全 文 ：［收稿日期］ 20121114(001)
［基金项目］ 国家食品药品监督管理局科技计划项目
(2009342)
［第一作者］ 文萍，助理研究员，从事中药分析研究，Tel:
13803502552，E-mail:wenp818@ yahoo． cn
［通讯作者］ * 吕武清，研究员，硕士研究生导师，从事中药新
药及质量控制技术研究，Tel:0791-88512906，
E-mail:jxzyyjs@ 163． com
ＲP-HPLC测定蜂胶中乔松素、白杨素和高良姜素的含量
文萍1，范婷婷1，吕武清1* ，姚剑平1，胡棠洪2，李淑岚3，俞建辉3
( 1. 江西省中医药研究院，南昌 330046; 2. 江西省保健品协会，南昌 330046;
3. 江西汪氏蜜蜂园有限公司，江西 新建 330100)
［摘要］ 目的:采用反相高效液相色谱法测定蜂胶中乔松素、白杨素和高良姜素的含量。方法:使用 YMC-C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 1%磷酸(40∶ 60) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长，乔松素 290 nm，白杨素和高良姜素
268 nm，柱温 30 ℃。结果:乔松素、白杨素和高良姜素分别在 4. 266 ～ 426. 6，4. 59 ～ 459，4. 322 ～ 432. 62 mg·L －1线性关系良
好，平均回收率(n = 6)分别为 98. 28%，98. 82%，100. 77%，ＲSD 分别为 0. 89%，0. 90%，1. 32%。结论:方法简便、准确、重复
性好，可为蜂胶的质量控制提供实验依据。
［关键词］ 蜂胶;乔松素，白杨素;高良姜素;高效液相色谱法
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)19-0108-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013190108
ＲP-HPLC Method for Simultaneous Determination of Propolis Pinocembrin，
Chrysin and Galangin Concentration
WEN Ping1，FAN Ting-ting1，LU Wu-qing1* ，YAO Jian-ping1，HU Tang-hong2，LI Shu-lan3，YU Jian-hui3
(1. Jiangxi Province Institute of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330046，China;
2. Health Products Association of Jiangxi Province，Nanchang 330046，China;
3. Jiangxi Wang Bee Park Company Limited，Xinjian 330100，China)
［Abstract］ Objective:By reversed phase high performance liquid chromatographic method for the
simultaneous determination of propolis pinocembrin，chrysin and galangin concentration． Method:YMC-C18
column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)was used with acetonitrile-0. 1% phosphoric acid (40∶ 60)as mobile phase．
The flow rate was 1. 0 mL·min －1 detected at 268 nm for chrysin and galangin，290 nm for pinocembrin． The
column temperature was maintained at 30 ℃ ． Ｒesult:Pinocembrin，chrysin and galangin were linear respectively
in the range of 4. 266-426. 6，4. 59-459，4. 322-432. 62 mg·L －1 ． The average recovery rates (n = 6)were
98. 28%，98. 82% and 100. 77%;ＲSD was 0. 89%，0. 90% and 1. 32% ． Conclusion:The method is simple，
accurate，reproducible，and can be as propolis quality control of Chinese medicinal materials and provide
experimental basis．
［Key words］ propolis;pinocembrin;chrysin;galangin;HPLC
蜂胶是蜜蜂采集植物树脂混入自身上颚腺、蜡
腺等分泌物混合形成的胶黏性物质。蜂胶化学成分
非常复杂，黄酮类化合物为其主要成分，已知成分还
有萜烯类、有机酸、醛类、醇类、酚类、酶等［1-2］，其中
黄酮类化合物具有多种生理活性如抗病毒、消炎、增
强免疫、降血脂、降糖、保肝、护肾、抗艾滋病毒、抗
菌、抗原虫、抗诱变、抗氧化的作用［3-4］。目前质量
控制主要测定其白杨素、高良姜素［5-7］。而乔松素
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第 19 卷第 19 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 19
Oct．，2013
为其黄酮类成分含量最高成分之一［8］，因此本文采
用反相高效液相色谱法对蜂胶中乔松素、白杨素和
高良姜素进行了含量测定研究，为蜂胶药材的质量
控制提供科学依据。
1 材料
Waters 1525-2487-2707 型高效液相色谱仪，
Empower工作站，SimplicityTM型超纯水系统(Millipore
公司) ，CQ-250型超声波清洗仪(上海船舶设备电子
研究所) ，乔松素、白杨素和高良姜素对照品(均购自
中国药品生物制品检定所，批号分别为 111691-
200501，111701-200501，111829-200801) ，蜂胶为课题
组收集云南、四川、江西、湖南、山东、河南、山西、内
蒙、辽宁、陕西、甘肃、新疆等地 95 个蜂胶(Propolis)
样品(由江西省中医药研究院中药室研究员虞金宝鉴
定) ，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 系统适应性实验 参考《中国药典》2010 年版
一部蜂胶项下含量测定方法，以 YMC-C18柱(4. 6
mm ×250 mm，5 μm)为色谱柱，柱温室温，理论板数
不低于 2 000。选择甲醇-0. 1% 磷酸溶液，乙腈-
0. 1%磷酸溶液，以不同容积比进行分离，流速 1. 0
mL·min －1，结果以乙腈-0. 1%磷酸溶液(42 ∶ 60)作
流动相峰型好，分离效果好;检测波长白杨素和高良
姜素 268 nm，乔松素以甲醇溶解，在 200 ～ 400 nm
进行光谱扫描，结果在 290 nm 波长处有最大吸收。
在此条件下蜂胶药材供试品溶液中乔松素、白杨素
和高良姜素色谱峰有良好的分离(图 1)。
1．乔松素;2．白杨素;3．高良姜素;A ～ C. 对照品;D．供试品色谱图(268 nm) ;E．供试品色谱图(290 nm)
图 1 蜂胶液相色谱
2. 2 供试品溶液的制备 取本品约 0. 1 g，精密称
定，置 100 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声处理
30 min，取出，放置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用
微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，作为供试品溶液。
2. 3 线性关系的考察 精密称定乔松素对照品
21. 33 mg，置 50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并加至刻
度，摇匀，得 426. 6 mg·L －1乔松素对照品溶液。取
此对照品溶液，分别加甲醇进行稀释成 4. 266，
8. 532，17. 064，21. 33，42. 66，85. 32 mg·L －1。精密称
定白杨素对照品 22. 95 mg，置 50 mL 量瓶中，加甲
醇使溶解并加至刻度，摇匀，得 459 mg·L －1白杨素
对照品溶液。取此对照品溶液，分别加甲醇进行稀
释成 4. 59，9. 18，18. 36，36. 72，45. 90，91. 8 mg·L －1。
精密称定高良姜素对照品 21. 61 mg，置 50 mL 量瓶
中，加甲醇使溶解并加至刻度，摇匀，得 432. 2 mg·
L －1高良姜素对照品溶液。取此对照品溶液，分别加
甲醇进行稀释成 4. 322，8. 644，17. 288，34. 576，43. 22，
86. 44 mg·L －1。分别精密吸取 10 μL 注人液相色谱
仪，按确定的色谱条件测定峰面积，将乔松素、白杨
素、和高良姜素浓度与相应峰面积进行回归处理，得
回归方程 Y乔松素 = 53 869. 072X + 69 784，Y白杨素 =
171 711. 37X + 111 199，Y高良姜素 =43 026. 955X +73 186
(r =0. 999 9)，结果表明乔松素、白杨素、高良姜素分
别在 4. 266 ～ 426. 6，4. 59 ～ 459. 0，4. 322 ～ 432. 2
mg·L －1呈良好的线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液
10 μL，注入液相色谱仪中，连续进样 6 次，测定供试
品溶液中乔松素、白杨素、高良姜素峰面积值，数据
结果经分析 ＲSD分别为 0. 05%，0. 20%，0. 37%，说
明仪器精度高。
·901·
文萍，等:ＲP-HPLC测定蜂胶中乔松素、白杨素和高良姜素的含量
2. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液分别在 0，1，
3，12，18，24 h注入液相色谱仪中，测定乔松素、白杨
素、高良姜素峰面积，数据结果经分析 ＲSD 分别为
0. 41%，0. 38%，0. 54%，表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 6 重复性试验 取同一批蜂胶药材共 6 份，测得
乔松素、白杨素、高良姜素平均含量分别为 6. 22%，
5. 89%，4. 15%，ＲSD 分 别 为 0. 13%，0. 12%，
0. 25%，说明方法稳定。
2. 7 回收率试验 取本品 0. 1 g 共 6 份，精密称
定，置 100 mL量瓶中，精密加入混合对照品溶液 25
mL(乔松素 42. 42 mg·L －1，白杨素 53. 725 mg·L －1，
高良姜素 43. 22 mg·L －1) ，再加入甲醇至刻度线，按
含量测定方法测定，计算回收率(表 1)。
表 1 蜂胶中乔松素，白杨素和高良姜素加样回收率试验
组分
原有量
/μg
加入量
/μg
测得总量
/μg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
乔松素 1 084. 11 1 060. 5 2 117. 91 97. 48 98. 28 0. 90
1 247. 49 1 060. 5 2 281. 90 97. 54
1 035. 57 1 060. 5 2 079. 96 98. 48
1 191. 77 1 060. 5 2 234. 81 98. 35
1 061. 32 1 060. 5 2 099. 85 97. 93
1 276. 20 1 060. 5 2 335. 30 99. 87
白杨素 1 511. 53 1 343. 125 2 824. 03 97. 72 98. 82 0. 89
1 739. 32 1 343. 125 3 054. 04 97. 89
1 443. 84 1 343. 125 2 784. 89 99. 85
1 661. 62 1 343. 125 2 989. 42 98. 86
1 479. 75 1 343. 125 2 808. 79 98. 95
1 779. 34 1 343. 125 3 117. 64 99. 64
高良姜素 1 066. 13 1 080. 5 2 133. 07 98. 74 100. 77 1. 32
1 226. 79 1 080. 5 2 311. 69 100. 41
1 018. 39 1 080. 5 2 107. 23 100. 77
1 171. 99 1 080. 5 2 266. 60 101. 31
1 043. 71 1 080. 5 2 130. 33 100. 57
1 255. 03 1 080. 5 2 365. 97 102. 82
2. 8 样品测定 对收集的 95 批样品，按 2. 2 项下
方法制备供试液，注入液相仪进行含量测定，测得样
品中乔松素含量范围从 3. 86% ～ 8. 60%，平均含量
为 4. 24%;样品中白杨素含量范围从 3. 47% ～
7. 54%，平均含量为 4. 19%;样品中高良姜素含量
范围从 3. 29% ～6. 33%，平均含量为 4. 01%。根据
实验结果，拟定蜂胶中乔松素含量不得少于 3. 5%，
白杨素含量定为不得少于 3. 0%，高良姜素含量不
得少于 3. 0%。
3 讨论
乔松素具有抗病毒、增强免疫、降血脂、降糖等
多种生理活性［9-11］，为蜂胶中黄酮类成分含量最高
成分之一，《中国药典》2010 年版一部蜂胶仅对白杨
素和高良姜素进行了含量测定，蜂胶中乔松素的含
量测定方法目前还没有文献报道。因此，有必要增
加乔松素含量控制指标。白杨素和高良姜素的检测
波长为 268 nm，乔松素在 290 nm 波长处有最大吸
收，在本实验条件下，采用双波长同时测定蜂胶中乔
松素、白杨素和高良姜素的含量，为蜂胶药材的质量
控制提供科学依据。
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 19 期
2013 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 19
Oct．，2013