全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 6 期 2014 年 3 月

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抗肿瘤有效成分 20(R)-25-OCH3-原人参二醇的结晶法分离
张赛楠 1，赵余庆 1, 2*
1. 沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016
2. 沈阳药科大学 基于靶点的药物设计与研究教育部重点实验室，辽宁 沈阳 110016
摘 要：目的 从 25-OCH3-原人参二醇（25-OCH3-PPD）非消旋体混合物中分离得到抗肿瘤有效成分 20(R)-25-OCH3-PPD
（AD-1）。方法 采用结晶法拆分 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物中的 AD-1，并对所用溶剂的种类、用量及结晶温度等分离
条件进行了优化，探讨溶剂的介电常数和 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物的 S/R 比例间的关系。结果 25-OCH3-PPD 非消旋
体混合物（R：59.34%；S：38.35%），在最优条件下，丙酮 26 mL、4 ℃时，可以获得 AD-1 的产率与纯度分别为 38.76%、
97.83%。结论 溶剂的电解质范围在 20.7 左右，低饱和度的溶剂以及低温有利于 AD-1 的分离。
关键词：结晶；非消旋体混合物；25-OCH3-原人参二醇；20(R)-25-OCH3-原人参二醇；介电常数；抗肿瘤
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)06 - 0770 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.06.005
Crystallization separation of antitumor constituent 20(R)-25-OCH3-PPD
ZHANG Sai-nan1, ZHAO Yu-qing1, 2
1. Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
2. Key Laboratory of Structure-based Drug Design and Discovery, Ministry of Education, Shenyang Pharmaceutical University,
Shenyang 110016, China
Abstract: Objective To separate antitumor constituent AD-1 [20(R)-25-OCH3-protopanoxadiol (PPD)] from non-racemic
enatiomeric mixture. Methods A crystallization method has been developed to separate AD-1 from 25-OCH3-PPD non-racemic
enatiomeric mixture, the sorts and amount of solvent and crystallization temperature were optimized to obtain the best separative
conditions, and the relationship between the S/R percentage of 25-OCH3-PPD non-racemic enantiomeric mixture and dielectric
constant of the solvent was discussed. Results Under the optimized conditions (acetone 26 mL, 4 ℃), the yield and purity of AD-1
crystals are 38.76% and 97.83% from 25-OCH3-PPD non-racemic enatiomeric mixture (R: 59.34%; S: 38.35%), respectively.
Conclusion The ε values of solvents are about 20.7, and an unsaturated solution and low temperature are beneficial to the separation
of AD-1 from 25-OCH3-PPD non-racemic enatiomeric mixture.
Key words: crystallization; non-racemic enatiomeric mixture; 25-OCH3- protopanoxadiol; 20(R)-25-OCH3- protopanoxadiol;
dielectric constant; antitumor

25-OCH3-原人参二醇（25-OCH3-PPD）是从三
七的茎叶与人参果实中分离得到一种新型的达玛烷
型的三萜皂苷[1-2]。25-OCH3-PPD 同其他的人参皂苷
相比具有显著的细胞毒性[1]。在几种人癌细胞系中，
20(S)-25-OCH3-PPD 的 IC50 值同人参皂苷 Rg3 相比
增强了 10～100 倍，同时 20(R)-25-OCH3-PPD（AD-
1）（结构见图 1）在细胞系 Colon205、A549 中显示
出比 20(S)-25-OCH3-PPD 更强的细胞毒性 [1-2]。
Zhang 等[3]研究了 20(S)-25-OCH3-PPD 药物动力学

图 1 AD-1 的结构
Fig.1 Structure of AD-1
以及口服和静脉给药后在大鼠体内的活性代谢产物。
然而，在大量制备 AD-1 的过程中产生了非消旋体

收稿日期：2013-12-16
基金项目：“十一五”国家重大新药创制项目（2009ZX09102-114）；中药标准提取物的工业化色谱制备平台建设（2009ZX09301-012-105B）；
国家自然科学基金资助项目（81273389）
作者简介：张赛楠（1987—），女，在读硕士，研究方向为药物分析。E-mail xmze2012@163.com
*通信作者 赵余庆 Tel: (024)23986521 E-mail: zyq4885@126.com
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混合物 [AD-1、20(S)-25-OCH3-PPD]。目前有关构
型异构体的拆分文献报道有很多方法，例如经典结
晶法、化学拆分法、动力学拆分法、生物拆分法、
色谱拆分、手性液-液萃取拆分法、膜分离法[4]，通
过 高 成 本 的 制 备 高 效 液 相 色 谱 法 可 以 将
25-OCH3-PPD 非消旋混合物进行分离，但本实验采
用具有低成本、操作简单和所得产物为固体的优势
的结晶方法进行了分离。与此同时，结晶法作为一
种相对经典且成熟的方法，已经被广泛的应用在精
细化工、制药和食品等领域。Wang 等[5]利用直接结
晶法联合色谱技术拆分了外消旋化合物心得安；李
鹏等[6]报道用乙醇溶液中溶解度的差异，并借助沉
淀和结晶手段，从而实现人参皂苷 Rg3 构型异构体
的分离。
本实验考察溶剂的种类、用量以及结晶温度等因
素对从 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物中分离 AD-1
的影响，探讨了溶剂的介电常数和 25-OCH3-PPD 非
消旋体混合物的 S/R 的比例间的关系，从而优化分离
AD-1 的条件，实现实验室条件下的 AD-1 分离。
1 仪器与材料
BS124S Sartorius 分析天平；BCD-139AC 冰箱
（中国美的公司）；K501 KNAUER 高效液相色谱仪
（德国诺尔）；蒸发光散射检测器（上海通微分析技
术有限公司）。
25-OCH3-PPD 非消旋体混合物（R：59.34%；S：
38.35%）、AD-1 对照品（经 HPLC 检测质量分数＞
98%，本实验室自制）。甲醇（色谱纯、分析纯），
纯化水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Agela Venusil MP C18（250 mm×4.6
mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（87∶13）；体积流
量为 1.0 mL/min；柱温 35 ℃；进样量 10 μL。
2.2 溶剂类型的影响
分别精密量取各溶剂 5 mL，置于锥形瓶中，
加入 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物，在 45 ℃下
溶解，直至其形成近饱和溶液，放冷，静置 15 d。
结晶所得产物在 50℃挥干，称定质量，基于
25-OCH3-PPD 非消旋体混合物计算产率。后经 0.45
μm 滤膜滤过后，用 HPLC 分析其 S/R 比例。结果
表明（表 1、图 2）[7]，采用丙酮为溶剂时目标物的
量较高。
表 1 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物在不同溶剂中的分离
Table 1 Resolution of 25-OCH3-PPD non-racemic enantiomeric mixture in different solvents
编号 溶剂 介电常数 样品量 a / g 产率 b / % S/R 比例
1 醋酸乙酯 6.0 0.134 1 60.28 36.89/61.25
2 二氯甲烷 8.9 10.397 0 98.54 40.17/58.74
3 异丙醇 18.3 0.279 7 — —
4 丙酮 20.7 0.132 4 42.22 20.41/77.57
5 95%乙醇 26.7 1.009 6 17.28 28.39/70.28
6 甲醇 33.0 1.042 8 86.78 39.26/59.04
a 在 45 ℃的条件下达到近饱和溶液时所需要的最小样品量；b 产率是基于 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物进行计算
aSample amount is minimum amount to obtain a nearly saturated solution at 45 ℃; bYield is calculated based on 25-OCH3-PPD non-racemic enantiomeric mixture


图 2 溶剂的介电常数与 AD-1 纯度的关系
Fig. 2 Relationship between purity of AD-1 and dielectric
constant of solvent used in resolution
2.3 溶剂用量的影响
基于“ 2.2”项下溶剂的选择，精密称取
25-OCH3-PPD 非消旋体混合物 0.5 g，置于锥形瓶
中，向其中分别加入丙酮 24、26、29、31 mL，超
声溶解，室温下放置 15 d，母液中析出产物，50 ℃
挥干，称定质量，基于 25-OCH3-PPD 非消旋体混合
物中的 AD-1 的量计算产率。后经 0.45 μm 滤膜滤
过后，用 HPLC 分析其 S/R 比例。结果见表 2。
2.4 结晶温度的影响
基于“2.2”和“2.3”项下溶剂类型与溶剂用量
的选择，精密称取 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物
90
70
50
30
10
0 5 10 15 20 25 30 35
A
D
-1
纯
度
/
%

溶剂介电常数
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0.5 g，置于锥形瓶中，向其中分别加入丙酮 26 mL，
超声溶解，为使得利用结晶分离非消旋体混合物可
以应用于大量制备，本实验在常用的温度 4、25 ℃
条件下进行，放置 15 d，母液中得产物，在 50 ℃
挥干，称定质量，基于 25-OCH3-PPD 非消旋体混合
物中的 AD-1 计算产率。后经 0.45 μm 滤膜滤过后，
用 HPLC 分析其 S/R 比例。结果见表 3。
表 2 溶剂用量的影响
Table 2 Effect of solvent amount
丙酮用量 / mL 产率 a / % S/R 比例
24 77.91 20.80/76.66
26 48.84 2.624/87.09
29 20.63 3.015/95.80
31 5.34 1.391/97.42
a产率是基于25-OCH3-PPD非消旋体混合物中的AD-1的量进行计算
aYield is calculated based on AD-1 of 25-OCH3-PPD non-racemic
enantiomeric mixture
表 3 结晶温度的影响
Table 3 Effect of crystallization temperature
温度 / ℃ 产率 a / % S/R 比例
25 28.62 23.01/75.52
4 38.76 0.959 7/97.83
a产率是基于25-OCH3-PPD非消旋体混合物中的AD-1的量进行计算
aYield is calculated based on AD-1 of 25-OCH3-PPD non-racemic
enantiomeric mixture
3 分析与讨论
表 1 显示了介电常数在 6～33 的溶剂的分离实
验的结果，由表 1 可知，在介电常数 20.7 附近，可
以获得 AD-1。且在丙酮溶剂，介电常数为 20.7 时
得到了纯度相对较高的 AD-1。由图 2 可以看出，
虽然25-OCH3-PPD非消旋体混合物只在5种溶剂中
显示出了 S/R 比例的差异性，但可以看出介电常数
与 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物之间有一定的关
系。目前对此现象可能的解释为由于分子间的氢键
网络的缔合发生改变引起的，而氢键网络是由溶剂
的介电常数决定的[8]。
表2显示了丙酮用量对25-OCH3-PPD非消旋体
混合物分离的结果。由表 2 可以看出，随着丙酮用
量的增加，25-OCH3-PPD 非消旋体混合物中的 S/R
比例以及产率降低，在最优的溶剂用量 26 mL 的条
件下，可以获得产率为 48.84%和 S/R＝2.624/87.09
的 AD-1。
表 3 显示了结晶温度对分离的影响。在结晶温
度为 4 ℃时，最终的产品结晶产率为 38.76%，S/R＝
0.959 7/97.83，在 25 ℃时，产率为 28.62%，S/R＝
23.01/75.52。结果提示，低温的条件有利于 AD-1
晶核的形成，而使异构体得到分离。图 3 显示了
25-OCH3-PPD 非消旋体混合物在分离前以及在优
化条件下分离后的色谱图。

图 3 色谱图 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物 (A) 和 AD-1
结晶 (B) 在 26 mL 丙酮、4 ℃的 HPLC 色谱图
Fig. 3 HPLC of 25-OCH3-PPD non-racemic enatiomeric
mixture (A) and AD-1 crystallized (B) in 26 mL
of acetone at 4 ℃
4 结论
本实验考察了不同溶剂、溶剂的用量、结晶温
度对 25-OCH3-PPD 非消旋体混合物分离的影响，同
时揭示了溶剂的介电常数与 25-OCH3-PPD 非消旋
体混合物的 S/R 比例的关系。结果显示，溶剂的介
电常数在 20.7 附近，不饱和溶液以及低温的条件有
利于 AD-1 的分离。
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1027-1031.
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30
0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30
t / min
25.405
22.826 A
B
23.098
25.652
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[3] Zhang X, Xu J, Zhang D, et al. Pharmacokinetics of
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