全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 24 期 2014 年 12 月

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HPLC-MS/MS 法测定山药中尿囊素的量
张亚锋，舒蕊华，王苑桃，李 卓
西安市食品药品检验所，陕西 西安 710054
摘 要：目的 建立高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定山药中尿囊素的量。方法 采用 Agilent Eclipse Plus C18
色谱柱（100 mm×4.6 mm，3.5 μm），以乙腈-水（90∶10）为流动相，体积流量 0.3 mL/min，柱温为 30 ℃；采用电喷雾负
模式电离（ESI−），多反应监测扫描模式（MRM）进行定量分析，选定的母离子是 m/z 156.9，定量子离子是 m/z 96.7。结果
尿囊素在 0.12～6.0 μg/mL 范围内线性关系良好（r＝0.998 5），平均加标回收率为 101%（n＝6），RSD 为 3.2%。结论 本方
法灵敏、准确、专属性强，能准确有效地测定出山药中尿囊素的量。
关键词：尿囊素；高效液相色谱-串联质谱法；山药；电喷雾负模式电离；多反应监测扫描模式
中图分类号：R286.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)24 - 3627 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.24.023
Determination of allantoin in Dioscoreae Rhizoma by LC-MS/MS
ZHANG Ya-feng, SHU Rui-hua, WANG Yuan-tao, LI Zhuo
Xi’an Institute for Food and Drug Control, Xi’an 710054, China
Abstract: Objective To establish an HPLC-MS/MS method for determination of allantoin in Dioscoreae Rhizoma. Methods
Determination of LC system used Agilent Eclipse Plus C18 (100 mm × 4.6 mm, 3.5 μm) column and acetonitrile-water (90:10) as
mobile phase in linear gradient condition. The flow rate was 0.3 mL/min. The mass spectrometer was operated under the negative ion
mode with ESI source. MRM (precursor ion of m/z 156.9 and product ion of m/z 96.7) was used to qualify allantoin. Results The
linear range of the component was 0.12—6.0 μg/mL, r＝0.998 5; The average recovery was 101%, and the RSD was 3.2%.
Conclusion The method is sensitive, reliable, and accurate, and can be applied in the quality control of Dioscoreae Rhizoma.
Key words: allantoin; HPLC-MS/MS; Dioscoreae Rhizoma; ESI−; MRM

山药为薯蓣科植物薯蓣 Dioscorea opposita
Thunb. 的干燥块茎，具有补脾养胃、生津益肺、补
肾涩精的功能，主治脾虚泄泻、食少浮肿、肺虚咳
喘、消渴、肾虚尿频、遗精、带下等症[1]。尿囊素是
山药中活性成分之一，具有生肌作用，能修复上皮
组织，促进皮肤溃疡和伤口愈合，可用于胃及十二
指肠溃疡[2]。《中国药典》2010 年版一部尚未收载山
药及其饮片的质量控制方法。目前文献报道尿囊素
定量测定的方法有薄层扫描法，紫外分光光度法[3]，
毛细管电泳法[4]和高效液相色谱法[5-7]。但由于尿囊
素属咪哇类杂环化合物，紫外吸收较弱，在溶液中
存在酮式与烯醇式平衡[8]，且极性很大，在色谱柱中
相对保留时间短，难以保证与其他相似极性成分
达到分离，采用现有方法均难以有效解决上述问
题。高效液相色谱-串联质谱技术（HPLC-MS/MS）
具有高灵敏度、高选择性和高准确性等特点，可
用于中药化学成分的分析，应用此方法测定山药
中尿囊素的量尚未见有报道。本实验应用
HPLC-MS/MS 技术研究了尿囊素质谱裂解规律，
并测定了山药中尿囊素的量，方法简便快捷，结
果令人满意，为山药及其制剂的质量控制提供了
一种新方法。
1 仪器与材料
Agilent 1200 液相色谱仪，Agilent 6410B Triple
Quad LC/MS 三重串联四极杆质谱仪，配 ESI 离子
源及MassHunter数据处理软件（美国Agilent公司）；
KQ—300VDB 双频数控型超声波清洗器（昆山市超
声仪器有限公司）。
乙腈为色谱纯（美国 Fisher 公司）；水为娃哈哈
纯净水；其他试剂均为分析纯。

收稿日期：2014-09-12
作者简介：张亚锋（1978—），男，硕士，主要从事药品及食品质量分析。Tel: (029)85513291 E-mail: yafeng@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 24 期 2014 年 12 月

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尿囊素对照品（批号 1501-200001）购自中国食
品药品检定研究院。山药饮片来自西安市场抽检样
品，经西安市食品药品检验所谢志民主任中药师鉴
定为薯蓣 Dioscorea Opposite Thunb. 的干燥块茎，质
量均符合《中国药典》2010 年版一部要求，见表 1。
表 1 样品信息
Table 1 Information of samples
编号 产地 编号 产地
1 河南 9 河南
2 河南 10 河南
3 广西 11 河南
4 河南 12 河南
5 陕西 13 河南
6 未知 14 河南（炒山药）
7 未知（炒山药） 15 河南
8 河南 16 河南

2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒定质
量的尿囊素对照品 5 mg，置 100 mL 量瓶中，加入
90%乙腈溶解，定容，制得含尿囊素 0.05 mg/mL 的
对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取山药样品粉末约 50
mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 90%乙
腈 50 mL，称定质量，超声处理（功率 250 W，频
率 40 kHz）30 min，冷却至室温，加 90%乙腈补足
减失质量，0.45 μm 微孔滤膜滤过即得。
2.2 色谱和质谱条件
2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Eclipse Plus C18
（100 mm×4.6 mm，3.5 μm）；流动相为乙腈-水（9∶
1），体积流量 0.3 mL/min；柱温 30 ℃；进样量 5 μL。
2.2.2 质谱条件 质谱仪采用大气压电喷雾电离源
（ESI），干燥气温度设定为 350 ℃，干燥气流量为
12 L/min，雾化器压力为 276 kPa，离子源电压为 4
kV；碎裂电压为 80 V。选择负离子扫描方式，采用
全扫描、选择离子扫描及二级全扫描，全扫描质量
范围 m/z 20～200，碰撞能量 10 eV，裂解电压 135。
测定采用多反应监测模式（MRM），母离子 m/z
156.9，定性离子 m/z 113.7，定量离子 m/z 96.7，具
体质谱图和色谱图见图 1～3。
2.3 尿囊素裂解规律
按照“2.2”项下的条件测得尿囊素的母离子为

图 1 尿囊素全扫描质谱图
Fig. 1 Full scan MS/MS spectra of allantoin

图 2 尿囊素子离子扫描质谱图
Fig. 2 Product ion scan MS/MS spectra of allantoin

图 3 多反应监测模式下尿囊素色谱图
Fig. 3 Chromatogram of allantoin by MRM scan mode
m/z 157，推测可能是尿囊素失去 1 个氢，形成 [M－
H]−碎片离子 m/z 157，主要的子离子 m/z 为 97、
114、42。
2.4 线性关系考察
精密量取适量对照品储备液，用 90%乙腈稀释
成质量浓度依次为 0.12、0.30、0.60、1.50、3.00、
6.00 μg/mL 的系列对照品溶液。将上述系列浓度的
对照品溶液按“2.2”项下色谱条件依次进样测定。
以对照品质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为
纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程为 Y＝0.399 X－
6.058，r＝0.998 5。
2.5 精密度试验
取 1 号样品的供试品溶液，连续进样 6 次，测
定尿囊素定量离子峰面积，计算 RSD 为 2.2%。
2.6 稳定性试验
取 1 号样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品
溶液，每隔 2 小时进行 HPLC-MS/MS 检测，以尿
囊素定量离子峰面积计算 RSD 为 3.2%，说明供试
100 120 140 160 180 200
m/z
0 40 80 120 160 200
m/z
0 1 2 3 4 5
t / min
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品溶液在 24 h 内稳定。
2.7 重复性试验
取 1 号样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品
溶液，平行 6 份，计算尿囊素的 RSD 为 3.8%。
2.8 加样回收率试验
取 1 号样品粉末约 0.05g 共 6 份，精密称定，
置具塞锥形瓶中，加入对照品适量，按“2.1.2”项
下方法制备供试品溶液，进样分析，计算加标回收
率。结果尿囊素平均回收率为 101%，RSD 为 3.2%。
2.9 样品测定
取 16 批不同山药饮片按“2.1.2”项下方法制备
供试品溶液，测定尿囊素定量离子峰面积，根据回归
方程计算各样品中尿囊素的质量分数，结果见表 2。
结果表明，标注产地为河南产（编号 8～16）山药
饮片中尿囊素的质量分数总体高于其他产地，山药
经炒制后，其尿囊素的量低于未炒制的生山药饮片。
结果可见，河南为山药道地药材产地，尿囊素的测
定结果也从另外一方面说明道地药材品质优良。
表 2 山药中尿囊素的量
Table 2 Contents of allantoinin in Dioscoreae Rhizoma
编号 质量分数 / % 编号 质量分数 / %
1 0.10 9 0.67
2 0.03 10 0.37
3 0.10 11 1.00
4 0.04 12 0.58
5 0.01 13 0.37
6 0.12 14 0.19
7 0.07 15 0.71
8 0.30 16 0.50

3 讨论
3.1 色谱-质谱条件的确定
分别考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-5 mmol/L
乙酸铵溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液等流动相系统。结
果发现加入盐的流动相和加入酸的流动相，离子响
应较低，分析其原因是酸的加入会抑制尿囊素的电
离，致使离子响应低，故本实验采用乙腈-水作为流
动相。在质谱条件的选择中，为使各准分子离子峰
信号达到最强，以正、负离子模式分别进行检测，
并进行二级质谱扫描。结果发现选择负离子模式检
测时，离子峰强度较高。
3.2 样品提取方法的选择
结合尿囊素的极性，分别考察了水、20%、50%、
90%、20%、50%、90%乙腈作为提取溶剂，结果表
明以 90%乙腈作为提取溶剂时提取率最高，且能有
效去除样品中的蛋白质，减少对离子源的污染，故
将 90%乙腈作为提取溶剂。
本研究利用 HPLC-MS/MS 测定山药中尿囊素
的量，由于质谱采用 MRM 扫描模式，样品中其他
成分不会对待测成分产生干扰，方法简单、灵敏、
准确。本方法可为含山药药材、饮片及其制剂质量
控制标准的制定提供参考。
参考文献
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