全 文 :合杂志 ot|{y oykttl }y{u q
≈y 敖清田 q黄帝内经k素问#灵枢白话全译藏本l q成都 }四川科学
技术出版社 ot||| qt q
≈z 顾文聪 o赵伟康 o韩志芬 q阴虚火旺更年期综合征患者血浆过
氧化脂质及性激素的变化 q中医杂志 ot||s ok|l }wx q
≈{ 程国钧 o刘建立 o张 全 q绝经后口服尼尔雌醇的前瞻性研
究 q中华妇产科杂志 ot||v ot{k|l }xvw q
≈| 程国钧 o刘建立 o叶惠方 q尼尔雌醇防治绝经后妇女血脂紊乱
的前瞻性研究 q中华妇产科杂志 ot||t otykyl }vw| q
≈责任编辑 古云霞
莲必治注射液k穿心莲内酯l
对免疫功能的调节作用
彭光勇 o周 峰 o丁如宁 o李焕娣 o姚
k南京医科大学 微生物与免疫学教研室 o江苏 南京 utssu|l
≈ 摘要 目的 }研究穿心莲内酯对免疫功能的影响 o探索其发挥治疗作用的免疫机制 ∀方法 }采用生物活性法和
∞≥法检测用有效成分为穿心莲内酯的莲必治注射液处理人外周血单个核细胞上清中的 ƒ2Αoƒ2Χo× ƒ2Αo2
{含量 ~用单核巨噬细胞吞噬鸡红细胞来研究其促吞噬功能及用 ⁄ 释放法检测其对 细胞杀伤活性的影响 ∀结
果 }和空白对照组比 o莲必治注射液作用外周血单个核细胞能显著诱导 ƒ2Αoƒ2Χo× ƒ2Α产生k Π s qsxl o但对
2{诱生无明显影响 o甚至轻度抑制 ∀莲必治注射液能提高豚鼠腹腔单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率k Π s q
sxl及提高人外周血中 细胞杀伤 xyu细胞的活性k Π s qsxl ∀结论 }穿心莲内酯是一种具有调节机体非特异免疫
功能的免疫刺激剂 o通过对 o 5 及细胞因子分泌的影响而发挥免疫调节作用 ∀
≈关键词 穿心莲内酯 ~莲必治注射液 ~单核巨噬细胞 ~细胞 ~细胞因子 ~免疫功能
≈中图分类号 u{x qy ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussulsu2stwz2sw
穿心莲为爵床科植物 o其主要有效成分是穿心
莲内酯 !新穿心莲内酯 !去氧穿心莲内酯及脱水穿心
莲内酯≈t ou ∀临床上除用于退热 !消炎 !保肝 !降压 !
引产及糖尿病等治疗外 o还用于抗各种细菌 !病毒引
起的感染 ∀莲必治注射液 o是利用穿心莲内酯与硫
酸氢钠而制备的有效单体k≤us vs x#¤≥wl o药
理研究及临床应用表明其具有抗菌 !抗病毒等作用 ∀
本文从免疫学角度研究了其作用于豚鼠腹腔中单核
巨噬细胞对吞噬功能 !人的外周血单个核细胞对
细胞杀伤活性及 ƒ2Αo2{ o× ƒ2Α细胞因子
诱生等影响 o为进一步探讨穿心莲内酯发挥杀菌抗
病毒作用的确切机制提供依据 ∀
1 材料与方法
1 q1 细胞
外周血单个核细胞k°
≤¶l }取健康人外周血 o
肝素kyu qx #°2tl抗凝 oƒ¬¦²¯¯分离 o在淋巴细胞生
≈收稿日期 usst2sx2vt
≈作者通讯 电话 }sux2yyyu|st o ∞2°¤¬¯}ª¼³¨ ±ª ±°∏q¨§∏q¦±
长液中培养 ∀培养条件 }us h 胎牛血清的 °2
tyws o含谷氨酰胺 u °°²¯ #pt o青 !链霉素各
tss ∏#°p t ∀人皮肤纤维母细胞 o本室常规方法制
备 ~xyu细胞 !|u|细胞 o本室保存 o均在 ts h胎牛血
清的 ° tyws中生长 ∀鸡红细胞悬液 }取鸡血 o
肝素kyu qx #°p tl抗凝 o无菌生理盐水洗涤后配
成 ts h红细胞悬液 ∀
1 q2 药品
莲必治注射液k
l o为亚硫酸氢钠穿心莲内
酯单体 xs °ªq°p tk无锡山禾集团健宏药业有限
公司提供 o生产批号 |{s|stl ∀
1 q3 病毒
ƒ系新城鸡瘟病毒k⁄∂l o用于诱生干扰素 o滴
度为 tu{血凝单位#°p t ~≥¬±§¥¬¶病毒为测定干扰
素时的攻击病毒 o均为本室保存 ∀
1 q4 动物
取 vxs ∗ wss ª成年豚鼠 xs只 o随机分成 x组 o
每组 ts只 o南京农业科学院提供 ∀
1 q5 其他试剂
#zwt#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qu
ƒ ¥¨qoussu
硝基氯化四氮唑 !氧化型辅酶 ´k⁄n l o吩嗪
二甲酯硫酸盐 k° ≥l o乳酸钠 o°2ws oµƒ2Αoµ
× ƒ2Αo放射菌素 ⁄o°≥ o × × o均为 ≥¬ª°¤公司产
品 ~2{ ∞≥ 检测试剂盒为美国 ±¨½¼°¨公司产
品 ~× ƒ2Αoƒ2Α单克隆抗体由第四军医大学金伯
泉教授提供 ∀
1 q6
对细胞因子的诱生
用淋巴细胞生长液调 °
≤¶为 x ≅ tsy 个#
°p t ot°r孔加入 uw孔板 o并分别加入不同浓度
的
o同时设定正常对照 °
≤¶组 ∀其中在
ƒ2Α检测组中增设 ⁄∂ ktu{ 个血凝单位l及
⁄∂ n
kxs Λªq°p tl诱生对照组 ∀ƒ2Χ检
测组中分别加入 ° tss Λª# °p t ∀ × ƒ2Α组检
测中增设
n °≥kv Λª# °p tl及 °≥对照组 ∀
vz ε ox h ≤ u培养 o于不同时间收集上清 p {s ε 保
存 o用于检测 ƒ2Αoƒ2Χo× ƒ2Αo2{ ∀
1 q7 细胞因子的检测
ƒ2Αoƒ2Χ利用生物活性法 o即 ≥¬±§¥¬¶病毒
攻击人皮肤纤维母细胞病变抑制试验检测≈v o当病
毒对照孔的细胞病变效应k≤°∞l达 7 ∗ 8 时 o判读
结果 o对应的稀释倍数的倒数为活性单位 ∀用于
ƒ2Α检测的上清液用 y °²¯#p t ≤¯酸化 ow ε zu
«后 o用 ¤ 调 ³ 值 z qs ∗ z qu再检测 ∀ƒ2Χ
检测的上清用 ƒ2Α单抗中和后再测其效价 ∀2{
利用双抗体夹心 ∞≥ 法检测 ∀ × ƒ2Α利用生物
活性法 |u|细胞微量细胞毒试验检测≈w ∀结果判
定 }
细胞毒k h l kt p实验组 lr对照孔 ≅ tss h
× ƒ 活性单位为 xs h细胞存活时的最高稀释
孔 值kxzs ∗ yvs ±°l在标准曲线上对应值再乘以
稀释倍数 ∀ƒ2Αo× ƒ2Α利用单克隆抗体中和试验
进行验证 ∀
1 q8 单核巨噬细胞吞噬功能测定
将豚鼠分成 w组 o将对应各组分别腹腔注射不
同浓度的
o连续 v §o每天 t次 o每次 t ° o同时
设定生理盐水对照组 o第 w 天各组注射 x h 淀粉 t
°ot «后注射鸡红细胞 t °o再间隔 t«将豚鼠处
死 o吸取腹腔渗出液涂片 o瑞氏染色后计数吞噬百分
率 ∀
1 q9 细胞杀伤活性测定
用 ⁄ 释放法检测 细胞杀伤活性≈x ∀将
°
≤¶调至所需浓度 o分别加入 w 组不同浓度的
及 ƒ2Αkt sss # °p tl o使细胞终浓度为 t
≅ tsy个#°p t ∀用经台盼蓝排除试验测定活力的
xyu细胞kt ≅ tsx个r°l作为靶细胞 o效靶比为 tsΒ
t ∀自然释放组以培养液代替效应细胞 o最大释放组
以 t h °2ws代替效应细胞 ∀
自然杀伤率k h l k实验组 值 p 自然释放组 值lr
k最大释放组 值 p自然释放组 值l ≅ tss h
1 q10 统计处理
采用 ≥≥统计软件 o各实验组之间的差异性以
两样本均数之间比较 τ检验 ∀ Π s qsx o有统计学
意义 ∀
2 结果
2 q1
诱导 °
≤¶产生 ƒ2Α
xs Λª# °p t
o⁄∂ 及
n ⁄∂ 作用
°
≤¶w{ «均能显著诱生 ƒ2Αo与对照组相比有
统计学差别 ∀采用 u ≅ u析因设计的方差分析 o
组与 ⁄∂ 组之间的交互作用 ƒ tu q|| oΠ
s qssx o说明
与 ⁄∂ 具有交互协同诱导 ƒ2Α
产生 o
n ⁄∂ 组诱生 ƒ2Α高于
及 ⁄∂
组单独作用k见表 tl ∀利用 ƒ2Α单克隆抗体能明
显中和 ƒ2Α所发挥的抗病毒作用 o证实产生的
ƒ为 ƒ2Α∀
表 t
作用 °
≤¶w{ «诱生 ƒ2Αk ξ ? σl
组别 ν ƒ2Αr#°p t
组 vs ty qyz ? ts qzwtl
⁄∂ 组 vs tvz qw{ ? tsv q{ttl
n ⁄∂ 组 vs utt qxy ? t{x qxxtl
°
≤¶对照组 vs t qys ? t qwu
注 }
xs Λª#°p t o与 °
≤¶对照组相比 tl Π s qst
2 q2
诱导 °
≤¶产生 ƒ2Χ
ktss Λªq°p tl作用于 us份 °
≤¶zu «
后收集上清 o经 ƒ2Α单抗中和后再测 ƒ2Χ∀结
果
n ° n °
≤¶组 ƒ2Χ含量为kwy q| ?
uw qwyl # °¯ p t o° n °
≤¶对照组 ƒ2Χ含量
为kux qvs ? ux qxwl #°p t o两组诱生 ƒ2Χ存在
显著差异k Π s qsxl o说明
能诱生 ƒ2Χ产生 ∀
2 q3
作用于 °
≤¶对 2{诱生无明显影响
ktss Λª# °p tl作用于 ts份 °
≤¶w{ «
后 o用 ∞≥ 法检测细胞上清中 2{ 水平 ∀结果
组 2{为ktx qv ? w q|l ³ª#°p t o°
≤¶对照
组为kty q| ? w qtl ³ª# °p t o尽管两者无统计学差
异 o但结果对比发现
可轻度抑制 °
≤¶分泌
#{wt#
第 uz卷第 u期
ussu年 u月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qu
ƒ ¥¨qoussu
2{ ots 份标本中有 { 份上清 2{ 水平低于对应
°
≤¶对照组 ∀
2 q4 不同浓度
诱导 °
≤¶产生 × ƒ2Α
´ oµ o¶组及
n °≥ ´ oµ o¶组 o°≥
对照组作用 °
≤¶均能诱导 × ƒ2Αo和 °
≤¶对
照组相比存在显著差异k见表 ul ∀在各种药物浓度
组中 uss oxs Λª#°p t诱生的 × ƒ2Α作用强于中间
浓度 tss Λª#°p t组 ∀同时 o°≥和
具有协同
诱生 × ƒ2Αo且
低浓度组和 °≥ 协同产生
× ƒ2Α高于高浓度组 ∀用 × ƒ2Α单克隆抗体能完
全中和其对 |u|细胞的细胞毒作用 o证明产生的
× ƒ为 × ƒ2Α∀
表 u
作用 °
≤¶uw «后
产生 × ƒ2Α情况k ξ ? σoν tsl
组别
浓度r
Λª#°p t
°≥浓度r
Λª#°p t
× ƒ活性r
#°p t
n °≥ ´组 uss v x| q| ? tv qsul
n °≥ µ组 tss v wx qv ? uv qytl
n °≥ ¶组 xs v yt qy ? ws qxtl
´组 uss ) xt qx ? tv qsul
µ组 tss ) vw qw ? { q|ul
¶组 xs ) ws qy ? tx qsul
°≥对照组 ) v vu q{ ? us q|tl
°
≤¶对照组 ) ) z qs ? t qz
注 }与 °
≤¶对照组相比tl Π s .sx , u) Π s qst
2 q5 不同浓度
对豚鼠巨噬细胞吞噬功能的影
响
和生理盐水对照组相比 o
µ o¶ o·组能显
著提高豚鼠腹腔单核巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百
分率k Π s qsxl o但 ´组和对照组相比无差异k见表
vl ∀
表 v
对豚鼠巨噬细胞
吞噬功能的影响k ξ ? σoν tsl
组别
浓度r°ª#°p t 吞噬率r h
生理盐水组 zy qyx ? v qs{
´组 y qux z{ qxs ? w qwt
µ组 tu qx {x q{u ? w qsutl
¶组 ux {{ qvz ? y qtzt oul
·组 xs {x qvs ? x qvttl
注 }和生理盐水组相比tl Π s qsx o与
´组相比ul Π s qsx
2 q6 不同浓度的
对 °
≤¶中 细胞杀伤
活性的影响
´ oµ o¶ o·组及 ƒ2Α处理过的外周血
单个核细胞 o均能提高其中 细胞杀伤 xyu细胞
的活性 o与空白对照组相比有显著差异 o但各药物组
之间无差异k见表 wl ∀
表 w
对 °
≤¶中
细胞杀伤活性的影响k ξ ? σoν tsl
组别
浓度r
Λªq°p t
自然杀伤率r h
空白杀伤对照组 z qsz ? u qty
Α2干扰素对照组 ts q{t ? v qtutl
´组 ux ts qus ? v qyztl
µ组 xs ts q{| ? u qyutl
¶组 tss tt qut ? u qzztl
·组 uss tt quw ? w quvtl
注 }和空白杀伤对照组相比 tl Π s qst
3 讨论
是以穿心莲中含量最高的穿心莲内酯与亚
硫酸氢钠作用而制得的单体灭菌水溶液 o临床上已
用于治疗细菌性痢疾 !胃肠炎 !肺炎 !扁桃体炎 !胆囊
炎等各种由病毒 !细菌感染引起的炎症 ∀本实验结
果发现一定浓度的
能显著促进豚鼠单核巨噬
细胞对鸡红细胞的大吞噬功能 ~w组不同浓度的莲
必治注射液均能显著提高人 °
≤¶中 细胞杀
伤活性 o其作用同 tsss Α2干扰素对照组相似 ∀国
外学者报道穿心莲乙醇提取物中二萜穿心莲内酯和
新穿心莲内酯能明显增加单核巨噬细胞游走指数及
对大肠杆菌的吞噬作用 o并对正常小鼠淋巴细胞有
丝分裂反应明显增强 o表明其是较强的免疫刺激
剂≈y ∀这些结果提示
临床发挥作用机制可能
与其有效成分穿心莲内酯激活 o 5 o发挥非特
异性的免疫功能密切相关 ∀
穿心莲内酯除对效应细胞直接作用外 o还通过
刺激机体产生各种免疫活性物质而发挥作用 ∀我们
研究发现 o
能诱导人 °
≤¶产生 ƒ2Αoƒ2
Χo× ƒ2Α∀ƒ2Αoƒ2Χ具有抗病毒 !抗肿瘤和免
疫调节作用 ∀ × ƒ2Α也具有抗病毒抗细菌效应 o是
重要的非特异性免疫和炎症反应的主要因子 ∀ƒ2
Αo× ƒ2Α主要由 5 o等细胞分泌 oƒ2Χ主要
由活化的 × 细胞产生 o它们都可促进 5 o发挥
效应 o并且在体内具有协同作用≈z ∀这些效应因子
和细胞相互作用形成一个网络 o从而提高机体的非
特异性和特异性免疫功能 ∀2{ 是重要的趋化因
子 o可趋化激活中性粒细胞 o促进中性粒细胞的溶酶
体活性和吞噬作用≈{ ∀本实验中
对 °
≤¶中
2{无明显影响 o甚至有轻度抑制作用 o其可能是
降低 2{从而降低中性粒细胞向血管中趋化 o
#|wt#
第 uz卷第 u期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²qu
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促进中性粒细胞向炎症部分布 o从而清除局部炎症 ∀
总之 o穿心莲内酯是一种具有调节机体非特异免疫
功能的免疫刺激剂 o其对 o 5 及细胞因子分泌
的调节为临床用药提供了理论依据 ∀
≈参考文献
≈t 严永清 o余传隆 o黄泰康 o等 q中药辞海 q北京 }中国医药科技出
版社 ot||y qt{ty q
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≈w ƒ¯ ¬® ⁄ o ¬©©²µ§ ∞q ≤²°³¤µ¬¶²± ²©¬± ∂¬·µ² ≤¨¯¯ ≤¼·²·²¬¬¦
¶¶¤¼¶©²µ×∏°²µ ¨¦µ²¶¬¶ƒ¤¦·²µq°°∏±²¯ ·¨«²§o t|{w o
txukxl }xzy{ q
≈x 陈丙莺 o尤丽芬 o马建吟 o等 q简易自然杀伤试验 ) ) ) ⁄ 释放
改良法 q上海免疫学杂志 ot|{| o|kwl }ut{ q
≈y °∏®¬ o≥¤¬¨ ±¤ o≥¤¬¨ ±¤ ° o ·¨¤¯ q°°∏±²¶·¬°∏¯¤±·ª¨ ±·¶
©µ²° ±§µ²ªµ¤³«¬¶ °¤±¬¦∏¯¤·¤q ²∏µ±¤¯ ²© ¤·∏µ¤¯ °µ²§∏¦·¶o
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≈z ¤µ®o¨¯¶¨ o µ¨¥¨µ·• o ·¨¤¯ q׫¨ ×2¦¨¯¯2±§¨ ³¨ ±§¨ ±· ²¯¨²©
¤°°¤ ±·¨µ©¨µ²± ¤±§ ×∏°²µ ¨¦µ²¶¬¶ ƒ¤¦·²µ ³¯«¤ ¬±
¤¦µ²³«¤ª¨ ¦·¤√¬¤·¬²± ⁄∏µ¬±ª ≤¼·²° ª¨¤¯²√¬µ∏¶¤±§ µ¨³¨ ¶≥¬°2
³¯ ¬¨ ∂¬µ∏¶±©¨ ¦·¬²± q ∂¬µ²¯ ot||x oy|kul }|sw q
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©¯¤°°¤·²µ¼ ¼³¨µ¤¯ª¨ ¶¬¤ ¬°¬·¨§¥¼ ±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t ¦¨¨³·²µ±2
·¤ª²±¬¶·q
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Μοδυλατιον οφ Λιανβιζι ϑνϕεχτιον (Ανδρογραπηολιδε)
ον Σοµε Ιµ µ υνε Φυνχτιονσ
°∞ ∏¤±ª2¼²±ªo ƒ ±¨ªo⁄ ∏2¯¬±ªo ∏¤±2§¬o≠ ∏±
k ⁄¨ ³¤µ·° ±¨·²© ¬¦µ²¥¬²¯²ª¼ ¤±§°°∏±²¯²ª¼ o¤±¬±ª §¨¬¦¤¯ ±¬√ µ¨¶¬·¼ o¤±¬±ªutssu| o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²©¤±§µ²ªµ¤³«²¯¬§¨ ²± ¬°°∏±¨ ©∏±¦·¬²±¶¤±§·«¨ ¬°°∏±¨ ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¬·¶¦¯¬±¬¦¤¯
¤³³¯¬¦¤·¬²±q Μετηοδ : × «¨ ¤°²∏±·¶²©ƒ2Αoƒ2Χo× ƒ2Αo2{ ¬± ·«¨ ³¨µ¬³«¨µ¤¯ ¥¯²²§ °²±²±∏¦¯ ¤¨µ¦¨¯¯¶k°
≤¶l ¦∏¯·∏µ¨ ¶∏³¨µ2
±¤·¤±·¶§¨ ¤¯ º¬·«¥¼ §¬©©¨ µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²©¬¤±
¬«¬k
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·¼ ·¨¶·²µ∞≥ ¬± √¬·µ² q× «¨ ©¨©¨ ¦·¶²©
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¬¨¤°¬±¨ §¥¼ ° ¤¨±¶²© °¤¦µ²³«¤ª¨ ·²³«¤ª²¦¼·¬½¨ ¦²¦® µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¤±§ ° ¤¨¶∏µ¨ ° ±¨·²© ¤¯¦·¤·¨ §¨ «¼§µ²ª¨ ±¤¶¨k⁄l ¤¦·¬√¬·¼ µ¨¯¨ ¤¶¨§
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¬±¨¦·¬²± ¦²∏¯§³µ²°²·¨ ƒ2Αoƒ2Χo× ƒ2Α¬±§∏¦·¬²±¶²© °
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¬±¨¦·¬²± ¦²∏¯§ ±²·²±¯ ¼ ±¨«¤±¦¨ ·«¨ ³«¤ª²¦¼·²¶¬¶¤¦·¬√¬·¼ ²© ³¨µ¬·²±¨ ¤¯ °¤¦µ²³«¤ª¨
©µ²° ª∏¬±¨ ¤³¬ª·² ³«¤ª²¦¼·²¶¬¶¦²¦® µ¨¼·«µ²¦¼·¨ o¥∏·¤¯¶² ¤∏ª° ±¨··«¨ ¦¼·²·²¬¬¦¬·¼ ° §¨¬¤·¨§¥¼ ±¤·∏µ¤¯ ®¬¯¯ µ¨¦¨¯¯¶©µ²° °
≤¶·²
§¤°¤ª¨ ·«¨ xyu ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶qΧονχλυσιον : ±§µ²ªµ¤³«²¯¬§¨ ¬¶¤±¬°°∏±²¶·¬°∏¯¤±·¤ª¨ ±·º«¬¦«¦¤± °²§∏¯¤·¨ ¥²·«¤±·¬ª¨ ±¶³¨¦¬©¬¦¤±§
±²±¶³¨ ¦¬©¬¦¬°°∏±¨ ©∏±¦·¬²± ¥¼ ° ¤¨±¶²©¬·¶±¤·∏µ¤¯ ®¬¯¯ µ¨¦¨¯¯¶¤±§ °¤¦µ²³«¤ª¨ ¤±§¦¼·²®¬±¨ ¶¬±§∏¦·¬²± q
[ Κεψ ωορδσ] ¤±§µ²ªµ¤³«²¯¬§¨ ~¬¤±¥¬½¬¬±¨¦·¬²± ~ °¤¦µ²³«¤ª¨ ~±¤·∏µ¤¯ ®¬¯¯ µ¨¦¨¯¯ ~¦¼·²®¬±¨ ¶~¬°°∏±¨ ©∏±¦·¬²±
≈责任编辑 古云霞
本刊重要启事
为进一步提高刊物质量 o增加信息量 o以及加快刊用周期 o本刊将自 ussu年起 o由原来的 zu页扩版为 {s页 o每本定价由
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第 uz卷第 u期
ussu年 u月
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