全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 10 期 2012 年 10 月

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不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷的动态变化研究
苏连杰 1，张卫平 2，赵 波 1，刘秀梅 1，黄永鑫 1，南 洋 1，樊锐锋 1，李 鞠 1，张水利 3*
1. 黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040
2. 江苏康缘药业股份有限公司 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
3. 浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053
摘 要：目的 研究不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷量的变化规律，为合理开发利用金莲花药用资源提供实验依据。
方法 采用 UV 法和 HPLC 法，分别以芦丁和荭草苷为对照品，测定不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷量，并绘制动
态曲线。结果 从 5 月下旬至 6 月下旬，总黄酮量呈现不断升高的趋势，从 4.597%上升到 5.125%；从 7 月上旬至 8 月中旬，
总黄酮量持续下降，从 4.264%下降至 1.181%。而荭草苷量从 5 月下旬至 7 月中旬一直呈上升趋势（0.095～0.332 mg/g）；从
7 月下旬至 8 月中旬，呈下降趋势（0.306～0.092 mg/g）。结论 结合花的产量，并综合总黄酮和荭草苷量的动态变化，采
收期以 7 月上旬至中旬为佳。本实验方法稳定、可行，结果可靠，为合理采收金莲花茎叶提供了理论依据。
关键词：金莲花茎叶；UV；HPLC；总黄酮；荭草苷；芦丁
中图分类号：R282.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)10 - 2058 - 04
Dynamic changes of total flavonoids and orientin from stems and leaves
of Trollius chinensis at different collecting periods
SU Lian-jie1, ZHANG Wei-ping2, ZHAO Bo1, LIU Xiu-mei1, HUANG Yong-xin1, NAN Yang1, FAN Rui-feng1,
LI Ju1, ZHANG Shui-li3
1. Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd.,
Lianyungang 222001, China
3. College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China
Key words: stems and leaves of Trollius chinensis Bunge; UV; HPLC; total flavonoids; orientin; rutin

金莲花 Trollius chinensis Bunge 为毛茛科金莲
花属多年生草本植物，主要分布于河北、陕西、内
蒙古、东北等地。其花民间用开水沏当茶喝，用来
治疗扁桃体炎、上呼吸道感染、咽炎等。目前，临
床上用于治疗急性化脓性扁桃体炎、上呼吸道感染、
咽炎、急性肠炎、急性支气管炎、尿路感染、急性
阑尾炎等。因此金莲花被认为是一种抗菌谱广、疗
效显著、不良反应小的植物抗菌药[1-6]。目前研究认
为金莲花有效成分是总黄酮，以荭草苷和牡荆苷量
较高，具有抑菌、抗病毒等活性，且荭草苷具有明
显的抗缺氧-复氧损伤和保护心肌细胞的作用[7-10]。
金莲花传统药用部位是花，其茎叶弃之不用。
随着金莲花制剂品种的不断增多，金莲花药材的需
求量急剧上升。目前，金莲花无成熟人工栽培技术，
开展大规模规范化种植和产业化生产仍处在研究阶
段[11]。本课题前期研究表明，金莲花茎叶化学成分
与花基本相同，只是总黄酮量稍低，但茎叶产量大；
若将其地上部位全部入药，其药源将明显扩大。在
黑龙江省，金莲花野生资源丰富，主要分布于大、
小兴安岭和塔河地区。笔者曾对大兴安岭地区不同
采收期金莲花茎叶中总黄酮量进行了测定[12]；本实
验在前期研究工作的基础上，对塔河地区不同采收
期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷量进行了动态变化
研究，为确定黑龙江地区金莲花茎叶药材的适宜采

收稿日期：2012-03-15
基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12521492）
作者简介：苏连杰（1963—），女，教授，硕士生导师，研究方向为中药药效物质基础研究及中药资源的开发和利用。
Tel: 15804611048 E-mail: sulianjie1981@163.com
*通讯作者 张水利 Tel: (0571)86613576 Fax: (0571)86613606 E-mail: zhang_shuili@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 10 期 2012 年 10 月

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收期提供参考依据。
1 仪器与试药
美国戴安 Dionex Ultimate 3000 高效液相色谱仪
（VWD3000 紫外检测器，LPG—3x00 低压四元梯度
泵，WPS—3000 自动进样器）；250DE 型超声波清
洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子分析天平
（Mettler Toledo AB204—L）。日本岛津 UV—260 自
动扫描可见-紫外分光光度计。
乙腈和甲醇均为色谱纯，水为纯净水（经 0.45
μm 微孔滤膜滤过）。亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝
均为分析纯；芦丁对照品（中国药品生物制品检定
所，批号 100080-200803）；荭草苷自制，质量分数
为 98.98%；不同采收期样品于 2010 年 5 月至 8 月
采自黑龙江省塔河地区，由浙江中医药大学张水利
副教授鉴定为金莲花 Trollius chinensis Bunge，见
表 1。
表 1 金莲花茎叶样品来源
Table 1 Sample sources of stems and leaves of T. chinensis
编号 采收时间 生长状态 编号 采收时间 生长状态
1 2010-05-26 幼株 6 2010-07-16 花明显减少
2 2010-06-08 幼株 7 2010-07-24 根茎处叶片枯萎
3 2010-06-18 花期 8 2010-08-03 果实成熟
4 2010-06-28 花期 9 2010-08-13 果实成熟
5 2010-07-08 花与果实并存

2 方法与结果
2.1 不同采收期茎叶中总黄酮的测定[12]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒定质
量的芦丁对照品 50.0 mg 置 25 mL 量瓶中，加甲醇
20.0 mL，水浴微热使之溶解，放冷，加甲醇定容，
摇匀。精密吸取 10 mL 于 100 mL 量瓶中，加蒸馏
水稀释至刻度，摇匀，即得 0.2 mg/mL 芦丁对照品
溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取茎叶粉碎，过 20 目
筛，放置于 60 ℃恒温干燥箱中干燥 2 h，于干燥器
中放凉，精密称定 3.0 g，置索氏提取器中，加入石
油醚浸泡 1 h，回流至无色。取出，挥干石油醚后置
于 100 mL 锥形瓶中，加入甲醇 50 mL，称定质量，
静置 24 h，密封超声提取 40 min，冷却，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静置 0.5 h，滤
过，滤液用甲醇定容于 50 mL 量瓶中。
2.1.3 测定波长的确定 精密量取对照品溶液 3.0
mL 置于 25 mL 量瓶中，加 5.0 mL 水、1.0 mL 0.7
mol/L 亚硝酸钠溶液，摇匀，放置 6 min，加 0.5 mol/L
硝酸铝溶液 l.0 mL，摇匀，放置 6 min，再加 1.0 mol/L
氢氧化钠溶液 10.0 mL，加水至刻度，摇匀，放置
15 min，按分光光度法，进行全波长扫描，测定吸
光度，绘制吸收曲线，结果在波长 500 nm 处有最
大吸收。
2.1.4 线性关系考察 精密量取对照品溶液 0、1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 分别置于 25 mL 量瓶中，
按“2.1.3”项方法，在波长 500 nm 处测吸光度。
以吸光度为横坐标（X），质量浓度为纵坐标（Y），
得回归方程 Y＝0.110 4 X－0.003 3，r＝0.999 0，结
果表明芦丁在 0.008～0.048 mg/mL 线性关系良好。
2.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 1.0 mL，
按“2.1.3”项方法测定 6 次，按回归方程计算总黄
酮质量分数，结果总黄酮质量分数的 RSD 为 0.48%。
2.1.6 稳定性试验 吸取同一供试品溶液，分别在
0、10、20、30、60、120 min 测其吸光度，结果总
黄酮吸光度的 RSD 为 1.06%。
2.1.7 重复性试验 取 1 号样品 5 份，制备供试品
溶液，测定吸光度，结果总黄酮质量分数的 RSD 为
2.44%，表明本方法重复性良好。
2.1.8 加样回收率试验 精密吸取已测定的供试品
5 份，加入不同量的芦丁对照品，制备供试品溶液，
按“2.1.3”项下方法测定，计算质量分数，结果平
均回收率为 98.46%，RSD 为 1.49%。
2.1.9 样品测定 精密吸取供试品溶液 5.0 mL，用
甲醇定容于 50 mL 量瓶中，再精密吸取 3.0 mL，置
25 mL 量瓶中，按照“2.1.3”项方法操作，在波长
500 nm 处测定吸光度，依标准曲线计算茎叶中总黄
酮的质量分数，平行样品测定 3 次。结果见表 2。
结果表明，从 5 月下旬至 6 月末，金莲花茎叶总黄
酮量呈现不断升高的趋势，从4.597%上升到5.125%；
从七月上旬至采收期结束，总黄酮量持续下降，从
表 2 不同采收期金莲花茎叶中总黄酮量 ( ± = 3x s n, )
Table 2 Content of total flavonoids in T. chinensis
at different collecting peroids ( ± = 3x s n, )
采收时间 总黄酮 / % 采收时间 总黄酮 / %
05-26 4.597±0.003 07-16 2.889±0.004
06-08 4.125±0.005 07-24 1.472±0.003
06-18 5.139±0.007 08-03 1.333±0.006
06-28 5.125±0.003 08-13 1.181±0.009
07-08 4.264±0.008
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 10 期 2012 年 10 月

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4.264%至 1.181%。
2.2 不同采收期茎叶中荭草苷的测定[13]
2.2.1 供试品溶液的制备 按照“2.1.2”项方法制
备供试品溶液，过 0.45 μm 滤膜，即得供试品溶液。
2.2.2 荭草苷对照品溶液的制备 精密称取荭草苷
对照品 2.50 mg，加甲醇溶解并定容于 50 mL 量瓶
中，得质量浓度为 0.05 mg/mL 对照品溶液。取对照
品溶液 2.5 mL 定容于 100 mL 量瓶中，得质量浓度
为 2.5 μg/mL 对照品溶液。
2.2.3 色谱条件及系统适用性 色谱柱为 Welch
Materials Ultimate TMXB-C18（250 mm×4.6 mm，5
μm），柱温 30 ℃；流动相：乙腈-0.35%磷酸（15∶
85），等度洗脱，体积流量 1 mL/min，检测波长为
340 nm，外标法定量。进样量为 8 μL。在此条件下
所得对照品和供试品溶液的色谱图见图 1。各色谱
峰完全分离，峰形好，按荭草苷峰计算理论塔板数
不低于 5 000。

﹡荭草苷
﹡orientin
图 1 对照品 (A) 和样品 (B) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of orientin reference
substance (A) and sample (B)
2.2.4 线性关系考察 取质量浓度为 2.5 μg/mL 荭
草苷对照品溶液 2、4、6、8、12、16、20 μL，依
次进样，测定其峰面积。以荭草苷质量浓度（X）为
横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得
回归方程为 Y＝193.61 X－0.010 9（r＝0.999 0），荭草
苷在 0.005～0.05 μg 线性关系良好。
2.2.5 精密度试验 取荭草苷对照品溶液，连续进样
5 次，每次 8 μL，计算荭草苷峰面积积分值的 RSD
为 0.128 3%。
2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液，分别在 0、1、
3、6、12、24 h 进样 8 μL，记录峰面积，计算荭草
苷峰面积的 RSD 为 0.137 5%，表明供试品溶液在
24 h 内稳定。
2.2.7 重复性试验 精密称取同一批样品 5 份，制
备供试品溶液，进样，每次 8 μL，测定荭草苷质量
分数，结果其 RSD 为 2.935 7%。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取已测定荭草苷的
样品 5 份，适量，分别准确加入荭草苷对照品 0.05
mg，制备供试品溶液，进样 8 μL，测定荭草苷的峰
面积，计算平均回收率为 100.6%，RSD 为 1.587%。
2.2.9 样品测定 分别取不同采收期茎叶样品，精
密称定，制备供试品溶液，按上述方法测定荭草苷
量，平行样测定 3 次，见表 3。结果表明，荭草苷
量，从 5 月下旬至 7 月中旬一直呈直线上升趋势，
在 7 月中旬达到最高，以后呈线性下降，到 8 月中
旬降到最低。
表 3 不同采收期金莲花茎叶中荭草苷量 ( ± = 3x s n, )
Table 3 Content of orientin in T. chinensis at different
collecting peroids ( ± = 3x s n, )
采收时间 荭草苷 / % 采收时间 荭草苷 / %
05-26 0.095±0.002 07-16 0.332±0.005
06-08 0.149±0.003 07-24 0.306±0.003
06-18 0.197±0.005 08-03 0.182±0.004
06-28 0.231±0.001 08-13 0.092±0.004
07-28 0.276±0.003
3 讨论
金莲花传统药用部位是花，在黑龙江省大兴安
岭及塔河等地区资源丰富，民间用开水沏茶喝，用
以治疗扁桃体炎、急性中耳炎等。药理研究表明，
金莲花具有明显的抑菌、抗病毒等作用，有效成分
为总黄酮，以荭草苷和牡荆苷量较高[8-9]。本研究在
确定了其茎叶也具有明显抑菌作用[14]的基础上，考
察黑龙江塔河地区不同采收期茎叶中总黄酮及荭草
苷量的变化规律，为综合应用金莲花提供依据。
总黄酮量与荭草苷量变化不一致，荭草苷是一
个动态累积的曲线；而总黄酮量，在开花前，呈现
不断升高的趋势，开花后逐渐减少，应该与花中总
黄酮积累或转移有密切关系。需要今后进行进一步
的深入分析和研究。
结合总黄酮和荭草苷量，参考其生物学产量，
提示金莲花茎叶 6 月中旬至 7 月上旬采收最佳。但
6 月中旬至下旬正是盛花期，此时采集茎叶，会对
花的生长和产量产生严重影响。因此，兼顾花和茎
叶的产量，并结合总黄酮、荭草苷量的动态变化，
建议 7 月上旬至中旬采收为佳。

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t / min
A B
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通过严力群等[15]、苏连杰等[12]和本实验研究表
明，金莲花茎叶中总黄酮量较高，动态积累趋势随
生长时间的不同而呈现出一定的变化规律。塔河地
区茎叶总黄酮于 5 月中旬达到最大值 5.139%，此后
逐渐降低。本研究结果与坝上围场县广字基地相似，
总黄酮都是在 5 月中旬至 6 月初较高，而在 6 月中
旬最高。
比较茎叶与花中总黄酮及荭草苷量，坝上地区
9 个金莲花样品的总黄酮量平均值为 6.939%，与茎
叶总黄酮量的最大值十分接近；而承德地区所产金
莲花总黄酮量最高达 10.9%[13,15]。至于荭草苷的量，
经笔者研究表明，花最高达 1.956%；而茎叶中最高
是 0.332%。虽然茎叶中总黄酮及荭草苷量与花中有
差距，但茎叶产量大，而且抑菌抗病毒效果明显，
如加以综合利用，应用前景十分广阔。
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