品质量（X）对峰面
积（Y）作图，求得回归方程，见表 1。结果表明各
化合物在各自质量浓度范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
在“2.1”项色谱条件下对混合对照品溶液重复
进样 6 次，每次 10 μL，记录峰面积，计算 7 个化
合物的 RSD 值分别为 1.14%、1.03%、1.20%、1.17%、
0.80%、1.42%、1.15%。
2.5 稳定性试验
精密称定苦丁茶冬青药材粉末 1.0 g，按供试品
溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条
件操作，分别在室温下放置 0、2、4、8、12、24 h
后进样分析，测定各组分的峰面积。按峰面积计算
大叶冬青苷 G、大叶冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、
大叶冬青苷 C、苦丁冬青苷 A、苦丁冬青苷 E、苦
丁冬青苷 D 的 RSD 分别为 0.97%、1.88%、1.79%、
0.99%、1.01%、1.80%、1.74%，表明供试品溶液在
表 1 7 个三萜皂苷的线性关系考察结果
Table 1 Regression equations with correlation coefficients of seven triterpenoid saponins
化合物 回归方程 r 线性范围/μg
大叶冬青苷 G Y＝1.100 6×105 X＋1.551 1×103 0.999 9 1.02～22.95
大叶冬青苷 H Y＝9.051 4×104 X－5.889 9×103 0.999 9 0.96～21.60
苦丁冬青苷 G Y＝1.165 6×105 X＋3.706 2×103 0.999 5 0.24～ 5.40
大叶冬青苷 C Y＝1.325 6×105 X－1.747 8×103 0.999 6 0.20～ 4.50
苦丁冬青苷 A Y＝2.393 2×105 X＋3.807 8×103 0.999 9 1.18～26.55
苦丁冬青苷 E Y＝1.610 3×105 X＋3.220 0×103 0.999 9 0.30～ 6.75
苦丁冬青苷 D Y＝2.488 1×105 X－5.965 1×103 0.999 9 0.22～ 4.95

1 2
3 4
5
6 7
1 2
34
5
6 7
0 5 10 15 20 25 30 35
A
B
t/min
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24 h 内稳定。
2.6 重复性试验
精密称取同一批供试品药材 1.0 g，按供试品溶
液制备方法平行制备 6 份供试品溶液，在“2.1”项
色谱条件下测定 7 个化合物的色谱峰面积，计算大
叶冬青苷 G、大叶冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、大
叶冬青苷 C、苦丁冬青苷 A、苦丁冬青苷 E、苦丁
冬青苷 D 质量分数的 RSD 分别为 1.32%、1.70%、
0.75%、1.64%、1.24%、1.89%、1.94%。
2.7 加样回收率试验
取已知量的苦丁茶冬青药材粉末 6 份，每份 0.5
g，精密称定。加入等同于药材样品中相应量的 7
种对照品。按供试品溶液制备方法制备，按“2.1”
项下色谱条件进行测定，计算大叶冬青苷 G、大叶
冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、大叶冬青苷 C、苦丁
冬青苷 A、苦丁冬青苷 E、苦丁冬青苷 D 的加样
回收率分别为 99.59%、99.81%、100.5%、99.49%、
99.25%、100.8%、100.0%，RSD 分别为 0.68%、
0.40%、0.60%、0.87%、1.02%、0.43%、1.47%。
2.8 样品测定
取广东和广西不同产地的苦丁茶冬青药材，精
密称定 1.0 g，按“2.2.2”项下操作，每个批号药材
平行制备 3 份，再按“2.1”项下色谱条件进行测定，
并计算样品中 7 种成分的量。结果见表 2。
表 2 苦丁茶冬青药材中 7 个三萜皂苷的测定结果 (n = 3)
Table 2 Determination of seven triterpenoid saponins in I. kudingcha (n = 3)
质量分数/(mg·g−1) 编号 来源
大叶冬青苷 G 大叶冬青苷 H 苦丁冬青苷 G 大叶冬青苷 C 苦丁冬青苷 A 苦丁冬青苷 E 苦丁冬青苷 D 总量
1 广西 33.81 16.40 11.48 3.47 42.79 8.51 5.12 121.57
2 广西 25.04 12.41 12.58 3.19 32.29 6.65 7.00 99.16
3 广西 38.25 27.30 6.46 3.06 72.50 18.79 8.78 175.15
4 广西 7.71 11.04 7.77 6.22 46.66 27.08 7.07 113.55
5 广西 21.07 17.18 20.58 3.94 19.96 16.88 8.74 108.35
6 广西 43.36 25.85 15.90 5.78 61.96 17.02 8.78 178.66
7 广东 37.88 25.46 9.52 3.70 61.28 14.00 9.08 160.90
8 广东 24.21 13.02 7.30 2.65 33.25 8.18 4.33 92.94
9 广东 22.60 12.51 11.55 3.67 34.60 9.33 7.67 101.92
10 广东 22.14 12.44 7.02 2.56 30.93 8.15 5.79 89.03

3 讨论
在选择波长方面，上述 7 个三萜皂苷类成分的
紫外扫描图谱显示，大叶冬青苷 G、大叶冬青苷 H、
苦丁冬青苷 G、大叶冬青苷 C、苦丁冬青苷 A 的
最大吸收波长在 205～210 nm，苦丁冬青苷 E 和苦
丁冬青苷 D 的最大吸收波长均为 261 nm。虽然苦丁
冬青苷 E和苦丁冬青苷 D的最大吸收波长不为 210
nm，但是在该波长下也有较强吸收，而大叶冬青苷
G、大叶冬青苷 H、苦丁冬青苷 G、大叶冬青苷 C、
苦丁冬青苷 A 在波长 261 nm 附近均无吸收。因此，
采用 261 nm 作为检测波长只能检出苦丁冬青苷 E
和苦丁冬青苷 D，而以 210 nm 作为检测波长则可同
时测定 7 个化合物。考虑到采用单波长检测时，操
作更为简便、检测方法适用性更好，而且采用 210
nm 波长检测时，各化合物的线性、精密度、加样
回收率等方法学考察均符合定量测定要求，完全能
满足苦丁茶冬青药材测定的要求，因此最终选择
210 nm 作为检测波长。
在供试品溶液制备方法考察时，比较了甲醇、
75%甲醇、水 3 种提取溶剂，结果显示，甲醇为最
佳溶媒；比较了超声提取和回流提取方法，结果显
示，用超声提取方法操作简单、提取完全、制备的
供试品干扰少；最后考察了用甲醇超声提取 30、40、
50、60 min 的效果，结果显示，30 min 的提取率低
于 40 min 的提取率，而 40、50、60 min 的提取量
没有明显差别，所以最后选用甲醇超声提取 40 min
作为制备供试品溶液的方法。
在选择流动相方面，分别用了甲醇-水、乙腈-
水、乙腈-水（含 0.02%三氟乙酸）3 个不同系统进
行了分析，结果显示，乙腈-水系统对 7 个三萜皂苷
成分的分离度优于甲醇-水系统，而且乙腈-水比乙
腈-水（含 0.02%三氟乙酸）系统的信噪比高，且分
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离度相差不大，所以流动相选择了乙腈-水系统。
实验结果显示广东、广西两地的苦丁茶冬青中
的三萜皂苷总量没有明显差异，但是不同批次药材
之间差异显著，可能与药材采收时间、加工工艺和
储藏时间有关。本实验建立了 HPLC 法同时测定苦
丁茶药材中 7 个三萜皂苷类成分的量，该方法简单、
有效、准确，因此可以考虑作为苦丁茶冬青药材质
量优劣的控制标准。根据实验结果，苦丁茶冬青药
材三萜皂苷类成分量的限度暂定为以干燥品计算，
每克药材中各化合物的总量不低于 85 mg。
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