全 文 ：构比均具有较大差异。
3 2 夏枯草、山菠菜、硬毛夏枯草 3个不同品种的
夏枯草药材中咖啡酸、迷迭香酸、芦丁、槲皮素 4 种
成分的量及组分结构比均存在较大差异。其中安徽
夏枯草和江苏山菠菜 4种成分的量及组成结构比较
相似, 分别为 1 0 14 7 3 9 1 0 和 1 0
14 8 4 0 0 8。推测原因可能是江苏、安徽两产
地地域相近,生长环境相似。本实验结果说明不同
产地、不同品种夏枯草药材中的咖啡酸、迷迭香酸、
芦丁、槲皮素成分量及组成结构比存在着较大差异。
3 3 在分析的九产地夏枯草药材中,江西夏枯草中
咖啡酸、迷迭香酸、芦丁、槲皮素成分量均最高,但在
对 A549 和 SPCA1 细胞的药效评价中,其 IC50分
别为 58 43 和 52 91 g / mL [ 7] , 按照南美抗肿瘤药
物研发办公室制定的植物提取物细胞筛选实验
IC50 50 g 提取物/ mL 认为有效的标准[ 8] , 对肺
癌细胞的抑制效果并不明显。而安徽夏枯草和江苏
山菠菜此 4类成分量均较低,但 4类成分间的结构
比相似, 在对 A549 和 SPCA1 细胞的药效评价
中,均表现出了很强的肺癌细胞抑制活性。结合各
产地夏枯草属药材的药效分析 [ 7] , 单纯的某一类或
某几类成分的量较高并不一定具有更好的疗效, 即
量高低与疗效强弱并无明确的相关性, 而成分间的
结构比(各成分量比例)与药效具有密切相关性。这
表明这种组分结构比的差异可能是造成夏枯草药材
药效差异的根本原因。为保证临床疗效,夏枯草属药
材的质量应从成分量和结构比两方面进行严格控制。
参考文献:
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HPLC法同时测定救必应药材中紫丁香苷和长梗冬青苷
毕福钧1 ,钟顺好2 , 陈 蔼3 , 顾利红1*
( 1 广州市药品检验所,广东 广州 510160; 2 天祥(广州)技术服务有限公司, 广东 广州 510730;
3 广东药学院,广东 广州 510006)
摘 要:目的 建立 H PLC 同时测定救必应药材中紫丁香苷 ( sy ring in) 和长梗冬青苷 ( pedunculo side) 的方法。
方法 采用 Dikma C18色谱柱 ( 200 mm ! 4. 6 mm, 5 m) ; 乙腈水 ( 10 90) 为流动相, 梯度洗脱, 体积流量 1 0
mL / min,检测波长 210 nm。结果 紫丁香苷线性范围为 0 198 0~ 3 465 0 g , r= 0 999 9 ( n= 8) ,平均回收率为
97 1% ( n= 6) , RSD 为 1 9% ; 长梗冬青苷线性范围为 0 539 8~ 9 446 5 g, r= 0 999 9 ( n= 8) , 平均回收率为
99 2% ( n= 6) , RSD 为 1 6%。结论 本法操作简便、准确,具有良好的重现性, 为救必应药材的合理利用与质量
控制奠定基础。
关键词:救必应; 紫丁香苷; 长梗冬青苷; 高效液相色谱
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 08138603
救必应为冬青科植物铁冬青 I l ex rotunda
Thunb. 的干燥树皮, ∀中国药典#1977 年版一部曾
经有过收载,目前收载于∀广东省中药材标准#第一
册。救必应具有清热解毒、凉血止血、行气止痛等功
效,用于治疗癍痧发热, 感冒发热,乳娥, 脘腹胀痛,
腹泻,痢疾;外用治烧烫伤[ 1]。据文献报道, 救必应
药材中含黄酮、酚类、木脂素和皂苷等化合物[ 2] , 其
中紫丁香苷和长梗冬青苷是主要的有效成分[ 34] ,因
此,本实验采用 HPLC 法同时测定救必应药材中紫
丁香苷和长梗冬青苷的量, 该方法简便, 分离效果
∃1386∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091215 作者简介:毕福钧( 1982 % ) ,男,硕士,药师,主要从事药品检验和质量标准的研究工作。
T el: ( 020) 26282368335 Emai l: b fuju n@ hotmail. com
* 通讯作者 顾利红 T el: ( 020) 26282368335 Em ail : gulh@ gzfda. gov. cn
好,为更好地控制救必应药材的质量提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪 (紫外检测器,
脱气机,四元梯度泵, 化学工作站) ; CQF % I % 6 型
超声波清洗仪 (上海音波电科技公司) ; Mill % Q 超
纯水仪 ( Millpore)。
紫丁香苷对照品 (批号 111574200201) , 购自
中国药品生物制品检定所; 长梗冬青苷对照品 (由
广州市医药工业研究所提供, 其结构通过 IR、
HPLCMS、NMR 数据与文献数据对照进行了确
证,经 HPLC 归一化法测定, 质量分数为 99 7% )。
乙腈为色谱纯, 水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
10批收集于不同产地的药材均由广州市药品
检验所中药室刘柏英老师鉴定,见表 1。
2 方法与结果
2 1 色谱条件及系统适应性试验: Dikma C18色谱
柱 ( 200 mm ! 4. 6 mm, 5 m) ;柱温 30 & ;流动相
为乙腈 ( A )水 ( B) 梯度洗脱 ( 0~ 10 min, 10 %
A; 10~ 20 min, 10% ~ 40% A; 20~ 30 min, 40%
A) ;体积流量 1 0 mL/ m in;检测波长 210 nm ;进样
量 10 L。理论板数按紫丁香苷峰计算不低于
3 000,紫丁香苷、长梗冬青苷与相邻峰分离度均大
于 1 5。
2 2 对照品溶液制备: 取紫丁香苷对照品、长梗冬
青苷对照品适量,精密称定,加 50% 甲醇制成分别
为 0 1 mg / mL 紫丁香苷, 0 3 mg/ mL 长梗冬青苷
的混合溶液。
2 3 供试品溶液制备:取药材粉末 (过 3号筛) 约
0 1 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入 50%
甲醇 25 mL,摇匀, 称定质量,超声处理 30 min (功
率 250 W, 频率 40 kHz) , 放冷, 再称定质量, 用
50% 甲醇补足减失的质量, 摇匀, 滤过,取续滤液,
即得。
2 4 标准曲线绘制:分别精密吸取混合对照品溶液
(紫丁香苷的质量浓度为 99 0 g / mL, 长梗冬青苷
的质量浓度为 269 9 g/ mL) 2、5、10、15、20、25、30
和 35 L 进样,测定其峰面积。分别以进样量 (g)
为横坐标, 峰面积为纵坐标,绘制标准曲线, 得紫丁
香苷回归方程: Y= 3 074. 6 X + 61 13, r= 0 999 9;
长梗冬青苷回归方程: Y = 316. 42 X + 2 803 9, r=
0 999 9。结果表明, 紫丁香苷和长梗冬青苷分别在
0 198 0~ 3 465 0 g 和 0 539 8~ 9 446 5 g 与峰
面积呈良好线性关系。
2 5 精密度试验: 精密吸取混合对照品溶液 10
L,重复进样 6次,在上述色谱条件下测定峰面积,
紫丁香苷、长梗冬青苷峰面积的 RSD 分别为
0 5%、0 3%。
2 6 重现性试验: 取同一批样品(编号 1) , 精密称
取 6份,按 2 3项下操作,在上述色谱条件下测定紫
丁香苷、长梗冬青苷的量, 结果紫丁香苷、长梗冬青
苷的质量分数分别为 2 3%、8 9%, RSD 分别为
1 5%、1 1%。
2 7 稳定性试验:取同一供试品溶液, 在室温下放
置,分别于 0、2、4、8、12、16、24 h 测定紫丁香苷、长
梗冬青苷的量, RSD 分别为 0 3%、1 9% ( n= 7) ,
表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2 8 加样回收率试验:精密称取 6份已测定紫丁香
苷、长梗冬青苷的同一批样品(编号 1) 0 05 g,置具
塞锥形瓶中, 分别精密加入长梗冬青苷对照品 4
mg,紫丁香苷对照品溶液 25 mL ( 46 65 g/ mL) ,
依法制成供试品溶液, 在上述色谱条件下测定, 紫丁
香苷的平均回收率为 97 1%, RSD 为 1 9%; 长梗
冬青苷的平均回收率为 99 2%, RSD 分别为
1 6%。
2 9 样品测定: 分别吸取对照品溶液与供试品溶
液,在上述色谱条件下测定,以外标法计算各样品中
紫丁香苷、长梗冬青苷的量, 结果见表 1, HPLC 色
谱图见图 1。
表 1 不同产地救必应中紫丁香苷和长梗冬青苷量的
测定结果 ( n= 2)
Table 1 Determination of syringin and pedunculoside
in Ilicis Rotundae Cortex from different
habitats ( n= 2)
编号 产 地 质量分数/ %紫丁香苷 长梗冬青苷
1 广东阳山 2 3 8 9
2 广东肇庆 3 1 7 0
3 广东翁源 2 9 12 0
4 广东连州 1 3 11 8
5 韶关曲江 2 9 9 5
6 广西灵山 1 7 8 9
7 广西博白 3 3 6 3
8 福建 1 3 6 8
9 江西赣州 1 0 2 5
10 湖南永州 2 3 8 9
3 讨论
3 1 救必应药材及其制剂多以紫丁香苷为测定的指
标[ 5] ,也有单独测定救必应药材中长梗冬青苷量的报
道[ 6]。本实验首次建立同时测定救必应中紫丁香苷
和长梗冬青苷量的高效液相色谱法, 方法简便,准确,
重现性好,能够更全面地控制救必应药材的质量。
∃1387∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
1紫丁香苷 2长梗冬青苷
1sy ringin 2pedunculoside
图 1 对照品( A)与样品( B) HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference substance ( A)
and sample ( B)
3 2 检测波长的选择: 通过对紫丁香苷、长梗冬青
苷对照品溶液进行紫外波长扫描, 结果表明, 两者在
210 nm 波长处均有较强的吸收, 因此选择 210 nm
紫外检测波长。
3 3 实验中比较了不同提取溶剂 (甲醇、乙醇、水、
20% 甲醇、50% 甲醇和 80% 甲醇) 以及不同提取
方法 (超声提取、加热回流提取和索氏回流提取)
对紫丁香苷和长梗冬青苷的提取效果, 结果显示,
50% 甲醇超声提取的效果最理想; 另外, 对超声提
取时间( 15、30、45、60m in)进行了考察,结果表明
超声提取 30 min 即可将两个成分提取完全。因此,
最终确定供试品溶液的制备方法为 50% 甲醇超声
提取 30 min。
3 4 从样品的测定结果来看,不同产地救必应药材
中紫丁香苷和长梗冬青苷的量差异较大, 这可能与
救必应的生长环境、生长时间、药用部位(枝皮或树
干皮)等因素有关。
致谢:方法研究中使用的具柄冬青苷对照品由原广
州市医药工业研究所刘国樵高级工程师及原广州市
药品检验所朱品业主任药师提供,特此感谢。
参考文献:
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多种药用裸子植物中双黄酮的定量测定
鲁来凤,曹 园,王 强*
(中国药科大学,江苏 南京 210009)
摘 要:目的 用 H PLC 法同时测定多种药用裸子植物中穗花衫双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮的量。方法
采用Hanbon Lichr ospher C18 ( 150 mm ! 4 6 mm, 5 m)柱, 甲醇0 1%甲酸水梯度洗脱,检测波长 337 nm, 体积流
量 1 0 mL / min, 柱温 30 & 。结果 所测样品中双黄酮类成分的量差异大, 其中,穗花杉双黄酮的量在 0 08~ 4 61
mg / g; 扁柏双黄酮的量在 0 03~ 4 68 mg / g ;银杏双黄酮的量在 0 10~ 3 03 mg/ g。穗花杉双黄酮在所测样品中存
在比较普遍,而银杏双黄酮则相对较少。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论 本方法结果准确、灵
敏度高、重现性好, 可作为部分药用裸子植物中双黄酮类成分的质量控制定量方法。
关键词:药用裸子植物; 穗花杉双黄酮;扁柏双黄酮; 银杏双黄酮
中图分类号: R284 2 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 07138803
裸子植物分布在世界各地, 特别是北半球亚热
带高山地区及温带至寒温带地区。药用裸子植物的
化学成分主要有黄酮类、生物碱、有机酸及甾酮等。
其中,黄酮类及双黄酮类成分是裸子植物的特征性
成分[ 1] 。双黄酮具有抗肿瘤、抗病毒、消除自由基等
药理作用[ 2~ 4] ,提示该类化合物在治疗心血管疾病
及抗肿瘤方面具有广阔的前景。因此, 合理开发利
用裸子植物中双黄酮类成分资源具有重要的意义。
虽然裸子植物的分析研究已有报道, 但药用裸子植
物中双黄酮的定量测定未见系统报道, 因此本实验
采用 HPLCDAD方法考察了多种不同药用裸子植
物中双黄酮类成分量差异,为今后利用药用裸子植
物中双黄酮类成分提供科学依据。
1 仪器与试药
∃1388∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091207 作者简介:鲁来凤( 1981 % ) ,女,湖南常德人,硕士研究生,从事中药及其制剂分析。T el: 15850686892 Email : lulaifeng520@ 126 com
* 通讯作者 王 强 T el: ( 025) 83271390 Emai l: qwang49@ sohu com