全 文 :东北刺人参对失血性贫血小鼠的补血作用研究
何晓燕 ,包贤 ,梁立文 (通化师范学院 ,吉林通化 134002)
摘要 [目的 ]为东北刺人参的临床应用提供科学依据。 [方法 ]采用眼眶静脉取血法制造失血性贫血小鼠模型 ,然后用 0.5、1.0、2.0
g/ml东北刺人参水煎液对小鼠进行灌胃处理 ,研究不同处理对小鼠外周血红细胞数、白细胞数及血红蛋白含量的影响。 [结果]造模使
小鼠外周血红细胞数和白细胞数减少 ,血红蛋白含量降低;东北刺人参水煎液灌胃处理后 ,小鼠外周血红细胞数 、白细胞数及血红蛋白
含量均有不同程度的升高 ,其中 1.0 g/ml东北刺人参水煎液对失血性贫血小鼠的补血作用最明显。 [结论 ]东北刺人参具有一定的补
血作用。
关键词 东北刺人参;水煎液;小鼠;补血作用
中图分类号 S567.5+1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2010)06-02964-02
StudyonEnrichingBloodEffectofOplopanaxelatusNakaionPosthemorrhagicAnemiaMice
HEXiao-yanetal (TonghuaNormalUniversity, Tonghua, Jilin134002)
Abstract [ Objective] ThestudywastoprovidethescientificbasisforclinicalapplicationofOplopanaxelatusNakai.[ Method] The
posthemorrhagicanemiamicemodelwasmadebycolectingbloodfromtheirophthalmicvenousplexus, andthenthemiceweretreatedbyin-
tragastricadministrationwith0.5, 1.0, 2.0g/mlwaterdecoctionofO.elatus.Theefectsofdiferenttreatmentsonerythrocytecount, leuko-
cytecountandhemoglobincontentinperipheralbloodofthemicewerestudied.[ Result] Modelcreationmadetheerythrocytecount, leuko-
cytecountandhemoglobincontentinperipheralbloodofmicedecrease.Aftertreatmentbyintragastricadministrationwithwaterdecoctionof
O.elatus, theerythrocytecount, leukocytecountandhemoglobincontentinperipheralbloodofthemicehadsomeincrease.Theenriching
bloodefectofwaterdecoctionofO.elatuswith1.0g/mlwasthemostobvious.[ Conclusion] O.elatushadenrichingbloodefectinsome
degree.
Keywords OplopanaxelatusNakai;Waterdecoction;Mice;Enrichingbloodeffect
基金项目 国家科技部 “国家科技攻关计划引导项目 ”(2005BA741C)。
作者简介 何晓燕(1972-),女 ,吉林通化人 ,硕士 ,副教授 , 从事长白
山区药用植物资源开发与药理学研究。
收稿日期 2009-11-12
东北刺人参(OplpanaxelatusNakai)系五加科刺人参属
多年生落叶灌木 ,仅在前苏联 、朝鲜 、中国有分布 ,在我国主
要分布在吉林省长白山海拔 1 300 ~ 1 600 m的针叶林带及
辽宁东部山区海拔 800 ~ 1 000 m的松杉林下 [ 1] 。东北刺人
参的干燥根 、茎均可入药 ,具有补气 、助阳 、兴奋中枢神经等
作用 ,可以治疗神经衰弱 、精神抑郁 、阳痿 、精神分裂及糖尿
病等症 [ 2] 。近年来 ,国内外学者对东北刺人参的化学成分 、
药理作用 、临床应用等进行了大量研究 ,但有关东北刺人参
的补血作用尚未见报道 ,为此 ,笔者研究了东北刺人参水煎
液对失血性贫血小鼠的补血作用 ,以期为其临床应用提供科
学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物。昆明种小鼠 ,雌性 ,体重(20±2)g,由长
春高新医学实验动物中心提供 ,合格证号:SCXK-(吉)2003-
0004。
1.1.2 试验药品。东北刺人参 ,采于通化市白鸡腰森林公园
并经鉴定;复方阿胶浆 ,批号 061117,山东东阿阿胶股份有限
公司生产;冰醋酸 ,批号 20060926,天津市科密欧化学试剂有
限公司生产;龙胆紫 ,批号 20060102,沈阳市新西试剂厂生
产;NaCl,批号 20070210, 天津市科密欧化学试剂有限公司生
产;Na2 SO4 ,批号 20060201,沈阳市新西试剂厂生产;HgCl2 ,
批号 20040816,沈阳市新西试剂厂生产 。
1.1.3 仪器。血红蛋白仪 ,型号 XF-1C,南京普朗医用设备
有限公司生产;电子天平 ,型号 MB10Kpw,上海海康电子仪
器厂生产;精密电子天平 ,型号 JA2003 SHP07003,上海恒平
科学仪器有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 东北刺人参水煎液的制备 。取东北刺人参根 25 g,加
入 6倍蒸馏水浸泡约 12 h,煮沸 30 min后倒出煎出液 ,再向
药渣中加入 4倍蒸馏水继续煎煮 25min,合并 2次煎出液 ,用
消毒纱布过滤 ,去掉药渣 ,浓缩至 50ml,即每 1ml含生药 0.5
g,再同法制备浓度分别为 1、2g/ml的水煎液各 50ml作为东
北刺人参水煎液的低 、中 、高剂量组 ,冷藏备用 [3] 。
1.2.2 饲养条件。分笼饲养 ,每笼 9只 ,通用饲料喂养 ,自由
饮水 ,自然光照 ,温度 20 ~ 30 ℃,湿度 50% ~ 70%,通风 1
次 /d,每次通风 2 h,适应环境 2d后进行试验 。
1.2.3 试验分组。将小鼠随机分为 6组 ,每组 9只 ,即空白
组 ,模型组 ,复方阿胶浆组 ,东北刺人参水煎液低 、中 、高剂量
组 [ 4-6] 。
1.2.4 给药剂量。灌胃给药 [ 7-8] ,空白组 、模型组 0.1ml/10
g,每 24 h给予生理盐水 1次;复方阿胶浆组 0.2 ml/10 g,每
24 h灌胃给药 1次;东北刺人参水煎液低 、中 、高剂量组 0.1
ml/10 g, 给药质量浓度分别为 0.5、1.0、2.0g/ml,每 24h灌
胃给药 1次 ,连续灌胃 8 d[ 9] 。
1.2.5 动物造模。用小鼠眼眶静脉取血法制造小鼠失血性
贫血模型 ,即除空白组外 ,其余各组每只小鼠眼眶静脉取血
0.5ml[ 10] 。
1.2.6 外周血红细胞数 、白细胞数及血红蛋白含量测定。在
失血前 、失血 24 h后 、给药 4和 8 d后 ,每只小鼠取血 60 μl,
分别检测红细胞数 、白细胞数及血红蛋白含量 ,方法参看文
献 [ 11-13] 。
1.3 数据分析 采用 SPSS数据处理软件进行数据分析 ,试
验结果以 x±s表示 [ 14];采用 t检验进行组间比较 。
2 结果与分析
随着试验天数的增加 ,正常组小鼠的体重呈稳步增长趋
责任编辑 常俊香 责任校对 卢瑶安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(6):2964-2965, 2980
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.06.107
势 ,模型组及各给药组小鼠体重与正常组无显著差异。模型
组及各给药组小鼠自造模后逐渐出现精神活动欠佳 、聚堆 、
倦卧 、嗜睡 、毛欠光泽 、少饮少食等现象。给药 4d后 ,模型组
小鼠精神萎靡 ,活动迟缓 ,聚堆 ,倦卧 ,嗜睡 ,毛无光泽 ,尾色
苍白 ,而给药组小鼠行为活动逐渐趋于正常 ,其中复方阿胶
浆组 、东北刺人参水煎液中剂量组小鼠表现尤为明显。东北
刺人参水煎液对失血性贫血小鼠外周血红细胞数的影响如
表 1所示 ,对其外周血白细胞数的影响如表 2所示 ,对其外
周血血红蛋白含量的影响如表 3所示。
表 1 东北刺人参水煎液对失血性贫血小鼠外周血红细胞数的影响
Table1 TheeffectofwaterdecoctionofOplpanaxelatusNakaionRBCofhemorrhagicanemiamice
组别
Group
剂量
Dose
失血前∥×1012 /L
Beforebloodloss
失血 24h后∥×1012 /L
Afterbloodloss24h
给药 4d后∥×1012 /L
Aftermedication4d
给药 8d后∥×1012 /L
Aftermedication8d
空白组 - 9.20±0.16 9.26±0.16 9.25±0.20 9.27±0.23
模型组 - 9.10±0.17 6.18±0.13** 6.25±0.10** 6.47±0.30**
低剂量组 5g/kg 9.12±0.10 6.08±0.11** 7.65±0.31**■■ 8.04±0.31**■■
中剂量组 10g/kg 9.10±0.17 6.07±0.16** 8.23±0.31*■■ 8.57±0.23■■
高剂量组 20g/kg 9.14±0.36 6.05±0.31** 7.85±0.22**■ 8.29±0.28*■■
复方阿胶浆组 20ml/kg 9.14±0.23 6.02±0.21** 8.30±0.28*■■ 8.56±0.26■■
注:与失血前比较 , *P<0.05, **P<0.01;与失血 24h后比较■P<0.05, ■■P<0.01。下同。
Note:﹡ and﹡﹡ meansignificantdifference(P<0.05)andextremelysignificantdiference(P<0.01)withthatbeforebloodlossrespectively;■ and
■■meansignificantdiference(P<0.05)andextremelysignificantdiference(P<0.01)withthatafterbloodloss24hrespectively.Thesameas
below.
表 2 东北刺人参水煎液对失血性贫血小鼠外周血白细胞数的影响
Table2 TheeffectofwaterdecoctionofOplpanaxelatusNakaionWBCofhemorrhagicanemiamice
组别
Group
剂量
Dose
失血前∥×109 /L
Beforebloodloss
失血 24h后∥×109 /L
Afterbloodloss24h
给药 4d后∥×109 /L
Aftermedication4d
给药 8d后∥×109 /L
Aftermedication8d
空白组 - 8.11±0.21 8.17±0.13 8.18±0.28 8.23±0.17
模型组 - 8.20±0.12 6.13±0.23** 6.37±0.22** 6.56±0.12**
低剂量组 10g/kg 8.19±0.15 6.09±0.16** 6.61±0.22**■ 7.24±0.23**■■
中剂量组 20g/kg 8.24±0.30 6.13±0.18** 7.14±0.31*■■ 8.08±0.30■■
高剂量组 40g/kg 8.13±0.21 6.03±0.30** 6.96±0.17**■ 7.35±0.24*■■
复方阿胶浆组 20ml/kg 8.21±0.19 6.16±0.20** 7.26±0.26*■■ 7.97±0.22■■
表 3 东北刺人参水煎液对失血性贫血小鼠外周血血红蛋白含量的影响
Table3 TheeffectofwaterdecoctionofofOplpanaxelatusNakaionHGBofhemorrhagicanemiamice
组别
Group
剂量
Dose
失血前∥g/L
Beforebloodloss
失血 24h后∥g/L
Afterbloodloss24h
给药 4d后∥g/L
Aftermedication4d
给药 8d后∥g/L
Aftermedication8d
空白组 - 147.3±4.7 146.6±4.6 143.6±3.6 148.7±5.6
模型组 - 144.3±3.5 102.6±2.5** 109.4±3.6**■ 113.8±4.1**■
低剂量组 5g/kg 144.3±2.8 104.9±3.6** 119.3±5.2**■■ 128.6±3.8*■■
中剂量组 10g/kg 141.3±2.1 106.7±2.3** 130.3±4.5*■■ 142.6±3.7■■
高剂量组 20g/kg 145.4±3.6 102.8±3.0** 123.8±3.0**■■ 137.7±3.7■■
复方阿胶浆组 20ml/kg 144.4±2.8 105.8±3.0** 122.9±3.3**■■ 135.6±5.6■■
3 结论与讨论
该试验结果表明 ,外周血红细胞数 、白细胞数与血红蛋
白含量降低是失血性贫血模型小鼠的主要表现 ,对模型组 、
复方阿胶浆组 、东北刺人参水煎液高 、中 、低剂量组小鼠眼眶
取血 24 h后检测其血红蛋白含量 、红细胞数和白细胞数 ,发
现失血前上述指标与正常组无明显差异;失血 24 h后此 5组
间上述指标亦无明显差异 ,但与失血前差异极显著 (P<
0.01),说明失血性贫血模型建立成功 。
由于失血性贫血小鼠的造血功能并未被损伤 ,所以模型
组小鼠失血 8d后与失血 24h后相比 ,红细胞数 、白细胞数与
血红蛋白含量均有一定升高 ,其自身贫血得到一定的恢复。
东北刺人参水煎液能有效提高失血性贫血小鼠的红细
胞数 、白细胞数与血红蛋白含量 ,给药 4 d后即可发挥药效 ,
说明东北刺人参水煎液可以使小鼠本来就活跃的造血功能
更加活跃 ,这对于失血性贫血小鼠的恢复是十分有益的。
东北刺人参水煎液中剂量组给药 8d后小鼠外周血红细
胞数 、白细胞数及血红蛋白含量与失血前无显著差异 ,与失
血 24h后差异极显著(P<0.01),基本接近复方阿胶浆组 ,说
明东北刺人参水煎液中剂量组对失血性贫血小鼠的作用最
强。但有关东北刺人参水煎液的补血作用机制尚有待于进
一步研究。
参考文献
[ 1] 金英善 ,玄永浩,金允哲.濒危植物东北刺人参的开发利用和保护[ J].
中国野生植物资源 , 2002(6):31.
[ 2] 姜玉贵 ,宓鹤鸣,叶鸿玲.东北刺人参的资源和药用 [ J].中国野生植物
资源, 1992(1):24-25.
[ 3] 陈奇.中药药理研究方法学 [ M].北京:人民卫生出版社, 1993:67-68.
[ 4] 孙峻.滋阴养血丸和四物汤对血虚小鼠补血作用研究 [ J] .长春中医学院院报 , 2005, 21(4):38-39.
(下转第 2980页)
296538卷 6期 何晓燕等 东北刺人参对失血性贫血小鼠的补血作用研究
1.2.4 统计学处理 。应用 SPSS11.5统计软件 ,计量资料以
(X±S),采用单因素方差分析。
2 结果与分析
2.1 各组魟鱼软骨多糖对脾脏和胸腺指数的影响 由表 1
可知 ,由 CY构建的模型组脾和胸腺指数都显著低于空白对
照组 。其中 , 3个多糖组均可提高脾和胸腺指数 ,并且表现出
一定的量效关系 ,提示魟鱼软骨多糖虽对试验性免疫低下小
鼠的脾脏和胸腺具有恢复及保护作用 ,但不能使之恢复
正常。
表 1 魟鱼软骨多糖对小鼠脏器指数的影响(X±S, n=8)
Table1 Theeffectofcartilagepolysaccharideinstingrayontheim-
muneorganindexofmice(X±S, n=8) mg/g
组别
Group
脾指数
Spleenindex
胸腺指数
Thymusindex
A 5.51±0.24 3.28±0.16
B 3.26±0.45■ 2.42±0.55■
C 5.15±0.25* 3.16±0.15*
D 4.50±0.16* 2.88±0.23*
E 4.78±0.12* 2.49±0.07*
F 3.93±0.53 2.96±0.42
注:■与空白组比较;*与模型对照组比较。下表同。
Note:■ meansdifferencewithcontrolgroup;* meansdiferencewith
modelgroup;Thesameasbelow.
2.2 各组小鼠脾脏中细胞因子表达水平的比较 IL-2:模型
组与空白组无显著性差异;低 、中剂量多糖与模型组均有显
著性差异;该药各浓度均有促进机体分泌 IL-2的作用 ,其中
中剂量组多糖好于空白组但低于阳性对照组(表 2)。IL-6:
模型组与空白组有显著性差异 ,模型组与中剂量多糖差异具
有显著性意义 ,说明该药各浓度均可提高 IFN-6含量 ,且中
剂量组优于其他药物组 ,但多糖组均低于阳性对照组 。IFN-
γ:模型组与空白组有显著性差异 ,模型组与多糖低中高剂量
表 2 魟鱼软骨多糖对小鼠脾脏细胞分泌细胞因子的影响(X±S, n=8)
Table2 Theeffectofcartilagepolysaccharideinstingrayonthesecre-
tionofcytokinesinspleencelsofmice(X±S, n=8)
组别
Group
吸光度 Absorbency
IL-2 IL-6 IFN-γ
A 4.60±0.14 4.39±0.10 4.86±0.16
B 4.47±0.13■ 4.26±0.44■ 4.55±0.12■
C 4.83±0.09 4.56±0.16 4.98±0.32
D 4.53±0.01* 4.36±0.13 4.80±0.03*
E 4.79±0.02* 4.43±0.02* 4.78±0.05*
F 4.50±0.15 4.54±0.21 4.62±0.02*
差异具有显著性意义 ,说明该药各浓度均可提高 IFN-γ含
量 ,且具有一定的量效关系。
3 讨论
多糖广泛存在于大自然中 ,对免疫系统有重要的调节作
用 ,主要表现为免疫增强或免疫刺激。大量药理试验证明 ,
多糖不仅能激活 T、B淋巴细胞 、巨噬细胞(MΥ)、自然杀伤
细胞(NK)、细胞毒细胞(CTL)、淋巴因子激活的杀伤细胞
(LAK)、树突状细胞(DC)等免疫细胞 ,还能促进细胞因子生
成 ,激活补体系统 ,促进抗体产生 ,对免疫系统发挥多方面的
调节作用。更多研究显示 ,多糖还对细胞黏附分子 、一氧化
氮 、前列腺素 E2等也有一定程度的影响 。在提高机体免疫
的同时 ,多糖还具有良好的抗病毒活性 ,并具有低毒和低耐
药性等特点。试验采用给受试动物腹腔注射 CY以造成小
鼠免疫功能低下的同时 ,观察魟鱼软骨多糖对小鼠免疫器官
重量 、细胞因子分泌的影响。胸腺和脾脏是体内的主要免疫
器官 ,与体液免疫和细胞免疫均有密切联系 ,细胞因子主要
与机体的免疫应答有关 , IL-2具有重叠的免疫调节作用 ,能
促进 T淋巴细胞的增殖 ,而 IL-6和 IFN-γ可促进 T细胞 IL-2
受体的表达 ,因此细胞因子在整个免疫系统中起重要作用。
脾脏以 B淋巴细胞为主 ,是调节体液免疫的主要细胞 ,能分
泌细胞因子调节免疫 ,并将抗原提呈给 T、B细胞 [ 8-9] ,研究
结果显示 ,魟鱼软骨多糖对免疫低下小鼠具有增强其免疫功
能的作用 ,表现在对脾脏和胸腺具有保护和恢复作用 ,并能
促进小鼠脾脏中 IL-2、IL-6、IFN-γ的产生。
结果表明 ,不同浓度多糖对免疫调节作用的侧重点有所
不同 ,因此 ,魟鱼软骨多糖能否通过增强机体的免疫功能而
治疗免疫功能低下疾病 ,尚待进一步研究。
参考文献
[ 1] 郭斌,唐金中,贾玉海.魟鱼骨素抗肿瘤作用的初步研究 [ J] .辽宁中医
杂志, 2002, 29(6):368-369.
[ 2] BRUCEWH.Poisonousandvenomousmarineanimalsoftheworld[M].
WashingtonDC:U.S.GovtPrintOfice, 1970:132.
[ 3] LUOH, XUJ, YUX.Isolationandbioactivityofanangiogenesisinhibitor
extractedfromthecartilageofDasyatisakajei[J] .AsiaPacJClinNutr,
2007, 16(1):286-289.
[ 4] 罗红宇 ,余新威 ,钱晓.赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化及抗血管生成活性验证 [ J].水产学报 , 2007, 31(6):813-817.
[ 5] 余新威,钱晓 ,王婕妤,等.赤魟软骨血管生成抑制因子的分离纯化
[ J].海洋学报, 2008, 30(1):113-118.
[ 6] 罗红宇 ,高鹏,宋茹.赤魟软骨黏多糖的制备 [ J].中国海洋药物杂志,
2005, 24(4):14-17.
[ 7] 朱丹.魟鱼软骨多糖的研究[ D].沈阳:辽宁中医学院 , 2004.
[ 8] 邱培勇 ,徐自超 ,陈正跃,等.黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响[ J].新
乡医学院学报, 2006, 23(6):585-586.
[ 9] XUC, SHENY, ZHANGM.StudiesonmedicinalDendrobiumidentifica-
tion[J].ChinaTraditHerbDrugs, 2004, 35(8):11-12.
(上接第 2965页)
[ 5] 苗明三,孙艳红,史晶晶,等.熟地黄粗多糖对血虚模型小鼠胸腺和脾
脏组织形态的影响 [ J].中华中医药杂志, 2007, 22(5):318-320.
[ 6] 丘小惠,宋艳刚,孙景波,等.不同炮制工艺制首乌对大鼠血虚模型的
作用研究 [ J].中药材, 2008, 31(1):14-17.
[ 7] 赵明德.常用小型实验动物灌胃给药技术方法介绍 [ J] .泸州医学院学报, 2004, 27(3):258-259.
[ 8] 李星 ,朱亨炤,张一帆,等.健脾补肾汤对血虚模型大鼠T细胞分泌IL-2
的影响[ J].福建中医学院学报, 2008, 18(1):22-24.
[ 9] 赵新年,刘同祥,王伟 ,等.阿胶补血口服液补血升白作用的研究 [ J] .
中国中医药科技, 2003, 10(6):341-342.
[ 10] 张铭连,赵金生,王鑫国.视康冲剂对失血性血虚小鼠的影响[ J].河
北中医, 2002, 24(8):639-940.
[ 11] 解景田,谢申玲.生理学实验 [ M] .北京:高等教育出版社 , 2001:61-
64.
[ 12] 张建英,王兆成.血球计数仪溶血剂的实验研究 [ J] .职业与健康,
2000, 16(6):31-32.
[ 13] LIXS, XUEWL, HAOBH.Efectsofreinforceddecoctionofangelicae
sinensisforEnrichingbloodontheimmunityofimmunosuppressedMice
[J].JournalofXi anMedicalUniversity, 2001, 3(1):36-38.[ 14] 王均宁.圣愈汤及其拆方对血虚模型小鼠造血生长因子IL-6和 GM-
CSF的影响 [ J].山东中医杂志 , 2006, 25(7):478-480.
2980 安徽农业科学 2010年