全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 8期 2014年 4月 ·1115·

新癀片中药成分对吲哚美辛胃肠毒性的减毒作用机制研究
刘 静 1，邸志权 1，王晶晶 1，王春凤 2，包侠萍 2，申秀萍 1*
1. 天津药物研究院，天津 300193
2. 厦门中药厂有限公司，福建 厦门 361100
摘 要：目的 研究新癀片中药成分对吲哚美辛产生的胃肠毒性反应的减毒作用机制。方法 大鼠分别 ig 给予新癀片及相
当剂量的吲哚美辛，每日 1 次，连续给予 3 d，测定各组大鼠胃酸分泌量及胃蛋白酶活性；测定血清胃泌素、环氧化酶-1
（COX-1）、环氧化酶-2（COX-2）等指标；大鼠分别 ig给予新癀片及相当剂量的吲哚美辛，每日 1次，连续给予 2周，进行
肝组织基因表达芯片分析，研究新癀片及吲哚美辛对胃肠毒性相关基因的影响。结果 吲哚美辛可促进大鼠胃泌素分泌，
从而促进胃酸分泌及增加胃蛋白酶活性，新癀片能显著抑制胃泌素分泌，抑制胃蛋白酶活性，对胃酸分泌增加有一定的抑制
作用。吲哚美辛可显著抑制 COX-1活力，而与吲哚美辛比较，新癀片可以升高 COX-1活性。吲哚美辛能显著下调基质金属
肽酶 2（Mmp2）表达，上调穿孔蛋白基因表达，显著下调免疫、凝血系统相关基因表达；与吲哚美辛比较，新癀片能显著
上调 Mmp2、紧密连接蛋白 1（Cldn1）表达，下调穿孔蛋白基因表达，显著上调免疫相关基因、凝血因子、纤维蛋白原表
达。结论 新癀片中药成分对吲哚美辛胃肠毒性的减毒作用机制可能与其抑制胃泌素分泌增加、提高被吲哚美辛抑制的
COX-1 活性，以及上调 Cldn1 表达，下调穿孔蛋白表达，增加细胞膜稳定性，上调免疫相关蛋白基因、凝血因子、纤维蛋
白原表达，促进伤口修复有关。
关键词：新癀片；吲哚美辛；基因芯片；胃溃疡；减毒作用
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)08 - 1115 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.08.014
Mechanism of Chinese herbal ingredients in Xinhuang Tablet on attenuating
gastrointestinal toxicity induced by indomethacin
LIU Jing1, DI Zhi-quan1, WANG Jing-jing1, WANG Chun-feng2, BAO Xia-ping2, SHEN Xiu-ping1
1. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research, Tianjin 300193, China
2. Xiamen Traditional Chinese Medicine Co., Ltd., Xiamen 361100, China
Abstract: Objective To study the mechanism of Chinese herbal ingredients in Xinhuang Tablet on attenuating gastrointestinal
toxicity induced by indomethacin. Methods Xinhuang Tablet and a considerable dose of indomethacin were ig given to rats once a
daily, lasted for 3 d, and then the levels of gastric acid, the activity of gastric protease, and the indexes of the serum gastrin, COX-1,
COX-2, etc were determined. Xinhuang Tablet and a considerable dose of indomethacin were ig given to rats once daily, lasted for 2
weeks, and then the liver tissue gene expression microarray analysis was applicated to research the effects of Xinhuang Tablet and
indomethacin on the gastrointestinal toxicity associated proteins. The mechanism of Chinese herbal ingredients in Xinhuang Tablet on
attenuating the gastrointestinal toxicity induced by indomethacin was explored on the gene level. Results Indomethacin could
promote gastrin secretion, thus increasing gastric acid secretion and the vitality of pepsin. Xinhuang Tablet could significantly inhibit
gastrin secretion, the activity of pepsin, and gastric acid secretion. Indomethacin could significantly inhibit the vitality of COX-1, while
Xinhuang Tablet could increase the COX-1 vitality and further protect the gastric mucosa. Indomethacin could significantly
up-regulate the gene expression of perforin, while down-regulate the gene expression of Mmp2 as well as the related protein genes of
immune system and coagulation system. Compared with indomethacin, Xinhuang Tablet could significantly lower the expression of
perforin gene, and raise the expression of Mmp2, Cldn1, the immune-related protein genes, coagulation factors, and fibrinogen.
Conclusion These results indicated that the attenuating mechanism of Chinese herbal ingredients in Xinhuang Tablet on the

收稿日期：2013-10-25
基金项目：国家科技重大专项（2012ZX09505001-001）
作者简介：刘 静（1980—），女，副研究员，硕士，研究方向为药理毒理。E-mail: liuj@tjipr.com
*通信作者 申秀萍，研究员，从事药理毒理研究工作。E-mail: shenxp@tjipr.com
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gastrointestinal toxicity of indomethacin might be ralated to the inhibition of gastrin secretion, improved vitality of inhibited COX-1 by
indomethacin, down-regulate perforin, up-regulate Cldn1, immune-related protein genes, coagulation factors, fibrinogen, increase the
membrane stability, and promote wound healing as well.
Key words: Xinhuang Tablet; indomethacin; gene chip; gastric ulcer; attanuation

新癀片是在古方八宝丹片仔癀的基础上研制而
成的常用中成药，其主要组成为肿节风、三七、人
工牛黄、肖梵天花、珍珠层粉、吲哚美辛等，具有
清热解毒、活血化瘀、消肿止痛的功效，临床用于
热毒瘀血所致的咽喉肿痛、牙痛、痹痛、胁痛、黄
疸、无名肿毒等症。其化学药组分吲哚美辛为常用
非甾体抗炎药，具有非甾体抗炎药常有的致胃肠道
溃疡等不良反应，本课题组通过小鼠急性毒性试验
比较新癀片与吲哚美辛的急性毒性作用，发现新癀
片 LD50为 1 217.83 mg/kg，用高效液相法测定新癀
片原料粉（不含辅料）中含吲哚美辛 2.478%，折算
成吲哚美辛的 LD50为 30.16 mg/kg，而单用吲哚美
辛的 LD50为 18.31 mg/kg，二者比较差异非常显著，
表明新癀片中中药成分对吲哚美辛有显著的减毒作
用[1]。本实验进一步研究新癀片中药成分对吲哚美
辛产生的胃肠毒性反应的减毒作用机制，为其临床
应用提供参考。
1 材料
1.1 药品
新癀片，淡棕灰色片，含吲哚美辛 2.111%，批
号 090505；吲哚美辛，质量分数 99.0%，白色粉末，
批号 081201；均由厦门中药厂有限公司提供。
1.2 试剂
环氧化酶-1（COX-1）、环氧化酶-2（COX-2）、
胃泌素 ELISA 测定试剂盒，Adlitteram Diagnostic
Laboratories 生产；基因芯片类型为 Affymetrix
Rat-2.0 microarray；分析软件为 dChip（Dec.2009
version）。基因芯片表达试剂盒，Affymetrix公司；
TRIzol Reagent，Invitrogen生命技术公司；无核酸
酶水，Ambion公司；水，分子生物学级，Cambrex
公司；牛血清白蛋白（BSA），Invitrogen 生命技术
公司；5 mol/L NaCl，Ambion公司；MES钠盐、EDTA
二钠、DMSO、山羊 IgG，Sigma-Aldrich 公司；聚
山梨酯 20，Pierce Chemical公司。
1.3 仪器
BIO—RAD 酶标仪，美国 Bio-Rad 公司；DK
型电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；
QZX—C空气浴振荡器，哈尔滨市东明医疗仪器厂。
实验平台是 Affymetrix GeneChip 3000 TG System，
具体包括：Scanner 3 000 7G 4C with Autoloader芯
片扫描仪，Scanner 3000 Workstation扫描工作站，
Fluidics Station 450芯片洗涤工作站，Hybridization
Oven 640芯片杂交炉。
1.4 动物及饲养环境
SD雄性大鼠，SPF级，体质量 180～200 g，由
北京维通利华实验动物技术有限公司提供，生产单
位许可证编号 SCXK（京）2007-0001。动物饲养在
天津药物研究院实验动物屏障系统（津实动设施准
第 012号），实验动物使用许可证号：SYXK（津）
2006-0002。
设施环境温度维持在 20～25 ℃，相对湿度维持
在 40%～70%，通风次数为 10～15次/h全新风，光
照为 12 h明、12 h暗。食用天津市华荣实验动物科
技有限公司生产的大鼠全价营养块料，饮去离子水。
2 方法
2.1 对大鼠胃液分泌及胃蛋白酶活性的影响
选用 SD大鼠 50只，随机分为 5组，分别为对
照组（去离子水），新癀片 90、180 mg/kg（分别含
吲哚美辛 1.9、3.8 mg/kg）组和吲哚美辛 1.9、3.8
mg/kg组。大鼠分别 ig给予相应剂量的新癀片及吲
哚美辛，每日 1次，连续给药 3 d。于末次给药当天
各组随机挑选 8只动物于给药后 40 min（实验前 1 d
禁食 24 h）戊巴比妥钠麻醉，仰位固定，腹部剃毛，
腹部酒精棉球及碘酒消毒后，于剑突下沿正中线剪
一约 1 cm切口，打开腹腔，用手术线结扎胃幽门及
十二指肠连接处，缝合腹腔。术后禁食禁水。4 h
后 20%乌拉坦麻醉大鼠，剖开切口，结扎胃贲门，
取出胃，沿胃大弯剖开，收集胃液，3 000 r/min离
心 10 min，吸取上清液，备用。
2.1.1 胃液分泌量、胃酸总酸度及胃酸分泌速度测
定 将胃液上清液全部置于量筒中，读取数值，作
为胃液分泌量。取上清液 0.5 mL置小锥形瓶中，加
入酚酞指示剂 1滴，以 0.01 mol/L氢氧化钠溶液滴
定至出现红色（颜色不再加深）为终点，按下面公
式计算胃酸酸度及胃酸分泌速度，并计算新癀片中
药成分对吲哚美辛的抑制率。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 8期 2014年 4月 ·1117·

胃酸酸度= NaOH浓度×NaOH体积×滴定所取胃液量 /
1 000
胃酸分泌速度＝胃酸酸度×胃液总量 / 收集胃液时间
抑制率＝(吲哚美辛组数值－新癀片组数值) / (吲哚美
辛组数值－对照组数值)
2.1.2 胃蛋白酶活性测定 取胃液 1.5 mL加入 10
mL的带塞玻璃瓶中，放入 2.0 cm长的麦氏蛋白管
2根，封好瓶口，在 37 ℃恒温箱中孵育 20 h。取出
蛋白管，用游标卡尺测量蛋白管两端透明部分的长
度，以 4端长度值求平均值，按下面公式计算胃蛋
白酶活性单位。
胃蛋白酶活性单位＝平均值 2×16
2.2 对大鼠血清胃泌素的影响
动物分组、给药方法同“2.1”项，于末次给药
后 40 min（实验前 1 d禁食 16 h）戊巴比妥钠麻醉，
仰位固定，腹主动脉取血，3 000 r/min离心 10 min，
吸取上清，ELISA法试剂盒测定胃泌素。
2.3 对大鼠血清 COX-1 和 COX-2 的影响
选用 SD大鼠 100只，随机分为 5组，分别为对
照组 15只、新癀片 90 mg/kg（含吲哚美辛 1.9 mg/kg）
组 10只、新癀片 180 mg/kg（含吲哚美辛 3.8 mg/kg）
组 25只、吲哚美辛 1.9 mg/kg组 10只、吲哚美辛 3.8
mg/kg组 40只。大鼠分别 ig给予新癀片及吲哚美辛，
每日 1次，连续给药 2周。此时，新癀片 180 mg/kg
组死亡 3只，吲哚美辛 3.8 mg/kg组死亡 11只。动
物均死于肠穿孔，吲哚美辛组动物可见少量轻度溃
疡。于末次给药后 40 min（实验前 1 d禁食 16 h）各
组取 10只大鼠戊巴比妥钠麻醉，仰位固定，腹主动
脉取血，3 000 r/min离心 10 min，吸取上清，ELISA
法测定试剂盒测定 COX-1、COX-2活性。
2.4 对大鼠相关基因表达的影响
选用 SD 大鼠，随机分为对照组、新癀片 180
mg/kg（含吲哚美辛 3.8 mg/kg）组和吲哚美辛 3.8
mg/kg组。大鼠分别 ig给予新癀片及吲哚美辛，每
日 1次，给药 4周。分别于第 2周及第 4周给药后
40 min（实验前 1 d禁食 16 h）戊巴比妥钠麻醉，
每组立即随机取肝脏 3份，液氮冷冻保存，进行基
因表达芯片检测。
2.4.1 提取 RNA 在液氮中将肝组织研磨成粉末，
待液氮挥干，立即加入 TRIzol，使样品充分裂解，
移入离心管中，在离心管中加入 200 μL氯仿，振荡
混匀，并离心。用移液器吸出上层水相，加入另一
离心管中，加入 500 μL异丙醇，室温沉淀。离心后
弃去上清。沉淀中加入 1 mL 75%乙醇，离心，并重
复 1 次。去上清，室温晾干，加入适当体积的
RNase-free水，充分溶解。
2.4.2 cDNA 的合成 对 RNA 进行纯化后，利用
T7-(dT)24 做引物，在反转录酶的作用下，由 RNA
反转录成单链 cDNA，42 ℃反应 2 h。以所合成的
单链 cDNA 为模板，RNA 片段为引物，在 DNA
Polymerase 作用下合成双链 DNA，并两端补平。
16 ℃反应 1 h，65 ℃反应 10 min。
2.4.3 aRNA 的合成和纯化 利用反转录过程中所
加入的 T7启动子，在体系中加入 T7转录酶进行转
录扩增，并同时对产生的 aRNA产物进行 Biotin标
记，40 ℃反应 16 h。将合成的 aRNA转入 aRNA 结
合Mix中，加入 120 μL无水乙醇，轻轻振荡 2 min。
将该 1.5 mL离心管转到磁力架上，静置 5 min，使
磁珠吸附。弃上清。按下述方法清洗磁珠：将离心
管从磁力架上取出，每管加入 100 μL RNA 洗液，
振荡 1 min；将该 1.5 mL离心管转到磁力架上，静
置 5 min，使磁珠吸附；弃上清，将离心管从磁力
架上取出；重复 1次，然后按下述方法洗脱 aRNA：
加入预热（50～60 ℃）的 aRNA 洗脱液，振荡 3
min；将该 1.5 mL 离心管转到磁力架上，静置 5
min，使磁珠吸附；将上清转移到不含核酸酶的PCR
管中。
2.4.4 aRNA 的定量和检测 用紫外分光光度计测
定 aRNA的浓度，并计算 A260/A280值，变性胶检测
aRNA。取 1 μg aRNA在 1.2%的变性胶上电泳，纯
化的 aRNA应该呈弥散状长条带。
2.4.5 芯片杂交 在 aRNA 片段化反应体系中
94 ℃温浴 35 min，置于冰上。将片段化 aRNA 配
入杂交液中，在芯片中注入 200 μL预杂交液，将芯
片放入杂交炉中，45 ℃、60 r/min离心 10 min。将
配制好的杂交 cocktail 放入 99 ℃温浴 5 min，将
cocktail从 99 ℃转入 45 ℃温浴 5 min，将 cocktail
放入离心机中，最大转速离心 5 min。在芯片中注
入 200 μL cocktail，将芯片放入杂交炉中，45 ℃，
60 r/min离心 16 h。
2.4.6 洗脱芯片 在洗涤工作站 FS450上，运行洗
脱程序，对芯片进行清洗、染色和信号放大过程。
2.4.7 扫描芯片 用 Scanner 3000 7G 4C扫描仪上
对芯片进行扫描和信号值转换。
2.5 数据处理
基因表达芯片检测数据采用 dChip（Dec.2009
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version）分析软件 lower bound fold change方法分析表
达差异 1.5 倍以上基因（fold 值，药物组与对照组比
值），其余实验数据结果均以 ±x s表示，采用统计软
件 SPSS 11.5（One-way ANOVA：LSD）进行检验。
3 结果
3.1 对大鼠胃液分泌及胃蛋白酶活性的影响
与对照组比较，吲哚美辛能显著增加胃蛋白酶
活力，增加胃液分泌量、胃酸总酸度、胃酸分泌速
度。与相当剂量的吲哚美辛比较，180 mg/kg新癀片
对胃蛋白酶活性有显著的抑制作用（P＜0.01），180、
90 mg/kg 新癀片对吲哚美辛引起的胃酸分泌速度增
加有显著的抑制作用，其抑制率分别达 71.6%、
57.2%；对吲哚美辛引起的胃液酸度增加有一定的抑
制作用，抑制率达 54.1%、34.1%。结果提示新癀片
中药成分能抑制吲哚美辛引起的胃蛋白酶活性及胃
酸的分泌速度增加，抑制胃酸过多分泌，见表 1。
表 1 新癀片和吲哚美辛对大鼠胃液分泌及胃蛋白酶活性的影响 ( ± = 8x s , n )
Table 1 Effects of Xinhuang Tablet and indomethacin on secretion of gastric juice and pepsin activity of rats ( ± = 8x s , n )
组别 剂量 / (mg·kg−1) 分泌胃液量 / mL 胃液酸度 / (mmol·L−1) 胃酸分泌速度 / (mmol·h−1) 胃蛋白酶活性单位
对照 — 4.3±1.6 44.5±24.7 0.046±0.027 104± 14
新癀片 90 5.2±1.4 70.4±12.5*** 0.091±0.027** 228±117*
180 4.6±1.8 60.6±18.9*** 0.075±0.048 151±173△△
吲哚美辛 1.9 7.0±2.6* 83.8±23.4*** 0.151±0.080** 359±136**
3.8 7.1±2.7* 79.6±34.0*** 0.149±0.102* 481±134***
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001；与相当剂量的吲哚美辛组比较：△△P＜0.01
*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001 vs control group; △△P＜0.01 vs considerable dose of indomethacin
3.2 对大鼠血清胃泌素的影响
与对照组比较，吲哚美辛高剂量组可显著促进
胃泌素分泌，与相当剂量吲哚美辛比较，新癀片高
剂量组显著抑制胃泌素分泌（P＜0.01）。提示新癀
片中药成分能显著抑制吲哚美辛引起的胃泌素分泌
增加，见表 2。
3.3 对大鼠血清 COX-1 和 COX-2 的影响
与对照组比较，吲哚美辛高剂量组可显著抑
制 COX-1活性，升高 COX-2活性。而与吲哚美
辛比较，新癀片高剂量组可以增加 COX-1 活性
（P＜0.05、0.01），抑制 COX-2活性（P＜0.01）。
结果显示新癀片中药成分能显著升高被吲哚美
辛抑制的 COX-1活性，显著抑制 COX-2活性，
见表 2。
3.4 对大鼠相关基因表达的影响
与对照组比较，吲哚美辛能显著下调基质金属肽
酶 2（Mmp2）表达，给药早期吲哚美辛能显著上调穿
孔蛋白 1（Prf1）基因表达，随着给药时间延长，吲哚
美辛能显著下调免疫系统及凝血系统相关蛋白基因表
达。与吲哚美辛比较，新癀片能显著上调Mmp2表达，
显著上调紧密连接蛋白 1（Cldn1）表达；给药 2周能
显著下调 Prf1基因表达，给药 4周能显著上调免疫系
统及凝血系统相关蛋白基因表达。结果表明，新癀片
中药成分能显著上调Mmp2表达，改善吲哚美辛引起
的胃肠黏膜溃疡，这可能与其显著下调Prf1基因表达，
上调 Cldn1表达，改善细胞通透性，加强细胞紧密连
接有关，以及上调免疫系统及凝血系统相关蛋白基因
表达，改善免疫及凝血系统有关。见表 3。
表 2 新癀片和吲哚美辛对大鼠血清胃泌素、COX-1、COX-2 的影响 ( ± = 10x s , n )
Table 2 Effects of Xinhuang Tablet and indomethacin on gastrin, COX-1, and COX-2 in serum of rats ( ± = 10x s , n )
组别 剂量 / (mg·kg−1) 胃泌素 / (ng·mL−1) COX-1 / (ng·mL−1) COX-2 / (ng·mL−1)
对照 — 0.744±0.201 11.961±3.369 6.730±2.624
新癀片 90 0.767±0.194△△ 11.415±2.920△△ 12.325±3.174△△△
180 1.019±0.186**△△ 9.742±2.205△ 23.369±6.728***△△△
吲哚美辛 1.9 1.318±0.512** 7.888±1.677** 24.801±5.347***
3.8 1.620±0.450*** 7.702±0.781** 40.105±9.375***
与对照组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 *** P＜0.001；与相当剂量吲哚美辛组比较：△P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001
*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001 vs control group; △P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001 vs considerable dose of indomethacin
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表 3 差异表达基因谱
Table 3 Differential expression of gene spectra
功能系统 探针 基因
吲哚美辛 fold值 新癀片 fold值
2周 4周 2周 4周
1370096_at Prf1: perforin 1 (pore forming protein) 1.90 −1.83 1.42 −1.05
1369825_at Mmp2: matrix metallopeptidase 2 −2.18 −2.96 −1.33 −1.67
1396150_at Cldn1: claudin 1 1.11 1.19 2.19 2.35
1387470_at Cldn1: claudin 1 1.41 −1.25 2.44 2.69
1383946_at Cldn1: claudin 1 1.62 1.35 2.64 3.27
免疫系统 1368000_at C3: complement component 3 −1.19 −61.7 1.02 −1.36
1368205_at Cfi: complement factor I −1.17 −66.0 −1.03 −1.41
1371079_at Fcgr2b: Fc fragment of IgG, low affinity IIb, receptor (CD32) 1.00 −28.7 1.14 −1.51
1387868_at Lbp: lipopolysaccharide binding protein 1.24 −15.4 1.74 1.57
1389470_at Cfb: complement factor B −1.04 −43.1 1.04 −1.43
1381006_at Hgfac: hepatocyte growth factor activator 1.04 −30.8 −1.01 −1.65
1383391_a_at C2: complement component 2 1.09 −11.1 1.23 −1.36
1393123_at C8g: complement component 8, gamma polypeptide −1.11 −27.3 1.06 −1.36
凝血系统 1368442_at F2: coagulation factor II (thrombin) −1.24 −60.0 −1.02 −1.46
1370511_at Fgb: fibrinogen beta chain −1.17 −111.0 −1.06 −1.52
1371258_at Fga: fibrinogen alpha chain −1.46 −39.9 −1.18 −1.71
1387270_at Hhex: hematopoietically expressed homeobox 1.16 −11.2 1.02 −1.25

4 讨论
吲哚美辛等非甾体抗炎药（NSAIDs）是一类具
有抗炎、镇痛作用的药物，其临床应用广泛。但长
期大量服用容易引起对胃肠道的损害，可引起消化
不良、胃肠道黏膜糜烂、消化性溃疡和出血，甚至
危及生命。研究表明吲哚美辛等 NSAIDs引起胃肠
溃疡的机制主要与其抑制环氧化酶，减少前列腺素
（PG）生成及对胃肠黏膜的直接损伤作用有关[2-4]。
本课题组研究发现，大鼠 ig给药 1个月长期毒
性试验中，高剂量的吲哚美辛给药 1个月后动物死
亡率达 71.4%，死亡原因为肠穿孔。与吲哚美辛比
较，新癀片高剂量（含有相同剂量吲哚美辛）动物
死亡数明显减少，死亡率为 26.2%，血液学各指标
基本正常。显示新癀片中药成分对吲哚美辛引起大
鼠胃肠溃疡有显著的保护作用，表明新癀片中药成
分对吲哚美辛的胃肠毒性有明显的减毒作用。
为了进一步研究新癀片中药成分对吲哚美辛的
减毒作用机制，本实验对吲哚美辛、新癀片对大鼠
血清胃泌素水平，血清 COX-1、COX-2活性及胃蛋
白酶活性和胃酸分泌的影响进行了研究。COX-1表
达于多种正常组织中，COX-2在大多数正常组织中
无表达或表达极微弱，在炎症部位则表达显著增加。
在维持正常胃肠道黏膜完整性方面起关键作用的
PG 主要是 COX-1 衍生物。吲哚美辛同时抑制
COX-1和 COX-2，使内源性 PG合成受阻，胃肠道
黏膜中 PG 的量减少，保护作用削弱，导致胃肠道
黏膜对外来攻击因子的防御能力降低。因此在吲哚
美辛致胃黏膜病变的发病机制中，抑制 COX-1活性
为关键因素之一。本研究中，吲哚美辛可显著抑制
COX-1活性，而与吲哚美辛比较，新癀片高剂量组
可以升高 COX-1 活性，对胃肠黏膜的保护作用增
强。本研究还发现高剂量的吲哚美辛并未抑制
COX-2 活性，而是引起 COX-2 活性升高，这可能
与吲哚美辛致胃肠溃疡后形成炎症，导致 COX-2
活性增加有关，而与吲哚美辛比较，新癀片可选择
性抑制 COX-2活性，从而加强其抗炎作用。
经进一步研究表明，吲哚美辛能引起胃蛋白酶
活性增加、胃酸分泌增多，这可能与其促进胃泌素
分泌有关。新癀片能显著抑制胃泌素分泌，显著抑
制吲哚美辛引起的胃蛋白酶活性增加，对胃酸分泌
增加有一定的抑制作用，显示新癀片中药成分对吲
哚美辛胃肠毒性的减毒作用机制可能与新癀片中药
·1120· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45卷 第 8期 2014年 4月

成分能抑制胃泌素分泌，从而抑制胃蛋白酶活性，
抑制胃酸分泌有关。
给药时间短，动物仅仅出现胃酸分泌增多的现
象，为了更好地研究新癀片中药成分对吲哚美辛引
起的胃肠溃疡、穿孔从而导致动物死亡的减毒作用，
在进行基因芯片检测时，延长了实验时间，以新癀
片出现少量死亡为准，从而便于研究新癀片中药成
分对吲哚美辛引起动物肠穿孔死亡的保护作用的机
制。通过基因表达芯片检测，本研究发现吲哚美辛
能显著下调 Mmp2基因表达，与文献一致[5]。吲哚
美辛诱导胃肠溃疡涉及活性氧的产生和减少基质金
属蛋白酶-2（MMP-2）的转录和翻译，这一作用可
以被抗氧化剂扭转。而新癀片能显著抑制吲哚美辛
引起的Mmp2表达下调，表明新癀片中药成分能显
著减轻吲哚美辛引起的胃肠溃疡。
通过基因表达芯片检测，本研究发现了吲哚美
辛能显著上调 Prf1基因表达，对 Cldn1无显著性影
响。而 Prf1基因的作用是在靶细胞膜上形成多聚穿
孔素管状通道，导致靶细胞溶解破坏[6]。在 Ca2+存
在下，插入靶细胞膜上，并多聚化形成管状的多聚
穿孔素，多聚穿孔素在靶细胞膜上形成穿膜的管状
结构，内径平均 16 nm。这种异常的通道使 Na+、
水分进入靶细胞内，K+及大分子物质（如蛋白质）
从靶细胞内流出，改变细胞渗透压，使细胞更容易
被破坏。吲哚美辛引起肠穿孔可能与之有关；与吲
哚美辛比较，新癀片的 Prf1 基因表达显著下调，
Cldn1 显著上调。新癀片中药成分能显著下调 Prf1
基因表达，上调 Cldn1基因表达可能是其对吲哚美
辛胃肠功能毒性的减毒作用机制之一。Claudin蛋白
是构成细胞膜紧密连接至关重要的成分，紧密连接
具有将细胞联合成整体的机械作用，加强细胞间的
连接，使细胞不易受破坏[7-9]。对肠道系统疾病的研
究发现，TNF-α可以破坏 Claudin 1的结构，从而破
坏紧密连接，肠道渗透性增强，最终导致炎性肠病
的发生。新癀片能显著上调 Cldn1基因表达，加强
细胞膜紧密连接，从而保护胃肠黏膜细胞。
通过基因表达芯片检测，本研究还发现吲哚美
辛能显著下调免疫、凝血系统相关蛋白基因表达，
影响机体伤口修复功能，而新癀片中药部分能上调
免疫相关蛋白基因表达，提高机体免疫力，上调凝
血因子、纤维蛋白原表达，改善凝血功能，促进伤
口修复，可能是其对吲哚美辛胃肠毒性的减毒作用
机制之一。
本实验研究发现新癀片中药成分对吲哚美辛胃
肠毒性有显著的减毒作用，其机制与新癀片中药成
分提高 COX-1活性，保护胃黏膜；抑制胃泌素分泌，
从而减少胃酸分泌及抑制胃蛋白酶活性，减少胃肠
黏膜的损伤有关，并可能与上调 Cldn1、下调 Prf1
基因表达、上调免疫系统及凝血系统相关蛋白基因
表达有关。本研究也为进一步研究新癀片中药成分
治疗吲哚美辛等 NSAIDs引起的胃肠溃疡提供理论
依据。
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