全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 5 期 2016 年 3 月 ·760·
女贞子生品及炮制品的 HPLC 指纹图谱研究
杨光明 1，陈晓红 1, 2，刘 路 1，陆兔林 1*，蔡宝昌 1*
1. 南京中医药大学，江苏省中药炮制重点实验室，国家中医药管理局中药炮制标准重点研究室，国家教育部中药炮制规
范化及标准化工程研究中心，江苏 南京 210023
2. 青海大学医学院，青海 西宁 810001
摘 要：目的 建立女贞子生品及其炮制品的 HPLC 指纹图谱。方法 采用 Purospher® STAR RP18 Endcapped（250 mm×4.6
mm，5 μm）色谱柱，以水-乙腈为流动相，梯度洗脱，体积流量 1.0 mL/min，检测波长 282 nm，柱温 25 ℃；采用《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统》（2012.130723 版）软件进行分析。结果 优化了 HPLC 色谱条件，在女贞子生品及其炮制品
的谱图中分别标定了 19 个共有指纹特征峰，确定了红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 5 个化合物，
建立了 10 个不同批次的女贞子生品及炮制品 HPLC 指纹图谱，相似度高。结论 该方法快速、简便、准确，符合指纹图谱
技术要求，可作为控制女贞子质量的分析方法。
关键词：女贞子；制女贞子；指纹图谱；HPLC；质量评价
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)05 - 0760 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.05.012
HPLC fingerprints of crude and processed Ligustri Lucidi Fructus
YANG Guang-ming1, CHEN Xiao-hong1, 2, LIU Lu1, LU Tu-lin1, CAI Bao-chang1
1. Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine for Standardization of Chinese Medicine Processing &
Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing, Standardization and Standardization Engineering Research Center of
Chinese Materia Medica Processing, Ministry of Education, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China
2. Medical College, Qinghai University, Xining 810001, China
Abstract: Objective To set up an analysis method of chromatographic fingerprint for crude and processed Ligustri Lucidi Fructus by
HPLC. Methods Purospher® STAR RP18 Endcapped column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used for separation. The separation
process was carried out using a gradient elution, which was based on a mobile phase of the mixture aqueous solution with water-
acetonitrile at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 282 nm and the column temperature was 25 ℃. The
chromatographic fingerprints were analyzed with the Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM
(2012.130723 Edition). Results Totally 19 common fingerprint peaks and five constituents including salidroside, privet glycosides,
especially privet glycoside, oleuropein, and oleonuezhenide were identified after optimization of the detection wavelength, mobile
phase, and gradient elution conditions. Furthermore, the similarity of HPLC fingerprints of 10 batches of Ligustri Lucidi Fructus was
high, being over 0.9. Conclusion The present methodology meets the technical requirements of fingerprint with the rapid, simple,
and accuracy properties and could be a basis for the intrinsic quality control standard for Ligustri Lucidi Fructus.
Key words: Ligustri Lucidi Fructus; processed products; fingerprint; HPLC; quality control

女贞子 Ligustri Lucidi Fructus 又称冬青子、女
贞实，为木犀科（Oleaceae）女贞属 Ligustrum L.
植物女贞 Ligustrum lucidum Ait. 的干燥成熟果实，
味甘、苦，性凉，归肝、肾经。主要用于治疗肝肾
阴虚、眩晕耳鸣、腰膝酸软、须发早白、目暗不明、
内热消渴、骨蒸潮热等症。常规炮制方法为酒蒸、

收稿日期：2015-08-21
基金项目：科技部“国家科技重大专项”资助项目（2012ZX09304005）；江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）；江苏高校品牌专业建
设工程一期项目（PPZY2015A070）
作者简介：杨光明，女，博士，副研究员，研究方向为中药炮制及中药质量标准研究。E-mail: ygmm0901@hotmail.com
*通信作者 陆兔林，教授，博士生导师，研究方向为中药炮制及中药质量标准研究。E-mail: lutuling2005@126.com
蔡宝昌，教授，博士生导师，研究方向为中药炮制及中药质量标准研究。E-mail: bccai@126.com

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清蒸，另外还有醋制、盐制等[1-3]。女贞子含有三萜
类、环烯醚萜类[4]、黄酮类、苯乙醇苷类化合物以
及挥发油、多糖、氨基酸、脂肪酸、微量元素等化
学成分[5]。近年来研究表明，女贞子具有保肝、抗
氧化、抗衰老、免疫调节、抗癌等药理作用，临床
上可应用于肝炎、内分泌代谢病和反复呼吸道感染
等疾病的治疗，其对肾功能和血液系统也有一定的
影响[6-10]。
随着中药的广泛应用，其有效性、安全性问题
引起了广泛关注，建立高品质的质量标准以保证药
材的质量是一项长期而艰巨的任务[11]。目前，中药
质量控制的方法只对其中少数已知成分进行分析，
无法体现中医药的整体性特点，必须发展中药质量
控制的新方法，建立现代质量控制标准的新体系，
中药指纹图谱技术应运而生。中药指纹图谱可以分
析中药中有效成分和无效成分的种类和其量分布的
信息，符合中医药整体性和模糊性的特点，开始逐
渐进入到中药质量控制和评价中，如当归、地黄、
山茱萸等中药指纹图谱的建立[12-15]，也有对中成药
的指纹图谱研究[16-17]。
中药炮制是在中医药理论指导下进行的一种传
统制药技术，通过炮制可以改变中药的药性和功能，
增强临床疗效。女贞子炮制前后药性药效发生改变，
生品清肝明目、滋阴润燥，酒制品滋补肝肾作用增
强。目前，有人对女贞子药材的指纹图谱进行了初
步的研究[18-19]，但尚无对女贞子炮制前后的指纹图
谱进行比较研究。本实验采用 HPLC 法对女贞子生
品及其炮制品进行研究，为女贞子生品及其炮制品
建立指纹图谱，区分女贞子生品及炮制品，同时对
不同来源女贞子样品进行质量评价，旨在更真实地
反映差异，更全面地评价女贞子饮片品质优劣，为
女贞子质量控制提供参考依据。
1 仪器与材料
Waters Alliance e2695 型高效液相色谱仪，包括
Waters 2487 紫外检测器，Waters 2996 二极管阵列
紫外检测器，Waters 2475 多波长荧光检测器，Waters
2414 示差折光检测器；EPED-10TF 型超纯水仪，南
京易普易达科技发展有限公司制造；KQ-500E 型超
声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；BT25S 型
电子分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公
司；TGL-160 型高速台式离心机，上海安亭科学仪
器有限公司。
对照品红景天苷，中国食品药品检定研究院，
批号 110818-201206；女贞苷，南京广润生物制品
有限公司，批号 GR-133-140120；特女贞苷，成都
曼思特生物科技有限公司/中国科学院成都生物研
究所，批号 MUST-14040402；oleonuezhenide，上
海一林生物科技有限公司，型号 112693-21-7；橄榄
苦苷，南京广润生物制品有限公司，批号 GR-133-
131122；质量分数均在 98%以上。
乙腈，色谱纯，ANPEL Laboratory Technologies
(Shanghai) Inc.；甲醇，分析纯，南京化学试剂有限
公司；水为超纯水。实验用女贞子样品均由安徽丰
原铜陵中药饮片有限公司，均经南京中医药大学药
学院刘训红教授鉴定为木犀科女贞属植物女贞
Ligustrum lucidum Ait. 的干燥成熟果实，女贞子生
品及制品详细信息见表 1。

表 1 女贞子生品及制品详细信息
Table 1 Detailed information of crude and processed
Ligustri Lucidi Fructus
编号 产地 批号 规格 编号 产地 批号 规格
s1 湖北 140412 生品 z1 湖北 140412 酒蒸品
s2 浙江 131108 生品 z2 浙江 131108 酒蒸品
s3 浙江 140508 生品 z3 浙江 140508 酒蒸品
s4 河南 140508 生品 z4 河南 140508 酒蒸品
s5 河南 140118 生品 z5 河南 140118 酒蒸品
s6 安徽 140515 生品 z6 安徽 140515 酒蒸品
s7 四川 140401 生品 z7 四川 140401 酒蒸品
s8 福建 140102 生品 z8 福建 140401 酒蒸品
s9 河北 140401 生品 z9 安徽 140306 酒蒸品
s10 江苏 140312 生品 z10 江苏 140102 酒蒸品

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Purospher® STAR RP18 Endcapped 柱
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为水-乙腈，梯
度洗脱：0～2 min，5%乙腈；2～40 min，5%～30%
乙腈；40～45 min，30%乙腈；45～46 min，30%～
5%乙腈；46～50 min，5%乙腈；体积流量 1.0
mL/min；检测波长 282 nm；柱温 25 ℃；进样量
10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
取红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、
oleonuezhenide 对照品适量，精密称定，加 10%乙
腈制成含红景天苷 0.988 mg/mL、女贞苷 0.984
mg/mL、特女贞苷 4.54 mg/mL、橄榄苦苷 0.950

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mg/mL、oleonuezhenide 0.790 mg/mL 的溶液，即得
母液。逐级稀释成不同质量浓度的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取过 4 号筛（65 目）的女贞子生品或制
品粉末 1.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分
数为 95%甲醇 25 mL，称定质量，超声提取 30 min，
室温放置，再称定质量，用 95%甲醇补至原质量，
12 000 r/min 离心 3 min，取上清液，过 0.45 μm 微
孔滤膜，即得。
2.4 指纹图谱方法学考察
2.4.1 空白溶剂的考察 取 95%甲醇溶液，在已经
确定的色谱条件下进样，结果表明溶剂无干扰。
2.4.2 稳定性试验 取同一编号女贞子药材 s3，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在 0、2、4、
8、12、24 h 进样，结果表明各共有峰相对峰面积及
相对保留时间的 RSD 均小于 3%，表明供试品溶液
在 24 h 内稳定性良好。
2.4.3 精密度试验 取同一编号女贞子药材 s3，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，连续进样 6 次，
结果表明各共有峰相对峰面积及相对保留时间的
RSD 均小于 3%，表明仪器的精密度良好。
2.4.4 重复性试验 取同一编号女贞子药材 s3，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液 6 份，进样，结果
表明各共有峰相对峰面积及相对保留时间的 RSD
均小于 3%，表明该方法重复性良好。
2.5 指纹图谱的建立与分析
2.5.1 指纹图谱的建立 取女贞子生品及制品各
10 批，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，记录图
谱，并将数据导入中国药典委员会《中药色谱指纹
图谱相似度评价系统》2012.130723 版软件，采用中
位数矢量法进行多点校正生成女贞子生品及制品的
对照指纹图谱，10 批女贞子生品、制品 HPLC 指纹
图谱共有模式及对照指纹图谱见图 1。
2.5.2 共有峰相对保留时间和相对峰面积的测定
《中国药典》2010 年版一部规定特女贞苷为女贞子
中的标志成分，同时根据 10 批女贞子药材及其炮制
品 HPLC 图分析，发现均有 19 个共有峰，其中生
品、制品均含有 18 号峰，且响应最强，故选择 18
号峰作为参照峰（S，与对照品比对确认为特女贞
苷），计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
结果其共有峰相对保留时间的 RSD 小于 2%，相对
峰面积的 RSD 在 7%～38%，表明各产地药材成分
相似，共有成分的相对质量分数差异较大，推测由
于受到药材产地、采集时间等因素影响。
2.5.3 色谱峰指认与生、制品对比 取“2.2”项下
方法制备的混合对照品溶液，进样，记录色谱图，
见图 2-Z。
将混合对照品溶液与生品及制品色谱图进行比
对，在已确定的 19 个共有峰中，指认出 5 个成分，
其中 7 号峰为红景天苷，16 号峰为女贞苷，18 号峰
为特女贞苷，21 号峰为橄榄苦苷，23 号峰为
oleonuezhenide。其余 14 个为未知峰。
女贞子生、制品 HPLC 指纹图谱之间差异显著，
一些成分的量发生了明显的变化，如红景天苷的量
大幅增加，而女贞苷、橄榄苦苷的量明显降低，特
别是橄榄苦苷，从量很高降低到几乎为零；有些成
分从无到有，如制品图中的 5 号峰、12 号峰。女贞
子生、制品指纹图谱镜像图中标出了变化较大的 7
个色谱峰（成分），见图 2。
2.5.4 指纹图谱相似度计算 采用中国药典委员会
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012.130723
版，将 10 批次女贞子生品及 10 批次女贞子制品指
纹图谱数据导入，以中位数矢量法生成对照指纹图
谱。由于采用梯度洗脱的方式及实验中不可避免因
素的影响，各批次供试品指纹图谱中色谱峰保留时
间会产生一定迁移，因而不采用自动校正的方式，
而是通过多点校正法对色谱峰保留时间进行校正，
以 s3（生女贞子）、z3（制女贞子）作为相似度计
算时校正的参考，最终生成女贞子生品及制品的对
照指纹图谱。计算各批次女贞子生、制品指纹图谱
相似度，表明有较高的相似性，见表 2、3。
2.6 验证试验
另取女贞子生、制品各 10 批次对已建立的指纹
图谱进行验证，样品来自湖北、浙江、河南、广西、
四川、安徽、湖南等省，见表 4。
将 10 批次女贞子生品及 10 批次制女贞子指纹
图谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统》，以已生成的对照图谱为参照图谱，计算相似度。
10 批女贞子生品（ys1、ys2、ys3、ys4、ys5、
ys6、ys7、ys8、ys9、ys10）与已生成的对照图谱相
似度计算结果分别为 1.000、0.983、0.997、0.821、
0.990、0.984、0.995、0.985、0.976、0.958，10 批
女贞子制品（批号 yz1、yz2、yz3、yz4、yz5、yz6、
yz7、yz8、yz9、yz10）与已生成的对照图谱相似度
计算结果分别为 0.926、0.932、0.864、0.901、0.905、
0.870、0.889、0.906、0.892、0.870。结果发现女贞

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图 1 10 批生女贞子 (s)、制女贞子 (z) 指纹图谱共有模式 (G) 及对照指纹图谱 (R)
Fig. 1 Fingerprint patterns (G) and control fingerprints (R) of 10 batches of crude (s) and processed (z) Ligustri Lucidi Fructus
1
2
3 5
6
7
8 9
10
11
12 13 14
16
18 (S)
19
20
23 21
0 10 20 30 40 50
t/min
z-R
s-R
s10
s9
s8
s7
s6
s5
s4
s3
s2
s1
s-G
z-G
z-R

z10

z9

z8

z7

z6

z5

z4

z3

z2

z1
1
3 4
6
7 9 10
11
13 14
15
16
17
18 (S)
19
21
22
23
24
s-R

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7-红景天苷 16-女贞苷 18-特女贞苷 21-橄榄苦苷 23-oleonuezhenide
7-salidroside 16-nuezhenoside 18-specnuezhenide 21-oleuropein 23-oleonuezhenide

图 2 女贞子生品 (A)、制品 (B) 指纹图谱镜像图及混合对照品 HPLC 图 (Z)
Fig. 2 HPLC of mixed reference substances (Z) and mirror image of crude (A) and processed (B) Ligustri Lucidi Fructus

表 2 10 批女贞子生品指纹图谱相似度计算结果
Table 2 Similarities of fingerprint for 10 batches of crude Ligustri Lucidi Fructus
样品 s1 s2 s3 s4 s5 s6 s7 s8 s9 s10 对照
s1 1.000
s2 0.980 1.000
s3 0.975 0.997 1.000
s4 0.983 0.997 0.996 1.000
s5 0.990 0.996 0.993 0.997 1.000
s6 0.994 0.981 0.970 0.978 0.987 1.000
s7 0.994 0.982 0.980 0.985 0.992 0.989 1.000
s8 0.985 0.976 0.963 0.969 0.979 0.995 0.976 1.000
s9 0.956 0.986 0.977 0.973 0.974 0.969 0.952 0.974 1.000
s10 0.986 0.960 0.947 0.957 0.970 0.994 0.976 0.993 0.952 1.000
对照 0.994 0.994 0.989 0.993 0.997 0.995 0.993 0.990 0.979 0.983 1.000

子生品除 4 号河南产女贞子外，其他产地的女贞子
生品相似度均在 0.9 以上，而制女贞子为湖北、河
南产较好，相似度均在 0.9 以上，表明已建立的指
纹图谱可以作为评价女贞子及其炮制品质量的依据
之一。
3 讨论
3.1 提取与分析方法的考察
实验中考察了 2 号筛（24 目）、3 号筛（50 目）、
4 号筛（65 目）、5 号筛（80 目）4 种粉碎粒度。结
果发现通过 4 号筛和 5 号筛的女贞子粉末得到的峰
A
B
0 10 20 30 40 50
t/min
7
18 16
23
21
Z

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表 3 10 批制女贞子指纹图谱相似度计算结果
Table 3 Similarities of fingerprint for 10 batches of processed Ligustri Lucidi Fructus
样品 z1 z2 z3 z4 z5 z6 z7 z8 z9 z10 对照
z1 1.000
z2 0.999 1.000
z3 0.997 0.998 1.000
z4 0.994 0.993 0.997 1.000
z5 0.990 0.990 0.995 0.996 1.000
z6 0.996 0.995 0.992 0.987 0.980 1.000
z7 0.996 0.994 0.991 0.986 0.985 0.996 1.000
z8 0.983 0.982 0.988 0.989 0.986 0.980 0.976 1.000
z9 0.997 0.998 0.996 0.990 0.986 0.998 0.996 0.981 1.000
z10 0.987 0.984 0.987 0.987 0.978 0.990 0.982 0.995 0.987 1.000
对照 0.999 0.998 0.998 0.996 0.992 0.997 0.995 0.990 0.998 0.992 1.000

表 4 验证用女贞子生品及制品详细信息
Table 4 Detailed information of verification for crude and
processed Ligustri Lucidi Fructus
编号 产地 批号 规格 编号 产地 批号 规格
ys1 湖北 140401 生品 yz1 湖北 140401 酒蒸品
ys2 湖北 140302 生品 yz2 湖北 140302 酒蒸品
ys3 浙江 130905 生品 yz3 浙江 130905 酒蒸品
ys4 河南 140520 生品 yz4 河南 140520 酒蒸品
ys5 河南 140524 生品 yz5 河南 140524 酒蒸品
ys6 广西 140420 生品 yz6 广西 140420 酒蒸品
ys7 四川 140218 生品 yz7 四川 140218 酒蒸品
ys8 四川 140420 生品 yz8 四川 140420 酒蒸品
ys9 湖南 140408 生品 yz9 湖南 140408 酒蒸品
ys10 安徽 140312 生品 yz10 安徽 140312 酒蒸品

面积差异不大，且粉末较易通过 4 号筛，故本实验
采用 4 号筛的粉碎粒度。
采用体积分数为 60%、80%、95%甲醇提取溶
剂超声 30 min，结果采用体积分数 95%甲醇提取溶
剂出峰数较多且活性成分特女贞苷得率略高，故选
择体积分数 95%甲醇作提取溶剂。
本实验考察了超声 30、45、60 min 及回流 60
min 4 种提取方法，结果表明超声 30 min 的提取方
法提取效率高且简单方便，故采用超声 30 min 的
提取方法。
经过全波长扫描分析女贞子提取物的色谱行
为，254 nm 下峰高较高但峰的个数较少，282 nm
下峰高相对较低但峰的个数较多，各个峰的分离度
较好，因此确定 282 nm 作为女贞子生品及其炮制
品指纹图谱的检测波长。
比较乙腈-水、甲醇-水 2 种流动相系统，结果表
明，女贞子提取物在乙腈-水体系下出峰较多且色谱
峰分离较好，故采用乙腈-水体系作为流动相系统。
本实验考察了 20、25、30 ℃ 3 种温度的高效
液相色谱图，25 ℃时出峰较快且色谱峰分离较好，
故色谱分析中采用柱温 25 ℃。
设定不同的洗脱梯度，根据其洗脱梯度下的色
谱峰的峰形及分离度，最终确定最佳洗脱梯度为
“2.1”项下梯度。
3.2 指标性成分的选择
崔蕴慧等[20]建立的女贞子指纹图谱以红景天
苷、特女贞苷为指标性成分。大量研究表明，女贞
苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 均为女贞子中有效
活性成分，有较好的药理作用。女贞子中的环烯醚
萜类成分橄榄苦苷对病毒具有抑制作用，女贞苷具
有清除自由、抗氧化作用，特女贞苷可协同刀豆球
蛋白 A（ConA）提高对 T 淋巴细胞的刺激作用，且
与红景天苷都能显著提高由环磷酰胺抑制的 NK 细
胞杀伤功能，都对免疫有调节的作用，而红景天苷
具有明显的肝脏保护作用，对非特异性免疫、体液
免疫和细胞免疫均有提高作用，也能对抗免疫抑制
剂对骨髓造血功能的抑制[21-22]。这些有效成分在建
立的指纹图谱中都有较好的显示，故将其作为指标
性成分。
3.3 指纹图谱研究
本实验采用 HPLC 法，通过全波长扫描的方法

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确定了指纹图谱的检测波长，以女贞子的有效成分
红景天苷、女贞苷、特女贞苷、橄榄苦苷、
oleonuezhenide 为指标性成分而建立指纹图谱，确
定了 19 个共有峰。女贞子相似度评价结果表明，10
批供试品的 HPLC 指纹图谱相似度高，处于 0.90～
1.00，表明各样品的相似情况良好，且各共有峰保
留时间稳定，符合中药指纹图谱的技术要求。说明
本实验所建立的指纹图谱精密度高，重复性好，稳
定性可靠，可以作为控制女贞子质量的依据之一。
本实验比较了 10 个不同产地女贞子及其炮制
品的指纹图谱，相似度均在 0.9 以上，其共有峰相
对保留时间的 RSD 小于 2%，但相对峰面积的 RSD
差异较大，表明各产地药材成分相似，但各共有成
分的量比例差异较大，可能是受到药材产地、采集
时间等因素影响，因此，尚需采集更多的样本，进
行归类比较，使其质量控制更具有科学性。
对比女贞子炮制前后的 HPLC 色谱峰可以看
出，炮制对女贞子的 HPLC 图谱有影响。炮制前后
的 HPLC 色谱峰有明显的不同，炮制后女贞苷、特
女贞苷、橄榄苦苷、oleonuezhenide 的色谱峰的峰
面积明显减小，说明炮制后这些成分的量减少，红
景天苷的色谱峰的峰面积明显增加，说明炮制后其
量增加。另外，其他色谱峰也有所变化，对于其成
分的定性尚待进一步研究。
3.4 结论
本实验采用 HPLC 法，建立了女贞子及其炮制
品的指纹图谱，标定了 19 个共有指纹特征峰，指认
了其中的 5 个成分，发现不同批次的女贞子指纹图
谱有一定差异，生品与炮制品指纹图谱中的共有峰
相对峰面积亦不相同，为女贞子及其炮制品质量控
制提供了依据。
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