全 文 :·2428· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月
胶艾汤对血虚模型大鼠补血作用的有效部位筛选
贾 梅,郑传柱,张 丽*,丁安伟
南京中医药大学 江苏省方剂高技术研究重点实验室/江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏 南京 210023
摘 要:目的 比较胶艾汤不同溶剂提取部位对血虚模型大鼠外周血象、免疫器官指数、白细胞介素 2(IL-2)和促红细胞生
成素(EPO)水平以及红细胞膜能量代谢酶活性的影响,筛选胶艾汤补血作用的有效部位。方法 采取每天于眼底静脉丛放血
5 mL/kg,连续放血 12 d的方法,复制大鼠血虚模型;造模同时各组动物分别 ig给予胶艾汤及其正丁醇、石油醚、醋酸乙酯、
水部位浸膏(剂量均为生药量 12 g/kg),以复方阿胶浆为阳性对照。造模第 12天检测各组大鼠外周血红细胞计数(RBC)、血
红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、血小板计数(PLT),计算脾脏和胸腺器官指数,检测血清中 IL-2和 EPO水平,检测全
血红细胞膜能量代谢酶 Na+, K+-ATP及 Ca2+, Mg2+-ATP酶活性,UPLC法初步分析胶艾汤不同提取部位的化学成分差异。结果
与对照组比较,模型组大鼠 RBC、HGB、HCT、PLT、胸腺指数以及 IL-2水平明显降低,Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP酶
活性明显减弱,脾脏指数及 EPO水平明显升高,表明血虚模型复制成功。与模型组比较,胶艾汤正丁醇组可明显升高 HCT、
RBC、HGB、PLT(P<0.05、0.01);降低脾脏指数及 EPO水平(P<0.05、0.01);明显升高胸腺指数、IL-2水平(P<0.01),
升高红细胞膜 Ca2+, Mg2+-ATP酶及 Na+, K+-ATP酶活性(P<0.05、0.01)。石油醚组可明显升高 PLT及 IL-2水平(P<0.01),
降低 EPO 水平及脾脏指数(P<0.05、0.01)。醋酸乙酯组可明显降低脾脏指数及 EPO 水平(P<0.01),升高红细胞膜 Ca2+,
Mg2+-ATP 酶活性(P<0.05)。水部位组可明显升高 PLT(P<0.05),降低 EPO 水平(P<0.01)。胶艾汤正丁醇提取部位中检
测到其他提取部位不含有的咖啡酸、苯甲酰芍药苷、甘草酸铵,且正丁醇提取部位中没食子酸、原儿茶酸、磷酸川芎嗪、绿原
酸的量均高于胶艾汤醋酸乙酯和水提取部位。结论 正丁醇部位是胶艾汤补血作用的最强有效部位。
关键词:胶艾汤;补血作用;部位筛选;促红细胞生成素;Na+, K+-ATP酶;Ca2+, Mg2+-ATP酶
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2015)16 - 2428 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.16.015
Screening of effective parts in Jiaoai Decoction with blood enriching function in
blood deficiency model rats
JIA Mei, ZHENG Chuan-zhu, ZHANG Li, DING An-wei
Jiangsu Key Laboratory for High Technology Research of TCM Formulae and Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese
Medicinal Resources Industrialization, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China
Abstract: Objective To screen the active parts with enriching the blood effects of different solvent extraction parts from Jiaoai
Decoction (JAD) by comparing the peripheral blood, immune organ index, interleukin 2 (IL-2), and erythropoietin (EPO) and the effect
of content of erythrocyte membrane and energy metabolism enzyme activity of blood deficiency model rats. Methods Taking the
fundus venous plexus blood 5 mL/kg every day, continuous bleeding for 12 d, to establish the rat model of blood deficiency; The model
animals in each group were ig given JAD and n-butanol, petroleum ether, ethyl acetate, parts of water extract (12 g/kg crude drug) with
compound E-Jiao slurry as a positive control. On day 12 of modeling, the erythrocyte count (RBC), hemoglobin (HGB), red blood cell
hematocrit (HCT), platelet count (PLT) were detected in rats and immune organ indexes of spleen and thymus were calculated, the
levels of IL-2 and EPO content were detected, energy metabolism enzymes (Na+, K+-ATPase and Ca2+, Mg2+-ATPase) activity were
investigated; The difference of the chemical constituents in the different solvent extraction of JAD was analyzed by UPLC. Results
Compared with the control group, the RBC, HGB, HCT, PLT, thymus index, and IL-2 levels of rats in the model group decreased
significantly, Na+, K+-ATPase and Ca2+, Mg2+-ATPase activity weakened significantly, the spleen index and EPO levels were significantly
收稿日期:2015-01-30
基金项目:江苏省高校自然科学研究项目(12KJA360002);江苏高校优势学科建设工程资助项目(ysxk-2014)
作者简介:贾 梅(1988—),女,硕士研究生,研究方向为中药复方机制研究。Tel: 18351895576 E-mail: jiamei19891230@163.com
*通信作者 张 丽,女,博士,教授,博士生导师,主要从事中药复方及质量标准研究。Tel: (025)85811509 E-mail: zhangliguanxiong@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月 ·2429·
increased, indicating that blood deficiency model was successfully established. Compared with the model group, HCT, RBC, HGB, and
PLT (P < 0.05, 0.01) of rats in n-butyl alcohol group could be significantly increased; The spleen index and the content of EPO (P <
0.05, 0.01) were reduced; The thymus index and the content of IL-2 (P < 0.01) were increased, the erythrocyte Ca2+, Mg2+-ATPase and
Na+, K+-ATPase activity (P < 0.05, 0.01) was elevated. The contents of PLT and IL-2 (P < 0.01) in petroleum ether group could be
obviously increased; The content of EPO and the spleen index (P < 0.05, 0.01) were decreased. The ethyl acetate fractions could
obviously reduce the spleen index and the content of EPO (P < 0.01), increase Ca2+, Mg2+-ATPase activity in erythrocytes (P < 0.05). In
water group PLT (P < 0.05) could be significantly increased and the content of EPO (P < 0.01) be decreased. There were no coffee
acid, benzoyl paeoniflorin, and ammonium glycyrrhizinate in other solvent extracts of JAD, while the content of gallic acid,
protocatechuic acid, ligustrazine phosphate, and chlorogenic acid in n-butanol extract were higher than those in ethyl acetate and
water extract parts of JAD. Conclusion The n-butanol extract is the most active part of JAD for enriching the blood.
Key words: Jiaoai Decoction; enriching blood effects; parts screening; haemopoietin; hemopoietin; Na+, K+-ATPase; Ca2+, Mg2+-ATPase
胶艾汤出自东汉张仲景《金匮要略》[1],全方
由阿胶、艾叶、甘草、当归、川芎、白芍、生地黄
7 味中药组成,临床主要用于治疗妇人月水过多或
妊娠下血、腹中疼痛,为传统经方,产科要方。实
验研究[2]发现胶艾汤具有补血作用,且本实验室前
期研究也已经证实了胶艾汤的补血作用[3],但胶艾
汤补血作用的物质基础尚不明确,因此,本研究采
用血虚模型大鼠筛选胶艾汤补血作用的有效部位,
为深入研究胶艾汤补血作用的物质基础提供依据。
1 材料
1.1 药材
当归、川芎、白芍、生地黄、艾叶、甘草饮片
均购于安徽丰源铜陵中药饮片有限公司,批号分别
为 121203、121203、121106、120908、121106、
120908;阿胶购于山东福胶集团东阿镇阿胶有限公
司,批号为 120612;上述各饮片均经南京中医药大
学段金廒教授鉴定,分别为伞形科植物当归
Angelica sinensis (Oliv.) Diels. 的干燥根、伞形科植
物川芎 Ligusticum chuanxiong Hort. 的干燥根茎、
毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根、
玄参科植物地黄 Rehmannia glutinosa Libosch. 的干
燥块根、菊科植物艾 Artemisia argyi Lévl. et Vant.
的干燥叶、豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis
Fisch. 的干燥根茎和马科动物驴 Equus asinus L.
的鲜皮经加工而成。
1.2 仪器
血液细胞分析仪(ABX Pentra XL80),
Anke-LXJ-11B 离心机(上海安寿科学仪器厂),
Waters I Class超高效液相色谱仪(美国沃特世公司),
SHANGPING YP601N型 1/10电子天平(上海精密
科学仪器有限公司),分析天平(Sartoriusag;
BP211D,d=0.01 mg),紫外/可见分光光度计
(PerkinElmer),超声波清洗机(南京以马内利仪器
设备有限公司,功率 500 W,频率 50 Hz)。
1.3 试药与试剂
复方阿胶浆(山东东阿阿胶股份有限公司,批
号 1408002)。乙二胺四乙酸二钠(EDTA,国药集
团化学试剂有限公司);肝素(中国惠兴生化试剂
有限公司);水合氯醛、NaCl(国药集团化学试剂
有限公司);超微量 Na+, K+-ATP 酶和 Ca2+,
Mg2+-ATP酶试剂盒(南京建成生物工程研究所);
白细胞介素 2(IL-2)、促红细胞生成素(EPO)ELISA
检测试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司);乙
腈为色谱纯(Merck),超纯水自制,甲酸为色谱纯
(ACS)。芍药苷、甘草酸铵、甘草苷、磷酸川芎嗪、
绿原酸、香草酸对照品均购自中国食品药品检定研
究院,批号分别为 110736-201136、110731-201116、
111610-201106、100845-201002、110753-200413、
110776-200402,各对照品质量分数均在 98%以上;
苯甲酰芍药苷对照品购自 MUST 公司,批号为
MUST-13030401,质量分数在 98%以上;原儿茶酸、
阿魏酸、咖啡酸、毛蕊花糖苷、没食子酸对照品均
购自中国食品药品检定研究院,批号分别为
110809-200604 、 0773-9910 、 110885-200102 、
111530-200505、110831-200302,各对照品质量分
数均在 99%以上。
1.4 实验动物
清洁级雌性 SD大鼠 80只,体质量 180~220 g,
由浙江省实验动物中心提供,许可证号 SCXK(浙)
2014-0001。
2 方法
2.1 胶艾汤及其各提取部位的制备
称取胶艾汤组方各药材饮片共 2 880 g,依文献
方法进行煎煮[4],水煎液减压浓缩得到胶艾汤浸膏
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1 637.1 g(得率 56.84%),取胶艾汤浸膏适量减压
真空干燥,得胶艾汤干燥粉末,保存备用。剩余浸
膏趁热用硅藻土拌样(硅藻土-浸膏 1∶1.5)后置减
压真空干燥箱 55 ℃烘干。再采用系统溶剂提取法对
胶艾汤干燥药粉进行提取,各溶剂提取物减压真空
干燥至干,分别得石油醚部位浸膏 6.5 g(得率
0.23%)、醋酸乙酯部位浸膏 40.2 g(得率 1.40%)、
正丁醇部位浸膏 268.8 g(得率 9.30%)、水部位浸膏
492.0 g(得率 17.08%)。分别称取适量的胶艾汤及 4
个提取部位浸膏,加 0.5% CMC-Na溶液适量,制得
质量浓度(按生药量计算)均为 1.20 g/mL的各供试
品溶液,各供试品溶液置 4 ℃冰箱内保存备用。
2.2 动物分组及给药
按照随机数字表法将实验动物随机分为 8组,
每组 10 只,分别为对照组,模型组,复方阿胶浆
(0.15 g/kg)组,胶艾汤组,胶艾汤石油醚、醋酸乙
酯、正丁醇、水部位组。各给药组均按照临床给药
剂量 2 倍折算成动物给药剂量,即胶艾汤组和胶艾
汤石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水部位组给药剂量
均为 12 g/kg(按生药量计算),按 10 mL/kg给药量
ig给予相应药物,复方阿胶浆组按 12 mL/kg剂量 ig
给予复方阿胶浆(相当于临床给药量的 2倍),对照
组与模型组按 10 mL/kg体积 ig 0.5% CMC-Na溶液,
各组均每天给药 1次,连续给药 12 d。造模与给药
同步进行。
2.3 模型复制
参照文献方法复制大鼠血虚模型[4]。取 SD 大
鼠,按 5.0 mL/kg放血量连续放血 12 d,复制大鼠
血虚模型。
2.4 指标检测
造模期间,每天记录大鼠体质量变化,观察其
反应敏捷度、毛色等的变化。各组大鼠均于造模第
12 天眼底静脉丛采血 1 mL,以 15 mg/mL EDTA
(1∶9)抗凝,采用 ABX Pentra XL80五分类 26项
血液细胞分析仪进行血常规检测,主要指标包括红
细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白
(HGB)、红细胞压积(HCT)4 项指标;静脉丛采
血后的大鼠以 10%水合氯醛麻醉,颈总动脉取血,
以 5 mg/mL肝素抗凝(1∶9),全血按照超微量 Na+,
K+-ATP 酶和 Ca2+, Mg2+-ATP 酶试剂盒说明书测定
Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP酶活性;另取全
血 2 mL(不加抗凝剂)静置 30 min后以 3 000 r/min
离心 10 min,取上层血清用 96T按照 ELISA试剂
盒说明书测定血清中 IL-2 和 EPO 水平。大鼠处死
后,迅速摘取脾脏、胸腺称质量,计算各脏器指数
(脾脏指数=脾脏质量/体质量,胸腺指数=胸腺质
量/体质量)。
2.5 UPLC 法定性分析胶艾汤及其各提取部位的
化学成分
2.5.1 色谱条件 T3色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8
μm);流动相为 0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯
度洗脱程序:0~2 min,0~8% B;2~4 min,8%~
15% B;4~9 min,15%~35% B;9~12 min,35%~
100% B;12~13 min,100% B;13~15 min,100%~
1% B;15~16 min,1% B;柱温 30 ℃;体积流量
0.4 mL/min,进样量 2 μL;检测波长 254 nm。
2.5.2 UPLC 定性分析用供试品溶液的制备 分别
取胶艾汤浸膏 782.0 mg、石油醚部位浸膏 4.3 mg、醋
酸乙酯部位浸膏 20.8 mg、正丁醇部位浸膏 138.9 mg、
水部位浸膏 240.9 mg置 25 mL量瓶中,加 30%乙腈
20 mL超声溶解,定容至刻度,13 000 r/min离心 10
min,取上清液,以 0.22 μm微孔滤膜滤过,即得。
2.5.3 对照品溶液的制备 分别取甘草苷 21.33
mg、原儿茶酸 12.65 mg、苯甲酰芍药苷 6 58 mg、
甘草酸铵 17.05 mg、磷酸川芎嗪 59.23 mg、绿原酸
29.27 mg、阿魏酸 31.64 mg、毛蕊花糖苷 5.54 mg、
芍药苷 19.70 mg、咖啡酸 21.95 mg、没食子酸 48.83
mg、香草酸 33.50 mg,置 25 mL量瓶中,加 30%
乙腈 20 mL溶解,定容至刻度,即得。
2.6 统计学方法
采用 SPSS 17.0 统计软件对数据进行双样本 t
检验及方差分析,所有实验数据均采用 ±x s表示。
3 结果
3.1 对血虚模型大鼠一般体征的影响
对照组大鼠体质量呈平稳上升趋势,皮毛光泽
而密,精神饱满,反应敏捷;血虚模型大鼠,随放
血次数增多,体质量呈下降趋势,反应迟钝,精神
萎靡,毛发蓬松无光泽。
3.2 对血虚模型大鼠外周血象的影响
与对照组比较,模型组大鼠 RBC、HGB、HCT、
PLT均明显降低(P<0.05、0.01)。与模型组比较,
胶艾汤组和正丁醇部位组可明显升高大鼠 HCT、
RBC、HGB、PLT(P<0.05、0.01);复方阿胶浆组、
石油醚组、水部位组可明显升高 PLT(P<0.05、
0.01);复方阿胶浆组可明显升高 RBC(P<0.01)。
结果见表 1。
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表 1 胶艾汤及其各提取部位对血虚模型大鼠外周血象的影响 ( x±s, n = 10)
Table 1 Effects of JAD and different extraction parts on peripheral hemogram in blood deficiency model rats ( x±s, n = 10)
组别 剂量/(g·kg−1) RBC/(×1012·L−1) HGB/(g·L−1) HCT/(L∙L−1) PLT/(×109·L−1)
对照 — 7.65±1.05 140.55± 8.32 40.15±5.43 1 315.20±278.51
模型 — 4.00±0.48## 87.29±11.27## 25.32±3.35## 1 089.30±124.82#
复方阿胶浆 0.15 4.58±0.30** 92.11± 6.36 27.50±2.02 1 352.50± 93.58**
胶艾汤 12 4.59±0.36** 96.72± 5.29* 28.99±1.70** 1 209.44± 91.94*
石油醚部位 12 4.29±0.50 88.63±11.58 27.06±3.15 1 295.89±173.01**
醋酸乙酯部位 12 4.27±0.31 88.73± 7.62 26.98±2.11 1 263.00±251.82
正丁醇部位 12 4.59±0.65* 98.29± 9.53* 29.52±3.04** 1 309.60±225.15*
水部位 12 4.26±0.46 91.62± 9.51 27.74±2.67 1 283.00±183.46*
与对照组比较:#P<0.05 ##P<0.01;与模型组比较:*P<0.05 **P<0.01,下同
#P < 0.05 ##P < 0.01 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group, same as below
3.3 对血虚模型大鼠脾脏和胸腺指数的影响
与对照组比较,模型组大鼠脾脏指数明显升高
(P<0.01)、胸腺指数明显降低(P<0.01)。与模型
组比较,正丁醇组、复方阿胶浆组、胶艾汤组可明
显降低脾脏指数、升高胸腺指数(P<0.05、0.01);
醋酸乙酯组、石油醚组可明显降低脾脏指数(P<
0.05、0.01)。结果见表 2。
3.4 对血虚模型大鼠血清 IL-2、EPO的影响
与对照组比较,模型组大鼠血清 IL-2 明显降
低(P<0.01)、EPO明显升高(P<0.01)。与模型
组比较,正丁醇组、石油醚组、胶艾汤组可明显升
高大鼠血清 IL-2(P<0.05、0.01);胶艾汤组、石
油醚组、醋酸乙酯组、水部位组、正丁醇组可明显
降低大鼠血清 EPO(P<0.01,P<0.05)。结果见
表 3。
表 2 胶艾汤及其各提取部位对血虚模型大鼠脾脏和胸腺
指数的影响 ( x±s, n = 10)
Table 2 Effects of JAD and different extraction parts on
indexes of spleen and thymus in blood deficiency model rats
( x±s, n = 10)
组别
剂量/
(g·kg−1)
脾脏指数/
(mg·g−1)
胸腺指数/
(mg·g−1)
对照 — 2.69±0.59 2.08±0.28
模型 — 5.04±0.61## 1.74±0.21##
复方阿胶浆 0.15 3.66±0.43** 1.96±0.24*
胶艾汤 12 4.38±0.62* 1.98±0.28*
石油醚部位 12 4.17±0.77* 1.91±0.39
醋酸乙酯部位 12 4.13±0.70** 1.75±0.36
正丁醇部位 12 4.05±0.78** 2.11±0.33**
水部位 12 4.63±0.97 1.96±0.39
表 3 胶艾汤及其各提取部位对血虚模型大鼠血清 IL-2、EPO水平和红细胞膜能量代谢酶活性的影响 ( x±s, n = 10)
Table 3 Effects of JAD and different extraction parts on levels of IL-2 and EPO and energy metabolism enzyme of red cell
membrane in blood deficiency model rats ( x±s, n = 10)
组别 剂量/(g·kg−1) IL-2/(ng·L−1) EPO/(U·L−1)
Na+, K+-ATP酶/U
(1×107个 RBC)
Ca2+, Mg2+-ATP酶/U
(1×107个 RBC)
对照 — 1 292.94±43.53 13.22±1.03 9.52±1.78 5.98±1.67
模型 — 1 022.66±37.11## 19.71±0.84## 6.48±1.74## 4.43±1.14#
复方阿胶浆 0.15 1 028.11±80.61 19.17±1.74 9.19±1.35** 5.58±0.60*
胶艾汤 12 1 077.83±49.55* 17.81±1.02** 9.04±0.52** 6.02±1.09*
石油醚部位 12 1 114.65±46.18** 16.98±0.78** 6.76±0.71 5.42±0.87
醋酸乙酯部位 12 1 028.43±41.63 17.20±0.66** 6.81±1.93 5.81±0.68*
正丁醇部位 12 1 088.30±52.76** 18.84±0.64* 9.24±1.97* 6.60±1.10**
水部位 12 1 057.10±49.49 13.38±1.04** 7.31±1.41 4.91±1.26
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3.5 对血虚模型大鼠红细胞膜能量代谢酶的影响
与对照组比较,模型组大鼠全血红细胞膜 Na+,
K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP酶活性明显降低(P<
0.05、0.01)。与模型组比较,胶艾汤组、复方阿胶
浆组可明显升高 Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP
酶活性(P<0.05、0.01);正丁醇组可明显升高 Na+,
K+-ATP 酶和 Ca2+, Mg2+-ATP 酶活性(P<0.05、
0.01);醋酸乙酯组可明显升高 Ca2+, Mg2+-ATP酶活
性(P<0.05)。结果见表 3。
3.6 胶艾汤不同提取部位化学成分分析及比较
对胶艾汤不同提取部位进行 UPLC定性分析,由
图 1和 2可知,胶艾汤醋酸乙酯、正丁醇部位含有共
性成分没食子酸、磷酸川芎嗪、绿原酸。此外,胶艾
汤正丁醇、水部位还含有原儿茶酸、甘草苷。胶艾汤
正丁醇部位中还可以检测到其他提取部位中不含有
的咖啡酸、苯甲酰芍药苷以及甘草酸铵。
1-甘草苷 2-原儿茶酸 3-苯甲酰芍药苷 4-甘草酸铵 5-磷酸川芎嗪 6-绿原酸 7-阿魏酸 8-毛蕊花糖苷 9-芍药苷 10-咖啡酸 11-没食子酸 12-香草酸,图2同
1-liquiritin 2-protocatechuic acid 3-benzoyl paeoniflorin 4-ammonium glycyrrhizinate 5-ligustrazine phosphate 6-chlorogenic acid 7-ferulic acid
8-acteoside 9-paeoniflorin 10-coffee acid 11-gallic acid 12-vanillic acid, same as Fig.2
图 1 各对照品的 UPLC色谱图
Fig. 1 UPLC of each reference sbustance
图 2 胶艾汤及各提取部位 UPLC色谱图
Fig. 2 UPLC of JAD and its each extraction part
4 讨论
中医理论认为血虚证即血液亏虚,多因先天禀
赋薄弱,后天又失及时调养而致精血不足,气血来
源不足而导致[5]。血虚证涵盖了现代医学以贫血特
征为主要表现的多种疾病[6],如再生障碍性贫血[7]、
失血性贫血、溶血性贫血等。文献研究表明,目前
有关血虚证动物模型的造模方法主要有环磷酰胺
(CTX)化学损伤法、60Co辐射法、乙酰苯肼(APH)
溶血法、乙酰苯肼-环磷酰胺复合法和放血法等。环
磷酰胺(CTX)化学损伤法虽操作简单易行,但此
法对红细胞的损伤作用不甚明显,且模型动物的血
象易自然恢复。APH溶血法通过对红细胞进行缓慢
性氧化损伤作用造成血液中红细胞数明显减少,但
该方法仅仅能改变模型动物的外周血象,对模型动
物的造血系统基本无影响。60Co辐射法对设备要求
较高,且辐射程度不宜控制。放血法通过使实验动
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石油醚部位
醋酸乙酯部位
正丁醇部位
水部位
胶艾汤
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46卷 第 16期 2015年 8月 ·2433·
物失血而造成动物血虚模型,与中医上血液亏虚所
致的血虚理论相一致,是最接近中医血虚证本质的
造模方法,故本实验采用放血法复制动物血虚模型。
复方阿胶浆是在中医“损者益之”“劳者温之”
以及“形不足者温之以气,精不足者补之以味”的
指导原则下遣药组方而成[8],全方由阿胶、红参、
熟地黄、党参、山楂 5味中药组成[9]。以往研究[10]
选择复方阿胶浆作为血虚模型实验的阳性药,取得
较好的实验效果,故本实验选择复方阿胶浆作为阳
性药。
血虚证最直接的病理表现为红细胞数量减少,
由于红细胞的主要生理功能为运输氧气,红细胞数
量减少导致机体新陈代谢减慢,从而导致红细胞膜
上重要的酶蛋白 Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP
酶活性随机体新陈代谢作用减弱而降低。血虚状态
下血液不足或血液的濡养功能减弱导致机体免疫
功能低下,免疫器官萎缩而引起免疫器官脏器指数
下降。研究表明,脾脏在胎儿期是重要的造血器官,
出生后通常不参与造血,但当机体发生贫血时脾脏
可恢复造血作用,产生髓外造血,从而导致脾脏肿
大[11]。IL-2 和 EPO 是机体重要的体液因子,研究
表明,在缺血缺氧状态下,EPO的量随缺血缺氧时
间的延长呈现升高的趋势,且两者具有一定的正相
关性,提示 EPO的量可以反映贫血程度的轻重[12]。
IL-2是机体重要的免疫增强剂,与机体免疫力呈正
相关,故 IL-2量也可反映机体免疫力的强弱。本实
验研究表明,与对照组比较,模型组大鼠 RBC、
HGB、HCT、PLT、胸腺指数以及 IL-2水平明显降
低,Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP酶活性明显
减弱,脾脏指数及 EPO水平明显升高,表明血虚模
型复制成功。与模型组比较,胶艾汤正丁醇组可明
显升高大鼠 RBC、HGB、PLT、HCT,从而改善外
周血象,升高大鼠胸腺指数及血清 IL-2水平,增强
Na+, K+-ATP酶和 Ca2+, Mg2+-ATP酶活性,降低脾
脏指数及 EPO 水平。石油醚组可明显升高 PLT 及
IL-2水平,降低脾脏指数及 EPO水平。醋酸乙酯组
可明显降低脾脏指数及 EPO 水平,升高 Ca2+,
Mg2+-ATP酶活性。水部位组可明显升高 PLT,降低
EPO的量。UPLC法定性分析胶艾汤各提取部位化
学成分结果显示,胶艾汤正丁醇部位检测到其他提
取部位中所不含有的咖啡酸,研究表明,咖啡酸具
有升血小板、升白细胞数及止血等作用[13],推测咖
啡酸可能为胶艾汤正丁醇部位发挥补血作用的有效
成分之一,且胶艾汤正丁醇部位中含有的没食子酸、
原儿茶酸、磷酸川芎嗪以及绿原酸的量均高于胶艾
汤其他 3 个提取部位,结合药理实验数据可初步推
测,化学成分种类及量的差异可能是导致胶艾汤不
同提取部位补血作用差异的主要原因。综上所述,
正丁醇部位是胶艾汤补血作用的最强有效部位,但
胶艾汤发挥补血作用的活性成分群以及化学成分与
药理作用之间的关联性还需进一步深入研究。
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