全 文 ：用的除蛋白方法如 Sevag 法、三氯乙酸法、酶法等并
不能彻底去除去蛋白质 ,只能部分除去游离的蛋白
质 ,这些方法在不同程度上都会造成多糖2蛋白复合
物的损失 ,还可能影响到多糖的得率或活性。本实
验通过比较筛选出了女贞子多糖除蛋白的优选工艺
为 :以 1 倍量的 10 %三氯乙酸溶液除蛋白 1 次 ,静
置 2 h 后离心。该方法是否影响到女贞子多糖的结
构及活性 ,还有待于进一步深入的研究。
参考文献 :
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[J ]1中药药理与临床 ,2001 , 17 (2) : 112121 [ 2 ] 　张振明 ,蔡曦光 ,葛 　斌 ,等 1 女贞子多糖的抗氧化活性研究[J ]1 中国药师 ,2005 ,8 (6) : 48924911[ 3 ] 　张振明 ,葛　斌 ,许爱霞1 女贞子多糖的抗衰老作用[J ]1 中国药理学与毒理学杂志 , 2006 ,20 (2) : 10821111[ 4 ] 　Wang Q J , Yu H , Zong J , et al1 Determination of t he compo2sition of Chinese L i gust rum luci dum polysaccharide by capil2lary zone elect rophoresis wit h amperomet ric detection [J ]1 JPharm B iomed A nal , 2003 , 31 : 47324801[5 ] 　中国科学院上海药物所1 中草药有效成分的提取与分离[ M ]1北京 :化学工业出版社 ,19831[6 ] 　张惟杰1 复合多糖生化研究技术 [ M ]1 上海 :上海科学技术出版社 ,19871[ 7 ] 　王文平 ,郭祀远 ,李　琳1 考马斯亮蓝法测定野木瓜多糖中蛋白质的含量[J ]1 食品研究与开发 , 2008 , 29 (1) :11521171
莲必治注射液中细菌内毒素检查法的研究
陈宜鸿 ,白 　林
①
(解放军总医院医学保障部 ,北京 　100853)
摘　要 :目的 　建立莲必治注射液细菌内毒素检查 (BET)方法。方法 　参照《中国药典》2005 年版细菌内毒素检测
方法及其指导原则中干扰试验的基本原理和检测方法。结果 　莲必治注射液稀释 25 倍 (2 mg/ mL) ,采用灵敏度
01125 EU/ mL 的鲎试剂经干扰实验无增强、抑制作用。结论 　实验具有准确性、可靠性 ,细菌内毒素检查法适用
于检测莲必治注射液中的内毒素。
关键词 :莲必治注射液 ;鲎试剂 ;细菌内毒素检查
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320410202
　　莲必治注射液具有清热解毒、抗菌消炎的功效 ,
用于细菌性痢疾、肺炎、急性扁桃体炎等。细菌内毒
素检测法 , 具有灵敏 , 快速 , 简便易行等诸多优
点[1 ,2 ] ,因此本实验探讨了采用细菌内毒素检查法
检测莲必治注射液中细菌内毒素的可行性。
1 　材料与仪器
　　细菌内毒素工作标准品 (10 EU/ 支 ,厦门鲎试
剂厂 , 批 号 050301 ) ; 鲎 试 剂 ( 灵 敏 度 01125
EU/ mL ,厦门市鲎试剂实验厂有限责任公司 ,批号
051138 ;灵敏度 01125 EU/ mL ,湛江安度斯生物有
限责任公司 ,批号 0503070) ;细菌内毒素检查用水
(B ET 水 ,2 mL/ 支 ,湛江博康海洋生物有限公司 ,内
毒素 < 01005 EU/ mL ,批号 050804) ;莲必治注射液
(2 mL ∶011 g ,无锡山禾药业股份有限公司 ,批号
050302、050517、050912) 。
　　超净工作台 (四达净化技术研究所) ;电热恒温
水浴锅 (上海沪南科学仪器联营厂) ;旋涡混合器 (江
苏海门市麒麟医用仪器厂) 。
2 　方法与结果
211 　鲎试剂 ( TAL ) 灵敏度 (λ) 复核试验 :按《中国
药典》2005 年版附录细菌内毒素检查法复核试验用
TAL 的灵敏度 ,2 批 TAL 灵敏度复核结果显示λc
均在 015λ～210λ,均符合《中国药典》规定 ,可用于
细菌内毒素检查 ,并以其标示值为灵敏度[1 ] 。
212 　供试品细菌内毒素限值 (L )的确定
21211 　按人用最大剂量确定 :《中国药典》2005 年
版规定注射剂的致热阈值 ( K)为 510 EU/ (kg ·h) ,
根据临床用法 ,人一次应用最大剂量 ( M ) 为 600
mg/ (60 kg ·h) ,则其细菌内毒素理论限值 ( L′) 为 :
L′= K/ M = 510/ (600 ×60) = 015 EU/ mg。
21212 　按静脉滴注用药细菌内毒素总限量确定 :根
据本品临床用法 ,成人一次 500～600 mg ,溶于 250
mL 019 %氯化钠注射液中 ,静脉滴注 ,按 600 mg 莲
必治注射液与 250 mL 019 %氯化钠注射液 (细菌内
毒素限值 LNaCl为 015 EU/ mL)静脉滴注作为 1 h 的最
大剂量计算 ,混合药液的细菌内毒素总限量应小于或
等于《中国药典》规定的 K 值 (510 EU/ kg ·h) ,即
(600 mg ×L + 250 mL ×L NaCl ) / (60 kg ·h) ≤K ,计
·014· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009207215　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
算得供试品的细菌内毒素理论限值 ( L ) 为 : L ≤
01292 EU/ mg ,小于人用最大剂量确定的细菌内毒
素理论限值 ,考虑到除联合药液可能存在的细菌内
毒素的累加因素外还存在环境等污染因素 ,故确定
01290 EU/ mg 为供试品细菌内毒素限值。
213 　供试品最大有效稀释倍数 (MVD)的确定 :按公
式 MVD = CL/λ确定 MVD。将供试品加入 250 mL
019 %氯化钠注射液中 ,根据本品说明书 ,供试品的质
量浓度为 C = 011 g/ 2 mL = 50 mg/ mL ,λ= 01125
EU/ mL 时 ,MVD = 50 ×01290/ 01125 = 116 (倍) 。
214 　干扰初筛试验 :按鲎试剂灵敏度复核试验 ,取
原液适量 ,并用 B ET 水分别将不同批号的莲必治注
射液稀释成原液 5、10、20、25 倍稀释液 ,得质量浓度
为 10、5、215、2 mg/ mL 的样品系列溶液 ,用不同稀
释倍数的供试液将细菌内毒素工作品制成 2λ的内
毒素溶液 ,并用标示灵敏度为 01125 EU/ mL 的不
同厂家的鲎试剂与之反应 ,每一质量浓度做二管 ,同
时做阳性 ( Pe)和阴性 (Nc)对照液 ,结果见表 1。
表 1 　干扰初筛试验结果
Table 1 　Results of preliminary interference test
批 号 系列
样品溶液质量浓度/ (mg ·mL - 1 )
10 5 21 5 2 阴性对照(NC) 阳性对照( PC)
050302 NPC - - - - - - - -
NPC - - - -
NPC - - - - - - - - - - + +
PPC - - + + + + + +
NPC - - - - - - - -
PPC - - + + + + + +
215 　干扰试验 :由干扰初筛试验可知 ,样品溶液浓
度较高时对鲎试剂有抑制作用 ,只有将样品稀释才
可消除干扰 ,所以在干扰试验时用细菌内毒素检查
用水将 3 个批号的莲必治注射液分别稀释成 1 ∶
20、1 ∶25、1 ∶50 系列质量浓度 ,将细菌内毒素工作
品分别稀释成 2λ、1λ、015λ、0125λ系列质量浓度与
鲎试剂进行干扰试验 ,结果见表 2。结果表明 ,其
Es 在 01 5λ～210λ,其 Et 在 015 Es～210 Es ,对供试
品进行 25 倍及以上稀释可消除干扰。
表 2 　莲必治注射液干扰试验结果
Table 2 　Results of interference test for Lianbizhi Injection
批　号
质量浓度/
(mg ·mL - 1)
细菌内毒素 (批号 050301、0503070)浓度/ ( EU ·mL - 1)
01 25 01 125 01 062 5 01031 252 阴性对照(NC) E 值/( EU ·mL - 1)
050302 215 + + + + + + - - - - - - - - - - - - - - 01 177 Et
210 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
110 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
050517 215 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
210 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
110 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
050912 215 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
210 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
110 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
BET 水 + + + + + + + + - - - - - - - - - - - - 01 125 Et
216 　供试品细菌内毒素检查 :取 3 个批号的样品 ,
分别用 B ET 水稀释 25 倍 , 使用灵敏度 01125
EU/ mL的鲎试剂按《中国药典》2005 年版细菌内毒
素检查法检查 ,并做样品阳性对照 ,结果见表 3 ,均
符合规定。
表 3 　样品细菌内毒素检查结果
Table 3 　Results of bacterial endotoxin test
for Lianbizhi Injection
样品批号 样品 阳性对照 样品阳性对照 阴性对照
050302 - - + + + + - -
050517 - - + + + + - -
050912 - - + + + + - -
3 　讨论
由干扰试验结果可知 ,样品经稀释 20 倍时对实
验结果仍有干扰 ,所以本品须经 25 倍及以上稀释
后 ,使用灵敏度为 01125 EU/ mL 的鲎试剂对细菌
内毒素的检查无干扰 ,本实验采用了不同厂家的鲎
试剂 ,对不同批号的样品进行干扰试验 ,均得到无干
扰结果 ,据此建立的细菌内毒素检查法可行 ,且简
洁、准确、快捷。临床上本品静脉滴注药液如有细菌
内毒素污染 ,可以参考本方法进行检测。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S]1 二部1 20051
[ 2 ] 　肖贵南 ,陆惠文 ,宜　全1 天芎注射液干扰鲎试验检查的研究
[J ]1 中草药 ,2007 ,38 (7) :1023210251
·114·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月