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Simultaneous determination of ten nucleosides and bases contents in plants of Paris L. by HPLC

HPLC法同时测定重楼属药用植物中10种核苷和碱基



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 16 期 2016 年 8 月

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HPLC 法同时测定重楼属药用植物中 10 种核苷和碱基
周 浓 1, 2,张 杰 1,潘兴娇 2,罗 静 3,郭冬琴 1,丁 博 1*,张自钰 1
1. 重庆三峡学院生命科学与工程学院,重庆 404000
2. 大理大学药学与化学学院,大理 671000
3. 重庆市食品药品检验所 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心,重庆 401121
摘 要:目的 对不同品种、不同产地的重楼属药用植物中核苷(胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷)
和碱基(尿嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤)量进行对比研究,为合理开发利用重楼属药用植物提供理论依据。方法 采用 RP-HPLC
法,色谱柱为 Venusil MP C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水溶液,梯度洗脱,体积流量 1.0 mL/min,
柱温 35 ℃,检测波长 260 nm。运用上述方法对 16 批重楼药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析。结果 测定了重楼
药材中 10 种核苷和碱基的量,在线性范围内线性关系良好(r2>0.999 1),平均回收率为 96.04%~104.34%,RSD≤2.94%。
采用聚类分析能将不同产地的 16 批重楼药材分为 3 类。16 批重楼样品中 10 种核苷和碱基均可检测到,不同品种重楼药材
中 10 种核苷和碱基的质量分数及组成结构比存在着显著性差异,各核苷和碱基总量平均值为 735.390 1~1 612.807 3 μg/g,
质量分数高低排序为巴山重楼>长药隔重楼>卵叶重楼>五指莲重楼>狭叶重楼>华重楼>滇重楼>花叶重楼>小重楼>
毛重楼。同一品种不同产地重楼药材中 10 种核苷和碱基的质量分数及组成结构比亦存在着较大差异。结论 该方法简单,
准确可靠,重复性好,适用于重楼药材中 10 种核苷和碱基的测定。同时亦为全面客观地认识重楼药材功效物质基础,丰富
和发展重楼药材多指标评价体系研究提供科学依据。
关键词:重楼属;核苷;碱基;高效液相色谱法;质量评价;同时测定;聚类分析
中图分类号:R286.6 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)16 - 2927 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.16.026
Simultaneous determination of ten nucleosides and bases contents in plants of
Paris L. by HPLC
ZHOU Nong1, 2, ZHANG Jie1, PAN Xing-jiao2, LUO Jing3, GUO Dong-qin1, DING Bo1, ZHANG Zi-yu1
1. College of Life Science and Engineering, Chongqing Three Gorges University, Chongqing 404000, China
2. College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000, China
3. Chongqing Engineering Research Center for Pharmaceutical Process and Quality Control, Chongqing Institute for Food and Drug
Control, Chongqing 401121, China
Abstract: Objective In order to provide a theory basis for rational development and utilization of medicinal plants from Paris L., this
study compared nucleosides (cytidine, uridine, inosine, guanosine, thymidine, adenosine and 2′-desoxyadenossine) and bases
(including uracil, guanine, and adenine) contents in the different plants of Paris L.which collected from different places. Methods
RP-HPLC was applied in this study, Venusil MP C18(2) chromatographic column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used, the mobile phase
was a methanol and water gradient, the flow rate was1.0 mL/min, the temperature of column was 35 ℃ and the UV detector was set at
260 nm. Sixteen batches of samples in Paris L. were measured by above method, and cluster analysis was used to analyze the results.
Results Ten nucleosides and bases from the plants of Paris L. were measured, a good linear relationship was showed (r2 > 0.999 1), and the
average recovery was 96.04%—104.34%, RSD ≤ 2.94%. The samples in Paris L. from different places were divided into three
categories by cluster analysis. All of the ten nucleosides and bases were detected in the 16 batches of samples; However, the mass
fraction and component ratio of the ten substances were significantly different from each variety. The average of total nucleosides and
bases content was ranged from 735.390 1 to 1 612.807 3 μg/g, and the order from high to low was: P. bashanensis > P. polyphylla var.

收稿日期:2015-03-09
基金项目:重庆市教委科学技术研究项目资助(KJ131109);万州区科委自然科学基金项目(201301024);国家自然科学基金项目(81260622)
作者简介:周 浓(1978—),男,重庆开县人,副教授,研究方向为药用植物栽培与质量控制。Tel: (023)58102522 E-mail: erhaizn@126.com
*通信作者 丁 博 Tel: (023)58102522 E-mail: 229424275@qq.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 16 期 2016 年 8 月

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pseudothibetica > P. delavayi var. petiolata > P. axialis > P. polyphylla var. stenophylla > P. polyphylla var. chinensis > P. polyphylla
var. yunnanensis > P. marmorata > P. polyphylla var. minor > P. mairei. The mass fraction and component ratio of the ten substances
also had a significant difference between the samples collected from different regions which were the same variety. Conclusion This
method is simple, accurate and reliable and has good reproducibility. It is appropriate for measuring the contents of the ten nucleosides
and bases. Simultaneously, this study provids a scientific basis for an objective and complete knowledge of the material basis for the
efficacy, and for an enrichment and development of evaluation indicators system of in the plants Paris L.
Key words: Paris L.; nucleosides; bases; HPLC; quality evaluation; simultaneous determination; cluster analysis

重楼属 Paris L. 隶属于百合科多年生草本植
物,全世界 24 种,中国 19 种,以西南各省区居多,
其中,三峡库区有 6 种 9 变种,是重楼属药用植物
的地理分布中心之一,药材品种丰富[1-2]。据调查,
三峡库区为重楼属药用植物的药材主产区,除《中
国药典》收载的品种外,市场上有多种重楼属药用
植物流通和使用[3]。现代研究表明,重楼具有抗肿
瘤、抗病毒、免疫调节、止血、镇痛、抗菌、抗炎
等生物活性[4]。
核苷类物质是生物机体细胞维持生命活动的
基本组成元素,具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、
抗缺血性损伤、抗菌、抗血小板聚集等多种生物
活性[5-7],与重楼的生物活性具有一定关联性,可作
为重楼药材的质量评价指标之一。
随着重楼需求量的增加,野生资源蕴藏量急剧
减少,现已列为二级濒危药用植物之一[8]。商品药
材依靠栽培生产提供为解决市场供需矛盾、实现重
楼的有效保护和可持续利用的唯一途径[9]。为此,
本课题组深入三峡库区的主要栽培区考察重楼资源
状况,实地采集重楼属药用植物,鉴定品种,比较
各种重楼所含核苷和碱基类成分的差异性和同一
性,评价产地及品种因素对重楼属药用植物质量的
影响,为更好探讨重楼药效物质基础提供依据。
1 仪器与试药
LC-20AT 型高效液相色谱仪(日本岛津集团);
DZF-6050MBE 型电热恒温真空干燥箱(上海博讯
实业有限公司);SB-5200DTN 型超声波清洗机(宁
波新芝生物科技股份有限公司,功率 300 W,频率
40 kHz);TDZ5-WS 型多管架自动平衡离心机(湖
南赛特湘仪离心机仪器有限公司);CP225D 型分析
天平(德国 Sartorius 公司)。
尿嘧啶(批号 100469-200401)、鸟嘌呤(批
号 140631-201205)、尿苷(批号 110887-200202)、
腺嘌呤(批号 886-200001)、肌苷(批号 140669-
200903)、胸苷(批号 101215-201401)和腺苷(批
号 110879-200202)对照品购自中国食品药品检定
研究院;对照品胞苷、鸟苷、2′-脱氧腺苷均购自南
京都莱生物技术有限公司,质量分数经 HPLC 峰面
积归一化法计算均大于 98%。
重楼新鲜根茎采集于重庆市开县满月乡等地,
每份样品均取自 10 株成熟植株根茎以保证样品代
表性,由中国科学院昆明植物研究所李恒研究员鉴
定(表 1)。色谱纯甲醇为德国默克公司,其他试剂
均为分析纯,水为娃哈哈牌纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Venusil MP C18(2)柱(250 mm×
4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇 (A)-水 (B),梯度
洗脱,0~10 min,1%~5% A;10~15 min,5%~
15% A;15~20 min,15%~20% A;20~30 min,
20%~30% A;检测波长 260 nm;体积流量 1.0
mL/min;进样量 20 μL;柱温 35 ℃。按照上述色
谱条件进行分析,各成分分离度良好,对照品和药
材色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取减压干燥至恒定质量的尿嘧啶、
胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、
腺苷、2′-脱氧腺苷对照品适量,加纯净水溶解并制
成质量浓度分别为 1 039.0、1 040.4、992.4、1 057.2、
618.0、1 061.0、486.0、1 080.0、1 040.4、1 020.8 μg/mL
的对照品贮备液。取各对照品贮备液适量,加纯净
水定容至 50 mL 制成混合对照品溶液,各对照品
质量浓度分别为 10.390 0、52.020 0、36.718 8、
158.580 0、46.350 0、15.915 0、28.431 0、172.800 0、
93.636 0、91.872 0 μg/mL。并逐级稀释,得到一系
列不同质量浓度的 10种混合对照品溶液,置于 4 ℃
的冰箱内,临用前以 0.22 μm 微孔滤膜滤过,供分
析用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取重楼粉末(过 50 目筛)1.0 g,置 50 mL
具塞锥形瓶中,精密加纯净水 10 mL,称定质量,混
匀,密封,室温下超声提取 15 min(超声功率 300 W,
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 16 期 2016 年 8 月

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表 1 重楼样品来源
Table 1 Sources of samples in Paris L.
编号 种名 采集地点 经纬度 栽培方式 海拔/m 采集日期
S1 华重楼 Paris polyphylla var. chinensis 重庆市开县满月乡双坪村 1 组 108°42.912′/31°61.967′ 林下栽培 1 209 2012-08-22
S2 华重楼 重庆市开县满月乡双坪村 4 组 108°42.625′/31°60.943′ 露地栽培 1 195 2012-08-22
S3 华重楼 重庆市万州区铁峰乡 108°21.080′/30°55.489′ 林下栽培 1 230 2013-10-28
S4 滇重楼 P. polyphylla var. yunnanensis 重庆市开县满月乡马营村 108°31.177′/31°35.627′ 林下栽培 1 895 2013-07-08
S5 滇重楼 重庆市城口县咸宜乡 108°42.645′/31°42.395′ 林下栽培 2 379 2013-07-09
S6 滇重楼 重庆市石柱县马武镇 108°16.758′/29°44.531′ 露地栽培 1 217 2013-07-11
S7 滇重楼 重庆市万州区铁峰乡 108°22.113′/30°54.621′ 露地栽培 1 200 2013-10-28
S8 狭叶重楼 P. polyphylla var. stenophylla 重庆市城口县咸宜乡 108°42.611′/31°42.417′ 林下栽培 2 360 2013-07-09
S9 狭叶重楼 重庆市石柱县马武镇 108°16.751′/29°44.517′ 露地栽培 1 211 2013-07-11
S10 小重楼 P. polyphylla var. minor 重庆市开县满月乡双坪村 1 组 108°42.566′/31°61.842′ 露地栽培 1 206 2012-08-22
S11 毛重楼 P. mairei 重庆市开县满月乡马营村 108°31.425′/31°35.788′ 林下栽培 1 862 2013-07-08
S12 巴山重楼 P. bashanensis 重庆市城口县岚天乡 108°92.226′/31°95.148′ 露地栽培 1 550 2012-08-24
S13 卵叶重楼 P. delavayi var. petiolata 重庆市石柱县马武镇 108°16.693′/29°44.517′ 露地栽培 1 235 2013-07-11
S14 花叶重楼 P. marmorata 重庆市石柱县马武镇 108°16.742′/29°44.494′ 露地栽培 1 220 2013-07-11
S15 长药隔重楼P. polyphylla var. pseudothibetica 重庆市渝北区兴隆镇 106°68.612′/29°94.788′ 露地栽培 526 2013-06-07
S16 五指莲重楼 P. axialis 重庆市渝北区兴隆镇 106°69.501′/29°93.027′ 露地栽培 526 2013-06-07



1-尿嘧啶 2-胞苷 3-鸟嘌呤 4-尿苷 5-腺嘌呤 6-肌苷 7-鸟苷
8-胸苷 9-腺苷 10-2′-脱氧腺苷
1-uracil 2-cytidine 3-guanine 4-uridine 5-adenine 6-inosine
7-guanosine 8-thymidine 9-adenosine 10-2′-deoxyadenosine
图 1 混合对照品 (A) 及 S8 号样品 (B) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of mixed reference substances (A) and S8
Sample (B)
工作频率 40 kHz),取出,放至室温,用纯净水
补足减失质量,倒入离心管中,4 000 r/min 离
心 10 min,取上清液以 0.22 μm 微孔滤膜滤过,
即得。
2.4 线性关系的考察
精密吸取“2.2”项下的不同质量浓度的系列混
合对照品溶液各 20 μL,在“2.1”项下色谱条件下
测定,以对照品的峰面积(Y)对相应的质量浓度(X)
进行线性回归,得回归方程和线性范围:尿嘧啶 Y=
91 737 X-6 198.3,r2=0.999 3,线性范围 0.519 5~
10.390 0 μg/mL;胞苷 Y=38 337 X-2 577,r2=0.999 8,
线性范围 2.601 0~52.020 0 μg/mL;鸟嘌呤 Y=5 608.1
X-1 019.1,r2=0.999 9,线性范围 1.835 9~36.718 8
μg/mL;尿苷 Y=51 423 X+24 962,r2=0.999 3,线
性范围 7.929 0~158.580 0 μg/mL;腺嘌呤 Y=
108 249 X+4 140.6,r2=0.999 4,线性范围 2.317 5~
46.350 0 μg/mL;肌苷 Y=14 466 X+2 267.7,
r2=0.999 6,线性范围 0.795 8~15.915 0 μg/mL;鸟
苷 Y=73 426 X+9 797.7,r2=0.999 1,线性范围
1.421 6~28.431 0 μg/mL;胸苷 Y=43 699 X+
15 039,r2=0. 999 7,线性范围 8.640 0~172.800 0
μg/mL;腺苷 Y=78 096 X-12 577,r2=0.999 1,
线性范围 4.681 8~93.636 0 μg/mL;2′-脱氧腺苷
Y=67 858 X+15 905,r2=0.999 9,线性范围4.593 6~
91.872 0 μg/mL。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 20 μL,连续进样 6
次。结果尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、
肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷峰面积的 RSD
分别为 0.12%、0.19%、0.07%、0.07%、0.74%、
0.66 %、0.62%、0.11%、0.08%、0.12%,表明本方
法精密度良好。
0 5 10 15 20 25 30
t/min
1 2 3
4
5 6 7 8
9
10
1 2
3
4
5 7 8
9
10 6
A


B
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 16 期 2016 年 8 月

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2.6 重复性试验
取同一重楼样品(S8)6 份,每份 1.0 g,精密
称定,依“2.3”项下方法平行制备供试品溶液,依
“2.1”项下色谱条件进行分析,记录其色谱峰面积。
结果尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、
鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷质量分数的 RSD 分
别是 1.64%、1.06%、1.74%、2.73%、2.22%、2.37 %、
2.89%、2.45%、1.61%、1.40%,表明样品制备方法
重复性良好。
2.7 稳定性试验
将制成的供试品溶液(S8)在室温条件下密闭
放置,分别在 0、2、4、8、12、16 h 进样,记录其
色谱峰面积。结果尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、
腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2′-脱氧腺苷峰
面积的 RSD 分别是 1.38%、2.21%、2.37%、2.36%、
2.89%、1.22%、0.61%、2.87%、1.51%、1.30%,表
明样品样品溶液 16 h 内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验
取已测定的重楼样品(S8)6 份,每份约 0.5
g,精密称定,分别依次加入“2.2”项下的对照
品贮备液适量,按“2.3”项下方法制备加样回收
率的供试品溶液,在“2.1”项下色谱条件下进样,
计算各成分的加样回收率和 RSD,结果尿嘧啶、
胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸
苷、腺苷、2′-脱氧腺苷平均回收率 97.50%、
97.57%、104.34%、96.04%、97.18%、97.17%、
99.21%、97.26%、99.32%、98.92%,RSD 分别为
2.04%、1.34%、2.94%、1.21%、1.73%、1.20 %、
2.50%、1.36%、1.73%、2.63%。
2.9 样品的测定
取 16 批重楼药材粉末,按“2.3”项下方法各
制备 3 份供试品溶液,在“2.1”项下色谱条件下进
样,进行峰面积测定,标准曲线法计算重楼药材中
10 种成分的量,结果见表 2。
测定结果表明,不同产地、不同品种重楼药
材均含有 10 个核苷及碱基类成分,表明 10 种重
楼属药用植物中核苷和碱基类成分较为相似。其
中,尿苷、鸟苷、胸苷、腺苷和 2′-脱氧腺苷量相
对较高,胞苷、鸟嘌呤、腺嘌呤和肌苷量次之,
而尿嘧啶量较低,说明从质量分数上看尿苷、鸟
苷、胸苷、腺苷和 2′-脱氧腺苷为主要核苷和碱基
类成分。
表 2 不同产地重楼中 10 种成分的量 (n = 3)
Table 2 The content of 10 analytes in Paris sample from different location (n = 3)
质量分数/(μg·g−1) 编号
尿嘧啶 胞苷 鸟嘌呤 尿苷 腺嘌呤 肌苷 鸟苷 胸苷 腺苷 2′-脱氧腺苷 合计
S1 19.161 1 116.615 5 43.185 8 232.025 3 104.719 8 47.875 4 271.341 1 183.479 3 172.247 5 132.160 6 1 322.811 4
S2 19.265 0 44.140 8 25.391 8 124.881 6 66.550 7 9.507 5 155.836 1 105.114 8 113.005 4 85.729 5 740.731 7
S3 9.773 8 82.406 4 24.976 0 166.078 8 60.893 8 32.314 4 153.708 6 129.914 5 171.540 1 104.817 8 936.424 4
S4 7.148 1 110.505 4 66.540 7 229.713 2 57.239 6 42.941 1 136.346 6 219.296 5 243.349 9 152.239 3 1 265.323 4
S5 18.323 5 55.893 4 65.860 1 135.121 1 142.256 3 70.924 8 20.906 5 93.432 1 85.165 8 57.219 8 735.390 1
S6 36.084 6 54.590 8 63.092 1 154.624 9 51.352 8 72.917 0 79.358 4 148.190 7 138.434 2 82.201 4 880.846 9
S7 7.775 6 44.610 2 20.153 6 146.893 7 34.460 0 25.480 5 136.365 2 154.111 6 153.399 3 110.126 1 833.375 7
S8 26.298 7 89.322 5 92.983 3 249.649 9 53.638 5 128.697 8 123.714 8 99.162 8 237.859 6 87.040 2 1 179.771 8
S9 11.051 5 62.681 1 28.885 2 162.774 2 56.127 4 74.147 6 148.189 1 166.733 0 147.490 1 107.008 2 969.659 8
S10 32.918 6 47.953 1 62.239 6 163.782 7 49.983 4 10.383 0 70.909 5 157.105 3 152.396 2 135.505 7 883.177 2
S11 44.650 7 44.742 3 51.820 4 102.359 9 42.850 1 18.089 3 116.777 4 203.741 2 108.499 7 120.597 6 854.128 6
S12 12.950 3 143.894 0 169.952 8 341.911 5 169.587 7 22.050 3 78.119 1 279.057 3 162.522 4 229.761 7 1 612.807 3
S13 13.679 3 28.770 9 21.115 6 267.530 4 61.927 0 159.885 5 183.401 1 213.453 5 231.898 5 97.704 7 1 241.151 2
S14 11.872 7 77.815 3 90.871 4 159.750 4 34.407 2 42.224 1 25.949 8 132.986 8 200.263 1 108.383 3 892.038 7
S15 105.216 8 143.966 0 129.653 4 339.466 9 76.861 9 106.326 5 140.721 5 148.085 7 68.798 0 53.513 0 1 312.609 5
S16 15.862 5 92.728 5 46.016 3 193.013 4 43.471 7 53.801 6 148.424 3 159.005 0 206.885 4 138.464 9 1 112.541 3
平均值 24.502 1 77.539 8 62.671 1 198.098 6 69.145 5 57.347 9 124.379 3 162.054 4 162.109 7 112.654 6 1 048.299 3

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 16 期 2016 年 8 月

• 2931 •
2.10 聚类分析
分别对 16 批重楼属药用植物的测定结果进行聚
类分析。以表 2 中重楼药材中 10 种核苷和碱基量为
依据,利用 SPSS19.0 版本软件欧式距离平方(squared
Euclidean distance)计算样品间的相似系数,并用离
差平方和法(Ward 法)进行系统聚类。结果见图 2。
由图 2 可见,当分类距离为 15 时,可将 16 批重楼
药材分为 3 类:第 1 类有 9 批药材,即 S2、S3、S5~
S7、S9~S11、S14,此类样品中 10 种核苷及碱基
量均较低,均低于平均值;第 2 类有 5 批药材,即
S1、S4、S8、S13、S16,此类药材中 10 种被测成
分各质量分数较均衡,与平均值无较大差异;第 3
类有 2 批药材,即 S12、S15,此类药材中 10 种被
测成分总量较高,尤其尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿
苷、腺嘌呤量均远高于其他样品,这 5 个成分几乎
是其他样品的 2 倍。

图 2 16 批重楼药材聚类分析树状图
Fig. 2 Dendrogram of 16 batches of samples in Paris L.
3 讨论
3.1 提取条件的选择与优化
本实验考察了回流提取法和超声提取法 2 种方
法,结果显示超声提取法明显高于回流提取法,故
选择超声提取法。由于分析物的高极性,故采用不
同体积比的甲醇水溶液进行提取溶剂效率的优化。
结果显示以纯净水为提取溶剂时的提取液出峰多、
目标化合物量高。另外,本实验还对提取时间、提
取次数和提取溶剂用量分别进行了考察,最终确定
了“2.3”项中的方法。此法步骤简单,易操作,误
差小,更能真实地反映出重楼药材中核苷和碱基类
成分的量。
3.2 色谱条件的选择与优化
核苷和碱基类化合物极性大,较难分离,本实
验比较了以下 4 种色谱柱 Innoval AQ C18 柱(250
mm×4.6 mm,5 μm),Venusil XBP C18(L)柱(250
mm×4.6 mm,5 μm),Durashell C18 柱(250 mm×
4.6 mm,5 μm)和 Venusil MP C18(2)柱(250
mm×4.6 mm,5 μm)。实验结果表明,Venusil MP
C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)对 10 种核
苷和碱基类成分达到了良好的分离,第 2~3 种色谱
柱不能很好的分离 10 种核苷和碱基类成分,而第 1
种色谱柱峰形较差。同时比较了不同的流动相组成
如乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液和甲醇-甲酸
水溶液,结果显示甲醇-水做流动相时分析物的分离
效果较好,因此最终选择了 Venusil MP C18(2)柱
(250 mm×4.6 mm,5 μm)和甲醇-水系统梯度洗脱。
3.3 结果分析
不同栽培品种重楼药材中核苷和碱基类成分总
量具有显著差别,相差近 2 倍。各核苷和碱基总量平
均值高低排列顺序为巴山重楼(S12)>长药隔重楼
(S15)>卵叶重楼(S13)>五指莲重楼(S16)>狭
叶重楼(S8~S9)>华重楼(S1~S3)>滇重楼(S4~
S7)>花叶重楼(S14)>小重楼(S10)>毛重楼
(S11)。同时,不同产地、不同品种重楼药材中 10
种核苷和碱基类成分量及组成结构比存在着较大差
异,与杨德全等[10]和付绍智等[11]对重楼属药用植物
中甾体皂苷的报道类似,非药典品种(巴山重楼、
长药隔重楼等)中核苷类量甚至超过药典品种(滇
重楼、华重楼),进一步表明重楼属药用植物具有一
定的化学等同性,在民间代用重楼具有一定的科学
性,但药效的差异性有待进一步研究。
同一栽培品种在不同栽培地区的重楼药材,各
核苷类成分及总核苷的量亦不相同。其中以重庆市
开县(S4)与其他栽培区域滇重楼中 10 种核苷和
碱基量相差近 2 倍,而 2 个不同栽培区域的狭叶重
楼量相差甚微,表现出一定的地域及生境依赖性。
但来源于同一栽培区域不同种植基地的华重楼量
相差近 2 倍,进一步表明重楼品质的形成受小气候
影响较大[9]。造成以上差异的原因,可能与栽培技
术、产地环境等有关,表明需加大对重楼药材的人
工栽培技术和产地适宜性研究,以确保重楼药材资
源可持续利用和重楼医药产业可持续发展。
鉴于核苷和碱基类成分在重楼药材中质量分数
为 735.390 1~1 612.807 3 μg/g,进一步探讨以其含
量高低作为重楼药材质量优劣的衡量指标,很有必
要。本方法专属性强,简便可靠,可为全面客观地
认识重楼属药用植物功效物质基础、丰富和发展重
楼药材多指标评价体系研究提供新的方法参考。
S3
S7
S9
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S6
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志谢:中国科学院昆明植物研究所李恒研究员
在植物标本鉴定中给予了帮助。
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