全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月
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HPLC-ELSD 法测定蒺藜粗皂苷中 3 种甾体皂苷元
方惠娟 1，李 清 1，关潇滢 2，钱忠直 3，王铁杰 2*，毕开顺 1*
1. 沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016
2. 深圳市药品检验所，广东 深圳 518057
3. 国家药典委员会，北京 100061
摘 要：目的 同时测定蒺藜粗皂苷中海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的量。方法 采用 HPLC-ELSD 法，色谱柱为
Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（86∶14），漂移管温度 100 ℃，载气体积流量 2.5 L/min。
结果 海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元分别在 114.1～1 141.0 μg/mL（R2＝0.999 2），16.88～168.80 μg/mL（R2＝0.999 4），
78.60～786.00 μg/mL（R2＝0.999 3）呈良好线性关系；蒺藜粗皂苷中海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的平均回收率分
别为 99.7%（RSD 为 1.6%）、99.3%（RSD 为 1.4%）、99.4%（RSD 为 1.1%）。结论 该方法简便、准确、快速，且专属性
良好，可用于蒺藜粗皂苷的质量评价。
关键词：HPLC-ELSD；蒺藜粗皂苷；海柯皂苷元；薯蓣皂苷元；替告皂苷元；质量评价
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)12 - 2417 - 03
Determination of three steroid sapogenins in crude saponin of Tribulus terrestris
by HPLC-ELSD
FANG Hui-juan1, LI Qing1, GUAN Xiao-ying2, QIAN Zhong-zhi3, WANG Tie-jie2, BI Kai-shun1
1. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
2. Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen 518057, China
3. Chinese Pharmacopoeia Commission, Beijing 100061, China
Key words: HPLC-ELSD; Tribulus terrestris L. crude saponin; hecogenin; diosgenin; tigogenin; quality evaluation
蒺藜为蒺藜科植物蒺藜 Tribulus terrestris L. 的
干燥果实，味辛、苦，微温，有小毒，归肝经[1]。
现代研究表明，蒺藜中含有皂苷、生物碱、黄酮、
多糖、氨基酸等多种成分，主要活性成分为皂苷类
成分[2-4]。
蒺藜甾体皂苷元主要有海柯皂苷元、薯蓣皂苷
元、替告皂苷元和吉托皂苷元等，由于皂苷元紫外
吸收较弱且主要为末端吸收，采用 HPLC-DAD 进
行定量具有一定困难[5]，ELSD 是一种通用检测器，
可以弥补 DAD 检测器的不足 [6]。本实验采用
HPLC-ELSD 法测定蒺藜粗皂苷中量较高的海柯皂
苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元，为蒺藜粗皂苷的
质量评价提供依据。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪 Waters 2695（在线脱气机、四
元泵、自动进样器、柱温箱），Empower 色谱数据
工作站（美国 Waters 公司）；Alltech 2000 型蒸发光
散射检测器（美国奥泰公司）；XWK—3A 空气泵（天
津市分析仪器厂技术服务经营部）；LC-MS（Waters
2695、Waters 2487 检测器、Quattro Micro、Masslynx
工作站，美国 Waters 公司）；Millipore-Q 超纯水制
备仪（法国密理博公司）。
海柯皂苷元对照品购自 TCI 公司（经纯化至质
量分数 97.5%），薯蓣皂苷元对照品购自中国药品生
物制品检定所（批号 111539-200001），替告皂苷元
购自成都瑞芬思生物科技有限公司（质量分数为
收稿日期：2012-03-19
基金项目：广东省科技计划项目（2010A030100018）
作者简介：方惠娟（1985—），女，河南义马人，硕士研究生。Tel: 15670377243 E-mail: huijuanfanghjf@126.com
*通讯作者 王铁杰 毕开顺 Tel: (024)23986016 E-mail: bikaishun@yahoo.com
网络出版时间：2012-11-26 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20121126.1813.014.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 12 期 2012 年 12 月
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98%），甲醇（色谱纯）为 Merck 公司产品，水为
Millipore-Q 制超纯水，其他试剂均为分析纯。蒺藜
粗皂苷 2 批（批号 20080702、20090806）购自吉林
敖东洮南药业股份有限公司，2 批（批号 20050821、
20070916）购自上海复旦复华药业有限公司，2 批
（批号 20081025、20081221）购自陕西奥泽生物科
技有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱为 Agilent Zorbax SB-C18 柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（84∶16），体积
流量 1.0 mL/min，柱温 35 ℃，ELSD 检测器漂移管
温度 100 ℃，载气体积流量 2.5 L/min，进样量 10
μL。在上述色谱条件下分析，理论塔板数按海柯皂
苷元计算不低于 8 424，按薯蓣皂苷元计算不低于
17 376，按替告皂苷元计算不低于 16 969，3 种成分
与相邻色谱峰的分离度均大于 1.5，拖尾因子在
0.95～1.05，色谱图见图 1。
2.2 对照品储备液的制备
分别取海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元
1-海柯皂苷元 2-薯蓣皂苷元 3-替告皂苷元
1-hecogenin 2-diosgenin 3-tigogenin
图 1 对照品 (A) 与样品 (B) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substance (A) and sample (B)
对照品适量，精密称定，置 20 mL 量瓶中，加甲醇
溶解并定容，制成含海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替
告皂苷元质量浓度分别为 2.852、0.422、1.965 mg/mL
的对照品混合溶液，作为对照品储备溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取蒺藜粗皂苷约 0.5 g，精密称定，置 100 mL
圆底烧瓶中，加甲醇-25%盐酸（4∶1）混合溶液 25
mL，回流提取 5 h，转移至 25 mL 量瓶中，冷却后
用甲醇定容，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下对照品储备液 0.4、
0.8、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mL 置 10 mL 量瓶中，
用甲醇定容至刻度，摇匀，即得系列对照品混合溶
液。按“2.1”项下色谱条件依次进样分析，记录色
谱峰面积。以峰面积的对数为纵坐标（Y），对照品
质量浓度的对数为横坐标（X），进行线性回归分析，
得回归方程分别为海柯皂苷元 Y＝1.653 X＋6.079，
R2＝0.999 2；薯蓣皂苷元 Y＝1.758 X＋4.476，R2＝
0.999 4；替告皂苷元 Y＝1.972 X＋5.565，R2＝0.999 3。
结果表明，海柯皂苷元在 114.1～1 141.0 μg/mL、薯
蓣皂苷元在 16.88～168.80 μg/mL、替告皂苷元在
78.60～786.00 μg/mL，质量浓度的对数与峰面积的
对数呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液（海柯皂苷元 285.2
μg/mL，薯蓣皂苷元 42.2 μg/mL，替告皂苷元 196.5
μg/mL）10 μL，重复进样 6 次，按上述色谱条件测
定，海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元峰面积
的 RSD 分别为 0.2%、0.7%、0.7%。
2.6 重复性试验
取同一批样品（批号 20080702），精密称取 6
份，按“2.3”项下操作，依上述色谱条件分析，测
得海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的量，计
算其 RSD 分别为 0.5%、1.1%、0.8%。
2.7 稳定性试验
取供试品（批号 20080702）溶液，室温下放置，
分别于 0、2、4、6、8、10、12 h 进样 10 μL，按“2.1”
项下色谱条件分析，海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替
告皂苷元峰面积的 RSD 分别为 0.5%、1.0%、0.8%，
结果表明供试品溶液室温放置 12 h 内稳定。
2.8 回收率试验
取已测定的蒺藜粗皂苷（批号 20080702）9 份，
每份 0.25 g，精密称定，3 份为一组，每组按低
（80%）、中（100%）、高（120%）分别加入一定量
的海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元对照品，
按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条
0 8 16 24 32 0 8 16 24 32
t / min
A B
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3 3 2
1
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件测定海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的量，
计算回收率，结果海柯皂苷元的平均回收率为
99.7%，RSD 为 1.6%；薯蓣皂苷元平均回收率为
99.3%，RSD 为 1.4%；替告皂苷元平均回收率为
99.4%，RSD 为 1.1%。
2.9 样品的测定
分别取 6 批蒺藜粗皂苷，按“2.3”项下方法制
备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，计算结果
见表 1。
表 1 样品中海柯皂苷元、薯蓣皂苷元和替告皂苷元的量
Table 1 Determination of hecogenin, diosgenin,
and tigogenin in samples
质量分数 / % 批 号
海柯皂苷元 薯蓣皂苷元 替告皂苷元
20080702 3.03 0.30 1.87
20090806 3.04 0.31 1.84
20050821 4.52 0.33 2.67
20070916 4.54 0.34 2.64
20081025 0.73 0.00 0.67
20081221 0.72 0.00 0.69
3 讨论
3.1 检测器的选择
实验过程中将 ELSD 检测器与 DAD 检测器进
行了对比考察。由于皂苷元的紫外吸收很弱甚至没
有紫外吸收，其在 DAD 检测器上响应很低或者没
有响应，给皂苷元定量带来了一定的困难，而 ELSD
作为一种通用质量检测器，可用于检测无紫外吸收
的样品，弥补了 DAD 检测器的不足，实验证明
ELSD 检测器适合于蒺藜中皂苷元的测定。
3.2 供试品溶液的制备
实验过程中，同时考察了甲醇-25%盐酸（4∶1）
水解后直接定容、甲醇-25%盐酸（1∶1）水解后氯
仿萃取皂苷元、25%盐酸水解后氯仿萃取皂苷元。
结果表明，3 种提取方法中第 1 种提取方法所得的
色谱峰信息较全面。曾有文献报道，在蒺藜粗皂苷
中未发现薯蓣皂苷元[7]，为此在本实验过程中使用
Quattro Micro 对供试品溶液及对照品溶液中的薯蓣
皂苷元峰进行一级正离子扫描和二级正离子扫描，
结果谱图一致，证明在蒺藜粗皂苷中检测到薯蓣皂
苷元，最终供试品溶液的制备方法采用甲醇-25%盐
酸（4∶1）水解后直接定容，方法简单，可靠。
在测定的蒺藜粗皂苷 6 批样品中，同一厂家所
产不同批次粗皂苷中 3 种皂苷元的量差别不大，不
同厂家所产蒺藜粗皂苷中 3 种皂苷元的量相差较
大，故建议规范蒺藜粗皂苷的提取过程，并使用专
属性较强的 HPLC-ELSD 法对其进行质量评价。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 顾关云, 蒋 昱. 蒺藜及其同属植物的化学与药理学
研究进展 [J]. 现代药物与临床, 2009, 24(4): 198-202.
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缺血再灌注损伤大鼠心功能的影响 [J]. 中草药, 2010,
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和果实中的主要甾体皂苷元成分 [J]. 中成药, 2005,
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