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Advances in studies on ITS sequence of medicinal plants germplasm resources

药用植物种质资源ITS序列研究进展



全 文 :中草药 , 2009 , 40 (7) : 11722附 21
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药用植物种质资源 ITS 序列研究进展
于华会1 ,杨志玲1 3 ,杨  旭1 ,谭梓峰1 ,舒  枭2 ,刘若楠1 3 ①
(11 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 ,浙江 富阳  311400 ; 21 云南农业大学 ,云南 昆明  650201)
摘 要 : ITS(internal t ranscribed spacer)序列分析已成为近年来国际上植物多样性研究的热点 ,并在药用植物种质
资源研究中得到广泛的应用。但由于相关研究成果众多 ,一定程度上也阻碍了该方面的科研工作。针对这种情
况 ,对 ITS 序列分析的优缺点、技术流程、数据分析方法及其在药用植物品种鉴定、分类、亲缘关系确定、遗传多样
性分析等方面的应用情况进行详细的综述 ,同时对其未来的发展前景进行了展望 ,以期能使国内药用植物学工作
者对此有更多的了解和认识。
关键词 : ITS 序列 ;药用植物 ;种质资源
中图分类号 :R28212 ;Q789 ;Q946    文献标识码 :A    文章编号 :025322670 (2010) 0320491206
Advances in studies on ITS sequence of medicinal plants germplasm resources
YU Hua2hui1 , YAN G Zhi2ling1 , YAN G Xu1 , TAN Zi2feng1 , SHU Xiao2 , L IU Ruo2nan1
(11 Research Institute of Subtropical Forest ry , Chinese Academy of Forest ry Sciences , Fuyang
311400 , China ; 21 Yunnan Agricultural University , Kunming 650201 , China)
Key words : ITS sequence ; medicinal plant ; germplasm resources
·194·中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009209204                      
基金项目 :国家科技部项目 (200704022)
作者简介 :于华会 (1983 —) ,女 ,硕士研究生 ,主要从事药用植物分子方面研究。 E2mail :yuhuahui1217 @163. com3 通讯作者 杨志玲 Tel : (0571) 63100410  E2mail :zlyang0002 @126. com
  药用植物种质资源是指一切可用于药物开发的植物资
源 ,是所有药用植物物种的总和 ,也是进行中药材品种改良、
新品种培育及遗传工程建设的物质基础。随着人们生活水平
日益提高 ,对药用植物的利用不再局限于传统的入药治病 ,而
广泛应用于饮食、保健、绿色农药、畜禽业等人类生活的各个
方面 ,因而导致了药用植物资源的过度开发利用 ,已有相当一
部分珍贵药用植物资源受到严重破坏或濒临灭绝。国内外学
者对药用植物种质资源可持续利用进行了广泛的研究[1~3 ] 。
分子生物学技术飞速发展 ,并渗透到生命科学的各个领
域 ,为药用植物种质资源研究提供了新的借鉴方法。各种分
子标记技术 ,如 A FL P (amplified f ragment length polymor2
phism ,扩增片段长度多态性) [4 ] 、随机扩增多态性 DNA
(random amplified polymorphic DNA , RA PD) [5 ] 、内部简单
重复序列标记 (inter simple sequence repeat , ISSR) [6 ] 、内部
转录间隔区 (internal t ranscribed spacer , ITS) [7 ]等先后被借
鉴和应用到药用植物种质资源研究。其中 ITS 序列分析技
术因其准确、可靠、方便等优点备受人们的关注和推崇 [8 ] ,从
诞生之初便被广泛应用于药用植物资源鉴定 [9 ,10 ] 、系统发
育 [11~13 ] 、遗传多样性检测 [7 ,14 ]等研究领域 ,促使药用植物理
论研究与其实际应用以前所未有的速度结合起来。然而 ,随
着该技术在药用植物研究中的不断深入 ,研究方向重叠、结
果不一、操作流程不规范等一系列问题也随之产生 ,不但影
响到该技术的发展 ,一定程度上也对科技工作者科研选题造
成了影响 ,但鲜见有专业对其总结分类的文章。针对这种情
况 ,本文综述了 ITS 技术常规操作流程和数据分析方法及其
在药用植物种质资源研究中的最新进展和成果 ,以期能使国
内药用植物学工作者对此有更多的了解和认识。
1  ITS技术常规操作及数据分析
1. 1  ITS 序列结构及优点 :高等植物的 rDNA ( ribosome
DNA)是由核糖体基因 (转录单位) 及与之相邻的间隔区组
成的高度重复串联序列 ,并以外部转录间隔间 ( external
t ranscribed spacer , ETS) 、18S rDNA、内部转录间隔区 1 (in2
ternal t ranscribed spacer , ITS1) 、5. 8S rDNA、内部转录间隔
区 2 ( ITS2) 、26S rDNA 和非转录间隔区 ( non transcribed ,
N TS)的顺序排列在 DNA 上 (5′到 3′) [15 ] 。其中 , ITS1 和
ITS2 共同构成了 ITS 序列。介于 ITS1 和 ITS2 之间的5. 8S
序列长度非常保守 (被子植物中 ,一般 163~164 bp) [16 ] ,物
种间的碱基序列也极为相似 ,该片段的存在不会对 ITS1 和
ITS2 序列分析造成影响 ,因此 ,通常所说的 ITS 序列也将其
包括在内 ,统称为 ITS 区域 (图 1) 。
  ITS 序列分析之所以在植物研究中得到广泛应用 ,主要
图 1  核糖体基因组及 ITS区结构
Fig. 1  Nuclear ribosomal DNA and structre ITS region
取决于以下几个原因 : 1) 相对于 mtDNA (线粒体 DNA) ,
rDNA是核基因组序列 ,受到细胞核保护机制的保护 ,进化过
程相对稳定 ,且同时具有多变区和保守区 ,可利用不同的区
域特点进行独立研究 ,研究方向广泛 ;2) ITS1、ITS2 分别位
于 18S~5. 8S rDNA ,5. 8S~26S rDNA ,而 18S、5. 8S、26S
rDNA的序列又非常保守 ,这样就可以用与其序列互补的通
用引物对 ITS 区进行 PCR 扩增 [7 ] ;3) ITS 在 rDNA 中是高
度重复的 ,千万个拷贝以串联重复方式出现在一个或多个染
色体基因位点上 ,且通过不等交换和基因转换 ,使得重复单
位间发生了位点内或位点间的同步进化 ,即不同的 ITS 拷贝
间的序列趋于相近或完全一致 [17 ] ,为 PCR 产物的直接测序
奠定了理论基础 [8 ] ;4) ITS1 和 ITS2 作为非编码区 ,承受的
选择压力较小 ,虽然长度比较保守 ,但是核苷酸序列变化大 ,
可以提供详尽的遗传学信息 [18 ] 。除此之外 , ITS 序列还具
有样品用量少、精准鉴定等优点 ,这也为其成为药学研究中
的重要标记奠定了基础。
1. 2  ITS技术操作流程 :与以往分子系统学方法相似 , ITS同
样是基于 DNA 测序的分子标记技术 ,通过准确检测 DNA 序
列中碱基替换、插入和缺失等变异信息 ,来研究个体或种群的
遗传结构。因此 ,也具有相似的操作流程 :1)采集所需物种样
品 ,提取基因组 DNA ;2)设计和合成引物 ;3)进行 PCR 预选扩
增 ,优化反应条件 ,筛选可用引物 ;4) 克隆测序 ;5) 序列编辑 ,
人工校正 ;6)结果分析 ,比对差异位点 ;7) 提交结果到相关数
据库 (如 GenBank) ,获得登录号 (原理见图 2) 。另外 ,利用
18S、5. 8S、26S rDNA 序列在物种间的保守性特点 ,可通过已
知物种的相关序列设计引物 ,或利用通用引物进行扩增[7 ,19 ] ,
大大缩短了实验时间和简化了实验步骤。
表 1 总结了一些已在药用植物 ITS 区域研究中扩增成
功的通用引物 ,利用这些引物通过 PCR 反应可以扩增出需
要的片段。
1. 3  数据分析
图 2  ITS技术操作流程图示
Fig. 2  Flowchart of ITS technical operation
·294· 中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
表 1  成功应用于药用植物 ITS2PCR的引物序列
Table 1  Successful application of ITS2PCR primer sequence
to medicinal plant
物  种 引物名称 引物序列 (5′23′) 位置 文献来源
乌头属
( Aconitum)
ITS4
ITS5
TCCTTCCGCTTA TTGA TA TGC
GGAA GGA GAA GTCGTAACAA GG
18S
26S
20~22
三叶草属
( T ri f olium)
ITSL
ITS4
TCGTAACAA GGTTTCCGTA GGTG
TCCTCCGCTTA TTGA TA TGC
18S
26S
19
无花果属
( Ficus)
ITS4
ITS5
TA TGCTTAAACTCCA GCGGG
AA GGTTTCCGTA GGTGAAC
18S
26S
7、23
广义青篱竹属
( A rundinaria)
ITS21
ITS4
A GAA GTCGTAACAA GGTTTCCGTA GG
TCCTCCGCTTA TTGA TA TGC
18S
26S
24、25
当归属
( A ngelica)
P1 ( ITS25)
P2
GGAA GTAAAA GTCGTAACAA GG
TCCTCCTCCGCTTA TTGA TA TGC
18S
26S
26~28
ITS24 TCCTTCCGCTTA TTGA TA TGC 26S
18SP1 CGTAACAA GGTTTCCGA TGGTGAA 18S
26SP2 TTA TTGA TA TGCTTAAACTCA GCGGC 26S
明党参属
( Changium)
P1
PA
A GAA GTCGTAACAA GGTTTCCGA TGG
GA TGCGA GA GCCGA GA TA TCCGTTG
18S
5. 8S
29、30
P3 GCA TCGA TGAA GAACGCAAC 5. 8S
P4 TCCTCCTCCGTCTA TTGA TA TGC 26S
莲属 ( N elumbo) C1
C2
GTTTCTTTTCCTCCGCT
A GGA GAA GTCGTAACAA G
18S
26S
10、31~33
ITS4 TCCTCCGCTTA TTGA TA TGC 18S
ITS5 GGAA GTAAAA GTCGTAACAA GG 26S
五味子属
( Schisandra)
P1
P4
A GAA GTCGTAACAA GGTTTCCGTA GG
TCCTCCTCCGCTTA TTGA TA TGC
18S
26S
16、34
P18S3′ A TTGAA TGGTCCGGTGAA GTGTTCG 18S 35~38石斛属 ( Den2
 drobium) P26S5′
ITS2P1 AA TTCCCCGGTTCGCTCGCCGTTACCGTAACAA GGTTTCCGTA GGTGGAC 26S18S
ITS2P2 TTA TTGA TA TGCTTAAACTCA GCGGG 26S
柴胡属 ( B upleu2
 rum)
ITS4
ITS5
TCCTTCCGCTTA TTGA TA TGC
GGAA GGA GAA GTCGTAACAA GG
18S
26S
39、40
1. 3. 1  ITS 序列测定 :测序虽作为 ITS 序列分析前的最后
步骤 ,但也是其最重要部分。现在常采用双脱氧终止法来完
成测序工作 ,测序条件一般为 : 95 ℃、20 s , 50 ℃、20 s ,
60 ℃、1 min ,30 个循环 :测序对象 : PCR 产物直接测序。
1. 3. 2  ITS 序列分析 : 利用 CL USTAL2X、DNAMAN、
DNAstar、MEGA (version4. 0) 等软件对测序所得序列进行
对位排列 ,经手工校正 ,剪去序列两端不可靠的碱基序列后 ,
便可获得目的片段。ITS1 和 ITS2 的边界可根据已发表的
植物 18S、5. 8S 和 26S rDNA 序列 ,以及近缘类群的 ITS1、
ITS2 序列来确定。
通过已获得 ITS 序列 ,可进行多方面研究 :1) 遗传距离
计算。种间距离常采用 pairwise uncorrected p2distance [41 ]或
Kimura222parameter distance ( K2P) [42 ] 模型计算 ;种内距离
常采用 K2P 距离、平均θ值和平均溯祖度 3 重参数来表
示 [42 ] 。其中平均θ值是指每个物种内不同个体间的平均
K2P 距离 ,目的是消除不同物种因采样个体数不均引起的偏
差 ;平均溯祖度是指物种内所有个体间最大的 K2P 距离 ,用
以反映种内最大变异范围 [43 ] 。2)系统学分析。采用标准的
分子系统学方法 (如 NJ 、U P GMA、ML)建立多种系统树 [43 ] ,
通过检验每个物种的单系性 ,即同一物种的不同个体能否紧
密聚类到一起 ,来判断其系统发生关系。建树过程中 ,各种
核苷酸替代同等加权 ,并进行自展分析 (boot st rap ,一般重复
1 000 次) ,以检验树拓扑结构的可靠性。3) 混淆品种分析。
在 GenBank 中检索混淆品种的 ITS 序列信息 ,排列后经
PAU P 分析 ,通过碱基差异比对和建树 ,分析待检测品种间
的差异。4)遗传多样性、物种分类等分析原理与系统学分析
相似。
2  ITS序列分析在药用植物种质资源研究中的应用
药用植物种质资源是中药生产的源头 ,尤其是野生近缘
植物和古老的地方种是长期自然选择和人工选择的产物 ,具
有独特的优良性状和抵御自然灾害的特性。但药用植物种
质资源作为一个庞大的家族体系 ,其发展更是受到气候、环
境及自身遗传等多种因素综合作用的影响。有的药用植物
在不同产地种系与区系的发展过程中 ,虽表现出种内或种间
药用功效的差异 ,但其外部形态、组织特征甚至化学成分却
极其相似 ,传统方法很难达到鉴别分离的目的。ITS 序列分
析通过比较 DNA 分子中 4 种碱基序列排列的变化 ,反映生
物体在遗传上的变异 ,从分子水平理清其遗传背景 [9 ] ,克服
了传统研究方法的弱点 ,提高了药用植物种质资源研究的水
平 ,为确定科学有效的保护策略和恢复措施提供依据。
2. 1  药用植物品种鉴定 :药材品种的鉴定是中药研究的重
要组成部分 ,长期以来我国中药材处于品种混乱和质量难以
保证的不利局面 ,很大程度上制约了中医药的安全有效及其
向现代化、标准化和国际化的发展。因此 ,采取科学的方法
对混淆生药品种及近缘生药品种进行鉴定具有重要的现实
意义。
张宏意等[10 ]研究不同产地何首乌的 ITS 片段遗传差异
性 ,分析该片段在何首乌道地性的 DNA 分子鉴别和野生资源
品种的鉴定及种质资源研究中的意义 ,序列间共有 17 个变异
位点 ,ITS序列可对何首乌的道地性做出鉴别 ,对野生资源品
种的鉴定具有较好的分辨性。张婷等[37 ] 采用限制性片段长
度 (PC2RFL P)方法获得部分石斛属植物 ITS片段的限制性图
谱 ,并用 ClaI 和 ApaL I 酶切束花石斛 Dendrobium chrysan2
thum Wall1 ex Lindl1 及其形态相似种的 PCR 扩增产物 ,SphI
酶切流苏石斛 D1 f imbriatum var1 oculatum Hook1 及其形态
相似种的 PCR 扩增产物。结果表明 , rDNA ITS 的 PCR2
RFL P可用于鉴别药用植物束花石斛、流苏石斛及其形态相
似种 ,并用此方法鉴定了市场上收集的 25 件商品束花石斛、
流苏石斛新药材的原植物。Yang 等[9 ]利用 PCR 技术对柴胡
属的北柴胡 B upleurum chinense DC1 和南柴胡 B1 scorzoneri 2
f olium Willd1 2 种道地药材及其 9 种混淆品种的 ITS序列 (约
600 bp)进行扩增分析 ,发现 ITS序列能够对收集到的所有材
料进行准确识别。Xue 等[44 ]利用 ITS 序列标签分析技术 ,创
立了 DNA 条形码在线快速鉴定方法 ,并对中国传统药用植物
地锦草 Euphorbia humi f usa Willd1 和斑地锦美洲地锦 E1
maculata L1 成功进行了鉴定。
除此 之 外 , ITS 序 列 分 析 还 在 巴 戟 天 Morinda
of f icinalis How、鼠尾草属 ( S alvia L1 ) 、钩藤属 ( Unvaria
Schred1 )等药用植物品种鉴定中得到应用 [45~47 ] 。
2. 2  药用植物亲缘关系确定 :亲缘关系相近的药用植物有
相似或相同的药效成分 ,这是寻找新药源植物的重要方式。
·394·中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
药用植物亲缘关系的鉴定一直是药用植物领域研究的热点。
赵海光等 [13 ]同时利用 ITS 和 t rnL2F 2 种序列对繁缕
S tel lari a media (L1 ) Cyr1 及其近缘种和鹅肠菜 M yosoton
aquaticum Moench1 的亲缘关系进行了研究 ,结果发现两者
均可用于繁缕及其近缘种的鉴别 ,且 ITS 是更为适宜的分子
标记。Artyukova 等 [48 ]通过对生长于俄罗斯远东地区的 8
种五加科植物进行 ITS 序列分析 ,建立了远东地区种及科内
其他种植物间的系统发生关系。Zeng 等 [49 ] 对以礼草属
( Keng yi l ia Yen et J1 L1 Yang) 17 种植物和拟鹅观草属
[ Pseudoroegneria (Nevski) A1 Love ] 、冰草属 ( A g rop y ron
Gaerton1 、) 鹅观草属 ( Roegneria C1 Koch1 ) 、杜威草属
( Douglas dewey a C1 Yen) 18 种植物进行了 ITS 序列测定 ,
发现以礼草属与杜威草属和冰草属具有更近的亲缘关系 ,并
且以礼草属植物在地理分布上分为 2 个小种群 ,也与其系统
发育关系相符 ,证实 ITS 序列分析是研究近缘种发生关系的
有效手段。Sudheer Pamidimarri 等 [50 ]利用 ITS 序列分析对
大戟科麻风树属 J at ropha curcas L1 植物的系统发育关系
和遗传分化等问题进行了研究。大量的研究都显示出 , ITS
序列分析在药用植物亲缘关系的研究中具有无可替代的先
进性和可靠性 ,必将成为今后研究的趋势。
2. 3  药用植物分类 :药用植物种类繁多 ,各物种所含有的化
学成分复杂 ,运用传统研究方法很难达到对其精确分类 ,存
在较多弊端和争议。为解决以上问题 ,国内外学者纷纷采用
ITS 序列分析对有争议的分类重新进行研究 ,以期得到更合
理的解释。
刘春生等 [27 ]利用 ITS 序列分析 ,对紫花前胡 Peuceda2
num decursivum Maxim1 分类位置进行了探讨 ,发现紫花前
胡并不属于前胡属 ( Peucedanum L1 ) ,应为当归属植物 ,紫
花前胡和白花前胡 P1 p raeruptorum Dunn 应分别入药。
L uo 等 [21 ]对来自亚洲东部、美洲北部和欧洲的 51 种乌头属
植物和 1 个亚属植物进行了 ITS 序列分析 ,研究了乌头亚属
(Subgen1 A conitum)的分类地位。结果显示 , ITS 拓扑结构
与乌头亚属的子群划分一致 ,确立毛莨科乌头亚属的分类地
位 ,并且也得到种子和花瓣等形态学特征的支持 ,纠正了传
统分类的错误。Bekel 等 [51 ]也通过测定 ITS 全序列长度 ,分
析菊科小葵子属 ( Guizotia Cass1 ) 5 种植物的系统发育关系
及分类地位。结果发现 , G1 scabra ssp1 scabra、G1 scabra
ssp1 schim peri 和 G1 vi l losa Sch1 Bip1 ex A1 Rich1 与栽培
种 G1 abyssinica Cass1 具有相同的起源 ,现行的小葵子属及
其亚属的分类关系应该被重新定义。
五味子科 (Schisandraceae) 是被形态和分子证据证明的
被子植物中最基部的分支之一 ,而在传统的分类系统中 ,五
味子科一直被认为是木兰亚纲中较特化的类群。两种截然
不同的观点导致五味子科的系统位置和在被子植物起源演
化上的意义也截然不同 ,使得该类群成为目前被子植物系统
学研究中的关键类群之一而备受关注。刘忠等 [16 ] 利用 ITS
序列分析重新研究了五味子科的分类关系 ,发现基于 ITS 序
列分析得到的分子证据与形态学、孢粉学证据是相吻合的 ,
为五味子科植物系统发育关系及分类关系的界定提供了新
的佐证。
当归属一直以来存在狭义当归属 ( A ngelica s. s. ) 和广
义当归属 ( A ngelica s. l . ) 之争 ,各属之间的关系非常混乱。
薛华杰等 [26 ]采用 PCR 直接测序法 ,测定了东亚地区狭义当
归属及其近缘共 7 属 40 种代表植物的核糖体 DNA ITS 序
列 ,并结合 GenBank 中相关植物的 ITS 序列 (含外类群 3
种) ,对上述问题进行了探讨。结果表明 ,东亚当归属中 , ITS
序列分析支持狭义当归属不是单起源的自然分类群 ,而应该
被分成若干组的观点 [52 ] ,同时对广义当归属划分提出了质
疑 ,建议将山芹属 ( Ostericum Hoffm1 )作为一个相对独立的
分类群处理 ,而不是合并到广义当归属。
2. 4  药用植物遗传多样性分析 :遗传多样性的高低是物种
生存能力的具体体现 ,物种 (或居群)的遗传多样性越高或遗
传变异越丰富 ,对环境变化的适应能力就越强 ,越容易扩展
其分布范围和开拓新的环境。
张富民等 [20 ]通过测定 nrDNA 的 ITS 序列 ,对我国横断
山地区紫乌头复合体 A conitum delavay i complex)进行遗传
多样性和系统发育的研究 ,认为紫乌头复合体不是一个单系
类群 ,可能经历了 3 次不同的起源。石志刚等 [53 ] 利用
nrDNA ITS 序列分析 ,探讨 18 份宁夏枸杞资源的遗传多样
性 ,获得了 18 种宁夏枸杞 nrDNA ITS 区碱基序列。结果显
示 , ITS 序列在宁夏枸杞中具有较多的变异位点 ,能够直观
展示 18 份宁夏枸杞的遗传变异和遗传多样性差异 ,为目前
较为混乱的枸杞资源的整理及分类提供了一定的参考。
Tsai 等 [54 ]根据 ITS 的序列差异确定了 12 种台湾石斛的遗
传关系 ,完整地分析了 12 种石斛及 2 种非石斛属植物的
ITS 序列 ,发现了 684 个特征 ,并依次分析了其遗传距离和
构建了系统发育树。Singh 等 [55 ]也利用 ITS 序列分析 ,检测
了鹰嘴豆 Cicer ariteinum L1 野生种与栽培种的遗传多样性
水平 ,并进一步评价了它们系统发育关系。
总体来看 ,目前仅就常用的一些药用植物资源开展了遗
传检测 ,而绝大多数药用植物遗传背景还未开展研究 ,因此
该方面的研究课题还相对较多 ,有兴趣的研究者可以投入到
该领域的研究中。
3  问题与展望
3. 1  ITS 分析存在的问题 : ITS 序列分析在药用植物种质
资源研究中取得的成果已得到国内外学者的肯定 [7 ,13 ] ,也为
解决一些长期存在的分类争议提供了令人信服的证据 [26 ] ,
但在现有的技术条件下 ,仍然存在一些缺点和不足。首先 ,
ITS 片段不仅可能来自种间或亚种间 ,也可能来自同一个种
中不同的个体 ,甚至来自同一个体的不同的操纵子 ,动植物
个体的基因组中含有许多个 rDNA 拷贝 ,其中的 ITS 长度可
能不同 ,即使 ITS 片段长度一致 ,其序列也有一定的差异 ,这
样就更增加了复杂性 [56 ] 。其次 , ITS 序列长度变异大 ,多数
物种扩增片段长度超过 1 100 bp ,需要使用中间引物才能扩
增获得整个基因 ,并且序列中还存在的 poly2G、poly2C 和
poly2A 等基团 ,也导致测序和序列分析困难 [57 ] 。最后 ,由于
·494· 中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
在进化过程中 ITS 承受的选择压力小 ,因此 ,发生突变的概
率大大增加 ,其片段的插入、缺失和替换是常见的 ,这些有利
于获得变异信息来分析物种的遗传多样性 ,但同时也不可避
免地增大了分析的误差 [58 ] 。另外 ,现在大多数研究工作还
只是初步的尝试 ,许多研究在样品的取样数量和代表性方面
也存在不同程度的缺陷 ,如我国一些特有的优良药物植物种
质资源青蒿 A rtermisia annua L1 、药用菟丝子等都还未引起
人们广泛关注。因此 ,不管是 ITS 技术方面还是研究内容方
面 ,都有待进一步深入和完善。
3. 2  ITS 分析应用展望 :尽管 ITS 序列分析存在着上述缺
陷和不足 ,在许多方面都还有待改进 ,但不可否认其在药用
植物研究中已取得了一系列成果。近年来又有较多学者将
该技术应用于药用植物致病菌和内生菌的检测中 [59 ,60 ] ,为
ITS序列分析在药用植物研究领域又开辟了新的思路和方
向 ;并且 , ITS 序列分析技术与其他分子标记技术的相互结
合 ,也弥补了 ITS 序列测定和位点特异性 PCR 鉴别的不
足 [37 ] ,尤其是 Kress 等 [61 ] 将 nr ITS 列为植物条形码候选片
段 ,更是肯定了其在植物研究中的重要性 ,也为其发展和应
用注入了新的活力。相信现代分子生物学技术的迅速发展 ,
试验技术的突破及药用植物 DNA 序列数据的不断积累 ,必
将促进 ITS 序列分析在药用植物研究领域得到更广泛的应
用。
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热熔压敏胶应用于中药贴剂的研究进展
王承潇1 ,汤秀珍2 3 ,沈平孃2 ,韩  伟1 3 ①
(11 华东理工大学 中药现代化工程中心 ,上海  200237 ; 21 国家中药制药工程技术研究中心 ,上海  201203)
摘 要 :热熔压敏胶是一种运用广泛的胶粘剂 ,以热熔压敏胶作为基质的贴剂成为近年经皮给药系统研究热点。
我国已把热熔胶粘剂的研究做为“十一五”发展的重点。从热熔胶贴剂的基质处方研究和贴剂的制剂评价两方面
入手 ,对热熔胶在中药贴剂中的应用进展进行全面和系统的论述 ,重点探讨了当前热熔胶在中药贴剂应用方面存
在的若干问题 ,并对今后热熔胶贴剂的研发方向做出了展望。
关键词 :热熔压敏胶 ;中药 ;贴剂
中图分类号 :R28313    文献标识码 :A    文章编号 :025322670 (2010) 0320496204
Advances in studies on hot melt pressure sensitive adhesive applied in patches
of Chinese materia medica
WAN G Cheng2xiao1 , TAN G Xiu2zhen2 , SH EN Ping2niang2 , HAN Wei1
(11 Engineering Center for Traditional Chinese Medicine Modernization , East China University of Science
and Technology , Shanghai 200237 , China ; 21 National Engineering Research Center
for Traditional Chinese Medicine , Shanghai 201203 , China)
Key words : hot melt p ressure sensitive adhesive ; Chinese materia medica ; patch
·694· 中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs  第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009208223                      
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划课题 (2008BAI53B075)3 通讯作者 汤秀珍 ,女 ,高级工程师 ,研究方向为中药新型给药系统。Tel : (021) 5080552224025  Fax : (021) 38953204
E2mail :xztang @nercmtcm. com