全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
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厚朴水提物在 Caco-2细胞模型中的转运特征研究
费巧玲 1,王 建 2,侯 睿 1,刘 芬 1,高 源 1,蔡润兰 1,齐 云 1*
1. 中国医学科学院北京协和医学院 药用植物研究所,北京 100193
2. 成都中医药大学药学院,四川 成都 610075
摘 要:目的 研究厚朴水提物经 Caco-2 单层细胞模型双向转运的特征及对细胞膜上 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)活
性的影响。方法 在经验证的 Caco-2 细胞单层模型中进行厚朴水提物双向转运实验,根据水提物总抗氧化能力标准曲线计
算其转运量,并计算表观渗透系数(P’app)及溢流率(ER)。以 P-gp底物罗丹明 123(Rh123)在细胞内的蓄积与外排实验
来判断厚朴水提物对 Caco-2细胞膜上 P-gp活性的影响。结果 厚朴水提物 P’app(AP→BL)值在 1×10−5 cm/s左右,与质量浓度
呈正相关,ER值远小于 2,对 Rh123的蓄积和外排均没有影响。结论 厚朴水提物中与抗氧化作用有关的活性成分群可被
较好地吸收,以被动扩散形式转运,不是 P-gp底物,也不影响 P-gp活性。建立了一种考察厚朴水提物转运特征的新方法,
为临床安全合理使用厚朴提供了药动学研究基础。
关键词:厚朴;Caco-2细胞模型;双向转运;抗氧化能力;P-糖蛋白
中图分类号:R285.5 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)13 - 2313 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.13.018
Transport research on water extract from Magnoliae Officinalis Cortex across
Caco-2 monolayer model
FEI Qiao-ling1, WANG Jian2, HOU Rui1, LIU Fen1, GAO Yuan1, CAI Run-lan1, QI Yun1
1. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing
100193, China
2. Department of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China
Abstract: Objective To evaluate the transport property of water extract from Magnoliae Officinalis Cortex (WEMOC) across Caco-2
monolayer model by bioactivity method and observe the influence on the activity of P-glycoprotein (P-gp) in cell membrane. Methods
The validated Caco-2 cell monolayer model was used to observe the bidirection transportation of WEMOC; The amount of WEMOC in
the receiver compartment, apparent permeability coefficient (P’app), and efflux ratio (ER) value could be determined according to the
standard curve of total anti-oxidant capacity. The accumulation and efflux of rhodamine123 (Rh123), which is the substrate of P-gp, were
determined to evaluate the influence of WEMOC on P-gp. Results P’app(AP→BL) of WEMOC was around 1 × 10−5 cm/s, and positively
related to concentration; ER was far less than 2; It had no impact on the accumulation and efflux of Rh123. Conclusion The active
ingredient groups of WEMOC with anti-oxidant activity can be well absorbed by passive diffusion down a concentration gradient. Neither
is it the substrate of P-gp, nor does it have influence on P-gp activity. Our research establishes a novel method to evaluate the transport
characteristics of WEMOC, which provides the pharmacokinetic basis for the clinical application of Magnoliae Officinalis Cortex.
Key words: Magnoliae Officinalis Cortex; Caco-2 monolayer model; bidirection transport; anti-oxidant capacity; P-glycoprotein
Caco-2 细胞来源于人结肠腺癌细胞(human
colon adenocarcinoma cell line,Caco-2),具有类似于
肠上皮细胞的特征。正常情况下,Caco-2细胞能自
发分化为成熟细胞并形成完整的单分子膜[1],从而
可以考察药物跨膜转运方式[2]。由于在形态学和生
物化学方面与肠上皮细胞具有相似性,Caco-2细胞
常作为药物肠吸收和转运特征研究的体外模型[3-5]。
目前,中药提取物在 Caco-2细胞中跨膜转运特
收稿日期:2015-10-10
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81173567,811173645)
作者简介:费巧玲(1992—),女,硕士在读,研究方向为抗炎与免疫药理学。Tel: (010)57833511 E-mail: 1554368105@qq.com
*通信作者 齐 云,男,博士,教授,博士生导师,主要从事抗炎与免疫药理学研究。Tel: (010)57833225 E-mail: yqi@implad.ac.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
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征的研究常采用化学方法测定其流通量,如HPLC、
LC-MS 等[6-7]。马丽等[8]研究了板蓝根中有效成分在
Caco-2细胞模型中的吸收转运特征,以精氨酸和腺苷
为指标成分,采用HPLC检测,计算其表观渗透系数
(Papp)与外排率。然而,与成分单一且明确的化学药
物不同,中药提取物是混合物,其活性成分十分复杂。
化学测定法只能考察有限数量成分的转运特征,且当
所测成分呈现的转运特征不一致时[9-10],难以反映提
取物的整体特征。Yang等[11]考察肉豆蔻中新木脂素
类成分的转运特征时测定了其中 10 个单体成分的
Papp,不同成分之间转运特征既有强吸收,也有弱
吸收,既有被动扩散,也有主动转运。可见,要评
估含有这些成分的提取物总体的转运特征,单一成
分的化学测定法显然难以达成目的。因此,要获得
中药提取物整体的转运特征需要建立一种全新的
方法,这种方法必须跳出单一成分测定的窠臼。
厚朴 Magnoliae officinalis Cortex为木兰科植物
厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils. 或凹叶厚朴
Magnolia officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et
Wils. 的干燥干皮、根皮及枝皮。具有燥湿消痰、下
气除满的功效,主要用于治疗湿滞伤中、脘痞吐泻、
食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等[12],是传统中医
及日本汉方医学广泛使用的药材。其化学成分包括木
脂素类、生物碱类、挥发油及多糖等。近年从厚朴药
材中分离最多的是木脂素类化合物,包括厚朴酚、和
厚朴酚等,具有抗氧化,抗炎及抗菌作用[13]。中医
临床使用厚朴以水煎内服为主,最近牛晓晨等[14]研
究了厚朴的 Kreb-Ringer’s 超声提取液中厚朴酚与和
厚朴酚在大鼠肠道的吸收,结果显示 2种成分在小肠
上段有较好的吸收,属被动转运。但对厚朴水煎剂整
体的体外吸收特性的研究迄今未见。考虑到厚朴富含
多酚类成分(木脂素属多酚中的一类),而这类成分
抗氧化作用突出。本实验拟以厚朴水提物总抗氧化能
力来判断提取物在 Caco-2 细胞中的肠转运特征,并
观察提取物对 Caco-2细胞膜上 P-糖蛋白(P-gp)活
性的影响,为厚朴的临床应用提供初步的药动学研究
基础。
1 材料
1.1 Caco-2细胞株
源于 ATCC(American Typeculture Collection,
Rockville,MD,美国)。
1.2 药材
厚朴购于西南药都中药材市场,经成都中医药
大学卢先明教授鉴定为木兰科植物厚朴 Magnolia
officinalis Rehd. et Wils. 的干皮、根皮及枝皮,为《中
国药典》2015年版收录品种[12]。
1.3 主要试剂
DMEM培养基、非必需氨基酸(Gibco公司);
胎牛血清(Hyclone 公司);鼠尾胶原、非索非拉
定、罗丹明 123(rhodamine 123,Rh123)、2,4,6-
三吡啶基三嗪(tripyridyltriazine,TPTZ),均来源
于 Sigma- Aldrich公司;L-谷氨酰胺(北京欣经科
生物技术有限公司);碱性磷酸酶(ALP)测定试
剂盒(中生北控生物科技股份有限公司);维拉帕
米、普萘洛尔(中国食品药品检定研究院);青霉
素、链霉素、胰蛋白酶、Hank’s平衡盐液(Hank’s
balance salt solution,HBSS)、荧光黄等;实验用
水为三蒸水。
1.4 主要仪器
Multiskan Ascent 酶标仪、微孔板恒温振荡器
(美国 Thermo Electron公司);Napco 5410二氧化碳
孵箱(美国 NAPCO公司);BCN-1360型超净工作
台(北京东联哈尔仪器制造有限公司);EVOM 细
胞电阻仪(美国WPI公司)、TranswellTM培养板(0.4
μmol pore size,美国 Corning公司);CKX41倒置
显微镜(日本 Olympus公司);雷磁 PHS-3B 型精
密 pH计(上海精密科学仪器有限公司)。
2 方法
2.1 厚朴水提物的制备
取厚朴 20 g,置于圆底烧瓶中,200 mL水浸泡
30 min后冷凝回流煎煮。先武火至煮沸,沸后文火
续煎 15 min,滤过,60 ℃减压浓缩至 100 mL,相
当于厚朴原生药量为 0.2 g/mL[15],4 ℃冷藏备用。
经 HPLC 测定水提物中厚朴酚与和厚朴酚总量为
2.63%。
2.2 Caco-2细胞单层模型的建立及验证[16]
取对数生长期的 Caco-2 细胞,按 8×104/cm2
接种于涂有鼠尾胶原的 TranswellTM培养板上,接种
后第 1周隔天更换培养液,后 2周每天换液,并于
接种后每间隔 2~4 d 用细胞电阻仪测定单层细胞
的跨上皮细胞电阻(TEER)。各孔中 TEER值随时
间逐渐升高,于 19~21 d 分化形成,TEER>500
Ω·cm2,两侧 ALP比值为 1∶2.8,与 Sussman等[17]
报道接近,经验证[18]符合实验要求。
2.3 厚朴水提物对 Caco-2细胞毒性实验
2.3.1 厚朴水提物对 Caco-2 细胞活力的影响 取
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对数生长期的 Caco-2 细胞,按每孔 5×104个接种
于 96孔培养板,于 37 ℃、含 5% CO2的培养箱中
培养 24 h后,给药组每孔加入 100 μL含不同质量浓
度(终质量浓度为 15.625、31.25、62.5、125、250
μg/mL)厚朴水提物的培养基,并设药液对照孔(只
加含药培养基,不加细胞),对照组加入等体积的培
养基,并设空白孔(只加培养基,不加细胞),各组 3
个复孔,各组细胞于 CO2培养箱中培养 22 h后,每
孔加入 20 μL的MTS/PMS混合溶液孵育 2 h,于酶标
仪 492 nm处测定吸光度(A)值。计算活力抑制率,
并以活力抑制率为因变量(Y),药物质量浓度为自变
量(X)进行线性回归,通过回归方程计算药物作用
24 h对细胞半数抑制浓度(IC50)值。
活力抑制率=1-(给药孔 A 值-给药对照孔 A 值)/(对
照孔 A值-空白孔 A值)
2.3.2 厚朴水提物对Caco-2细胞单层模型TEER值
的影响 取经验证符合要求的 Caco-2细胞单层,于
黏膜侧或肠腔侧(AP侧)每孔加入 0.5 mL含厚朴
水提物(终质量浓度 0、40、70、100、150 μg/mL)
的培养基,对照组每孔加入等体积的培养基;于浆
膜侧或肠内壁侧(BL侧)每孔加入 1.5 mL培养基;
分别于给药后 30 min和 150 min在恒温热板上测定
TEER值,计算转运前后自身 TEER变化率。
TEER 变化率=(给药后 150 min TEER 值-给药后 30
min TEER值)/给药后 30 min TEER值
2.4 厚朴水提物在 Caco-2 细胞单层模型中双向转
运实验
2.4.1 厚朴水提物总抗氧化能力测定 采用亚铁离
子还原能力(FRAP)实验测定其总抗氧化能力[19]。
取各质量浓度厚朴水提物 100 μL(空白孔为 100 μL
HBSS),加入 96 孔酶标板中,每孔加入 100 mL
TPTZ工作液,微型振荡器上振荡 30 s后,在微孔
板恒温振荡器上 37 ℃避光孵育 20 min。酶标仪 540
nm处测定 A值,以 A值对质量浓度进行回归,绘
制厚朴水提物总抗氧化能力标准曲线。
2.4.2 厚朴水提物双向跨膜转运实验 取经验证
符合转运条件的 TranswellTM 12孔培养板,用 HBSS
清洗 3 次,分别进行 AP 侧(供侧)向 BL侧(受
侧)转运,以及 BL 侧(供侧)向 AP 侧(受侧)
转运实验。于供侧每孔加入 0.5 mL 含厚朴水提物
(终质量浓度 50、100 μg/mL)的 HBSS,受侧每孔
加入 1 mL HBSS,CO2培养箱中孵育 2 h后,取受
侧液进行总抗氧化能力测定。
2.5 厚朴水提物对Caco-2细胞P-gp活性的影响[20]
2.5.1 蓄积测定 将不同质量浓度的厚朴水提物
与 1 μg/mL Rh123 在Caco-2细胞中避光共孵育 2 h,
以 30 μmol/L维拉帕米(P-gp抑制剂)作阳性对照,
对照组每孔加入相同体积的培养基。随后以无酚红
HBSS洗涤 3次,溶胞后在 λex 488 nm、λem 530 nm
处测定胞内荧光强度。
2.5.2 外排测定 将 1 μg/mL Rh123与 Caco-2细
胞避光孵育 1 h,替换为不含 Rh123的受试药物与
Caco-2细胞避光孵育 1 h;以 30 μmol/L维拉帕米作
阳性对照,对照组每孔加入相同体积的培养基。随
后以无酚红 HBSS 洗涤 3 次,加入溶胞液后在 λex
488 nm、λem 530 nm处测定胞内荧光强度。
2.6 参数计算与统计学分析
TEER、Papp 以及溢流率[ER 值,ER 值=
Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)]计算方法参考文献报道[21]。
为有别于经典化学测定法计算的 Papp,本实验条件
下通过生物测定法计算出的表观渗透系数值称为
P’app。两组间样本均数差异比较采用 t 检验,多组
间比较应该用单因素方差分析。
3 结果
3.1 厚朴水提物对 Caco-2细胞的毒性
3.1.1 厚朴水提物对 Caco-2 细胞活力的影响 结
果表明随着厚朴水提物质量浓度的升高,对 Caco-2
细胞活力的抑制作用逐渐增强,见图 1。回归方程
为 Y=0.432 X-0.027,R2=0.978,作用 24 h的 IC50
为 116 μg/mL。根据课题组前期研究[22],跨膜浓度
选择在 24 h IC50的 1倍之内为相对安全剂量,一般
不会损伤细胞单层完整性。
3.1.2 厚朴水提物对Caco-2细胞单层模型TEER值
的影响 给药 150 min后,对照组及给药组 Caco-2
细胞单层模型 TEER值均有所上升。与对照组比较,
在误差允许范围内,厚朴水提物给药 150 min后,
40~150 μg/mL内不会对Caco-2细胞单层模型的完
整性造成损伤。结果见表 1。
图 1 厚朴水提物对 Caco-2细胞活力的影响
Fig. 1 Effect of WEMOC on vitality of Caco-2 cells
活
力
抑
制
率
/%
120
80
40
0
0 50 100 150 200 250
厚朴水提物/(μg·mL−1)
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表 1 厚朴水提物对 Caco-2细胞单层模型 TEER值的影响
( x±s, n=3)
Table 1 Effect of WEMOC on TEER value in Caco-2 cell
monolayer model ( x±s, n=3)
组别
ρ/
(μg·mL−1)
给药后 TEER值/(Ω·cm2) TEER变
化率/% 30 min 150 min
对照 0 1 315±37 1 349±40 2.59
厚朴水提物 40 1 317±59 1 355±59 2.89
70 1 326±51 1 353±65 2.04
100 1 325±61 1 359±40 2.57
150 1 320±40 1 335±34 1.14
3.2 厚朴水提物在 Caco-2 细胞单层模型中的双向
转运
3.2.1 厚朴水提物总抗氧化能力标准曲线 厚朴
水提物在 0~20 μg/mL内其总抗氧化能力与质量浓
度呈良好线性关系,标准曲线回归方程为 Y=0.133
X+0.102 6,R2=0.998 7。
3.2.2 厚朴水提物在 Caco-2 细胞单层模型中的双
向转运 厚朴水提物受侧质量浓度随着供侧质量
浓度的增大而增加,从 AP 侧到 BL 侧时,供侧质
量 浓 度 为 50 μg/mL 时 , 受 侧 质 量 浓 度为
(5.51±0.51)μg/mL,供侧质量浓度为 100 μg/mL
时,受侧质量浓度为(6.78±0.75)μg/mL,提示其
为被动扩散,P’app(AP→BL)值在 1×10−5 cm/s左右;从
BL侧到 AP侧时,供侧质量浓度为 50 μg/mL 时,
受侧质量浓度为(9.19±0.62)μg/mL,供侧质量浓
度为 100 μg/mL 时,受侧质量浓度为(11.76±0.46)
μg/mL。口服给药生物利用度大于 70%[3],显示其
吸收较好;ER值在 0.8~0.9,小于 2,说明没有外
排,不是 P-gp底物[23]。具体数据见表 2。
3.3 厚朴水提物对 P-gp活性的影响
3.3.1 厚朴水提物对 Rh123蓄积的影响 共设置 5
个厚朴水提物质量浓度,从 200 μg/mL开始,以 0.4
倍递减,范围内包含双向转运实验中的 2个质量浓
度。由表 3 可见,P-gp 抑制剂维拉帕米浓度为 30
μmol/L即可显著增加 P-gp底物 Rh123在 Caco-2细
胞内的蓄积。而不同质量浓度的厚朴水提物对
Rh123的蓄积几乎没有影响。
3.3.2 厚朴水提物对Rh123外排的影响 移除培养
基中 Rh123后,30 μmol/L维拉帕米即可显著抑制
已进入 Caco-2 细胞内的 Rh123 的外排。而不同质
量浓度的厚朴水提物对 Rh123 的外排均无明显影
响。因此无论蓄积实验还是外排实验均显示厚朴水
提物对 P-gp活性没有影响。结果见表 4。
表 2 厚朴水提物转运 2 h的P’app(AP→BL)、P’app(BL→AP)及ER值
( x±s, n=3)
Table 2 P’app(AP→BL), P’app(BL→AP), and ER value of WEMOC
after 2 h transportation ( x ±s, n=3)
供侧 ρ/
(μg·mL−1)
P’app(AP→BL)/
(cm·s−1)
P’app(BL→AP)/
(cm·s−1)
ER值
50 1.35×10−5 1.13×10−5 0.83
100 8.34×10−6 7.23×10−6 0.87
表 3 厚朴水提物对 Rh123 在 Caco-2 细胞内蓄积的影响
( x±s, n=3)
Table 3 Effect of WEMOC on accumulation of Rh123 in
Caco-2 cells ( x±s, n=3)
组别 ρ/(μg·mL−1) 荧光强度
对照 0 2 328±115
维拉帕米 30 μmol·L−1 3 858±105**
厚朴水提物 5.12 2 494±119
12.80 2 432±128
32.00 2 256±140
80.00 2 288±124
200.00 2 327±115
与对照组比较:**P<0.01,下同
**P < 0.01 vs control group, same as below
表 4 厚朴水提物对 Rh123 从 Caco-2 细胞外排的影响
( x±s, n=3)
Table 4 Effect of WEMOC on efflux of Rh123 from
Caco-2 cells ( x±s, n=3)
组别 ρ/(μg·mL−1) 荧光强度
对照 0 2 350±125
维拉帕米 30 μmol·L−1 3 193±113**
厚朴水提物 5.12 2 562± 72
12.80 2 571±103
32.00 2 466±120
80.00 2 438± 78
200.00 2 448± 65
4 讨论
Caco-2 细胞模型是常用的研究口服药物吸收
的体外细胞模型[4],建模后需经过单层完整性、细
胞分化极性、膜通透性以及 P-gp 表达等方面验证
后,才能进行后续的研究[18]。具体到正式的转运研
究,还应当选择对细胞单层无损的指标,如 TEER
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值(完整性)及 ALP比值(极性)。本实验研究采
用的是符合条件的 Caco-2细胞单层模型。
以 Caco-2细胞单层模型研究受试物转运特征,
经典的方法是采用 HPLC 或 LC-MS 测定转运成分
的量并计算出相应的 Papp、ER等值来判断该化合物
的转运特征。这些化学方法虽然灵敏、准确、可靠,
但其只适合于已知成分。对包含大量未知成分的中
药提取物,采用经典方法来研究并反映中药提取物
整体转运特征显然是不适合的,其原因有二。首先,
化学测定无法穷尽提取物中所有成分;更重要的
是,当同一提取物中不同成分显示出截然不同的转
运特征时,用哪种成分的转运代表提取物整体是无
法判断的。因此,为评价中药提取物整体的转运特
征,需建立一种有别于传统的新的研究方法。本实
验采用了生物测定法来评价厚朴水提物的肠转运
特征。由于厚朴含有多种酚类物质,具有显著的抗
氧化活性[24]。因此,可通过选择此生物活性的量
效曲线来判断厚朴水提物在 Caco-2 细胞单层的转
运量。结果显示,厚朴水提物转运具有浓度依赖性,
为被动扩散;P’app(AP→BL)值在 1×10−5 cm/s 左右
(1.35×10−5~8.34×10−6 cm/s),大于判断吸收不良
的临界值[3](P’app(AP→BL)值为 1×10−6 cm/s,生物利
用度为 20%),说明与抗氧化作用有关的活性成分
群吸收较好。ER值在 0.8~0.9,表明这类成分总体
上不存在外排[25]现象。
P-gp是肠上皮细胞中主要的外排蛋白,由于厚
朴水提物不具外排特征,自然不可能是 P-gp等外排
蛋白的底物,但厚朴水提物是否对 P-gp活性有影响
却不明确。有文献报道,厚朴能抑制远志中细叶远
志皂苷、远志 酮 III 在空肠和结肠的吸收[26],提
示厚朴水提物对肠上皮细胞中的外排蛋白活性似
乎有兴奋作用。对此,聚焦于肠道中最主要的外排
蛋白 P-gp,通过它的底物 Rh123在 Caco-2细胞中
的蓄积和外排实验来评价厚朴水提物对其活性的
影响。结果显示,厚朴水提物对 Rh123的蓄积和外
排均无明显影响,说明厚朴水提物并不影响 P-gp
活性。当然,在肠上皮细胞中,具有促外排的蛋白
并不只有 P-gp,厚朴水提物对肠上皮细胞中多药耐
药相关蛋白 2(multidrug resistance related protein 2,
MRP2)或乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance
protein,BCRP)等外排蛋白[27]是否有兴奋作用尚
待研究。
需要说明的是,通过本实验条件计算出的 P’app
值与经典化学测定法计算的 Papp值是有区别的。前
者是针对混合物的整体,而后者针对的是特定的成
分;如果以成分来比较两者区别,P’app不仅反映了成
分的原型,也包括这些成分的代谢物、降解物甚至还
包括细胞单层分泌的因子等[28],这些物质均可能影响
到所具有的生物活性,而 Papp却只能代表原型成分。
从这个角度来看,P’app值可能与体内实际作用更为吻
合[29]。当然,P’app所代表的转运特征是与该生物活
性相关的成分群的总和,它不能反映提取物中与该
生物活性无关的成分群。因此,准确地说,这里所
谓的“整体”,也只是与该生物活性相关的成分集
合。同时,采用生物测定法进行转运特征研究是有
条件的。首先,选择的生物测定指标要足够灵敏,
至少能从 2 h或 4 h的受侧液中检测出明确的生物
活性,并能通过量效曲线进行有效计算。其次,该
生物活性检测体系要与转运介质兼容,即转运介质
与生物活性测定的反应介质不能相冲突;最后,该
生物活性能够反映中药提取物中足够多的成分,这
才有可能代表这个集合的整体情况。
由于采用生物活性的量效曲线来判断提取物
的转运量,其灵敏度往往低于化学方法。为了进行
有效测定,常常需要在受侧加入尽量多的受试物,
但前提是不破坏细胞单层的完整性。对此,在实验
中首先进行了厚朴水提物对 Caco-2细胞 24 h毒性
实验,并计算出其 IC50为 116 μg/mL。根据前期研
究结果[22],IC50的 1~1.5倍用于转运研究可能是安
全的。事实上,本实验显示 150 μg/mL及以下厚朴
水提物不破坏细胞单层的完整性。当然,考虑到生
物活性的灵敏度,最终选择了 50和 100 μg/mL 2个
质量浓度进行转运实验。
综上,本研究为评价多成分的厚朴水提物在
Caco-2细胞中的肠转运特征,建立了一种全新的方
法。实验结果表明,厚朴水提物吸收较好,以被动
扩散方式转运,无外排,且不影响 P-gp活性,这为
临床合理使用厚朴提供了药动学基础。同时提示,
只要能找到合适的生物活性指标,生物测定法同样
适用于其他中药提取物转运特征的研究。
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