全 文 :·554· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 4 期 2015 年 2 月
阳春砂杂交新种“春选 1 号”药理活性研究
张丹雁,严娅娟,鲁 轮,赖小平
广州中医药大学中药学院,广东 广州 510006
摘 要:目的 探讨阳春砂杂交新种“春选 1 号”挥发油的药理活性,并与其母本“长果 2 号”进行比较。方法 采用 10%
番泻叶致小鼠腹泻模型、二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型、0.6%醋酸溶液致小鼠扭体模型,观察“春选 1 号”挥发油的止泻、
抗炎、镇痛作用,以及对小鼠胃肠动力的影响;并与其母本阳春砂“长果 2 号”进行对比分析。结果 “春选 1 号”与“长
果 2 号”的挥发油均具有显著的止泻作用,其效果与阳性药蒙脱石散相当;抗炎作用与醋酸地塞米松片差异不明显;镇痛效
果均显著;对胃排空均有双向调节作用,高剂量对小肠推进有促进作用,低剂量无明显影响。结论 阳春砂杂交新种“春选
1 号”与其母本“长果 2 号”挥发油药理活性无明显差异,可媲美传统品种阳春砂。
关键词:阳春砂;春选 1 号;止泻;抗炎;镇痛;胃肠动力
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2015)04 - 0554 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.04.017
Study on pharmacological activity of new hybrids Amomum villosum (Spring No.1)
ZHANG Dan-yan, YAN Ya-juan, LU Lun, LAI Xiao-ping
School of Chinese Materia Medica, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China
Abstract: Objective To explore the pharmacological activities of volatile oil in new hybrids of Amomum villosum (Spring No.1) and
compare to the female parent “Longfruit No.2”. Methods The auricle swelling model of mice was induced by xylene, the diarrhea
model of mice was induced by 10% Senna, the writhing body model of mice was induced by 0.6% acetic acid solution to observe the
pharmacological actions of volatile oil in “Spring No.1”. Results The volatile oil in both “Spring No.1” and “Longfruit No.2” had
significant antidiarrheal effect, their effect was equivalent to the positive drug (Montmorillonite Powder). There was no significant
difference in anti-inflammatory effect compared with the control group, the analgesic effect was significant. Both of them had the
bidirectional regulation on gastric emptying. High dose of them had the stimulative effect in the small intestinal propulsion, and low
dose of them had no significant effect. Conclusion There is no significant difference in pharmacological activity between the new
hybrid species “Spring No.1” and its female parent. It could be comparable to the traditional cultivars of A. villosum. This study
provides a scientific basis for expanding A. villosum medicinal resources.
Key words: Amomum villosum Lour. ; “Spring No.1”; antidiarrhea; anti-inflammation; analgesia; gastrointestinal motility
阳春砂为姜科植物阳春砂 Amomum villosum
Lour. 的干燥成熟果实[1],主要分布于广东、广西、
云南、福建等地,以广东阳春所产为佳,为我国著
名“四大南药”之一[2]。长期以来阳春地区春砂仁
种植主要依赖人工授粉,种植成本高,产量低,严
重制约了阳春砂的生产和可持续发展[3]。为解决阳
春砂授粉难题,提高产质,本课题组先后开展了阳
春砂杂交育种研究,以种性最佳的传统品种阳春砂
“长果 2 号”(阳春地区阳春砂主流产品,分布量>
99%[3])为母本,以抗病性较强的海南砂为父本进行
杂交,获得杂交新种“春选 1 号”[4],同时对“春
选 1 号”化学成分[5]及其与母本的形态、分子特性
等[6]进行对比研究,表明“春选 1 号”不仅遗传了母
本的优良种性,而且具有自然授粉率高、抗性强及
高产质优等特点。但目前尚缺乏药理药效实验证明,
为此本实验根据砂仁的主要临床功能主治,从抗炎、
镇痛、止泻及对胃肠蠕动影响 4 个方面考察杂交新
种“春选 1 号”的药效,以期丰富及完善“春选 1
收稿日期:2014-06-28
基金项目:国家科技部“十二五”国家科技支撑计划(2011BAI01B02)
作者简介:张丹雁(1964—),女,辽宁开源人,教授,博士生导师,研究方向为中药品种及真伪鉴别研究、中药质量标准研究、中药材规范
化种植(GAP)研究及中药种质资源研究。E-mail: danyan64@21cn.com
*通信作者 赖小平(1960—),男,研究员,博士生导师。Tel: (020)39358045 E-mail: vip.lxp88@gzhtcm.edu.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 4 期 2015 年 2 月 ·555·
号”的质量评价,为解决阳春砂自然授粉难题、扩
大阳春砂种质资源奠定基础。
1 材料与方法
1.1 动物
SPF 级昆明种小鼠,体质量 18~22 g,雌雄各
半,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证
号 SCXK(粤)2013-0020。饲养于广州中医药大学
中药学院实验动物观察室(国家中医药管理局中医
药科研实验室三级认证),喂以标准的颗粒鼠料。
1.2 仪器
Bsiios 万分之一分析天平(香港佳立国际有限
公司);JY09 电子天平(广州市君宇家用电子衡器
有限公司);DT62067 微量移液器(大龙医疗设备
有限公司,20~200 μL);UV Blustar A 型紫外-可见
分光光度仪(北京莱伯泰科仪器有限公司)。
1.3 药品及试剂
蒙脱石散(天津博福-益普生制药有限公司,批
号 F00024);醋酸地塞米松片(广东华南药业集团
有限公司,批号 130101);罗通定片(四川康富来
药业集团有限公司,批号 20110113);西沙比利(浙
江京新药业股份有限公司,批号 1108132);聚山梨
酯-80(天津市大茂化学试剂厂,批号 120328);二
甲苯(天津市富宇精细化工有限公司,批号
100506);冰醋酸(天津市大茂化学试剂厂,批号
110537);葡聚糖蓝-2000(瑞典 Pnarmacia 公司)。
1.4 样品
“春选 1 号”与“长果 2 号”均于 2012 年 8 月
采自阳春市砂仁示范试验场,经广州中医药大学中
药鉴定教研室张丹雁教授鉴定,均为姜科植物阳春
砂 Amomum villosum Lour. 的干燥成熟果实,凭证
标本存于广州中医药大学中药鉴定实验室。挥发油
按《中国药典》2010 年版(一部)附录 XD 甲法提
取,“春选 1 号”及“长果 2 号”挥发油的提取率分
别为 4.14%、3.63%,挥发油中主要成分为乙酸龙脑
酯,分别占挥发油总量的 53.5%、55.2%[7]。实验以
聚山梨酯-80 为助溶剂配成 O/W 型的药物水溶液,
以 8%聚山梨酯-80 溶液作空白对照品。临用时分别
用蒸馏水把上述药物配成所需浓度的药液。
实验所用番泻叶经广州中医药大学张丹雁教授
鉴定为豆科植物狭叶番泻 Cassia angustifolia Vahl
的干燥小叶,取 10 g 干燥小叶,加 8 倍量水煎煮 2
次,每次 15 min,合并 2 次煎煮液,真空浓缩至 100
mL,即得 10%番泻叶煎剂。
1.5 方法
1.5.1 对番泻叶致小鼠腹泻的影响 取昆明种小鼠
70 只,雌雄各半,随机分为 7 组:对照组、模型组、
蒙脱石散(1.500 g/kg)组、“春选 1 号”挥发油高
和低剂量(270、90 mg/kg)组、“长果 2 号”挥发
油高和低剂量(270、90 mg/kg)组,每组 10 只。
各组小鼠分别 ig 给药,对照组和模型组 ig 给予 8%
聚山梨酯-80 水溶液,给药 60 min 后,除对照组外,
其余各组小鼠 ig 10%番泻叶煎剂 30 mL/kg,而后各
小鼠分别单独置笼中,笼下铺吸水纸,观察并记录
4 h 内各小鼠排出的湿粪粒数。
1.5.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 取昆明小
鼠 60 只,雌雄各半,随机分为 6 组:模型组、醋酸
地塞米松片(20 mg/kg)组、“春选 1 号”挥发油高
和低剂量(270、90 mg/kg)组、“长果 2 号”挥发
油高和低剂量(270、90 mg/kg)组,每组 10 只。
各组小鼠分别 ig 给药,每天 1 次,连续 3 d,末次
给药后 1 h,于小鼠右耳涂二甲苯 0.04 mL,左耳不
作任何处理,15 min 后脱颈椎处死,剪下双耳,用
8 mm 直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,精
密称质量,以左右耳片质量之差为肿胀度,计算耳
肿胀率及肿胀抑制率。
肿胀率=(右耳片质量−左耳片质量)/左耳片质量
肿胀抑制率=(模型组肿胀率−给药组肿胀率)/模型组肿
胀率
1.5.3 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 取昆明种小
鼠 60 只,雌雄各半,随机分为 6 组:模型组、罗通
定组(80 mg/kg)、”春选 1 号”挥发油高和低剂量
(270、90 mg/kg)组、”长果 2 号”挥发油高和低剂
量(270、90 mg/kg)组,每组 10 只。各组小鼠分
别 ig 给药,给药 90 min 后,每只小鼠 ip 0.6%醋酸
溶液 0.2 mL,使小鼠出现伸展后肢、腹部收缩内凹、
躯体扭曲的疼痛反应,观察并记录注射醋酸后 20
min 内小鼠因疼痛扭体次数。计算扭体反应抑制率。
抑制率=(模型组扭体反应均数−给药组扭体反应均数)/
模型组扭体反应均数
1.5.4 对小鼠胃肠动力的影响 取昆明种小鼠 80
只,雌雄各半,随机分为 8 组:对照组,西沙必利
(2.5 mg/kg)组,“春选 1 号”挥发油高、中、低剂
量(90、60、30 mg/kg)组,“长果 2 号”挥发油高、
中、低剂量(90、60、30 mg/kg)组,每组 10 只。
各组小鼠分别 ig 给药,给药 4 d。实验前均禁食不
禁水 12 h,第 4 天 ig 给药 30 min 后,每只再分别
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ig 0.4 mL 20 mg/L(2%)葡聚糖蓝-2000。15 min 后
脱颈处死,开腹取出全胃肠。自幽门括约肌处取胃,
沿大弯侧剪开,将胃内色素残留物充分洗于 4 mL
去离子水中,3 500 r/min 离心 15 min,取上清液,
采用分光光度计于 620 nm 波长处检测,所测吸光
度(A)值代表胃内色素残留量,并计算色素残留
率。同时量取幽门括约肌至色素最前端及至盲肠的
距离,以二者之比为小肠推进比。
色素残留率=给药组 A 值/对照组 A 值
1.5.5 数据处理
实验数据采用 SPSS 17.0 统计软件进行分析,
组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),组内比
较采用配对样本 t 检验法,实验结果以 ±x s 表示。
2 结果
2.1 对番泻叶致小鼠腹泻的影响
对照组小鼠无湿粪(正常干燥粪便),与对照组
比较,模型组小鼠出现明显湿粪,说明实验造模成
功;与模型组比较,阳性药蒙脱石散可显著减少小
鼠湿粪粒数(P<0.01),“春选 1 号”与“长果 2 号”
挥发油高、低剂量组亦可显著减少小鼠的湿粪粒数
(P<0.01),说明两者挥发油对番泻叶致小鼠腹泻均
有显著的抑制作用。与蒙脱石散组比较,2 种砂仁挥
发油高、低剂量组小鼠湿粪粒数均无显著差异(P>
0.05)。与“长果 2 号”挥发油高、低剂量组比较,
“春选 1 号”挥发油高、低剂量组小鼠湿粪粒数均无
显著差异,提示 2 种挥发油对番泻叶致小鼠腹泻的
抑制效果相当。见表 1。
2.2 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
表 2 结果显示,与模型组比较,阳性药醋酸地
塞米松片可显著抑制二甲苯致小鼠的耳肿胀程度
表 1 “春选 1 号”及“长果 2 号”挥发油对番泻叶致小鼠
腹泻的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 1 Effect of volatile oil in “Spring No.1” and “Longfruit
No.2” on diarrhea of mice induced by 10% Senna ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量/(mg·kg−1) 湿粪数/粒
对照 — 0
模型 — 10.8±3.3
蒙脱石散 1 500 5.5±1.6**
春选 1 号 270 4.8±1.9**
90 5.7±2.3**
长果 2 号 270 5.0±2.5**
90 5.2±1.7**
与模型组比较:**P<0.01
**P < 0.01 vs model group
表 2 “春选 1 号及“长果 2 号”挥发油对二甲苯致小鼠耳
肿胀的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 2 Effect of volatile oil in “Spring No. 1” and “Longfruit
No. 2” on ear edema of mice induced xylene ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量/(mg·kg−1) 耳肿胀度/mg 肿胀抑制率/%
模型 — 11.85±2.8 —
醋酸地塞米松片 20 5.96±3.4** 49.7
春选 1 号 270 6.74±1.8** 43.1
90 7.44±3.8** 37.2
长果 2 号 270 7.15±3.6** 39.7
90 7.81±2.9** 34.1
与模型组比较:**P<0.01
**P < 0.01 vs model group
(P<0.01),耳肿胀抑制率达到 49.70%,提示实验
方法可行。与模型组比较,“春选 1 号”与“长果 2
号”挥发油均可极显著减轻二甲苯致小鼠的耳肿胀
度(P<0.01),表明两者均具有显著的抗炎效果。
与“长果 2 号”挥发油高、低剂量组比较,“春选 1
号”挥发油高、低剂量组对小鼠耳肿胀度得抑制作
用均无显著差异(P>0.05),说明两者抗炎效果相当。
2.3 对醋酸致小鼠扭体反应的影响
结果显示,与模型组比较,罗通定可显著减少
小鼠 20 min 内扭体次数(P<0.01),提示造模成功,
实验方法可行。与模型组比较,“春选 1 号”与“长
果 2 号”挥发油均可显著减少小鼠 20 min 内扭体次数
(P<0.05、0.01),说明两者均能显著抑制醋酸致小
鼠的疼痛;与罗通定组比较,2 种阳春砂挥发油 20
min 内扭体反应次数均无显著差异。与”长果 2 号”
挥发油高、低剂量组比较,“春选 1 号”挥发油高、
低剂量组对小鼠 20 min 内的扭体次数均无显著性
差异,提示二者镇痛效果相当。见表 3。
表 3 “春选 1 号”及”长果 2 号”挥发油对醋酸致小鼠扭
体反应的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 3 Effects of volatile oil in “Spring No. 1” and “Longfruit
No. 2” on writhing body reaction of mice induced by acetic
acid ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量/ (mg·kg−1)
扭体潜伏
期/s 扭体次数/次
抑制率/
%
模型 — 153± 37 35±14 —
罗通定 80 312± 78** 17±10** 52
春选 1 号 270 341±122** 14± 9** 60
90 308± 83** 18± 9** 49
长果 2 号 270 293±101** 17±10** 53
90 259±104 24±14* 31
与模型组比较:*P<0.05 **P<0.01
*P < 0.05 **P < 0.01 vs model group
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 4 期 2015 年 2 月 ·557·
2.4 对小鼠胃肠动力的影响
与对照组比较,“春选 1 号”与“长果 2 号”挥
发油高剂量均可显著增加小鼠胃内相对色素残留率
(P<0.01),抑制胃排空;中、低剂量均可极显著减
少小鼠胃内相对色素残留率(P<0.01),促进胃排
空,说明两者对小鼠胃排空具有双向调节作用,与
张宁等[8]研究结果相一致。与“长果 2 号”挥发油
高、中、低剂量组比较,“春选 1 号”挥发油高、中、
低剂量组小鼠胃内色素残留率无显著性差异,表明
二者对小鼠胃排空的影响作用相当。
与对照组比较,2 种阳春砂挥发油高、中剂量
均可极显著增加小鼠小肠推进比(P<0.01),2 种
阳春砂挥发油低剂量也可增加小鼠小肠推进比,但
无显著性差异,表明 2 种阳春砂仁挥发油高剂量均
具有显著促进小肠推进作用,低剂量则无明显促进
小肠推进的功能。与”长果 2 号”挥发油高、中、
低剂量组比较,”春选 1 号”挥发油高、中、低剂量
组对小鼠小肠推进作用无显著性差异,提示二者对
小肠的推进作用相当。见表 4。
表 4 “春选 1 号”及“长果 2 号”挥发油对小鼠胃排空和
小肠推进功能的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 4 Effects of volatile oil in “Spring No. 1” and “Longfruit
No. 2” on promoting function of gastric emptying and small
intestine propulsion of mice ( ± = 10x s , n )
组 别 剂量/(mg·kg−1) 色素残留率/% 小肠推进比/%
对照 — 100 51.30±6.62
西沙必利 2.5 56.52±15.83* 65.86±9.91**
春选 1 号 90 123.10±15.75** 64.41±8.26**
60 44.10±18.96** 61.51±7.25**
30 33.10±12.89** 52.57±5.30
长果 2 号 90 115.60±35.75** 63.02±8.67**
60 44.80±22.69** 63.25±9.15**
30 29.30±11.30** 52.25±6.44
与对照组比较:*P<0.05 **P<0.01
*P < 0.05 **P < 0.01 vs control group
3 讨论
杂交育种是人们培育优良新品种的常用育种手
段,杂交使子代综合了双亲的优良特性,获得在生
长势、繁殖力、生产力、抗逆性及品质等方面均较
双亲优越的杂交优势。阳春砂具有特殊的花器结构,
且开花结果于地表,使其难以自然授粉[3],为提高
阳春砂昆虫授粉率,本课题组采用传统杂交方法获
得的阳春砂新品种”春选 1 号”不仅遗传了母本”长
果 2 号”的优良种性,还表现出花期迟、昆虫授粉率
高、抗病、抗逆性强、生长周期短及高产质优等特点,
更重要的是杂交种开花迟有利于昆虫授粉[6],初步解
决了阳春砂授粉难题。
在此基础上,本实验根据砂仁的主要临床功能
主治,从抗炎、镇痛、止泻及对胃肠蠕动影响等方
面对二者挥发油进行对比研究,结果显示杂交新种
与母本挥发油在上述药理实验中均无显著性差异,
说明二者药理药效相当,且杂交新种抗炎效果略优
于其母本。杂交新种”春选 1 号”的获得,为解决
阳春砂自然授粉难题,降低种植成本,扩大阳春砂
药用种质资源,提高产量和质量具有重要意义。
本研究中砂仁挥发油既具有增加胃肠蠕动作
用,又具有止泻效果,两者并不矛盾,原因在于其
作用机制不同:砂仁的促胃肠动力作用机制与血液
及胃肠道胃动素(MTL)及 P 物质(SP)的量增加
有关[9];而砂仁挥发油发挥镇痛止泻机制可能是通
过抑制小肠平滑肌产生的[10]。
参考文献
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