全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 23 期 2014 年 12 月 ·3402·
UPLC-MS/MS 法同时测定注射用益气复脉（冻干）中 13 种成分
乔晓莉 1，肖学凤 2，周大铮 3，叶正良 3，付淑军 4，阎 姝 1，刘昌孝 2, 5*
1. 天津市南开医院，天津 300100
2. 天津中医药大学，天津 300193
3. 天津天士力之骄药业有限公司，天津 300410
4. 天津国际生物医药联合研究院，天津 300457
5. 天津药物研究院，天津 300193
摘 要：目的 建立同时测定注射用益气复脉（冻干）（YFI）中人参皂苷类（人参皂苷 Rb1、Re、Rg1、Rc、Rd、Rf、Rg3、
F2和三七皂苷 R1）和木脂素类（五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素）共 13 种成分的 UPLC-MS/MS 分析
方法，并对 YFI 中上述成分进行定量分析。方法 采用液质联用法，应用 C18柱，流动相为含 0.1%甲酸的水溶液和含 0.1%
甲酸的甲醇溶液梯度洗脱，质谱采用正离子模式，多反应监测扫描。结果 YFI 中 13 种成分线性关系、精密度、稳定性、
重复性均符合方法学测定要求，加样回收率为 98.28%～101.08%。应用所建立的方法测定了 5 批次 YFI 中人参皂苷类和木脂
素类共 13 个成分的量。结论 所建立的用于同时测定 YFI 中 13 种成分的分析方法简单、重复性好、准确可靠，可为 YFI
质量控制提供依据。
关键词：UPLC-MS/MS；注射用益气复脉（冻干）；人参皂苷类化合物；木脂素类化合物；三七皂苷 R1；五味子醇甲；五味
子醇乙；五味子甲素；五味子乙素
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)23 - 3402 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.23.009
Simultaneous analysis on 13 components in Yiqi Fumai Injection (freeze-dried)
by UPLC-MS/MS method
QIAO Xiao-li1, XIAO Xue-feng2, ZHOU Da-zheng3, YE Zheng-liang3, FU Shu-jun4, YAN Shu1,
LIU Chang-xiao2, 5
1. Tianjin Nankai Hospital, Tianjin 300100, China
2. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
3. Tianjin tasly pride Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 300410, China
4. Tianjin International Joint Academy of Biotechnology & Medicine, Tianjin 300457, China
5. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China
Abstract: Objective To establish a UPLC-MS/MS analytical method for the simultaneous analysis of ginsenosides (ginsenosides
Rb1, Re, Rg1, Rc, Rd, Rf, Rg3, F2, and notoginsenoside R1) and lignans (gomisin A, schisandrol B, deoxyschizandrin, and schisandrin
B) in Yiqi Fumai Injection (freeze-dried) (YFI), and measure the contents of these constituents in YFI. Methods Quantitative
research of 13 components in YFI was done by reversed-phase liquid chromatography on a C18 column using a gradient elution (0.1%
formic acid in water and 0.1% formic acid in methanol). A triple quadrupole mass spectrometer operating in positive electrospray
ionization mode with multiple reaction monitoring was used. Results Thirteen components in YFI have good linear relationship,
precision, stability, and repeatability according to the requirements of the methodology determination. The recoveries were 98.28%—
101.08%. The 13 components in three batches of YFI were determined by UPLC-MS/MS method. Conclusion The developed
UPLC-MS/MS method is simple, sensitive, and accurate, and has good repeatability. The 13 components in YFI could be rapidly and

收稿日期：2014-06-12
基金项目：重大新药创制专项（2013ZX09402202）
作者简介：乔晓莉（1982—），女，山西大同人，博士，药师，主要从事中药质量控制方面工作。Tel: 13512463203 E-mail: 13512463203@163.com
*通信作者 刘昌孝，中国工程院院士。Tel: (022)84845243
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accurately quantified by UPLC-MS/MS, which provides the helpful information for the comprehensive quality evaluation of YFI.
Key words: UPLC-MS/MS; Yiqifumai Injection (freeze-dried); ginsenosides; lignans; notoginsenoside R1; gomisin A; schisandrol B;
deoxyschizandrin; schisandrin B

注射用益气复脉（冻干）（Yiqi Fumai Injection，
YFI）源自生脉饮[1]，是利用先进的药物提取技术，
从红参、麦冬、五味子中提取多种有效成分制成的
现代中药复方冻干粉针剂。其功能益气复脉、养阴
生津，临床研究表明，YFI 对于冠心病心绞痛、冠
心病所致心力衰竭具有确切疗效[2-4]。
YFI 中主要有效成分为人参皂苷类和木脂素
类[5-6]，目前，对于其中化学成分的定量分析大多针
对人参皂苷类和木脂素类成分分别进行[7-8]，尚无对
2 大类成分同时定量的报道。本实验采用 UPLC-
MS/MS 技术[9]建立同时测定 YFI 中人参皂苷类（人
参皂苷 Rb1、Re、Rg1、Rc、Rd、Rf、Rg3、F2 和三
七皂苷 R1）和木脂素类（五味子醇甲、五味子醇乙、
五味子甲素和五味子乙素）共 13 种化合物的分析方
法，并应用该方法进行 YFI 中 13 种化合物的定量
分析，以期为 YFI 的质量控制提供全面、快速、可
靠的方法。
1 仪器与试药
XH—C震动搅拌器，金坛市医疗仪器厂；Waters
UPLC-MS/MS 系统：Acquity Ultra Performance LC，
包括紫外检测器、自动进样器、二元泵、在线脱气
机；Quattro Premier XE 质谱仪：电喷雾离子源（ESI）
和 MassLynx V4.1 工作站；Zentrifugen Mikro 220R
台式冷冻离心机，北京森瑞科仪科技发展有限公司；
SB25—12 DTN 超声波清洗机，宁波新芝生物科技
有限公司；AL204 万分之一电子天平和 XP6 百万分
之一天平，瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司。
对照品人参皂苷 Rb1（批号 110704-201223）、
Re（批号 110754-201324）、Rg1（批号 110703-
201128）、Rc（批号 ABS-00007201-005）、Rd（批
号 110818-201001）、Rf（批号 111719-200502）、Rg3
（批号 110804-200402）、F2（批号 111764-200601）
及三七皂苷 R1（批号 110745-200617）、五味子醇甲
（批号 110857-200608）、五味子甲素（批号 110764-
200408）、五味子乙素（批号 110765-200609）、艾
司唑仑（批号 1219-0102）购自中国食品药品检定
研究院；五味子醇乙（批号 ASB-00019501-005）购
自 ChromaDex 公司，各对照品质量分数均≥98%；
注射用益气复脉（冻干）由天津天士力之骄药业有
限公司提供（批号 20130508、20130511、20130612、
20131002、20140101）；乙腈、甲醇，色谱级，Fisher
公司，美国；甲酸，色谱级，天津市光复精细化工
研究所；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 混合对照品溶液的配制
分别精密称取人参皂苷 Rb1、Re、Rg1、Rc、
Rd、Rf、Rg3、F2 及三七皂苷 R1、五味子醇甲、五
味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素对照品适量，
加甲醇-水（1∶1）溶解并摇匀，配制成含人参皂苷
Rb1、Re、Rg1、Rc、Rd、Rf、Rg3、F2 及三七皂苷
R1、五味子醇乙质量浓度均为 10 μg/mL，五味子醇
甲、五味子甲素、五味子乙素质量浓度均为 1 μg/mL
的混合对照品溶液。
2.2 内标溶液的制备
精密称取艾司唑仑对照品适量，加甲醇-乙腈
（1∶1）溶液，溶解并摇匀，配制成质量浓度为 20
μg/mL 的内标溶液。
2.3 供试品溶液的配制
精密称取 YFI 0.45 g 至 100 mL 量瓶中，加水适
量，超声使溶解为澄清药液，继续加水定容至刻度，
混匀，制成含原药 4.5 mg/mL 的 YFI 水溶液，精密
吸取上述 YFI 水溶液 100 μL，加入 5 μL 内标溶液，
混匀，离心，取上清液，即得。
2.4 色谱与质谱条件
2.4.1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Zorbax XDB
C18 柱（50 mm×2.1 mm，3.5 μm）；流动相为含 0.1%
甲酸的水溶液（A）-含 0.1%甲酸的甲醇溶液（B），
梯度洗脱：0.01～0.8 min，52% A；0.8～1.0 min，
52%～35% A；1.0～3.7 min，35%～5% A；3.7～4.7
min，5% A；4.7～4.71 min，5%～52% A；4.71～8.0
min，52% A；体积流量为 0.4 mL/min；柱温为室温；
进样量 10 μL。
2.4.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子源（ESI）；
气帘气（CUR）体积流量 15 L/min；喷雾电压（IS）
5 000 V；脱溶剂温度（TEM）350 ℃；雾化气（GS1）
体积流量 65 L/min；加热辅助气（GS2）体积流量
65 L/min。信号采集方式为多反应监测（MRM），
见表 1。MRM 离子流图见图 1。
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表 1 对照品的 MRM 条件
Table 1 MRM conditions of reference substances
成分 母离子（m/z） 子离子（m/z） 去簇电压 / V 碰撞能 / V 碰撞室出口电压 / V
人参皂苷 Rb1 1 131.7 365.2 200 85 18
人参皂苷 Re 969.6 789.6 266 63 20
人参皂苷 Rg1 823.5 643.5 180 53 16
人参皂苷 Rc 1 101.6 789.5 256 77 18
人参皂苷 Rd 969.5 789.6 266 67 18
人参皂苷 Rf 823.5 365.2 256 69 18
人参皂苷 Rg3 807.6 364.9 286 71 20
人参皂苷 F2 807.5 627.7 180 53 15
三七皂苷 R1 955.7 775.7 200 62 19
五味子醇甲 433.2 384.0 101 27 10
五味子醇乙 417.2 368.2 101 25 8
五味子甲素 417.3 316.2 126 35 16
五味子乙素 401.3 300.2 121 33 16
艾司唑仑 295.0 267.0 90 33 15










图 1 MRM 离子流图
Fig. 1 MRM ion current graphs

2.5 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液适量，加甲醇-
水（1∶1）溶液稀释至不同质量浓度，摇匀，制得
系列混合对照品溶液，分别取以上混合对照品溶液
100 μL，加入 5 μL 内标溶液，混匀，离心，取上清
液按“2.4”项下色谱与质谱条件进行测定。以对照
品质量浓度为横坐标（X），对照品与内标峰面积比
值为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程：人
参皂苷 Rb1 Y＝0.030 8 X＋0.004 0，r＝0.999 3；人
参皂苷 Re Y＝0.007 2 X＋0.000 8，r＝0.999 7；人参
皂苷 Rg1 Y＝0.022 8 X＋0.004 6，r＝0.999 7；人参
皂苷 Rc Y＝0.015 2 X＋0.001 2，r＝0.999 7；人参皂
苷 Rd Y＝0.021 6 X＋0.001 5，r＝0.999 5；人参皂苷
Rf Y＝0.012 6 X＋0.001 4，r＝0.999 6；人参皂苷 Rg3
Y＝0.012 7 X＋0.002 5，r＝0.999 6；人参皂苷 F2 Y＝
0.010 2 X＋0.004 4，r＝0.999 4；三七皂苷 R1 Y＝
艾司唑仑 人参皂苷 Rb1
人参皂苷 Re 人参皂苷 Rg1
人参皂苷 Rc 人参皂苷 Rd
人参皂苷 Rf 人参皂苷 Rg3
三七皂苷 R1人参皂苷 F2
五味子醇乙五味子醇甲
五味子乙素五味子甲素
艾司唑仑
人参皂苷 Rg1人参皂苷 Re
人参皂苷 Rb1
人参皂苷 Rc 人参皂苷 Rd
人参皂苷 Rf 人参皂苷 Rg3
五味子醇甲 五味子醇乙
三七皂苷 R1人参皂苷 F2
五味子甲素 五味子乙素
对照品 对照品YFI 样品 YFI 样品
0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8
t / min
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0.015 0 X＋0.002 1，r＝0.999 6；五味子醇甲 Y＝
0.139 9 X＋0.001 4，r＝0.999 2；五味子醇乙 Y＝
0.005 8 X＋0.000 1，r＝0.999 4；五味子甲素 Y＝
1.311 3 X＋0.020 3，r＝0.999 5；五味子乙素 Y＝
1.091 5 X＋0.004 5，r＝0.999 6；结果表明人参皂苷
Rg1、Rb1、Rc、Rd、Re、Rf、Rg3、F2 和三七皂苷
R1、五味子醇乙在 0.02～10.00 μg/mL、五味子醇甲、
五味子甲素和五味子乙素在 0.004～1.000 μg/mL 线
性关系良好。
2.6 精密度试验
配制低、中、高 3 个质量浓度的对照品系列溶
液。精密吸取混合对照品溶液，加甲醇-水（1∶1）
溶液稀释，配制成分别含人参皂苷 Rg1、Rb1、Rc、
Rd、Re、Rf、Rg3、F2 和三七皂苷 R1、五味子醇乙
系列质量浓度均为 0.04、0.2、8 μg/mL，五味子醇
甲、五味子甲素和五味子乙素系列质量浓度均为 8、
40、800 ng/mL 的混合对照品系列溶液，取以上混
合对照品溶液 100 μL，加入 5 μL 内标溶液，混匀，
离心，取上清液按“2.4”项下色谱与质谱条件进行
测定，1 d 内连续进样 6 次，计算日内精密度；连续
3 日进行测定，计算日间精密度。结果 13 种成分低、
中、高 3 个质量浓度（人参皂苷 Rg1、Rb1、Rc、
Rd、Re、Rf、Rg3、F2 和三七皂苷 R1、五味子醇乙
低、中、高 3 个质量浓度为 0.04、0.2、8.0 μg/mL，
五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素低、中、高
3 个质量浓度为 8、40、800 ng/mL）的日内精密度
分别为人参皂苷 Rb1（1.86%、1.83%、0.81%）、Re
（1.19%、1.37%、0.43%）、Rg1（0.91%、1.77%、0.43%）、
Rc（1.69%、1.62%、1.36%）、Rd（1.43%、1.61%、
0.27%）、Rf（1.27%、1.90%、1.77%）、Rg3（1.92%、
1.57%、0.92%）、F2（2.00%、1.50%、0.88%）、三
七皂苷 R1（1.50%、1.48%、0.52%）、五味子醇甲
（1.42%、1.15%、0.65%）、五味子醇乙（1.72%、1.62%、
0.86%）、五味子甲素（0.83%、1.86%、0.86%）、五
味子乙素（0.87%、1.36%、0.76%）。
13 种成分低、中、高 3 个质量浓度（人参皂苷
Rg1、Rb1、Rc、Rd、Re、Rf、Rg3、F2 和三七皂苷
R1、五味子醇乙低、中、高 3 个质量浓度为 0.04、
0.2、8.0 μg/mL，五味子醇甲、五味子甲素和五味子
乙素低、中、高 3 个质量浓度为 8、40、800 ng/mL）
的日间精密度分别为人参皂苷 Rb1（1.21%、1.71%、
0.71%）、Re（0.74%、1.66%、0.17%）、Rg1（0.27%、
0.85%、0.50%）、Rc（1.32%、1.78%、0.14%）、Rd
（1.82%、0.34%、1.04%）、Rf（0.44%、1.59%、0.64%）、
Rg3（1.90%、1.70%、0.29%）、F2（1.05%、0.51%、
0.84%）、三七皂苷 R1（0.66%、1.33%、0.55%）、
五味子醇甲（0.46%、1.64%、0.62%）、五味子醇乙
（1.83%、1.86%、0.22%）、五味子甲素（0.56%、0.52%、
0.59%）、五味子乙素（0.38%、0.56%、0.33）。表明
所建立的方法重复性好、准确可靠，可以满足待测
物定量测定的要求。
2.7 稳定性试验
取 YFI（批号 20130508），按“2.3”项下方法
处理后，室温放置，分别于 0、2、4、6、8、12 h，
按“2.4”项下色谱与质谱条件进行测定，计算对照
品与内标峰面积比值，结果人参皂苷 Rb1、Re、Rg1、
Rc、Rd、Rf、Rg3、F2 与三七皂苷 R1、五味子醇甲、
五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素峰面积与内
标峰面积比值的 RSD 分别为 1.15%、1.86%、1.53%、
1.44%、1.34%、1.78%、1.94%、1.69%、1.59%、1.75%、
0.99%、1.89%和 1.97%。表明供试品溶液在 12 h 内
稳定。
2.8 重复性试验
取 YFI（批号 20130508）6 份，按“2.3”项下
方法处理后，按“2.4”项下色谱与质谱条件进行测
定，计算对照品与内标峰面积比值，结果人参皂苷
Rb1、Re、Rg1、Rc、Rd、Rf、Rg3、F2 和三七皂苷
R1、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味
子乙素峰面积与内标峰面积比值的 RSD 分别为
1.96%、1.81%、1.50%、1.70%、1.96%、1.76%、1.95%、
1.90%、1.74%、1.70%、1.72%、1.95%、1.58%。表
明该方法重复性良好。
2.9 加样回收率试验
精密量取 6 份已测定的 YFI（批号 20130508）
水溶液（含原药 4.33 mg/mL）50 μL，加入 5 μL 内
标溶液，分别精密加入一定质量浓度的混合对照品
溶液 50 μL，其中人参皂苷 Rg1 7.4 μg/mL、Rb1 5.6
μg/mL、Rc 3.0 μg/mL、Rd 1.6 μg/mL、Re 1.2 μg/mL、
Rf 1.6 μg/mL、Rg3 0.7 μg/mL、F2 8 ng/mL、三七皂
苷 R1 0.4 μg/mL、五味子醇乙 0.08 μg/mL、五味子
醇甲 0.6 μg/mL、五味子甲素 0.6 μg/mL、五味子乙
素 0.06 μg/mL，混匀，离心，取上清液，按“2.4”
项下条件进行测定，记录峰面积，计算加样回收率。
结果 13 种成分的平均回收率和 RSD 分别为人参皂
苷 Rb1（99.49%、1.49%）、Re（100.28%、1.08%）、
Rg1（99.89%、1.40%）、Rc（100.20%、1.49%）、
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Rd（99.61%、1.21%）、Rf（99.17%、1.01%）、Rg3
（99.46%、1.45%）、F2（99.78%、1.10%）、三七皂
苷 R1（99.82%、1.63%）、五味子醇甲（100.71%、
1.09%）、五味子醇乙（98.85%、1.17%）、五味子甲
素（101.08%、0.84%）、五味子乙素（98.28%、1.69%）。
表明在实验选择的样品处理、色谱与质谱条件下，
待测物的提取回收率符合测定要求。
2.10 样品测定
取 5 个批次 YFI，按照“2.3”项下方法制备供
试品溶液，按照“2.4”项下色谱和质谱条件进行测
定，分别计算样品中 13 个成分的质量分数，结果见
表 2。

表 2 不同批次 YFI 中 13 种成分的定量测定结果 ( x ±s, n =3)
Table 2 Quantitative determination of 13 components in YFI from different batches ( x ±s, n = 3)
质量分数 / (μg·g−1) 批号
人参皂苷 Rb1 人参皂苷 Re 人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Rc 人参皂苷 Rd 人参皂苷 Rf 人参皂苷 Rg3
20130508 1 294.6±119.9 270.8±25.4 171.6±11.9 680.0±54.7 406.9±62.5 380.0±30.0 166.8±19.3
20130511 1 303.1± 61.5 313.8±30.2 185.2± 3.7 683.1±49.3 462.3±64.9 405.4±10.4 155.8± 5.9
20130612 1 281.5± 89.6 283.1±14.8 163.3±10.5 698.5±60.2 445.4±23.4 370.0±15.4 168.5± 8.5
20131002 1 280.0± 71.7 273.8±12.7 167.8±11.6 701.5±43.1 443.8±40.4 375.4±21.4 163.1± 9.6
20140101 1 249.2± 51.6 290.8±16.6 185.0± 4.5 680.0±17.9 426.9±28.0 367.7±11.6 167.5±27.1
质量分数 / (μg·g−1) 批号
人参皂苷 F2 三七皂苷 R1 五味子醇甲 五味子醇乙 五味子甲素 五味子乙素
20130508 1.70±0.04 96.2±7.2 138.5±11.0 20.8±0.4 0.030±0.002 0.003±0.002 0
20130511 2.10±0.10 113.8±5.4 141.0± 5.5 18.3±0.3 0.026±0.001 0.002±0.001 0
20130612 1.90±0.10 91.7±7.6 143.6± 5.0 17.8±0.8 0.027±0.003 0.001±0.001 0
20131002 2.00±0.20 94.3±7.3 140.3± 3.0 18.2±1.0 0.029±0.001 0.001±0.000 4
20140101 1.90±0.10 111.7±5.3 140.8± 5.8 19.6±1.3 0.028±0.002 0.001±0.001 0

3 讨论
由于 YFI 君药红参中质量分数较高的人参皂苷
类成分极性较大，因此选择 ESI 源为其定量分析的
离子源。有文献报道人参皂苷在负离子模式下检测
比在正离子模式下检测灵敏度更高[9-11]，本实验考
察了正、负离子扫描方式下待测物的响应强度，并
进行比较，发现正离子模式下 [M＋Na]+ 的响应度
更高，且得到的碎片离子更为稳定，因此选择正离
子模式进行 MS/MS 检测。本研究根据优选得到的
母离子和碎片离子信息，组建多个 MRM 离子对，
最终确定最合适的 MRM 条件，提高了选择性，且
大幅缩短了检测时间。在流动相中添加甲酸可以提
高 ESI 电离源正离子检测方式下的质谱响应，有利
于改善峰形，通过实验研究，最终确定含 0.1%甲酸
的水溶液-含 0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相。
本实验考察不同类型的色谱柱，最终选择
Agilent Zorbax XDB C18柱（50 mm×2.1 mm，3.5
μm），其保留时间适中，具有较好的分离效能，不
易受到干扰。选用艾司唑仑为内标，其保留时间适
当，峰形良好，回收率均符合规定，且在实验过程
中稳定可靠。
本实验建立的同时定量分析 YFI 中人参皂苷类
和木脂素类成分的 UPLC-MS/MS 方法，在 13 种成
分各自的质量浓度范围内，线性良好，所有测定样
品的准确度、精密度、回收率、稳定性等均满足定
量分析要求，并对 YFI 5 批次样品进行了多成分定
量分析，结果表明所建立的方法快速、准确、可靠，
为 YFI 的质量控制提供了一定的参考。
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