全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 5 期 2011 年 5 月

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没食子药材 HPLC 指纹图谱研究
周 露 1，斯拉甫·艾白 1, 2*，李治建 1，范晓红 1，孟繁龙 1
1．新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049
2．新疆维吾尔自治区维吾尔医医院，新疆 乌鲁木齐 830049
摘 要：目的 研究 10 个产地没食子药材的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价和有效控制其质量提供可靠方法。方法 采
用 Waters Symmetry ShieldTM RP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，甲醇-0.2%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，柱温
30 ℃，体积流量 1 mL/min，检测波长 270 nm，进样量为 20 μL。结果 对所采集的没食子药材进行测定，建立了没食子药
材的指纹图谱，有 7 个共有峰，有 2 批药材的相似度低于 0.9，与其他批次样品差异较大；此 HPLC 方法的精密度、稳定性
和重现性良好。结论 此方法准确、可靠、可控性强，可用于没食子药材的质量控制。
关键词：没食子；HPLC；指纹图谱；壳斗科；没食子酸
中图分类号：R282.7 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)05 - 0919 - 04
Studies on HPLC fingerprint of Quercina Galla
ZHOU Lu1, Silafu·Aibai 1, 2, LI Zhi-jian 1, FAN Xiao-hong1, MENG Fan-long1
1. Institute of Xinjiang Uighur Medicine, Urumqi 830049, China
2. Xinjiang Uighur Medical Hospital, Urumqi 830049, China
Key word: Quercina Galla; HPLC; fingerprint; Fagaceae; gallic acid
没食子 Quercina Galla 是一种维吾尔医常用药
材，是壳斗科植物没食子树 Quercus infectoria Oliv.
幼枝上的干燥虫瘿，由没食子蜂科昆虫没食子蜂
Cynips gallae-tinctoriae Oliv.幼虫寄生而形成。其含
有没食子鞣质 50%～70%、没食子酸 2%～4%及并
没食子酸、树脂等。性苦温，具有收敛、止汗、止
血等功能。用来治疗各种体癣、舌头炎、咽炎、牙
龈炎、结肠溃疡及慢性腹泻等病症[1]。色谱指纹图
谱方法是评价药材质量的有效方法之一[2-4]。目前，
关于没食子药材的 HPLC 指纹图谱研究未见报道，
因此本实验应用 HPLC 方法建立没食子药材指纹图
谱，并对其进行分析研究，为控制没食子质量提供
可靠方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Waters 1525 高效液相色谱仪，配有 Waters
1525 Binary HPLC pump、Waters 2487 Dual λ
Absorbance Detector、手动微型进样器、Waters
Symmetry ShieldTM RP C18 色谱柱（250 mm×4.6
m，5 μm）；BS224S 型电子天平（德国）。
1.2 试药
没食子药材，购于全国各地，由新疆维吾尔
自治区维吾尔医医院制剂中心艾尼瓦尔主任药
师鉴定为没食子 Quercina Galla，来源见表 1。
没食子酸对照品（批号 110831-200803）购于中
国药品生物制品检定所，色谱甲醇（美国 Fisher
公司），分析甲醇（天津市红岩化学试剂厂），双
蒸水（自制）。
表 1 没食子药材
Table 1 Source of sample
编号 购买地 批号 编号 购买地 批号
1 湖北 20091012 6 湖北 20091211
2 山东 20090101 7 江苏 20100309
3 山东 20090522 8 江苏 20091022
4 山东 20091120 9 新疆 20100314
5 湖北 20100415 10 新疆 20090325

收稿日期：2010-06-23
基金项目：“十一五”国家科技支撑计划（2007BAI30B03）；新疆维吾尔自治区科技支疆工程资助项目（200840102-34）
作者简介：周 露（1985—），女，新疆伊犁人，石河子大学硕士研究生。Tel: 15292856755 E-mail: zhoulu_bin@163.com
﹡通讯作者 斯拉甫·艾白 Tel: (0991)2563702
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2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备[5-7]
取没食子粉末（过 40 目筛）2.5 g，加入甲醇
50 mL，超声提取 2 次，料液比 1︰20，提取时间为
60、30 min，滤过，合并滤液，用双蒸水定容至 250
mL 棕色量瓶中。从中取出 5 mL，定容至 25 mL，
0.45 μm 微孔滤膜滤过，得供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备
取没食子酸对照品适量，精密称定，置于棕色
量瓶中，加甲醇制成 3 μg/mL 的溶液，过 0.45 μm
微孔滤膜，即得。
2.3 色谱条件
色谱柱：Waters Symmetry ShieldTM RP C18
（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）-0.2%
磷酸水溶液（B），梯度洗脱，0～10 min，20%A；
10～30 min，40%A；30～50 min，45%A；50 min
以后，50%（A）。检测时间：50 min；柱温：30 ℃；
体积流量：1 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：
270 nm。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取没食子酸对照品，精密称
定，按“2.2”项方法制备对照品溶液，连续进样 5
次，记录 HPLC 图谱，以相对应的色谱峰相对保留时
间和相对峰面积为指标计算 RSD。结果 RSD＜3%，
表明该方法精密度良好。
2.4.2 重复性试验 精密称取同一药材粉末 5 份，按
“2.1”项方法制备供试品溶液，记录 HPLC 图谱，以
色谱峰相对保留时间和相对峰面积为指标计算 RSD
值。结果 RSD＜3%，表明该方法重现性良好。
2.4.3 稳定性试验 取没食子药材粉末 1 份，精密
称定，按“2.1”项方法制备供试品溶液，分别于 0、
2、4、8、12 h 检测，以色谱峰相对保留时间为指
标计算 RSD。结果 RSD＜5%表明供试品溶液 12 h
稳定性良好。
2.5 HPLC 指纹图谱的建立[8]
2.5.1 将 10 批没食子药材的供试品溶液按“2.3”
项色谱条件进样，通过 Waters 液相工作站处理，得
到不同产地没食子药材的 HPLC 指纹图谱叠加图和
共有模式图（图 1）以及 10 批药材供试品的检测结
果（表 2～4）。从图 1 可见，原药材的主要特征峰
相同，说明不同产地的没食子药材的主要化学成分
特征相似，只是在峰高、峰面积等方面有所差异，
标定了 7 个共有峰。从表 2～4 的数据得出，10 批
药材共有峰峰面积占总峰峰面积比例都在 96%以
上；共有峰的相对峰面积的 RSD 值较大；各相对
峰的峰保留时间 RSD＜5.0%。

t / min
*-没食子酸
*-gallic acid
图 1 10 批没食子药材 HPLC 图谱叠加图
Fig. 1 HPLC overlapping chromatograms
for 10 beaches of Quercina Galla
表 2 10 批没食子药材指纹图谱共有峰的峰面积
Table 2 Areas of common peaks for 10 batches of Quercina Galla in fingerprints
峰面积 样 品
1(S) 2 3 4 5 6 7
共有峰峰面积 总峰峰面积 所占比例/%
1 4 945 2 923 4 018 9 521 2 150 4 041 7 965 35 564 36 328 97.90
2 4 401 2 398 2 573 9 200 1 679 8 388 10 605 39 244 39 905 98.34
3 3 564 2 853 2 552 9 028 1 813 8 964 10 870 39 645 40 322 98.32
4 4 715 2 679 2 651 9 305 2 246 9 226 11 002 41 824 42 344 98.77
5 4 221 2 743 2 459 9 488 2 278 4 146 8 551 33 886 34 601 97.93
6 4 051 2 665 2 390 9 606 2 237 4 100 8 612 33 661 34 355 97.98
7 6 240 3 232 4 080 10 469 1 535 3 786 9 054 38 395 39 249 97.83
8 6 782 3 317 3 918 10 389 1 100 3 939 8 545 37 991 38 858 97.77
9 10 288 2 430 2 517 8 483 8 744 5 703 2 009 40 173 41 519 96.76
10 9 272 2 206 1 958 1 376 7 692 5 123 4 699 32 326 33 532 96.40
均值 5 848 2 745 2 912 8 686 3 147 5 742 8 191 37 271 38 101 97.82
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
*
0.00 7.24 14.49 21.73 28.98 36.22
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表 3 10 批没食子药材指纹图谱共有峰相对峰面积
Table 3 Relative areas of common peaks for 10 batches of Quercina Galla in fingerprints
共有峰的相对峰面积 样 品
1 2 3 4 5 6 7
1 1 0.591 1 0.812 5 1.925 3 0.434 7 0.817 2 1.610 5
2 1 0.544 9 0.584 7 2.090 4 0.381 5 1.906 0 2.409 7
3 1 0.800 4 0.716 1 2.532 9 0.508 7 2.515 0 3.049 7
4 1 0.568 1 0.562 2 1.973 4 0.476 2 1.956 5 2.333 1
5 1 0.649 9 0.582 6 2.247 7 0.539 6 0.982 3 2.025 9
6 1 0.657 9 0.589 9 2.371 0 0.552 1 1.012 0 2.125 8
7 1 0.518 0 0.653 8 1.677 7 0.245 9 0.606 8 1.451 0
8 1 0.489 1 0.577 7 1.531 8 0.162 2 0.580 7 1.259 9
9 1 0.236 2 0.244 7 0.824 5 0.849 9 0.554 4 0.195 2
10 1 0.237 9 0.211 2 0.148 4 0.829 6 0.552 5 0.506 9
均值 1 0.529 3 0.553 5 1.732 3 0.498 1 1.148 3 1.696 8
RSD/% 0 17.72 18.85 73.89 21.93 71.29 87.97
表 4 10 批没食子药材指纹图谱共有峰的相对保留时间
Table 4 Relative retention time of common peaks for 10 batches of Quercina Galla in fingerprints
各峰相对保留时间/min 样 品
1（S） 2 3 4 5 6 7
1 1 1.748 3 2.210 0 2.982 3 3.404 8 4.066 4 4.461 0
2 1 1.753 6 2.227 6 3.077 1 3.490 2 3.929 3 4.351 6
3 1 1.787 5 2.268 4 3.069 1 3.532 8 4.056 9 4.482 3
4 1 1.761 0 2.235 1 3.068 6 3.483 5 4.053 8 4.463 6
5 1 1.748 6 2.209 7 2.979 8 3.404 0 4.060 3 4.454 1
6 1 1.748 4 2.210 0 2.981 1 3.402 5 4.064 9 4.452 4
7 1 1.737 2 2.215 8 2.995 9 3.424 4 4.091 7 4.485 7
8 1 1.737 9 2.215 3 3.003 6 3.427 7 4.061 1 4.480 7
9 1 1.734 3 2.211 0 2.985 5 3.408 5 4.072 8 4.469 1
10 1 1.733 7 2.210 0 2.983 9 3.407 1 4.069 5 4.465 1
均值 1 1.749 0 2.221 3 3.017 9 3.440 3 4.044 1 4.456 6
RSD/% 0 1.62 1.87 4.14 4.64 4.46 3.86

2.5.2 指纹图谱相似度计算 利用中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 A 版计算软件，对 10 批没食
子药材的 HPLC 图谱进行相似度计算，结果见表 5，
有 8 批药材的相似度在 0.9 以上，余下 2 批的相似
度在 0.6～0.8。
3 讨论
3.1 提取溶剂和提取方法的选择
分别比较以水、甲醇、70%乙醇和 50%丙酮作
为提取溶剂，静置、水浴加热和超声的提取方法，
经过 HPLC 检测，考察了峰数、峰面积、分离度等
因素，最终选择以甲醇为提取溶剂，超声法为最佳
提取方法。
3.2 检测波长的选择
通过 PDA 检测器对没食子提取物进行全波长
（200～400 nm）扫描，从三维信息谱图分析，在
250～280 nm 波长处检测出的色谱峰较多，在 270
nm 处出现的峰最多，且在此波长下，没食子的主
要成分没食子酸有最大吸收，整体图谱较为匀称，
基线平稳，因此将 270 nm 设为本实验的检测波长。
3.3 流动相的选择
分别采用甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸、甲醇-0.2%
磷酸、乙腈-水为流动相，以甲醇-水和乙腈-水作为
流动相系统时，出峰数目都很少，并且分离度差，
峰形较差；甲醇-0.1%磷酸和甲醇-0.2%磷酸系统相
比较，后者出峰数目多，分离效果更好，漂移现象
较弱。因此选择以甲醇-0.2%磷酸水溶液为流动相进
行梯度洗脱。
3.4 柱温的选择
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表 5 10 批样品的相似度计算结果
Table 5 Results of similarity analysis in fingerprint for 10 batches of Quercina Galla
样 品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 对照
1 1 0.939 0.926 0.934 0.993 0.991 0.993 0.991 0.785 0.677 0.993
2 0.939 1 0.971 0.971 0.953 0.952 0.929 0.925 0.705 0.663 0.961
3 0.926 0.971 1 0.980 0.942 0.941 0.912 0.906 0.682 0.640 0.949
4 0.934 0.971 0.980 1 0.947 0.946 0.922 0.918 0.717 0.677 0.956
5 0.993 0.953 0.942 0.947 1 0.989 0.986 0.981 0.763 0.661 0.999
6 0.991 0.952 0.941 0.946 0.989 1 0.985 0.979 0.756 0.651 0.998
7 0.993 0.929 0.912 0.922 0.986 0.985 1 0.997 0.764 0.665 0.988
8 0.991 0.925 0.906 0.918 0.981 0.979 0.997 1 0.776 0.673 0.984
9 0.785 0.705 0.682 0.717 0.763 0.756 0.764 0.776 1 0.871 0.766
10 0.677 0.663 0.640 0.677 0.661 0.651 0.665 0.673 0.871 1 0.674
对照 0.993 0.961 0.949 0.956 0.999 0.998 0.988 0.984 0.766 0.674 1

在甲醇-0.2%磷酸为流动相的条件下，根据对柱
温 25、30、35 ℃的图谱进行比较，发现 30 ℃时
出峰数目最多并且分离度较好。实验结果显示，温
度过低，分离度较差；温度过高，使得后半部分峰
的峰形变宽变扁，并且柱温过高，对色谱柱损害也
较大。因此，最终选择 30 ℃为最佳柱温。
3.5 参照物的选择
没食子中的没食子酸在图谱中出峰时间在 5.9
min，此峰峰面积大，峰形好，稳定，是没食子药
材的一个重要鉴别色谱峰。因此，选择没食子酸作
为没食子 HPLC 指纹图谱的参照物。
相似度在一定程度可以体现药材的优劣与真
假，现已成为一种科学的评价方法，为中药材的质
量控制提供依据。从本实验 10 批药材的相似度分
析结果来看，新疆的没食子药材相似度低于 0.9，
与其他产地药材差异较大。因此本研究建立的指纹
图谱可以快速鉴别不同来源的没食子药材，有利于
全面控制药材质量，促进药材和制剂水平的提高。
今后结合没食子药材药理学方面的相关性研究，会
更全面地对其进行质量评价和控制。
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