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大青叶抗内毒素实验



全 文 :线和回归方程 , 结果表明在 2 一 1。!1 9 / m l浓 度 内 , 线
性关系 良好 , 符合 B e er 一 L a m b e rt 定律 。
C 之 1 2
.
9 0 3 A + 0

5 0 7 5
, r = 0

9 9 9 8
样品的测定 : 取盐酸黄连素约。 。 1 9 , 精密称定 ,
与对照 品溶液同样操作 , 稀释成约 6砰g /m l溶液 , 蒸馏
水作空 白 , 在认二 a二 2 6 3 n m处测定 A 值 , 用回 归 方程计
算其含量 , 结果算出均值为 9 7 。 7 % ( n 二 5 ) , c v 二 为
O

2 3%

取盐酸黄连素片20 片 , 精密称定 , 研细 , 取细粉
( 约相当于盐酸黄连素 O。 g1 ) , 适量 , 精密称定 , 操
作同原料药 , 结果是均值 为 94 . 4 % , ( n = 5 ) , C V
为 0 。 5% 。
对照实验 : 取 3个批号的原料药 , 忍个批 号 的片
剂 , 分别用本法和 《 中国药典 》 1 9 9。年版规定的方法
进行测定 , 结果不存在显著差异 。
3 小结
盐酸黄连素及片剂的紫外测定具有简便 , 准确 、
快速等特点 , .不易受外界环境因素的影 响。 用本法测
定盐酸黄连素及片剂的含量 , 结果较为满意 。
盐酸黄连素不易溶于水 , 最好用沸水溶解并充分
振摇 , 否则会影响结果 。
( 1 9 9 3一 0 7一 2 2收稿 )
· 药理 ·
大青叶抗内毒素实验
同济医科大学附属 同济医院 ( 武汉 13。。3 0 ) 刘云海 李清香
江苏省 漂阳县 医院 ( 2 1 3 3 0 0 ) 石 玉梅
摘要 经体内、 体外实验发现大青叶有杭大肠杆菌 O ` :声 . 内毒素作用 。 体外 实验按细 菌 内毒素
检查法进行 , 结果大青叶氛仿提取物的 1 %溶液稀释 64 倍后仍有破坏内毒素作用 。 体 内实验按热源检
查法迸行 , 结果经药物作用后 的内毒素按家兔每公斤体重 注入 4OE U剂量 , 不能产生典型的致热反应 。
关键询 大青叶氛仿提取物 内毒素 卷试剂 热源检查法
临床在应用抗生素等抗菌药物后 , 被杀灭的革兰
氏阴性菌裂解释放 出内毒素 , 严重时 形 成 内 毒素血
症 , 引起机体多器官功能衰竭 、 弥漫性血管内凝血 、 呼
吸窘迫综合症、 中毒性休克综合症 、 脓毒性休克等疾
患 。 由于至今尚无有效的抗内毒素药物 , 致使革兰氏
阴性菌感染休克者死亡率仍在 6。%左右仁` ] 。
我们实验证实 , 大青叶氨仿提取物有抗大肠杆菌
O
: 。 B ` 内毒素作用 , 且体内、 体外实验结果一致 。 现
报告如下 。
飞 实验材料
药材 大青叶 ( F o一i u m I s a t i d i s ) , 产 于 河北
安国 , 经河北省药材公司刘彦斌鉴定为十字花科植物
移蓝 I s a t is i n d i g o t i e a F o r t 的干燥叶 。
动物 日本大耳白兔 , 体重 2 . 3 士 0 . 2 k3 g , 雌雄
兼用 , 雌兔无孕 。 购自本院医学动物实验中心。
试剂 精制冻干人肠杆菌 O 川 B ; 内毒素 : 卫生
部上海生物制品研究所 , 1 0 0 0 E U /支 , 批号 8 8 1 2 03 。
做试剂 : 福建省福州东方觉 试剂厂 , 0 。 l ml /支 ,
灵敏度 0 。 2 5E U / m l , 批号 9 2 2 2 1 4。 0 。 9 %氯化注钠射
36
液 ( N S , 灭菌无热 原 ) : 连云港东风制药厂 , 批号
9 1 1 0 1 7

仪 器 细菌内毒素测定仪 : X N C 型 , 江苏省洛
社实验电器厂 。
注射器、 试管 、 吸管等玻璃仪 器 均 按 《 中 国 药
典 》 〔 Z J热原检查法项 下规定处理 。
2 方法与结果
1 %氛仿提取物溶液配制
取大青叶 1 . 6 k g , 沸水煎煮二次 , 每 次 3 om in ,
合并提取液 , 浓缩至约 50 m l , 加 95 % 乙醇使 醉浓度
至 70 % , 充分搅拌 , 静置 2 4 h , 使沉淀完 全 。 取上清
液 , 回收 乙醉 ,并浓缩至无醇味 。 用石油醚萃取完全 ,
母液继用氯仿萃取数次 , 产荟犷并氧仿萃取液 , 回收除尽
氯仿 , 得稠膏状氯仿提取物 。 称取氯仿提取物 1 9 ,
加适量助溶剂 ,加蒸馏水至 1 0 m l , 调 p H 了. 0一 7 , 5 ,
密封 , 消毒 , 即得 1 % 氯仿提取物溶液 。
体外试验 1 %氯仿提取物各 o . s m l 分别置于
I

I 号试管内。 于 l 号试管内加入 o 。 5耐 N S , 摒
匀 , 吸取 o . s m l于 已加入 o . s m l N S的 l 号试管内 , 依
中药材第 17 卷第 6 期 1 9 9 4 年 6 月
!
1.lfr.
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 1994. 06. 019
次按向法作倍比稀释 , 得到稀释倍数分别为 1 , 2 ,
4
,
8
, 巧 , 3 2 , 6 4和 12 8倍的系列溶液 , 并 使 各管
药液量均为 o . s m l 。 分别于 8 只试管内加入 预 先配制
的浓度为 1 0 E U / m l内毒素液 。 . 5m l , 摇匀 , 于 5 5 + 2 ℃ ,
水浴保温 30 m in 。分别取 0 。 Zm l于 O。 l m l /支鳖试 剂中 ,
溶解 , 封 口 , 于 37 + l ℃内毒素测定仪中温育 60 士 1
m in
。 同时作阳性 、 阴性对照 。
结果阳性对照 管和顶号管产生凝胶 ; 阴性对照管
和 I , 孤号管无凝胶形成 。 说明 1 %氯仿提取物溶液
稀释 6 4倍 ( 班号管 ) 仍具抗内毒素作用 。
体 内试验
A
、 实验组 : 将内毒素 ( 1 0 0 0 E n /支 )用 2 m l N S
溶解后 , 取 0 。 s m l (理0 0 E U )加入已贮有 1 9 . 2m l已消毒
1 %氯仿提取物溶液瓶中 ,使 内毒素浓度为2 0 E U / m l 。
摇 匀 , 于 5 5 十 2 ℃ 温育 30 士 Zm ion
B
、 阳性对照组 : 另取 0 . s m l上述 已用 N S溶解的
内毒素液于 1 9 . 2m l N S中 ,使内毒素浓度为 20 E U /血 ,
同上法保沮 。
C
、 阴性对照 组 : 已消毒 1 %氯仿提取物溶液 20
m l
o
实验前 ,按 《 中国药典》 热原检查法闭项下规定作
好实验前家兔准备 。 选体重为 2 . 3 士 。 . 23 k g , 正常体
温 3 9 . 4 0一 3 9 . 6 0℃ , 且每只二次体温差在 0 . 2℃ 以内家
兔 9只 , 分成三组 , 雌雄兼备 , 分别按每 公 斤 体 重
Zm l自耳静脉注入 A 、 B 、 C 三种 药 液 。 于注射药液
后 1 , 2 , 3 h分别测定体温 , 以三次体温中升温最高
的一次减去正常体温 , 即为该兔的体温升温数 , 再求
出各组平均升温数 , 结果列于表 。
结果按 “ 热原检查法 ” 判断 , A 和 C 组 符 合规
表 大青叶佩仿提取物抗内毒案作用 ( ℃ )
注射前 注射后肛温平均 一一—一— - -一肛温 l h Zh 3h 最大温左 平均升温
定 , B 组 3 只 家兔体温升高均超过 O。 6℃ , 且 总体温
升高达 2 . 85 ℃ , 产生典型的热原反应 。
3 讨论
该实验中 , 体外抗内毒素试验按 “ 细菌 内毒素检
查法 ” 31[ 进行 , 体内抗内毒素试验 按 “ 热原检查法 ”
进行 。 结果互为印证 , 说明大青叶氯仿提取物确有抗
大肠杆菌O : : : B ; 内毒素作用 。
本实验中 ,各试管加入内毒素浓度均为 l o E U / m l ,
结果 I , 硕管均未产生凝集反应 。 本实验使用堂试剂
对内毒素灵敏度为 O。 2 5 E U /m l , 可见在将 1 %氯仿提
取物溶液稀释 64倍后仍有抗内毒素作用 。
pH 是影响内毒素与贫试剂间产生凝集反 应的重
要因素 , 最佳反应 p H为 6 . 25 ~ 7 . 2 5 , 为此 ,在将 1 %
氯仿提取物溶液消毒前调 p H 7 。 -0 、 7 . 5 , 以消除消毒引
起的 p H降低 。 药液与内毒素等作用的温度 和 时间直
接影响内毒素被破坏的程度 , 于 5 十 2℃水 浴中保温
3 0 + Zm in 较为理想 。
为证实大青叶氯仿提取物抗内毒素作用 , 将同等
剂量的内毒素经药物作用后再注入家兔体内 , 结果不
能产生热原反应 , 而与单独注入药液反应相似 ( 均在
热原检查合格范围内 ) , 说明 内毒素已被药液破坏 ,
从而证实大青叶中含有抗内毒素活性物质 。
参 考 文 献
1 侯瑞兴 , 等 . 乳果糖治疗肠源性内毒素血症
的实验研究 . 中华外科 杂 志 , 19 1 , 2 9( 4 :)
2 4 8
2 中华人民共和国卫生部药典委员会编 . 中华
人 民共和国药典 . 一部 . 北京 : 人民卫生出
)派社 , 2 9 9 0 : 6 2
3 巾华人 民共和国卫生部部标准 (试行 )〔W S ,

2 8 8( Y 一打 ) = 8 8 」. 细菌内毒素 检 查 法 .
( 8 8 )卫典办字第 2 9 0号 . 1 5 9 9组别
( 1 9 9 3一 1 2一 1 5收稿 )
3 9

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了、 3 9 . 5 5 3 0 . 了0 3 9 。 9 0 3 9 。 4 5 0 。 3 5 0 。 3 1 7
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币药材第介卷第 6 期 1 9 9 选年 G月 3 7
K e y W o r ds p e Z乙玄o n玄林 s e a乙 r a ; K N 0 3 : C h o le s te r i n : D a u e o s te r o l
(o r ig i n a l a r t ie le o n Pa P e 3 3 )
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S h i Y u m e i
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, a e e o r d i n g t o m e a s u r i n g t h e t em P e r a t u r e s
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( o r i g i n a l a r t i e l e o n P a P e 3 6 )
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X i e Z h im i n
(X i a n I n s t i t ut e f or D r u g C o n t r o l
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,
p a r t s a n d e f f i e a e y
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w a s n a m e d “ Z h i ju , a n d a Z h i ju z i , r e s P e e t iv e ly
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K e y W o r d s
“ z h i j u ” : “ z h i ju z i , ; H e r七o l o g je a l s t u d y
(o r ig i n a l a r t iC le o n P a P e 4 4 )
书 讯
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明扼要介绍了 4 3 0种常用中药的来源 、 特性 、 功用 、
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中医处方手册 》 本书以实用为原则 , 收进粉选的历代
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人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集 》 作为中国药
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常用中药的炮制方法 、 成品性状 、 炮制作用 、 贮存保
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· 中药材第17 卷第 6 期 1 9 9 4 年 6 月