全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月

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车前子指纹图谱研究及其 2 种指标成分的测定
何新荣，古 今，刘 萍
中国人民解放军总医院 中药房，北京 100853
摘 要：目的 建立不同产地车前子药材的高效液相色谱指纹图谱并测定京尼平苷酸和毛蕊花糖苷 2 种指标成分的量。方法
Zorbax sbaq-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.5%的醋酸水溶液，体积流量 1.0 mL/min，检测波长 254 nm，
采用梯度洗脱，建立车前子 HPLC 指纹图谱。结果 建立了车前子的指纹图谱，确立 13 个共有峰，京尼平苷酸和毛蕊花糖
苷质量分数均值为 0.794 3%和 0.664 2%。结论 本研究建立的指纹图谱与指标成分测定相结合分析方法快速，可用于评价
车前子的质量，并为下一步建立车前子配方颗粒的质量控制方法提供依据。
关键词：车前子；HPLC；京尼平苷酸；毛蕊花糖苷；指纹图谱
中图分类号：R286.022 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2013)21 - 3053 - 04
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.21.021
Fingerprint of Plantaginis Semen and determination of its two index contents
HE Xin-rong, GU Jin, LIU Ping
Depertment of Chinese Materia Medica, PLA General Hospital, Beijing 100853, China
Abstract: Objective To establish the fingerprint of Plantaginis Semen and to determine the two index contents of geniposidic acid
and verbascoside. Methods The chromatographic separation was performed on a C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm). The mobile
phase was a mixture of acetonitrile-0.5% acetic acid aqueous solution in gradient elution. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
detection wave length was 254 nm. Similarity evaluation system was used in data analysis. Results The HPLC fingerprint of
Plantaginis Semen showed 13 characteristic peaks with high similarity, and contents of geniposidic acid and verbascoside were
0.794 3% and 0.664 2%, respectively. Conclusion The method that combining the determination of index contents with fingerprint
analysis is timesaving and could be used for the quality control of Plantaginis Semen. It could provide a reference for the further
research on the quality control of formular granule with Plantaginis Semen extracts.
Key words: Plantaginis Semen; HPLC; geniposidic acid; verbascoside; fingerprint

车前子为车前科植物车前 Plantago asiatica L.
或平车前 P. depressa Willd. 的干燥成熟种子，具有
清热利尿、渗湿通淋、明目祛痰的功效[1]。目前，
由于车前子品种多、分布广、药源杂，伪品多，如
葶苈子、荆芥子、党参子、青葙子、茺蔚子、小车
前子等[2]，故其质量控制一直是个难题，同时车前
子的 GAP 建设也缺少足够的科技支撑[3]。指纹图谱
是一种顺应中药多组分、多靶点，从“全成分”的
角度出发的现代中药质量控制方法，现已成为国内
外广泛接受的中药质量控制评价模型[4-5]。《中国药
典》2010 年版规定了京尼平苷酸和毛蕊花糖苷为车
前子的 2 个质量控制成分，而目前只有关于车前子
中车前子苷、桃叶珊瑚苷和芦丁等成分的定量测定
的报道[6-9]，未见有车前子中质控成分京尼平苷酸和
毛蕊花糖苷的测定报道，因此，为全面控制车前子质
量，本实验首次将其指纹图谱与《中国药典》2010
年版规定的 2 个指标成分结合起来进行研究。
1 材料与仪器
1.1 材料
京尼平苷酸对照品（批号 A0526，成都曼思特
生物科技有限公司）；毛蕊花糖苷对照品（批号
A0280，成都曼思特生物科技有限公司）；车前子 13
个不同来源饮片 S1～S13，见表 1；乙腈为色谱纯；
醋酸为分析纯；超纯水。
1.2 仪器
Agilent 1100 型高效液相色谱仪（美国），G1313A

收稿日期：2013-01-13
作者简介：何新荣，药师，研究方向为中药学。Tel: (010)66937426 E-mail: hexinrong666@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 21 期 2013 年 11 月

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表 1 不同来源车前子饮片
Table 1 Plantaginis Semen from various sources
批次 批号 产 地
S1 20110301 四川（购自新绿色药业公司）
S2 11010603 亳州（购自北京同仁堂药业公司）
S3 20100901 河北（购自北京三和药业公司）
S4 散货 江西（购自广州清平市场）
S5 110300811 江西（购自广西市场）
S6 散货 江西（购自江西药材市场）
S7 20100601 河北（购自北京三和药业公司）
S8 11030102 亳州（购自北京同仁堂药业公司）
S9 20100801 河北（购自北京三和药业公司）
S10 10061601 江西（购自北京绿野药业公司）
S11 11010802 黑龙江（购自北京绿野药业公司）
S12 散货 四川（购自四川市场）
S13 11010702 黑龙江（购北京绿野药业公司）

自动进样器，数据由 Agilent Chemstation on-line 系
统处理，G1315B 紫外检测器（DAD），色谱柱为
Agilent SBaq-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；电子
天平（Sartorius CP225D）；KQ2200DB 型数控超声
波清洗器（昆山超声仪器）。
2 方法与结果
2.1 优化后的色谱条件
Agilent Zorbax sbaq-C18 色谱柱（250 mm×4.6
mm，5 μm），体积流量 1.0 mL/min；柱温 30 ℃；
检测波长 254 nm；进样量 20 μL，以乙腈（A）-0.5%
醋酸水（B）为流动相，梯度洗脱：0～10 min，90%
B，10～20 min，80% B，20～50 min，20% B，50～
60 min，90% B。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取京尼平苷酸 4.4 mg，毛蕊花糖苷对照
品各 3.9 mg，用 60%甲醇溶解并定容至 25 mL 量瓶
中，混匀，即得母液，冰箱中保存备用。
2.3 供试品溶液的制备
分别取不同来源的车前子样品，将其粉碎后过
2 号筛。精密称取 0.5 g，加入 25 mL 60%甲醇，密
塞，称定质量，超声（250 W，40 kHz）60 min，放
至室温，称定质量，用甲醇补足质量，过滤，取滤
液，备用。
2.4 指纹图谱方法学的考察
2.4.1 精密度试验 取样品 S1 供试品溶液，连续
进样 6 次，结果显示各色谱峰的相对保留时间及峰
面积的比值基本没有明显变化，各色谱峰的相对保
留时间和峰面积的 RSD 值均≤3.0%，表明仪器精
密度良好，符合指纹图谱的要求。
2.4.2 稳定性试验 取样品 S1 供试品溶液，分别在
0、3、6、12、24 h 进样，结果显示各共有色谱峰的
相对保留时间和峰面积的比值基本没有明显变化，各
色谱峰的相对保留时间 RSD＜1.02%，相对峰面积的
RSD＜2.38%，符合指纹图谱的要求，且各时间点色
谱图相似度均大于 0.98，表明在该供试品在 24 h 内供
试品溶液的成分基本稳定。
2.4.3 重复性试验 取样品 S1 的供试品溶液 6 份，
按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液，
然后按“2.1”项下检测方法依次进样检测，记录色
谱峰，各共有峰与内参比峰的相对保留时间和相对
峰面积的 RSD 值均小于 2.8%，表明该方法重现性
良好，符合指纹图谱要求。
2.5 指纹图谱的建立与评价[10]
2.5.1 共有峰的标定 按上述色谱条件对 13 批样
品进行测定，根据 HPLC 指纹图谱检测结果，按中
国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
（2004A）”进行计算，分别对各批次样品指纹图谱
进行匹配，得出相应的对照图谱，标定了 13 个共有
特征峰，见图 1。色谱图中峰 1 为京尼平苷酸的色
谱峰，峰 2 为毛蕊花糖苷的色谱峰，两峰均与相邻
峰分离度较好，峰高合适且为配方中 2 个重要质量
控制指标成分，故选定京尼平苷酸和毛蕊花糖苷为
特征峰。

1-京尼平苷酸 2-毛蕊花糖苷
1-geniposidic acid 2-verbascoside
图 1 13 批样品 HPLC 指纹图谱
Fig. 1 HPLC fingerprint for 13 batches of samples
2.5.2 相似度评价 按中国药典委员会“中药色谱
指纹图谱相似度评价系统（2004A）”比较样品的
色谱图和计算相对保留时间，对各批样品指纹图谱
采用多点校正后进行自动匹配，生成的对照图谱

1
2
R
S13
S12
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.18 60.87
t / min
3
4

5

6 7 8 9 10
11

12
13
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R，计算相似度，结果表明各批次相似度较高，见
表 2。
2.5.3 车前子样品聚类分析 将各色谱峰面积相对
于称样量量化，应用“SPSS 11.5”软件对其进行系
统聚类分析，采用组间均联法（between-group
linkage），以夹角余弦（cosin）作为样品相似度的
测度。聚类分析将 13 批车前子样品分为 2 类，聚类
分析结果见图 2。
表 2 13 批次样品相似度评价
Table 2 Similarities for 13 batches of samples
批次 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 R
S1 1.000 0.826 0.803 0.941 0.940 0.803 0.771 0.914 0.774 0.790 0.935 0.916 0.923 0.912
S2 0.826 1.000 0.997 0.822 0.823 0.995 0.989 0.956 0.990 0.994 0.844 0.781 0.845 0.962
S3 0.803 0.997 1.000 0.789 0.789 0.989 0.991 0.938 0.992 0.991 0.822 0.748 0.824 0.946
S4 0.941 0.822 0.789 1.000 0.999 0.830 0.777 0.949 0.779 0.807 0.962 0.991 0.955 0.939
S5 0.940 0.823 0.789 0.999 1.000 0.832 0.782 0.950 0.783 0.810 0.969 0.993 0.964 0.941
S6 0.803 0.995 0.989 0.830 0.832 1.000 0.991 0.961 0.992 0.997 0.851 0.796 0.855 0.966
S7 0.771 0.989 0.991 0.777 0.782 0.991 1.000 0.935 1.000 0.995 0.831 0.748 0.837 0.946
S8 0.914 0.956 0.938 0.949 0.950 0.961 0.935 1.000 0.936 0.950 0.952 0.929 0.951 0.998
S9 0.774 0.990 0.992 0.779 0.783 0.992 1.000 0.936 1.000 0.996 0.831 0.748 0.837 0.946
S10 0.790 0.994 0.991 0.807 0.810 0.997 0.995 0.950 0.996 1.000 0.842 0.775 0.847 0.958
S11 0.935 0.844 0.822 0.962 0.969 0.851 0.831 0.952 0.831 0.842 1.000 0.969 0.999 0.955
S12 0.916 0.781 0.748 0.991 0.993 0.796 0.748 0.929 0.748 0.775 0.969 1.000 0.965 0.920
S13 0.923 0.845 0.824 0.955 0.964 0.855 0.837 0.951 0.837 0.847 0.999 0.965 1.000 0.955
R 0.912 0.962 0.946 0.939 0.941 0.966 0.946 0.998 0.946 0.958 0.955 0.920 0.955 1.000


图 2 车前子样品聚类分析结果
Fig. 2 Hierarchical cluster analysis
of Plantaginis Semen samples
2.6 车前子中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的测定
2.6.1 线性关系考察 分别精密吸取“2.2”项的
对照品溶液，用甲醇配制成混合对照品溶液 5 份
（京尼平苷酸为 0.220、0.440、2.200、4.400、22.200
μg/mL；毛蕊花糖苷为 0.195、0.390、1.950、3.900、
19.500 μg/mL）。按“2.1”项色谱条件，以质量浓
度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线
性回归，京尼平苷酸回归方程为 Y＝1 516.2 X－
46.925（r＝0.999 3），结果表明京尼平苷酸在
0.220～22.200 μg/mL 线性关系良好；毛蕊花糖苷
回归方程为 Y＝1 396.2 X＋2.1（r＝0.999 4），结果
表明毛蕊花糖苷在 0.195～19.500 μg/mL 线性关系
良好。对照品溶液及供试品溶液色谱图见图 3。
2.6.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液（S2），
同“2.1”项色谱条件，重复进样 6 次，记录峰面积，
结果京尼平苷酸与毛蕊花糖苷峰面积的 RSD 值分
别为 0.18%、0.23%。
2.6.3 重复性试验 取药材粉末（S2）6 份，按“2.3”

1-京尼平苷酸 2-毛蕊花糖苷
1-geniposide 2-verbascoside
图 3 对照品 (A) 与车前子样品 (B) 色谱图
Fig. 3 HPLC chromatograms of reference substances (A)
and Plantaginis Semen samples (B)

7
9
3
2
6
10
8
11
13
4
5
12
1
0 5 10 15 20 25
遗传距离



0 10 20 30 40 50 60
0 10 20 30 40 50 60
1
2
1
2
t / min
A
B
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项下供试品溶液制备方法进行处理后，各取 20 μL
进样，结果京尼平苷酸与毛蕊花糖苷质量分数的
RSD 值分别为 1.12%、0.99%。
2.6.4 稳定性试验 精密吸取供试品溶液（S2），
于制备后 0、1、2、4、12、24 h，同“2.1”项色谱
条件进样，结果京尼平苷酸与毛蕊花糖苷量的 RSD
值分别为 2.00%、2.37%。
2.6.5 加样回收率试验 精密称取已测定的样品
（S2）6 份，分别精密加入一定量的京尼平苷酸与毛
蕊花糖苷对照品溶液，按“2.3”项下供试品溶液制
备方法进行处理后，按“2.1”项色谱条件进样，结
果京尼平苷酸与毛蕊花糖苷平均回收率分别为
97.2%和 95.5%，RSD 值分别为 1.75%和 1.08%。
2.6.6 样品测定 分别精密吸取各批药材的供试品
溶液 20 μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，计
算 13 批车前子中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷量，测定
结果见表 3。
表 3 车前子中京尼平苷酸与毛蕊花糖苷的测定结果
Table 3 Contents of geniposidic acid and verbascoside
in Plantaginis Semen samples
批次 京尼平苷酸 / % 毛蕊花糖苷 / %
S1 0.570 1 0.439 1
S2 0.882 9 0.676 0
S3 0.628 8 0.464 6
S4 0.960 1 0.641 7
S5 0.939 1 0.684 3
S6 0.997 3 0.815 6
S7 0.742 6 0.734 5
S8 0.766 3 0.575 2
S9 0.767 2 0.756 3
S10 0.957 2 0.812 1
S11 0.639 6 0.707 5
S12 1.044 7 0.798 0
S13 0.629 8 0.729 3
均值 0.794 3 0.664 2

3 讨论
本实验考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-醋酸水
以及乙腈-醋酸水梯度洗脱系统，根据指标成分的性
质，采取乙腈-醋酸水溶液系统时车前子能达到较好
的分离，保留时间适中。还考察了 Agilent Zorbax
C18，Agilent Zorbax sbaq-C18和 Agilent TC-C18 3 种
色谱柱。结果表明，Agilent Zorbax SB-C18 色谱柱上
车前子中各个成分能在较短洗脱时间内达到较好的
分离。用二极管阵列检测器全波长扫描考察了不同
吸收波长图谱，重点考察了 200、240、254、280、
326 nm 的图谱。结果表明，在 254 nm 下检测到的
车前子指纹图谱信息量均较大，特征性强，且不同
成分的响应值较为均匀，因此选择 254 nm 为检测
波长。车前子提取实验中主要对时间（30、60、90
min）和甲醇的比例（50%、60%、80%、100%）都
进行了考察，结果表明，60%甲醇超声 60 min 样品
峰较多，京尼平苷酸和毛蕊花糖苷 2 个指标成分峰
型好且峰高，100%甲醇提取样品出峰少。
中药指纹图谱能够全面反映中药的质量[11-12]。相
似度评价和聚类分析的结果表明该2种不同测度间可
互相认证。用该法分析未知样品时，只需测得该样品
的指纹图谱，计算未知样品与共有模式间的相似度，
即可对样品进行分类鉴定和评价。本实验建立的方法
测定了车前子制剂中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷的量，
并结合该饮片指纹图谱进行研究，可从多方面多角度
控制其质量，为其质量标准建立提供可靠数据。
依据《中国药典》2010 年版车前子中京尼平苷
酸不少于 0.50%；毛蕊花糖苷不少于 0.40%。本实
验结果表明，从各地区收集来的车前子样品质量均
达到要求，而且发现与其他地区产比较，江西产样
品 S6 和 S10 中京尼平苷酸和毛蕊花糖苷量均较高。
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