全 文 ：·244· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 2 期 2014 年 1 月

不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的
影响
霍仕霞，彭晓明，高 莉，赵萍萍，闫 明*
新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所 新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆 乌鲁木齐 830049
摘 要：目的 研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤 A375 细胞黑素合成及酪氨酸酶基因（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白-1
（TRP-1）、酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-2）mRNA 和蛋白表达的影响。方法 采用 MTT 法测定细胞增殖，左旋多巴氧化法测
定酪氨酸酶活性，NaOH 裂解法测定黑素合成，采用 RT-PCR 法、Western-blotting 法检测 A375 细胞中 TYR、TRP-1、TRP-2
mRNA 和蛋白表达。结果 90%高良姜素浓度为 1.0～10.0 μmol/L 对 A375 细胞具有显著的促增殖作用（P＜0.01），而在浓
度为 20.0 μmol/L 时，无促 A375 细胞增殖作用（P＞0.05），浓度为 0.5～20.0 μmol/L 均能促进酪氨酸酶活性的升高（P＜0.05、
0.01），浓度为 1.0～20 μmol/L 具有显著促进黑素升高的作用（P＜0.05、0.01），且随着浓度的增加呈增强趋势；99%高良姜
素浓度在 0.5～20.0 μmol/L 具有显著促进 A375 细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用（P＜0.01），而对黑素合成无促进作用（P＞
0.05）。90%高良姜素对 TYR、TRP-1 mRNA 表达基本无影响，1.0 μmol/L 时上调 TRP-2 mRNA 表达（P＜0.05）；99%高良姜
素能上调 TYR、TRP-1 及 TRP-2 mRNA 表达；二者均促进 TYR 蛋白表达，但对 TRP-1 及 TRP-2 蛋白表达基本无影响。结
论 99%高良姜素能够促进 A375 细胞增殖及酪氨酸酶活性升高，可能是通过上调 TYR、TRP-1、TRP-2 的 mRNA 表达和
TYR 蛋白表达实现的；而 90%高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加，表明 90%高良姜素能够促
进黑素的合成，但不是通过调节 TYR、TRP-1、TRP-2 的 mRNA 表达，可能是通过促进 TYR 蛋白表达实现的。
关键词：高良姜素；黑素合成；酪氨酸酶；酪氨酸酶相关蛋白-1；酪氨酸酶相关蛋白-2
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)02 - 0244 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.02.017
Effects of galangin with different purity on melanin synthesis and related gene
expression in hunman melanoma A375 cells
HUO Shi-xia, PENG Xiao-ming, GAO Li, ZHAO Ping-ping, YAN Ming
Xinjiang Laboratory of Uighur Medical Prescription, Xinjiang Institute of Traditional Uighur Medicine, Urmuqi 830049, China
Abstract: Objective To study the effects of galangin with different purity on the synthesis of melanin and the expression of mRNA
and protein of tyrosine (TYR), TRP-1, and TRP-2 in hunman melanoma A375 cells. Methods The cell proliferation, tyrosinase
activity, and melanin synthesis were measured by MTT assay, L-dopa oxidation method, and NaOH asssay, respectively. Reverse
transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western-blotting were used to analyze the mRNA and protein expression of
TYR, TRP-1, and TRP-2 in A375 cells. Results The cell proliferation was promoted by 90% galangin (0.5—10.0 μmol/L, P < 0.01)
but was not changed by galangin (20 μmol/L, P > 0.05); The tyrosinase activity was promoted by galangin (0.5—20.0 μmol/L, P <
0.05, 0.01), and the synthesis of melanin was significantly promoted by galangin (1.0—20 μmol/L, P < 0.05, 0.01), with concentration
increasing an increasing tendency was shown. The cell proliferation and tyrosinase activity in A375 cells were significantly promoted
after the treatment with 99% galangin (0.5—20 μmol/L, P < 0.01), but no influence was observed on the synthesis of melanin (P >
0.05). Galangin (90%) had no influence on the mRNA expression of TYR and TRP-1, but the mRNA expression of TRP-2 was
upregulated by 90% galangin (1.0 μmol/L, P < 0.05). The mRNA expression of TYR, TRP-1, and TRP-2 was significantly upregulated
after the treatment with 99% galangin; They (90% and 99% galangin) all promoted the expression of protein for TYR, but no influence
for TRP-1 and TRP-2. Conclusion The 99% galangin could promote the cell proliferation and tyrosinase activity in A375 cells,

收稿日期：2013-06-27
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81160556）
作者简介：霍仕霞，女，助理研究员，主要从事药物分析及中药药动学研究。Tel: 13565889322 E-mail: huoshixia1983@163.com
*通信作者 闫 明，男，硕士，研究员，主要从事药物分析与新药研发。Tel: (0991)2574309 E-mail: yanming21cn@sohu.com
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maybe related with the upregulation of mRNA expression of TYR, TRP-1, and TRP-2 and downregulation of TYR protein
expression; The 90% galangin could promote the cell proliferation, tyrosinase activity, and melanin synthesis, maybe related with
promoting the protein expression of TYR, but without regulation of the mRNA expression of TYR,TRP-1 and TRP-2.
Key words: galangin; melanin synthesis; tyrosine; TRP-1; TRP-2

高良姜是姜科山姜属植物，为常用中药材，具
有重要药用价值，也是维吾尔医治疗白癜风的常用
药材，本课题组前期进行了高良姜提取物治疗
C57BL/6 小鼠实验性白癜风模型的研究，结果高良
姜提取物能够促进模型动物皮肤中酪氨酸酶活性及
黑色素毛囊数的增加，同时进行体外药效观察，结
果高良姜提取物能够促进人黑素瘤 A375 细胞黑素
的合成，表明高良姜具有治疗白癜风的作用[1]。在
进行高良姜治疗白癜风作用物质基础[2-3]研究时发
现，高良姜素可能是高良姜的有效作用物质之一，
为进一步验证其作用，本研究从黑素合成角度，考
察了不同质量分数高良姜素对人黑素瘤 A375 细胞
黑素合成的影响，并针对黑素合成的相关基因——
酪氨酸酶基因（tyrosine，TYR）、酪氨酸酶相关蛋
白-1（TRP-1）、酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-2）mRNA
和蛋白表达进行研究，以深入探讨高良姜素治疗白
癜风的可能分子机制。
1 材料
1.1 细胞株
人黑素瘤 A375 细胞由上海中国科学院细胞库
提供。
1.2 试药
质量分数为 90%、99%高良姜素，均为自制[4]；
8-甲氧基补骨脂素（8-MOP，东京化成工业株式会
社）；DMEM 干粉培养基（美国 Gibco 公司）；胎牛
血清（美国 Hyclone 公司）；台盼蓝、胰酶、曲拉通
（TritonX-100）均购于 Scientific Research Special 公
司）；噻唑蓝、链霉素（美国 Amresco 公司）；Trizol
Reagent 试液（Invitrogen Corporation Lot）；cDNA
合成试剂盒（Invitrogen）；2×Taq PCR MsaterMix
反应液（TIANGEN）；PCR 反应试剂盒（Invitrogen）；
100 bp DNA Lander（Fermentas）；2K DNA Marker
（TIANGEN）；Tris-base（美国陶氏）；丙烯酰胺
（Acrylamide，Acr）（UItra pure Grade）；双丙烯酰
胺（Bis，UItra pure Grade）；十二烷基硫酸钠（SDS）
（BioSHARPEXP：2013/04）；TEMED（N, N, N, N-
四甲基乙二胺，上海蓝季科技发展公司）；过硫酸铵
（APS，天津市盛奥化学试剂有限公司），Western 及
IP 细胞裂解液（Beyotime）；苯甲基磺酰氟（PMSF，
上海源生叶生物科技有限公司）；PVDF 膜（Scientific
Research Speciac）；甘氨酸（Solarbio）；甲醇（天津
市致远化学试剂有限公司）；溴酚蓝（BPB）（上海试
剂三厂）；甘油（天津市福晨化学试剂厂）；Western
Mar（TransGen Biotech）；兔抗人 TYR 抗体、兔抗人
TRP-1 抗体、兔抗人 TRP-2 抗体、β-tubulin 抗体（Santa
cruz biotechnology，INC）；Western breeze 一步法反
应试剂盒（Invitrogen，美国）；其他为国产市售试剂。
1.3 仪器
XD—101 倒置显微镜（中国江南光电有限公
司）；BIO—RAD550 型酶标仪（美国伯乐公司）；
BECKMAN 高速低温离心机（美国 PE 公司）；
BS224S 精密电子天平 [ 赛多利斯科学仪器（北京）
有限公司 ] ；DYCP—31CN 琼脂糖水平电泳仪（北
京六一仪器厂）；Gene Amp PCR 仪（美国 PE 公司）；
RNA/DNA 检测仪（Pharmacia Biotech）；Tannon
3500R 凝胶成像系统（上海天能公司）。DYY—6D
型垂直电泳仪（北京六一仪器厂）；ST—I 型半干式
转移电泳槽（大连竟迈生物科技有限公司）。
2 方法
2.1 MTT 法测定细胞增殖
取对数生长期 A375 单细胞悬液，调整细胞浓度
为 5×104个，100 μL/孔，铺 96 孔板，培养 24 h，依
次加入浓度 0.5、1.0、5.0、10.0、20.0 μmol/L 的含
90%、99%高良姜素和 8-MOP 的培养液，200 μL/孔，
每一浓度设 8 个复孔，培养 48 h。于结束前 4 h 加 5
mg/mL MTT 溶液 20 μL，继续培养 4 h，加 DMSO 200
μL/孔，酶标仪于 490 nm 处测定吸光度（A）值。
2.2 酶学方法测定酪氨酸酶活性
将加入不同浓度含药培养液的 A375 细胞培养
48 h 后，弃去培养液。用 PBS 冲洗 2 次，每孔加入
1 mol/L TritonX-100 溶液 50 μL，迅速置−70 ℃冻存
30 min，随后室温融化使细胞完全裂解，37 ℃预温
后加入 0.25% 左旋多巴溶液 10 μL，置 37 ℃电热
恒温水槽中反应 2 h，用酶标仪于 490 nm 处测定 A
值。计算激活率。
激活率＝A 加药组 / A 对照组
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2.3 NaOH 裂解法测定黑素水平
将加入不同浓度含药培养液的 A375 细胞培养
48 h 后，弃去上清液，用 PBS 冲洗 2 次，加入 1 mol/L
NaOH 溶液 150 μL，在 37 ℃作用 48 h，充分碱裂
解细胞、溶解黑素颗粒；用酶标仪于 490 nm 处测
定 A 值。计算黑素水平。
黑素＝A 加药组 / A 对照组
2.4 半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）
2.4.1 提取细胞总 RNA 弃去培养液，4 ℃预冷的
PBS 洗 2 次，倒置于无菌滤纸上，使瓶内液体流尽。
加入试剂 Trizol 1.0 mL，反复吹打使细胞完全裂解，
室温静置 5 min 后将细胞 Trizol 液全部转移至无
RNase 1.5 mL 的 EP 管中，室温放置 5 min。每管加
入氯仿 0.2 mL，盖板盖振摇 15 s，室温静置 3 min。
4 ℃，12 000 r/min 离心 15 min。
移取上层水相至新的无 RNase 1.5 mL 的 EP 管
中。每管加入异丙醇 0.5 mL，轻摇混匀，室温静置
10 min，4 ℃，12 000 r/min 离心 10 min。离心后，
吸弃上清，管底沉淀即为 RNA，加入 1.0 mL 75%乙
醇洗涤沉淀，4 ℃，7 500 r/min 离心 5 min。小心吸
弃上清，室温放置 15 min，干燥沉淀（超净台内操
作）。加入 0.1% DEPC 水 30～40 μL，吹打溶解（55～
60 ℃促溶 10～15 min），−70 ℃短暂保存备用。
2.4.2 总 RNA 质量的检测 取 1 μL 总 RNA，加入
99 μL 无 RNA 酶水，充分混匀（稀释 100 倍），置
比色杯中，紫外分光光度计测定 A260、A280 数值，
计算两者比值。量取总 RNA 2.5 μL，加 6×上样液
10 μL，混合均匀，在 1%琼脂糖凝胶、100 V、100 mA
条件下电泳 20～30 min，检测 RNA 的完整性。各
组提取的 RNA 样品经 RNA/DNA 检测仪测定，
A260/A280 在 1.5～1.8，说明样品中蛋白的量相对较
高，经 1%琼脂糖凝胶电泳后，结果显示 18 S、28 S、
5 S 条带，且 28 S 量是 18 S 的 2 倍左右，提示总
RNA 质量良好，满足后续实验的要求。
2.4.3 mRNA 逆转录合成 cDNA 按 cDNA 合成试
剂盒操作，逆转录合成 cDNA。
2.4.4 RT-PCR 引物设计 GAPDH（458 bp）上游引
物：5’-GACCACAGTCCATGCCATCAC-3’，下游引
物： 5’-TGAGGTCCACCACCCTGTTGC-3’ ； TYR
（239 bp）上游引物：5’-GTGCTCTGGCAACTTCAT-3’
下游 引 物 ： 5’-TGTCGTTAAACATGGGTGT-3’ ；
TYP-1（532 bp）上游引物：5’-TTATTTGTCATTGC-
CACCAG-3’ 下游引物：5’-GAGCGACATCCTGT-
GGTTCA-3’ ； TYP-2 （ 286 bp ） 上 游 引 物 ：
5’-GTAACCTCTGTGATTCTTGTGG-3’，下游引物：
5’-ACTCCTTGTTCACTAGGCTGTC-3’。引物均由
生工生物工程（上海）有限公司合成。
2.4.5 PCR 产物电泳 2%琼脂糖凝胶电泳鉴定
PCR 产物，凝胶分析软件进行条带灰度值分析。
2.5 Western-blotting 实验
2.5.1 总蛋白提取 弃尽培养液，加 4 ℃预冷的
PBS，3 mL/瓶，洗涤 3 次。将 PBS 弃去，按 1 mL
裂解液加 10 mL PMSF（100 mmol/L），摇匀；加含
PEMS 的裂解液 0.5 mL/瓶，摇匀裂解 30 min；裂解
完后，将细胞碎片和裂解液移至 1.5 mL 离心管中；
4 ℃，12 000 r/min，离心 15 min，将离心后的上清
液分装置 200 μL EP 管中，−70 ℃保存备用。
2.5.2 蛋白浓度的测定 按 BCA 蛋白浓度测定试
剂盒操作。
2.5.3 SDS-PAGE 电泳 取样品至 0.2 mL EP 管中，
加 5×SDS 上样缓冲液。上样前要将样品于沸水中煮
沸 5 min 使蛋白变性；迅速转移至冰上 2 min。电泳：
浓缩胶：90 V，40 min；分离胶：110 V，130 min。
2.5.4 转膜 9 V 恒压，转膜 30～45 min。转膜结束
后，取出凝胶用考马斯亮蓝染色，PVDF 膜用 1×丽
春红染液染色 30 min（置脱色摇床上摇），检测蛋
白是否转移完全。然后用水冲洗掉没染上的染液就
可看到膜上的蛋白。将膜晾干备用。
2.5.5 Western-blotting 反应 按 Western breeze 一
步法反应试剂盒说明书操作。
2.6 统计学处理
采用 PEMS 3.1 软件进行统计分析，实验结果
以 ±x s 表示，两组间差异用 t 检验分析。
3 结果
3.1 不同质量分数高良姜素对A375 细胞增殖的影响
与对照组比较，两种质量分数的高良姜素均具
有促增殖作用，99%高良姜素在浓度为 0.5～20.0
μmol/L 具有显著的促增殖作用（P＜0.01），但无量
效关系；90%高良姜素在浓度为 1.0～10.0 μmol/L 具
有显著的促增殖作用（P＜0.01），而在浓度为 20.0
μmol/L 时，无促增殖作用（P＞0.05）。结果见表 1。
3.2 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞酪氨酸酶
活性的影响
与对照组相比，两种质量分数高良姜素在浓度
0.5～20.0 μmol/L 内均能促进酪氨酸酶活性的升高，
并且有显著性差异（P＜0.05、0.01）。结果见表 1。
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表 1 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素水平的影响 ( ± = 4x s , n )
Table 1 Effects of galangin with different purity on proliferation, tyrosinase activity, and melanin
levels of A375 cells ( ± = 4x s , n )
组别 C / (μmol·L−1) A 值 激活率 / % 黑素 / %
对照 − 0.274 4±0.033 0 100.000±0.004 100.000±0.014
8-MOP 0.5 0.327 4±0.026 0* 66.990±0.006 96.960±0.015
1.0 0.359 2±0.031 0** 128.620±0.009 71.740±0.010
5.0 0.353 3±0.025 0** 161.840±0.003** 113.040±0.019
10.0 0.341 3±0.022 0** 183.330±0.010** 71.380±0.007
20.0 0.318 8±0.041 0 137.080±0.017** 84.780±0.007
90%高良姜素 0.5 0.303 0±0.027 2 207.130±0.009** 106.870±0.008
1.0 0.396 6±0.054 4** 220.410±0.015** 136.720±0.006*
5.0 0.402 5±0.023 3** 178.740±0.008** 146.770±0.009*
10.0 0.386 5±0.041 5** 168.120±0.010** 168.160±0.008**
20.0 0.334 6±0.050 1 144.320±0.007** 160.700±0.009**
99%高良姜素 0.5 0.362 2±0.016 0** 144.100±0.013** 103.260±0.009
1.0 0.357 4±0.020 0** 162.110±0.007** 96.740±0.006
5.0 0.387 2±0.025 0** 173.910±0.006** 108.330±0.006
10.0 0.387 5±0.038 0** 164.600±0.004** 123.910±0.004
20.0 0.422 8±0.045 0** 116.680±0.015* 118.480±0.007
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01，下表同
*P < 0.05 **P < 0.01 vs control group, same as below
3.3 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞黑素水平
的影响
与对照组比较，90%高良姜素在浓度 1.0～20.0
μmol/L 内具有显著促进黑素升高的作用（P＜0.05、
0.01），且随着浓度的增加呈增强趋势。而 99%高良
姜素促进作用不显著（P＞0.05）。结果见表 1。
3.4 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞 TYR、
TRP-1、TRP-2 mRNA 表达的影响
电泳图谱（图 1）可知，内参条带均清晰可见，
说明样品 cDNA 合成成功，TYR、TRP-1、TRP-2 基
因目的条带清晰，TYR、TRP-1 均存在非特异性条
带，可能是由于TYR和TRP-1基因引物设计不严谨，
造成非特异性条带产生，但目的条带清晰可见，并
不影响目的条带的检测。灰度值分析（表 2），与对
照组相比，99%高良姜素浓度为 1.0 μmol/L 时，能显
著上调 TYR、TRP-2 mRNA 表达（P＜0.05），浓度
为 5.0、10.0 μmol/L 时能显著上调 TRP-1、TRP-2
mRNA 表达（P＜0.05、0.01），8-MOP 在浓度为 5.0、
10.0 μmol/L 时能显著上调 TRP-1 mRNA 表达（P＜
0.05、0.01），而 90%高良姜素浓度为 1.0～10.0
μmol/L，对这 3 个基因的 mRNA 表达无调节作用。



M-Marker 1～3-90%高良姜素（1.0、5.0、10.0 μmol·L−1） 4～
6-99%高良姜素（1.0、5.0、10.0 μmol·L−1） 7～9- 8-MOP（1.0、
5.0、10.0 μmol·L−1） 10-对照
M-Marker 1—3-90% galangin（1, 5.0, and10.0 μmol·L−1） 4—
6-99% galangin（1.0, 5.0, and 10.0 μmol·L−1） 7—9-8-MOP（1.0,
5.0, and 10.0 μmol·L−1） 10-control
图 1 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞 TYR、TRP-1 和
TRP-2 mRNA 表达的影响
Fig. 1 Effects of galangin with different purity on mRNA
expression of TYR, TRP-1, and TRP-2
in A375 cells
458 bp

239 bp

532 bp

286 bp
GAPDH

TYR

TRP-1

TRP-2
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
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表 2 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞 TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA 表达的影响 ( ± = 3x s n, )
Table 2 Effects of galangin with different purity on mRNA expression of TYR, TRP-1, and TRP-2 in A375 cells ( ± = 3x s n, )
组别 C / (μmol·L−1) TYR TRP-1 TRP-2
对照 − 0.475 7±0.107 0 0.436 2±0.192 3 0.431 1±0.083 4
1.0 0.646 9±0.084 0* 0.481 4±0.195 1 0.720 7±0.292 7*
5.0 0.607 4±0.066 3 0.610 2±0.206 8** 0.663 2±0.288 3*
99%高良姜素
10.0 0.573 4±0.148 7 0.507 3±0.254 3* 0.763 2±0.180 7**
1.0 0.425 9±0.092 1 0.411 9±0.222 3 0.624 4±0.268 8
5.0 0.415 2±0.115 5 0.433 3±0.208 9 0.405 4±0.110 6
90%高良姜素
10.0 0.282 2±0.066 6 0.338 7±0.132 3 0.449 5±0.145 9
1.0 0.533 8±0.103 1 0.528 6±0.224 6 0.530 3±0.083 4
5.0 0.575 6±0.106 5 0.616 1±0.246 2* 0.361 2±0.088 5
8-MOP
10.0 0.639 4±0.126 2 0.932 9±0.187 4** 0.532 2±0.227 8

3.5 不同质量分数高良姜素 A375 细胞 TYR、
TRP-1、TRP-2 蛋白表达的影响
由 Western-blotting 实验结果（图 2）可知，药
物作用 A375 细胞后，浓度分别为 1.0、5.0、10.0
μmol/L 时，与对照组相比，两种质量分数的高良姜
素不同程度促进 TYR 蛋白的表达，90%高良姜素无
浓度依赖性；99%高良姜素在 1.0～5.0 μmol/L 时与
对照组相比促进表达作用显著。


1～3-8-MOP（1.0、5.0、10.0 μmol·L−1） 4～6-90%高良姜素（1.0、
5.0、10.0 μmol·L−1） 7～9-99%高良姜素（1.0、5.0、10.0 μmol·L−1）
10-对照
1—3-8-MOP (1.0, 5.0, and 10.0 μmol·L−1) 4—6-90% galangin
(1.0, 5.0, and 10.0 μmol·L−1) 7—9-99% galangin (1.0, 5.0, and 10.0
μmol·L−1) 10-control
图 2 不同质量分数高良姜素对 A375 细胞 TYR、TRP-1、
TRP-2 蛋白表达的影响
Fig. 2 Effects of galangin with different purity on protein
expression of TYR,TRP-1, and TRP-2 in A375 cells
4 讨论
黑素细胞生物合成黑素主要发生于黑素小体，
以酪氨酸为底物，在酪氨酸酶的作用下合成黑素。
黑素是吲哚和醌与蛋白质结合的高分子聚合物。黑
素的合成必须有 3 种基本物质：酪氨酸、酪氨酸酶
和氧。酪氨酸为制造黑素的主要原料，是蛋白质代
谢的产物，为一种稳定的氨基酸；酪氨酸酶是酪氨
酸转变为黑素的催化剂，为铜及蛋白质的复合物，
是在黑素细胞的粗面内质网中合成，后转移到高尔
基空泡中，在此参与合成黑素。人类所有细胞中只
有黑素细胞能合成酪氨酸酶。酪氨酸在酪氨酸酶的
作用下产生黑素，此种作用为一氧化过程，必须与
氧结合才能转变为黑素。很显然，酪氨酸酶在黑素
合成过程中起到非常关键的限速酶作用[5]。因此，
本实验所设 3 个指标分别检验不同质量分数高良姜
素对 A375 细胞的增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成
的影响，相互之间关联又彼此独立，结果显示 90%
高良姜素作用明显，且各指标具有显著性差异，99%
高良姜素对细胞增殖和酪氨酸酶活性有显著的促进
作用，而对黑素合成无明显影响。本课题组前期进
行了不同质量分数高良姜素的药动学研究，发现不
同质量分数高良姜素的药动学参数差异较大[6]，
99%高良姜素与 90%高良姜素相比，达峰时间长，
吸收少，消除速率快。理化性质观察表明 99%高良
姜素呈浅黄色针状结晶，难溶于水，属于脂溶性物
质，90%高良姜素呈浅黄色粉末状，较易溶解；此
外，90%高良姜素中含有近 10%的杂质，对其药效
可能有一定的影响，本课题组将在今后的工作中进
行深入研究。
黑素的产生过程是一个复杂的生物化学过程，
而黑素的前体多巴来源于酪氨酸，经酪氨酸酶作用
下氧化而成，因此酪氨酸酶的活性改变与白癜风发
病有密切的关系。酪氨酸酶基因家族包括 TYR、
TYR
TRP-1
TRP-2
β-tubulin
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 2 期 2014 年 1 月 ·249·

TRP-1、TRP-2 基因，TRP-1、TRP-2 的编码基因与
酪氨酸酶虽同属一个家族，其结构和性质相似，但
催化能力不同。酪氨酸酶转化成黑素过程开始的两
步，即羟化左旋酪氨酸成左旋多巴和氧化后者成为
多巴醌；TRP-2 作为多巴色素互变异构酶，维持黑
素中酚的成分；而 TRP-1 则能氧化 TRP-2 产生的
5, 6-二羟基吲哚羧酸。TRP-1、TRP-2 二者对维持酪
氨酸酶在黑色素小体膜上稳定具有重要性，也参与
黑色素生成的酶过程[7]。本研究采用 RT-PCR 法测
定 TYR、TRP-1 和 TRP-2 基因 mRNA 表达水平，
初步探讨高良姜素治疗白癜风的可能机制，结果
99%高良姜素能够上调 TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA
表达水平，表明 99%高良姜素通过增加酪氨酸酶的
合成来促进黑素的生成；而 90%高良姜素无上调作
用；进一步又进行了 Western-blotting 实验考察了这 3
种基因的蛋白表达水平，结果两种质量分数的高良
姜素均能促进 TYR 蛋白表达，但对 TRP-1 和 TRP-2
的蛋白表达无作用，表明 90%高良姜素在翻译水平
上调控黑素的合成，而 99%高良姜素能够在转录和
翻译水平上共同调节黑素的合成，初步阐明了不同
质量分数高良姜素促黑素合成的分子机制。
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