全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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HPLC 法测定玉屏风不同配伍中 4 种黄酮成分
刘焕蓉，王 虹，秦雪梅，张丽增，吴 恩
山西大学化学化工学院，山西 太原 030006
摘 要：目的 研究玉屏风黄芪-白术-防风 1∶1∶1、2∶2∶1、3∶1∶1、4∶4∶1 和防风-黄芪 1∶2、黄芪-白术 1∶1、防
风-白术 1∶2 配伍剂量变化对槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和升麻苷 4 种黄酮成分的影响。方法 对玉屏风配
伍剂量变化的 4 组整方和 3 组拆方分别先用水回流提取，药渣再用 80%乙醇回流提取，并采用 HPLC 法对水醇提取液中 4
种黄酮成分的含量进行了测定。结果 在整方中，4 种黄酮成分的总量为 3∶1∶1＞1∶1∶1＞2∶2∶1＞4∶4∶1，在拆方中，
防风-黄芪＞防风-白术＞黄芪-白术。对单一成分而言，5-O-甲基维斯阿米醇苷＞升麻苷＞槲皮素＞芒柄花素；除芒柄花素外，
其余 3 种成分的量均为水提液大于药渣醇提液，药渣醇提可使 4 种黄酮成分的量增加 12.24%～40.64%。槲皮素和芒柄花素
是黄芪药材中的有效成分，二者的含量均为 3∶1∶1＞2∶2∶1＞4∶4∶1＞1∶1∶1，白术不含 4 种黄酮成分。结论 随
着玉屏风配伍剂量的变化，水醇提取液中 4 种黄酮成分的含量明显改变，但这种改变并不是药材含量的线性加减。
关键词：玉屏风；配伍；槲皮素；芒柄花素；5-O-甲基维斯阿米醇苷；升麻苷
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)06 - 1122 - 03
Determination of four flavonoids from Yupingfeng prescription in different
compatibility proportion by HPLC
LIU Huan-rong, WANG Hong, QIN Xue-mei, ZHANG Li-zeng, WU En
School of Chemistry and Chemical Engineering, Shanxi University, Taiyuan 030006, China
Key words: Yupingfeng; compatibility; quercetin; formononetin; 5-O-methylvisammioside; cimicifugoside

玉屏风由黄芪、白术、防风 3 味中药组成。经
文献统计，3 药比例有 12 种之多[1]，临床医家用药
剂量不同，药效也不同[2-3]。为了系统地探讨配比变
化所致有效成分差异与临床用药的相关性[4]，本实
验对玉屏风配伍中黄芪-白术-防风比例分别为 3∶
1∶1[5]、1∶1∶1、2∶2∶1、4∶4∶1 整方和防风-
黄芪比例为 1∶2、黄芪-白术比例为 1∶1、防风-白
术比例为 1∶2[6]拆方先分别进行水回流提取，药渣
再用 80%乙醇回流提取[7]，并采用 HPLC 法测定水
提液和药渣醇提液中槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基
维斯阿米醇苷和升麻苷 4 种黄酮成分的量。通过量
化经典方，为发挥传统医药的资源优势以及进行创
新药物研究提供可靠的理论依据。
1 仪器与材料
日立（Hitachi）高效液相色谱仪，L—2130 型
泵，L—2200 自动进样器，L—2420 UV-Vis 检测器。
黄芪（产地山西浑源）、防风（产地内蒙古乌兰浩
特）、白术（产地浙江磐安）均由山西大学化学化
工学院秦雪梅教授鉴定为正品。甲醇为色谱纯，
95%乙醇、无水乙醇、磷酸均为分析纯，水为纯净
水。槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和
升麻苷对照品均购于中国药品生物制品检验所，质
量分数均≥99.6%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为大连 Elite Hyprersil ODS2 柱（150
mm×4.6 mm，5 μm）；槲皮素：流动相为甲醇-0.4%
磷酸（50∶50），检测波长 360 nm[8]，体积流量 1.0
mL/min；芒柄花素：流动相为甲醇-0.4%磷酸（50∶
50），检测波长 254 nm，体积流量 0.8 mL/min；5-O-
甲基维斯阿米醇苷：流动相为甲醇-水（38∶62），
检测波长 254 nm[9]，体积流量 0.8 mL/min；升麻苷：

收稿日期：2010-09-01
基金项目：山西省自然科学基金资助项目（2007011026）；全国大学生创新性实验计划项目（080009）
作者简介 刘焕蓉（1956—），女，山西大同人，副教授，硕士生导师，研究方向为生药学。
Tel: (0351)7011716 13935172273 Fax: (0351)7011688 E-mail: liuhr@sxu.edu.cn
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流动相为乙腈-水-醋酸（13∶88∶0.03），检测波长
291 nm[10]，体积流量 0.8 mL/min；柱温均为室温。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取槲皮素对照品 2.00 mg，置 25 mL
量瓶中；芒柄花素对照品 2.00 mg，置 10 mL 量瓶
中；5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品 2.20 mg，置 10
mL 量瓶中；升麻苷对照品 3.80 mg 置 50 mL 量瓶
中，分别加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，备用。
2.3 供试品溶液的制备
按比例准确称取总质量为40 g的玉屏风配伍药
材，分别置 500 mL 圆底烧瓶中，加 8 倍量的蒸馏
水浸泡过夜；保持微沸回流提取 3 次，每次 1 h，合
并滤液，浓缩至适量；用 80%乙醇沉淀，离心，上
清液浓缩，蒸干，称质量，得水提液固形物；用蒸
馏水溶解定容于 50 mL 量瓶中，得水提液。水提后
的药渣再用 80%乙醇回流提取 2 次，每次 2 h，合
并滤液，浓缩，蒸干，称质量，得药渣乙醇提取液
固形物；用蒸馏水溶解定容于 50 mL 量瓶中，得药
渣醇提液。
2.4 线性关系考察
准确移取槲皮素对照品溶液 2、5、10、15、20
μL；芒柄花素对照品溶液 1 mL 稀释定容至 10 mL，
再分别移取 2、5、10、15、20 μL；5-O-甲基维斯
阿米醇苷对照品溶液 2、5、10、15、20、25 μL；
升麻苷对照品溶液 2、5、10、15、20、25 μL；按
各色谱条件分别进样，记录色谱峰，以峰面积为纵
坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方
程：槲皮素 Y＝2 294.6 X－4.493，r＝0.999 8；芒
柄花素 Y＝4 238.7 X－398.1，r＝0.996 0；5-O-甲基
维斯阿米醇苷 Y＝808.6 X－45.939，r＝0.999 2；
升麻苷 Y＝756.09 X＋42.573，r＝0.999 0；表明槲
皮素在 0.400～2.00 0 μg，芒柄花素在 0.100～1.000
μg，5-O-甲基维斯阿米醇苷在 0.440～5.500 μg，升
麻苷在 0.152～7.600 μg 线性关系良好。
2.5 精密度试验
分别取槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米
醇苷和升麻苷对照品溶液 20 μL，按各色谱条件进
样测定，重复 6 次，记录色谱峰，计算得各色谱峰
面积的 RSD 分别为 0.22%、0.21%、1.23%、0.76%。
2.6 稳定性试验
取黄芪-白术-防风比例为 4∶4∶1 的玉屏风水
提液，分别在 0、2、4、6、8、12、24 h 时按各色
谱条件分别进样 20 μL，记录色谱峰，计算得各色
谱峰面积的 RSD 分别为 3.95%、3.24%、3.41%、
3.52%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.7 重现性试验
按比例称取黄芪-白术-防风比例为 4∶4∶1 的
玉屏风样品 6 份，分别制备供试品溶液，进样测定，
记录色谱峰，计算得槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基
维斯阿米醇苷和升麻苷质量分数的 RSD 分别为
3.63%、1.94%、2.43%、2.99%。
2.8 加样回收率
按比例称取总质量 25 g 的黄芪-白术-防风比例
为 4∶4∶1 的玉屏风样品 6 份，分别精密加入槲皮
素对照品 4.0 mg、芒柄花素对照品 2.0 mg、5-O-甲
基维斯阿米醇苷对照品 11.0 mg、升麻苷对照品 7.6
mg，制备供试品溶液，按各色谱条件分别进样 20
μL，记录色谱峰，计算得槲皮素、芒柄花素、5-O-
甲基维斯阿米醇苷和升麻苷的平均回收率及 RSD
分别为 100.21%、0.93%；98.93%、0.71%；100.21%、
0.93%；98.99%、0.63%。
2.9 玉屏风不同配伍剂量中 4 种黄酮成分的测定
分别取不同配伍剂量的水提液和药渣醇提液各
10 μL，进样分析，重复测定 3 次，记录色谱峰，计
算槲皮素、芒柄花素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和升
麻苷 4 种黄酮成分的量，结果见表 1。在保持玉屏
风配伍药材总质量不变的条件下，随着配伍剂量的
变化，4 种黄酮成分在水提液和药渣醇提液中的质
量分数明显改变，这种改变并不是药材中各成分质
量分数的线性加减。在整方中，4 种黄酮成分的总
量为 3∶1∶1＞1∶1∶1＞2∶2∶1＞4∶4∶1；在拆
方中，防风-黄芪＞防风-白术＞黄芪-白术。对单一
成分而言，5-O-甲基维斯阿米醇苷＞升麻苷＞槲皮
素＞芒柄花素；且除芒柄花素外，其余 3 种成分均
为水提液质量分数大于药渣醇提液。药渣醇提可使
4 种黄酮成分的量增加 12.24%～40.64%。槲皮素和
芒柄花素是黄芪药材中的有效成分，二者的质量分
数均为 3∶1∶1＞2∶2∶1＞4∶4∶1＞1∶1∶1，白
术不含 4 种黄酮成分。
3 讨论
文献报道[6]玉屏风不同配伍对免疫力低下小鼠
均有较好的恢复作用，达到或接进正常水平。从抑
制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的增加表
明，在整方组中防风高剂量 1∶1∶1 配伍的吞噬效
果最好；在拆方组中防风-黄芪组的最强，结论是
其药理作用机制与 4 种黄酮成分的含量高低有关。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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表 1 玉屏风不同配伍剂量中 4 种黄酮成分的测定（n＝3）
Table1 Determination of four flavonoids from three components of Yupingfeng prescription
in different compatibility proportion (n = 3)
质量分数/(mg·g−1) 样 品
槲皮素 芒柄花素 5-O-甲基维斯阿米醇苷 升麻苷
药渣醇提占总量比/%
黄芪-白术-防风 1∶1∶1 水提液 0.084 0.013 0.667 0.577 20.18
药渣醇提液 0.039 0.016 0.215 0.069
黄芪-白术-防风 2∶2∶1 水提液 0.099 0.016 0.422 0.347 31.63
药渣醇提液 0.091 0.045 0.202 0.071
黄芪-白术-防风 3∶1∶1 水提液 0.153 0.024 0.633 0.397 28.24
药渣醇提液 0.136 0.057 0.240 0.042
黄芪-白术-防风 4∶4∶1 水提液 0.111 0.022 0.260 0.171 30.63
药渣醇提液 0.071 0.025 0.136 0.017
防风-黄芪 1∶2 水提液 0.200 0.026 0.636 0.278 29.45
药渣醇提液 0.190 0.052 0.190 0.044
防风-白术 1∶2 水提液 0.000 0.000 0.674 0.724 12.24
药渣醇提液 0.000 0.000 0.122 0.073
黄芪-白术 1∶1 水提液 0.129 0.020 0.000 0.000 40.64
药渣醇提液 0.073 0.029 0.000 0.000

2∶2∶1 配伍中槲皮素和芒柄花素的含量最高，对
提升溶血素和溶血空斑指标及淋巴细胞转化效果的
作用趋势最明显。《中国药典》2010 年版中的 3∶1∶
1 与 2∶2∶1 尽管防风剂量相同，但 4 种黄酮成分
的含量差异较大。在 3∶1∶1 中槲皮素和芒柄花素
的含量居前位，4 种黄酮成分的总含量也居前位，
由此可知《中国药典》选用 3∶1∶1 的原因所在。
另外传统的水煎法可使 4 种黄酮成分溶出近 80%，
由于黄酮类苷元分子中羟基甲基化及糖苷化，有部
分溶于醇，尤其芒柄花素为甚，所以对药渣再进行
乙醇提取是很有必要的。
综上所述，4 方主治相似，但由于防风、黄芪
剂量不同，其功效又有些许差异，临床上遣方用药，
应辨证施治。
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