全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 1 期 2013 年 1 月

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丹参素对异丙肾上腺素损伤大鼠内皮血管活性的保护作用及机制研究
汪旻晖 1, 2，单娇娇 1，李浣钧 1，丁小英 1，李宏仁 1，刘 淳 1，张 立 1，汤依群 1*
1. 中国药科大学 临床药学教研室，江苏 南京 210009
2. 皖南医学院弋矶山医院 安徽省药物临床评价中心，安徽 芜湖 241001
摘 要：目的 观察异丙肾上腺素持续给药对大鼠内皮血管活性的影响及丹参素的保护作用。方法 雄性 SD 大鼠随机分为
5 组：对照组，模型组，丹参素高、低剂量（3、10 mg/kg）组，缬沙坦（10 mg/kg）阳性对照组。血管切片染色观察组织形
态改变；观察各组大鼠内皮完整胸主动脉环对内皮依赖型血管收缩剂杨梅黄酮、内皮依赖型血管舒张剂乙酰胆碱的反应性，
观察缝隙连接开放剂 AAP-10 和阻断剂 18α-甘草次酸对模型大鼠血管环舒缩功能的影响；Western blotting 法测定血管缝隙连
接蛋白 Connexin 43（Cx43）、Connexin 40（Cx40）的表达水平。结果 模型组大鼠血管中膜厚度明显增加，收缩舒张功能
均下降；与模型组相比，丹参素给药组大鼠血管组织结构有所改善，血管舒缩功能显著提高（P＜0.05）。与模型组相比，模
型大鼠胸主动脉环用 18α-甘草次酸孵育后收缩功能显著降低（P＜0.05），用 AAP-10 孵育后收缩功能恢复，舒张功能改变不
明显。Western blotting 结果显示，丹参素和缬沙坦治疗组均可有效逆转异丙肾上腺素引起的 Cx40、Cx43 水平降低（P＜0.05）。
结论 丹参素可有效保护异丙肾上腺素引起的大鼠血管环收缩与舒张功能损伤，其机制可能与丹参素保护血管上缝隙连接蛋
白表达，逆转受损信号传导有关。
关键词：丹参素；异丙肾上腺素；内皮血管；缝隙连接蛋白；信号传导
中图分类号：R282.710.5；R972 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)01 - 0059 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.01.012
Protection of Danshensu on endothelial vascular functions in rats
damaged by isoproterenol and its mechanism
WANG Min-hui1, 2, SHAN Jiao-jiao1, LI Huan-jun1, DING Xiao-ying1, LI Hong-ren1, LIU Chun1, ZHANG Li1,
TANG Yi-qun1
1. Department of Clinical Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China
2. Anhui Provincial Centre for Drug Clinical Evaluation, Affiliated Yijishan Hospital of Wannan Medical College, Wuhu 241001,
China
Abstract: Objective To investigate the protective effect of Danshensu (DSS) on the endothelial vascular functions of rats damaged
by sustained delivery of isoproterenol (ISO). Methods Normal male SD rats were randomly divided into control, model, DSS low (3
mg/kg), DSS high (10 mg/kg) groups, and Valsartan (Val, 10 mg/kg) as positive control group. Vascular slice staining was used to
observe morphology changes. The tension and relaxation of endothelial intact aorta rings by endothelium-dependent vascular
inotropic agent myricetin and vasodilator acetylcholine (Ach) in rats of each group were observed. The effects of gap junction opener
AAP-10 and blocker 18α-glycyrrhetic acid on systolic and diastolic function of rat vascular rings were observed. The expression of
Connexin43 (Cx43) and Connexin40 (Cx40) was detected using Western blotting. Results The thickness of vascular was
significantly increased in the model group, and the tension and relaxation functions were both decreased. Compared with the model
group, the structure of vascular tissue in rats treated with DSS was improved, the tension and relaxation functions were obviously
improved (P < 0.05); The tension and relaxation functions of rat thoracic aortic rings were obviously decreased after treated with
18α-glycyrrhetic acid (P < 0.05), and the tension function was restored but the relaxation function showed no obvious change after
treated with AAP-10. Western blotting results showed that DSS and Val groups could effectively reverse the decrease of Cx43 and
Cx40 induced by ISO (P < 0.05). Conclusion DSS could effectively prevent and improve the aortic vascular function in rats suffered

收稿日期：2012-03-31
基金项目：国家自然科学基金资助项目（30772609）；国家级大学生实践创新训练计划项目（J0630858）
作者简介：汪旻晖（1987—），女，安徽芜湖人，硕士研究生，研究方向为心血管药理。E-mail: wmhclover1987@yahoo.com.cn
*通信作者 汤依群 Tel: (025)83271070 E-mail: tyq@cpu.edu.cn
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from the vascular damage induced by ISO. The mechanism may be related with DDS protection on the expression of vascular
connexin and retroconversion of damaged signal transduction.
Key words: Danshensu; isoproterenol; endothelial vascular; connexin; signal transduction
丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorhriza
Bunge 的干燥根及根茎，是常用的活血化瘀中药之一，
具有祛瘀止痛、养血安神的功效。丹参素是丹参中主
要的水溶性成分，具有抗心肌缺血、改善微循环、抗
炎及抗癌活性[1]，临床上广泛应用于防治各种心脑血
管疾病，如心绞痛、心肌梗死、脑卒中等[2-3]。前期研
究表明，丹参素对异丙肾上腺素（isoproterenol）造成
的心肌损伤有较强的保护作用[4-5]。异丙肾上腺素应
激对大鼠血管平滑肌缝隙连接蛋白表达的影响及其
与血管活性的关系，尚未见报道。本实验采用 sc 异
丙肾上腺素致大鼠血管损伤模型，研究异丙肾上腺
素应激下大鼠血管活性损伤与缝隙连接蛋白表达的
关系以及丹参素对血管功能的保护作用。
1 材料
1.1 药品与试剂
丹参素，南京泽朗生物有限公司，质量分数＞
98%；异丙肾上腺素、乙酰胆碱（Ach）、18α-甘草
次酸、杨梅黄酮（质量分数＞99%），美国 Sigma
公司；缬沙坦胶囊（批号 X0418），80 mg/粒，北京
诺华制药有限公司；重酒石酸去甲肾上腺素注射液，
天津金耀氨基酸有限公司；硝普钠（批号
20051110），北京世桥生物制药有限公司；抗心律失
常肽（AAP-10），上海生工生物工程有限公司。
小鼠抗 Connexin 43（Cx43）一抗，美国
Invitrogen 公司；兔抗 Connexin 40（Cx40）一抗，
美国 SantaCruz 公司；抗 GAPDH 兔多克隆抗体，美
国 Abcam 公司；羊抗小鼠二抗、羊抗兔二抗，武汉
博士德生物工程有限公司；ECL 化学发光试剂盒、
RIPA 裂解液、苯甲基磺酰氟（PMSF）蛋白酶抑制
剂，南京铂优生物技术有限公司。HE 染液，南京
建成生物工程研究所。
1.2 仪器
Med2D1A 离体组织器官恒温灌流系统，南京
美易科技有限公司；JZ101 型张力换能器，高碑店
市新航机电设备有限公司；Medlab—U/4c 多导生物
记录仪，南京美易科技有限公司；DYY—6C 型电
泳仪、DYCP—40C 电泳槽，北京市六一仪器厂；TS—
2000A Speed-Shake，澳门市其林贝尔仪器制造公
司；ChemiScope 2850 Mini 化学发光成像系统，上
海勤翔科学仪器有限公司；RM2235 型石蜡切片机、
Leica DM 1000 光学显微镜，德国 Leica 公司；
Tissue-Tek Tel 组织包埋中心，日本 Sakura 公司。
1.3 动物
雄性 SD 大鼠，体质量 200～250 g，SPF 级，上
海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号
SCXK（沪）2008-0016。
2 方法
2.1 造模、分组与给药
SD 大鼠随机分为 5 组：对照组、模型组、丹
参素高与低剂量组、阳性对照组，模型组 20 只大鼠，
其余各组每组 14 只大鼠。除对照组大鼠每天 sc 1
mL 生理盐水外，其余各组大鼠 sc 异丙肾上腺素 2.5
mg/(kg·d)，连续给药 7 d。丹参素低与高剂量组大鼠
于给予异丙肾上腺素第 4～7 天分别 ip 3、10
mg/(kg·d) 丹参素生理盐水溶液，阳性对照组 ig 10
mg/(kg·d) 缬沙坦生理盐水溶液。
2.2 主动脉组织形态学观察
造模第 8 天，每组取 4 只大鼠，麻醉后取出完
整胸主动脉，10%中性福尔马林液固定，24 h 后取
出，梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，石蜡包埋，
制备厚 4 μm 组织切片。切片脱蜡，二甲苯透明，HE
染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固，光
镜观察（×100）胸主动脉组织形态学的变化。
2.3 胸主动脉环的制备
造模第 8 天，每组取 6 只大鼠，麻醉后分离胸
主动脉，置于冰冷的 100% O2 饱和 K-H 液中，分离
周围结缔组织，剪成 4～6 mm 宽的环，通过自制金
属三角钩与肌张力传感器相连，置于 K-H 液浴皿
中，持续通氧，恒温 37 ℃，静息张力 1 g，每隔 15
min 换液 1 次，平衡 45 min 后开始实验。
2.4 离体胸主动脉环实验
2.4.1 胸主动脉内皮完整性检测及收缩与舒张活性
测定 以去甲肾上腺素（终浓度为 1×10−6 mol/L）
诱导各组胸主动脉环收缩至稳定平台期后，加入终
浓度为 1×10−6 mol/L Ach。以胸主动脉舒张程度
（%）评价其舒张反应性，舒张程度＞70%，表示血
管内膜完整。K-H 液冲洗 3～5 次用于实验。
浴皿中加入 KCl（80 mmol/L）使胸主动脉环预
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收缩 2次，使其至收缩平台后用K-H液洗脱至基线，
最后 1 次刺激引起的收缩幅度确定为收缩标准。加
入内皮依赖性血管收缩剂杨梅黄酮（终浓度为 1×
10−8～1×10−4 mol/L）使胸主动脉收缩，每次加入后
记录最大收缩张力。血管收缩稳定至平台期后，累
积加入内皮依赖性血管舒张剂 Ach（终浓度为 1×
10−8～1×10−4 mol/L）。比较各组大鼠胸主动脉收
缩、舒张活性。
2.4.2 缝隙连接功能与血管活性关系研究 取 6 只
模型组大鼠，造模后取内皮完整的胸主动脉环，分
别用终浓度为 1×10−4 mmol/L 的 AAP-10（缝隙连
接开放剂）和终浓度为 1×10−4 mmol/L 的 18α-甘草
次酸（缝隙连接阻断剂）孵育 30 min 后，测定血管
环收缩、舒张反应。以模型组大鼠胸主动脉环自身
在浴皿中静挂 30 min 后检测的反应性作为对照。工
具药试验仅旨在研究异丙肾上腺素引起的舒缩功能
改变与缝隙连接功能的关联，因而单独选用模型组
能够清晰地观察到这一关联。
血管收缩反应以由平方面积收缩克数（g/mm2）
和收缩幅度占 KCl（80 mmol/L）收缩幅度百分比（收
缩百分率）表示。血管舒张反应以舒张剂引起的舒
张百分率表示，即加舒张剂后引起的舒张幅度/最大
剂量收缩剂引起收缩幅度。
2.5 Western blotting 法检测大鼠胸主动脉缝隙连
接蛋白的表达
造模第 8 天，每组取 4 只大鼠，麻醉后取完整
胸主动脉，加入 RIPA 裂解液（内含 1.25% PMSF，
剪碎匀浆，12 000 r/min 离心 10 min 后提取总蛋白，
Bradford 法定量。取蛋白样品，经 SDS-聚丙烯酰胺
凝胶电泳分离，半干法转膜，封闭 120 min，4 ℃
孵育一抗过夜。TBST 洗膜，二抗室温摇床孵育 120
min，HRP-ECL 法显色，凝胶成像仪扫描成像，以
目的蛋白与 GAPDH 灰度值的比值计算目的蛋白的
表达水平，重复多次。
2.6 统计学处理
全部数据分析均采用 SPSS 12.0 统计分析软件，
数据以 ±x s 表示，对各组数据先进行正态检验和方
差齐性检验，符合正态分布、方差齐者，进行 t 检验。
3 结果
3.1 组织形态学观察
各组大鼠胸主动脉壁三层均清晰可见：对照组
大鼠主动脉内膜光滑，厚薄均匀；模型组平滑肌细
胞略显肥大，血管中膜与血管全层厚度较对照组明
显增加；丹参素高和低剂量组及缬沙坦组大鼠胸主
动脉中膜厚度较模型组均有所改善（图中箭头所
示）。结果见图 1。
3.2 丹参素对异丙肾上腺素损伤血管收缩与舒张
反应性的影响
与对照组相比，模型组大鼠胸主动脉环在杨梅
黄酮和Ach诱导下的收缩功能和舒张功能均显著下
降（P＜0.05、0.01、0.001）；与模型组相比，丹参
素和缬沙坦均可有效保护血管收缩和舒张功能（P＜

图 1 大鼠胸主动脉血管壁组织形态学观察
Fig. 1 Morphology of rat thoracic aortic wall tissue



A
对照 模型
丹参素 3 mg·kg−1 丹参素 10 mg·kg−1 缬沙坦
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0.05、0.01、0.001），其中丹参素高剂量组和缬沙坦
组血管舒缩活性接近对照组。结果见图 2、3。
3.3 血管舒缩活性与缝隙连接功能相关性
模型组大鼠主动脉环用缝隙连接开放剂
AAP-10 孵育 30 min 后，对 Ach 的敏感性有所增强，
在高浓度Ach下主动脉收缩功能的增强有统计学意
义。主动脉环用缝隙连接阻断剂 18α-甘草次酸孵育
30 min 后，血管的收缩与舒张活性进一步减弱，收
缩功能减弱较明显，在最高浓度的 Ach 下舒张功能
的改变有统计学意义。结果见图 4、5。

与对照组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001
与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001，下图同
#P < 0.05 ##P < 0.01 ###P < 0.001 vs control group
*P < 0.05 **P < 0.01 ***P < 0.001 vs model group, same as below
图 2 各组大鼠内皮完整胸主动脉环在杨梅黄酮诱导下收缩
功能的改变 ( 6=± n , sx )
Fig. 2 Effects of myricetin on contraction of rat endothelial
intact thoracic aorta rings ( 6=± n , sx )

图3 各组大鼠内皮完整胸主动脉环在Ach诱导下舒张功能
的改变 ( 6=± n , sx )
Fig. 3 Effects of Ach on relaxation of rat endothelial
intact thoracic aorta rings ( 6=± n , sx )

图 4 AAP-10和 18-α-甘草次酸对模型组大鼠胸主动脉环收
缩性的影响 ( 6=± n , sx )
Fig. 4 Effects of AAP-10 and 18-α-glycyrrhetimic acid on
contraction of rat thoracic aorta rings ( 6=± n , sx )

图 5 AAP-10和 18-α-甘草次酸对模型组大鼠胸主动脉环舒
张性的影响 ( 6=± n , sx )
Fig. 5 Effects of AAP-10 and 18-α-glycyrrhetimic acid on
relaxation of rat thoracic aorta rings ( 6=± n , sx )
3.4 对大鼠胸主动脉环缝隙连接蛋白表达的影响
与对照组相比，模型大鼠胸主动脉环 Cx40 和
Cx43 的表达显著降低（P＜0.05、0.01）；丹参素高、
低剂量组及缬沙坦组 Cx43 表达均显著增高（P＜
0.05、0.01），丹参素高剂量组及缬沙坦组 Cx40 也
显著增高（P＜0.05、0.01），丹参素低剂量组 Cx40
虽有所增高，但与模型组相比无统计学差异。结果
见图 6、7。
4 讨论
异丙肾上腺素是一种非选择性 β-受体激动剂，
在大量实验研究中被应用并得到公认。前期研究采
用 sc 异丙肾上腺素 2.5 mg/kg 7 d 诱发大鼠心肌缺
血性肥厚，5 mg/kg 诱发小鼠心肌缺血，发现模型
动物血中 SOD 活性降低，MDA 量增高，提示动物
对照
模型
丹参素 3 mg·kg−1
丹参素 10 mg·kg−1
缬沙坦
160
140
120
100
80
60
40
20
0
血
管
收
缩
/
%

−8 −7 −6 −5 −4
lgC 杨梅黄酮
***
***
***
***
***
**
**
*
**
**
**
*
###
###
###
##
对照
模型
丹参素 3 mg·kg−1
丹参素 10 mg·kg−1
缬沙坦
100
80
60
40
20
0
血
管
舒
张
/
%

−8 −7 −6 −5 −4
lgCAch
###
##
#
**
**
*
*
* *

−8 −7 −6 −5 −4
lgC 杨梅黄酮
异丙肾上腺素
异丙肾上腺素＋AAP-10
异丙肾上腺素＋18α-甘草次酸
80
70
60
50
40
30
20
10
0
血
管
收
缩
/
%

*
*
*
**

异丙肾上腺素
异丙肾上腺素＋AAP-10
异丙肾上腺素＋18α-甘草次酸
−8 −7 −6 −5 −4
lgCAch
40
35
30
25
20
15
10
5
0
血
管
舒
张
/
%

*
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图 6 丹参素对血管损伤大鼠胸主动脉 Cx40 蛋白表达的
影响 ( 4=± n , sx )
Fig. 6 Effect of DSS on Cx40 protein expression
in thoracic aorta rings of rat with vascular
damage ( 4=± n , sx )

图 7 丹参素对血管损伤大鼠胸主动脉 Cx43 蛋白表达的影
响 ( 4=± n , sx )
Fig. 7 Effect of DSS on Cx43 protein expression
in thoracic aorta rings of rat with vascular
damage ( 4=± n , sx )
循环系统存在氧化应激损害[5]；还存在 NO 量降低，
NOS 活性下降[6]，血中内皮素-1（ET-1）量增高[7]
等症状。这些结果均提示异丙肾上腺素可引起模型
动物血管功能损伤。
本实验结果表明，异丙肾上腺素明显损伤血管
活性，推测其机制可能为异丙肾上腺素造成交感神
经活性提高，细胞缺血缺氧，氧自由基产生增加，
SOD 等抗氧化能力降低，脂质过氧化物堆积，诱导
ET-1 释放增加。ET 是目前所知最强的收缩血管活
性多肽，其过量释放可明显损伤血管内皮细胞及功
能。高浓度的儿茶酚胺可引起内皮细胞释放 ET-1
增加，血管内皮细胞的 NO 产生和释放机能下降，
舒血管功能减弱[7]。本实验所用异丙肾上腺素的剂
量为 2.5 mg/kg，是文献报道剂量[8]的 2.5 倍，超大
剂量的异丙肾上腺素可加深血管病变程度。结果显
示，高剂量丹参素对大鼠胸主动脉环收缩功能的恢
复作用较低剂量组明显，而低剂量丹参素对胸主动
脉舒张功能改善作用较高剂量组明显，提示 3 mg/kg
是丹参素保护血管功能作用的适当剂量，更高剂量
的作用无显著差异。
组织形态学观察显示，各组大鼠胸主动脉内膜
无明显病变，模型组大鼠胸主动脉中膜厚度增加，
占血管比例明显增高，血管变化与 15 周自发性高血
压大鼠相似。丹参给药后，大鼠胸主动脉结构趋于
正常。
本实验结果表明，异丙肾上腺素引起的血管收
缩舒张功能损伤，与血管平滑肌上缝隙连接蛋白表
达和功能下降相关。血管组织中存在着丰富的缝隙
连接，血管平滑肌中的主要连接蛋白为 Cx43 和
Cx40[9]，内皮细胞中的主要是 Cx37、Cx40 和
Cx43[10]，这种连接允许内皮细胞与内皮细胞、平滑
肌细胞与平滑肌细胞、内皮细胞与平滑肌细胞之间
形成缝隙连接并进行信息传递。这类缝隙连接成为
肌-内皮缝隙连接（myo-endothelial gap junction，
MEGJ），它可以穿过内弹力层，使血管内皮细胞和
平滑肌细胞进行直接的电和化学交流[11]。MEGJ 在
内膜源性的超级化因子介导的小动脉血管超极化和
舒张中具有重要作用，是平滑肌细胞保持收缩舒张
活性重要的调节蛋白。在本实验中，大鼠胸主动脉
环用缝隙连接阻断剂 18α-甘草次酸孵育后，血管收
缩反应性较舒张性的降低更明显；而用缝隙连接开
放剂 AAP-10 孵育后，模型组大鼠胸主动脉环收缩
性的提高较舒张性更显著。工具药实验结果提示，
血管收缩功能与缝隙连接蛋白的关系密切，深入的
调控机制研究有待进一步进行。
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3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
C
x4
0/
G
A
PD
H

对照 模型 3 10 缬沙坦
丹参素 / (mg·kg−1)
#
** *
Cx40
GAPDH
4.0×104
3.6×104
对照 模型 3 10 缬沙坦
丹参素 / (mg·kg−1)




Cx43
GAPDH
5.0

4.0

3.0

2.0

1.0

0
C
x4
3/
G
A
PD
H

##
** *
*
4.3×104
3.6×104
对照 模型 3 10 缬沙坦
丹参素 / (mg·kg−1)
对照 模型 3 10 缬沙坦
丹参素 / (mg·kg−1)
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族医药研究 10 年，在多年工作成果和经验积累的基础上，以全新广阔的视觉对傣医药进行全面而系统的论述，内容丰富。
《傣医药研究》循着医药学的脉络，内容循序渐进，逐渐展开。从传统医药到中医药，到民族医药，再到傣医药；从
傣族的历史及其聚居区的自然地理、人文地理，到傣族的民俗文化、宗教文化，再到傣医药；从基本概念到法律法规和政策，
从傣药材到傣药成方制剂、医院制剂和经典名方，再从医疗、教学、文献资料、科技项目、发明专利、学术交流等多个不同
的角度对傣医药的发展现状进行全面的梳理、总结和分析；最后著者对傣医药发展提出自己的思考。书中以表格、图
片等形式提供了大量翔实的有关傣药材标准、傣成药标准、傣成药生产企业、傣医药相关医疗和研究及教学机构、傣医药古
籍和当代专著、各级各类傣医药科技项目、傣医药发明专利等方面的数据。书中还较为详细地介绍了部分中药、民族药、傣
药研发案例，以及经典傣药材、傣药成方制剂等，并穿插介绍了一些傣族药物故事。全书为读者清晰呈现当今傣医药的
全貌，为从事傣医药医疗、教学、研究、开发、生产经营的科学工作者提供真实、科学、全面、系统的傣医药数
据，是一本崭新的傣医药专著。
本书 2012 年 11 月由云南出版集团公司云南科技出版社出版。16 开软装，定价 56.00 元。
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