全 文 ：图 6 　LAMS 对 PC23 细胞 Caspase23 蛋白表达的影响 ( x ±s , n = 3)
Fig. 6 　Effect of LAMS on Caspase23 protein expression of PC23 cells ( x ±s , n = 3)
4 　讨论
　　前列腺癌是欧美国家主要的男性肿瘤疾病 ,目
前普遍的观点认为 ,从正常前列腺组织发展到前列
腺癌要经历 4 个主要的过程 :前列腺上皮细胞内瘤、
局部前列腺癌、侵袭性前列腺癌和转移性前列腺癌
等几个阶段 ,其间每一步都伴随着遗传的改变和各
种基因的异常[ 5 ] 。
本实验结果证实 L AMS 体外能抑制 PC23 细
胞的生长 ,并促进其 S + G2期阻滞和凋亡 ,抑制 bcl2
2 mRNA 表达及其蛋白表达 , 并促进 caspase23
mRNA 表达及其蛋白表达。
本研究结果初步证实 LAMS 具有体外抗前列
腺癌作用。
参考文献 :
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徐长卿多糖的分离纯化及其抗辐射和升高白细胞的作用
朱世权1 ,2 ,蔡文秀1 ,薛 　玲1 ,许云禄1
①
(11 福建医科大学蛇毒研究所 ,福建 福州 　350004 ; 21 福建省肿瘤医院 药剂科 ,福建 福州 　350014)
摘 　要 :目的 　从徐长卿中提取多糖组分并观察其对辐射和环磷酰胺 (CTX) 所致小鼠骨髓抑制的影响。方法
水提醇沉法从徐长卿根茎粉末中提取徐长卿多糖粗品 (CPB) ,粗品经 DEA E2Sepharose FF 柱纯化 ,组分作 IR 分
析。以 715 Gy 60 Co 射线正面及背面照射小鼠 ,观察徐长卿多糖对模型小鼠外周白细胞总数、骨髓 DNA 系数、胸
腺系数及脾系数的影响。以 CTX 100 mg/ kg ip 1 次致小鼠骨髓抑制后 ,观察徐长卿多糖对模型小鼠外周血白细胞
总数的影响。结果 　CPB 经 DEA E2Sepharose FF 柱色谱分离获得两个多糖组分峰 (CPBA 和 CPBB) ,提取率分别
16157 %、7180 %。小鼠接受 60 Co 辐射后 ,CPBB 高剂量[ 100 mg/ (kg ·d) ]组小鼠外周血白细胞数、骨髓 DNA 系
数与模型组相应指标比较均明显增高 ( P < 0105) ;CPBB 低剂量 [ 50 mg/ (kg ·d) ]组胸腺系数及脾系数 (0192 ±
0132) 与模型组相应指标比较均明显增高 ( P < 0101) 。小鼠 ip CTX 后 ,CPBB 高、中剂量组小鼠外周血白细胞数
与模型组比较均有明显提高 ( P < 0105) 。结论 　徐长卿多糖 CPBB 有明显对抗60 Co 辐射引起的小鼠胸腺、脾缩小
和骨髓 DNA 降低的作用 ,同时也有对抗60 Co 辐射或 CTX 引起的白细胞降低的作用。
关键词 :徐长卿 ; 多糖 ; 60 Co ; 环磷酰胺 ; 抗辐射
中图分类号 :R286191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0103 - 04
·301·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203212
　　作者简介 :朱世权 (1972 —) ,男 ,福建省闽清县人 ,主管药师 ,硕士 ,研究方向为医院药学。
Tel : (0591) 87688691 　E2mail : zsqsxq @126. com
　　3 通讯作者　许云禄　Tel : (0591) 83569646 　E2mail : snake @mail . fjmu. edu. cn
　　徐长卿 Cy nanchum p anicul at um ( Bunge )
Kitagawa 为罗摩科草本植物 ,入药部位为其根及根
茎 ,部分地区用其带根全草。徐长卿又名寥刁竹、竹
叶细辛 ,为我国药学专著《神农本草经》所收载 ,以后
历代本草书籍亦多载入。徐长卿性温 ,味辛 ,归肝、
胃经 ,具祛风止痛、温经活络、解毒消肿之功效 ,常用
于治疗风湿痹痛、胃痛胀满、牙痛、腰痛、跌打损伤、荨
麻疹、湿疹等。徐长卿主要活性成分有丹皮酚 (又名
牡丹酚) 、苷元及黄酮、氨基酸等。此外已有文献报
道 ,徐长卿中还含有多种不同活性的多糖组分[1 ] 。
多糖类药物近年来很引人注目 ,尤其在抗凝、调
血脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面都具有显
著药理作用与疗效。有文献报道多糖类物质对由于
放化疗引起的机体白细胞减少具有明显的改善作
用 ,如念珠菌多糖、人参多糖、细菌多糖等[2～4 ] 。而
徐长卿中含有多种活性多糖 ,关于它们对放化疗引
起的小鼠骨髓抑制的影响尚未见报道 ,本实验对徐
长卿多糖抗辐射和升白细胞作用进行初步研究 ,为
其应用提供实验依据。
1 　材料
111 　动物 :昆明种小鼠 ,体质量 (20 ±2) g ,雌雄兼
用 ,合格证号 :闽实动质准第 002204 号 ,福建医科大
学实验动物中心提供。
112 　药物及试剂 :徐长卿购自福州市中药材医药公
司 ,经福建省药材公司鉴定 , 产地山东 , 批号
020130 ,药用部位为根茎 ;复方阿胶浆 ,山东东阿阿
胶股份有限公司产品 , 批号 041019 ; 环磷酰胺
(CTX) ,江苏恒瑞医药股份有限公司出品 ,批号
06020821。其他试剂均为国产分析纯。
113 　仪器 :岛津 UV —2501PC 型紫外2可见分光光
度计 ,日本岛津公司产品 ;Magna 750 F T —IR 红外
光谱仪 ,美国 Nicolet 公司产品 ;L XJ2ⅡB 低速大容
量多管离心机 ,上海安亭科学仪器厂产品 ; T G328A
电光分析天平 ,上海天平仪器厂产品。
白细胞计数由福建医科大学内科基础教研室检
测。60 Co 辐射在福建省肿瘤医院放疗中心进行。
2 　方法
211 　徐长卿多糖的分离纯化及红外分析
21111 　徐长卿多糖的分离纯化[5～7 ] :徐长卿根茎干
燥粉末用 95 % 乙醇回流脱脂 ,残渣用 10 倍体积沸
水提取 4 h ,重复 3 次 ,滤过 ,残渣再用 10 倍体积
5 % NaO H 于 4～10 ℃浸泡 12 h ,上清液用稀盐酸
中和。合并滤液 ,透析 ,未透过部分减压浓缩 ,按
Sevag 法除蛋白后 ,4 倍体积 95 % 乙醇沉淀、静置、
离心 ,得沉淀 ,再经过多次水提醇沉 ,将最后所得沉
淀用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤得固体 ,干燥称质量 ,
得棕黑色颗粒粗品 (CPB) 。
称粗品 CPB 10 mg 溶于 10 mL 双蒸水中 ,4 ℃
过夜溶解 ,滤过 ,取滤液 5 mL 上 D EA E2Sep harose
FF 柱。洗脱液配制 : A 液为双蒸水 ;B 液为含 2
mol/ L 氯化钠溶液。利用梯度混合器进行线性洗
脱 ,洗脱速度为 3 mL/ 8 min ,收集 3 mL/ 管。测定
487 nm 吸光度值 ( A 487 ) 绘制洗脱曲线。按峰合并
收集液 ,得溶液 CPBA 和 CPBB。
21112 　定量测定[8 ] :称取干燥葡萄糖标准品 10
mg ,加蒸馏水溶解得 011 mg/ mL 的葡萄糖标准液。
精密量取标准液 110、210、410、510、61 0、810、910
mL ,置 10 mL 量瓶中 ,用蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 ,
分别精密量取 1 mL ,置于 10 mL 具塞比色管中 ,加
入 1 mL 5 % 苯酚液、5 mL 浓硫酸 ,摇匀反应 20
min ,以蒸馏水 1 mL 、5 % 苯酚 1 mL 、浓硫酸 5 mL
混合液按上述操作做空白。置 UV —2501PC 紫外2
可见分光光度计中 ,于 487 nm 处测定吸光度值。
以葡萄糖标准液浓度为横坐标 ,吸光度值为纵坐标 ,
制备葡萄糖溶液标准曲线并求其回归方程。
CPBA 和 CPBB 依上述操作分别测定吸光度
值 ,代入回归方程 ,求出质量分数及提取率。
21113 　IR 分析 :称取干燥样品 2 mg ,以 KBr 压
片 ,在 4 000～400 cm - 1内进行扫描。
212 　CPBB 对小鼠 60 Co 辐射所致骨髓抑制的影
响[9 ,10 ] :取体质量 18～22 g 的小鼠 50 只 ,雌雄各
半 ,随机分为 5 组 :对照组 (无辐射) ig NS 20 mL/
(kg ·d) ;模型组 ig NS 20 mL/ ( kg ·d) ; CPBB 高
剂量组 ig CPBB 100 mL/ (kg ·d) ;CPBB 低剂量组
ig CPBB 50 mL/ (kg ·d) ;阳性对照组 ig 复方阿胶
浆 20 mL/ (kg ·d) (分上下午两次) 。辐射前连续
给药 10 d ,每两天称体质量 ,根据最新体质量调整
给药量。第 10 天将各组小鼠 (对照组除外) 安放在
蛇毒研究所自行设计研制的有机玻璃制成的放射状
鼠笼中 ,经 715 Gy 60 Co 射线正面及背面照射 ,辐射
后继续给药 6 d ,第 7 天称其体质量。小鼠眼眶取
血 ,检查白细胞数。并将小鼠处死 ,取胸腺、脾、股骨
分别称质量。计算胸腺系数 [胸腺质量 (mg) / 体质
量 (g) ]、脾系数 [脾质量 ( mg) / 体质量 ( g) ]。股骨
称质量后 ,剪开股骨头 ,用 5 mmol/ L 氯化钙 10 mL
将全部骨髓冲入离心管中 ,置 4 ℃冰箱 30 min ,
2 500 r/ min 离心 15 min ,弃去上清液 ,将沉淀物加
012 mol/ L 高氯酸 5 mL 充分混合 ,90 ℃加热 15
·401· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
min ,冷却 ,滤过 ,滤液用紫外分光光度仪于 260 nm 处
测定 A260值 ,计算 DNA 系数[ A260 / 股骨质量 (g) ]。
213 　CPBB 对小鼠 CTX 所致骨髓抑制的影
响[ 9 ,10 ] :取体质量 18～22 g 的小鼠 60 只 ,雌雄各
半 ,随机分为 6 组 :对照组 ( NS + NS) ig NS 20
mL/ (kg ·d) ;模型组 ( CTX + NS) ig NS 20 mL/
(kg ·d) ;CPBB 高、中、低剂量 (CTX + CPBB) 组分
别 ig CPBSS 200、100、50 mg/ kg ; 阳性对照组
(CTX + 阿胶浆) ig 复方阿胶浆 20 mL/ (kg ·d) ;实
验共 14 d。阳性对照组每天分上下午各给药 1 次 ,
其余各组每天 ig 给药 1 次 ,第 7 天对照组加 ip NS
20 mg/ kg 1 次 ,其余各组 ip CTX 100 mg/ kg 1 次。
每两天称小鼠体质量一次 ,根据最新体质量给药。
第 14 天小鼠眼眶取血 ,检查白细胞数。
214 　统计学处理方法 :实验数据以 x ±s 表示 ,用
SPSS 1010 统计软件进行数据处理 ,采用 One2Way
ANOVA 方法进行组间分析比较 ,选择 Dunnett 法进
行单侧检验 ,处理组内部比较采用 LSD 法进行检验。
3 　结果
311 　徐长卿多糖的分离纯化
31111 　CPB 粗品 DEA E2Sep harose FF 柱离子交
换色谱 : CPB 粗品经 DEA E2Sep harose FF 离子交
换色谱得到 CPBA 和 CPBB 两个峰。
31112 　徐长卿多糖的定量测定 :应用苯酚2硫酸法 ,
将不同浓度的葡萄糖标准液置 UV —2501 PC 紫外2
可见分光光度计中 ,测定 A 487 ,可看出 A 487值随葡萄
糖标准液浓度的增加而增加 ,以葡萄糖标准液浓度
为横坐标 ,A 487值为纵坐标 ,求出葡萄糖标准液标准
曲线的回归方程 : Y = 0. 010 6 X - 0. 003 4 ( r2 =
0. 997 1) 。得 CPBA 和 CPBB 的质量浓度分别为
65102、69105 μg/ mL , 提 取 率 分 别 16157 %、
7180 %。接下来的生物学活性选用质量浓度较高的
CPBB 进行观察。
31113 　IR 分析 : CPBA 和 CPBB 的 IR 谱结果显
示 ,除含有多糖特征吸收峰外 ,CPBB 在 1 733 cm - 1
处吸收峰示有羟基成环结构。
312 　CPBB 对小鼠60 Co 辐射所致骨髓抑制的影响 :
经60 Co 照射 ,模型组小鼠外周血白细胞数、骨髓
DNA 系数、胸腺系数、脾系数与对照组比较均有明
显下降 ( P < 0101) ,见表 1。说明60 Co 照射致小鼠
骨髓抑制模型制备成功。CPBB 100 mg/ ( kg ·d)
组小鼠白细胞数、骨髓 DNA 系数与模型组相应指
标比较均明显增高 ( P < 0105 ) ; CPBB 50 mg/
(kg ·d) 组小鼠胸腺系数及脾系数与模型组相应指
表 1 　CPBB 对60 Co 辐射小鼠白细胞数、骨髓 DNA 水平及
胸腺、脾脏系数的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 1 　Effect of CPBB on peripheral WBC, DNA coeff icient
of bone marrow, and indexes of thymus and spleen
of mice irradiated with 60 Co ( x ±s , n = 10)
组　别
剂量/ (mg·
kg - 1 ·d - 1 )
白细胞数/
( ×109 ·L - 1 )
骨髓 DNA 系数/
(g - 1 )
胸腺系数/
(mg·g - 1 )
脾系数/
(mg·g - 1 )
对照 - 7197 ±3188 0119 ±0106 4114 ±1138 2171 ±0184
模型 20 mL 0133 ±0117 △△ 0108 ±0102 △△ 0170 ±0132 △△ 0134 ±0115 △△
CPBB 100 0166 ±0142 3 0111 ±0103 3 2108 ±0149 0197 ±0148 3 3
50 0131 ±0117 0109 ±0102 2110 ±0189 3 3 0192 ±0132 3 3
复方阿胶浆 20 mL 0137 ±0116 0108 ±0101 1132 ±0152 3 3 0158 ±0148
　　与对照组比较 : △△P < 0101
　　与模型组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 0101
　　△△P < 01 01 vs cont rol group
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs model group
标比较均明显增高 ( P < 0101) 。提示 CPBB 有防
止辐射引起的白细胞降低和骨髓 DNA 水平降低的
作用和明显保护60 Co 辐射引起胸腺和脾脏缩小的
作用。
313 　CPBB 对小鼠 CTX 所致骨髓抑制的影响 :模
型组小鼠 ip CTX 100 mg/ kg 1 次 ,外周血白细胞数
与对照组比较明显下降 ( P < 0101) ,见表 2 ,说明
CTX 致小鼠骨髓抑制模型制备成功。CPBB 高、中
剂量组小鼠外周血白细胞数与模型组比较均有明显
提高 ( P < 0101) ; CPBB 高、中、低剂量组与阳性对
照组比较均无显著差异 ( P > 0105) 。表明 CPBB
对 CTX 所致骨髓抑制小鼠白细胞减少均有对抗作
用 ,与传统治疗药复方阿胶浆效果相当。
表 2 　CPBB 对 CTX致骨髓抑制小鼠外周血白细胞数的
影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effect of CPBB on peripheral WBC number
of mice with bone marrow inhibition
induced by CTX ( x ±s , n = 10)
组　别 剂量/ (mg ·kg - 1 ·d - 1) 白细胞数/ ( ×109 ·L - 1)
对照 20 mL 71 50 ±11 26
模型 20 mL 51 57 ±11 30 3 3
CPBB 200 81 19 ±21 30 △△
100 71 57 ±11 20 △
50 61 35 ±11 88
复方阿胶浆 20 mL 71 39 ±11 08 3 △
　　与对照组比较 : 3 P < 01 05 　3 3 P < 0101
　　与模型组比较 : △P < 01 05 　△△P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs cont rol group
　　△P < 01 05 　△△P < 01 01 vs model group
4 　讨论
　　植物多糖是由许多相同或不同的单糖以α或β
糖苷键所组成的化合物 ,其相对分子质量一般为数
万甚至数百万 ,是构成生命活动的四大基本物质之
·501·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
一 ,与维持生命功能密切相关。近年来研究表明多
糖除具有免疫调节、抗肿瘤的生物活性外 ,还有抗衰
老、降血糖、抗凝血等作用 ,且其对机体不良反应少 ,
因此对多糖的研究已成为医药界的热点领域。多糖
的提取一般在提取前做脱脂预处理 ,去除组织细胞
中脂质 ,然后用水、盐或稀碱在不同浓度下提取 ,所
得多糖提取液可直接或离心除去不溶物。本实验采
用 95 % 乙醇回流脱脂 ,沸水、稀碱 4～10 ℃提取徐
长卿多糖 ,并用透析法除去小分子物质 ,以 Sevag
法除去蛋白 ,经 DEA E2Sep harose FF 阴离子交换色
谱纯化 ,获得徐长卿多糖 ,该分离纯化工艺快速简
便、重复性较好 ,是分离徐长卿多糖较好的方法。
多糖为一大类天然产物 ,广泛存在于动物、植
物、微生物等有机体中 ,具有多种生物活性如调节机
体免疫功能 ,防御细菌或病毒的感染 ;具有抗凝血活
性 ,对抗血栓的形成 ;能激活脂蛋白酶 ,调节机体脂
质代谢 ;血管壁上的多糖具有大的黏滞性 ,可保持或
维持管壁坚韧性和通透性[ 11 ] 。前期研究发现徐长
卿多糖 ig 给药对小鼠移植性腹水癌 H22 、EAC 和
实体瘤 S180生长具有抑制作用[12 ] 。目前 ,肿瘤的治
疗仍然以放疗和化疗为主 ,但其引起的骨髓抑制及
不良反应却严重地影响了患者的生存质量。辐射可
引起机体物质代谢紊乱 ,造成神经系统、内分泌系统
调节障碍 ,破坏机体组织的蛋白质、核蛋白和酶等。
肿瘤化疗药的主要不良反应是骨髓抑制、脱发和消
化道出血等 ,CTX 的主要不良反应是对免疫功能和
造血系统具有抑制作用 ,对其目前尚无有效防治手
段。多种多糖具有明显的抗辐射和免疫调节作用 ,
其机制可能与抗免疫损伤、保护造血系统、清除自由
基等方面有关[13 ] 。本实验观察了徐长卿多糖对放
化疗引起的小鼠白细胞减少的影响 ,提示与放化疗
同时应用能够减小放化疗对骨髓的毒性作用 ,预防
白细胞减少 ,并具有与传统治疗药复方阿胶浆相当
的效果 ,但量效关系不明显 ,这可有与多糖的药效特
点有关 ,研究发现多糖调节免疫功能呈双相性 ,不是
浓度越大功能越强 ,而是存在某一最佳剂量 ,其量效
曲线呈“钟罩型”[14 ,15 ] ,而非对称“S”型。本研究初
步显示徐长卿多糖有良好的抗放化疗毒性效应 ,但
其具体的作用有效部位、作用靶点、作用机制等还有
进一步研究。
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黄芪多糖对化疗后气虚证患者青紫舌的改善作用
苏旭春 ,梁傍顺 ,邬晓东 ,闫冰川 ,孔嘉欣 ,刘晓燕
①
(广州医学院附属肿瘤医院 中西医结合科 ,广东 广州 　510095)
摘 　要 :目的 　观察黄芪多糖对化疗后气虚证患者青紫舌的治疗作用及其机制。方法 　50 例化疗后气虚证青紫舌
患者静脉注射黄芪多糖针剂 ,并以丹参针剂为对照。观察治疗前后两组患者舌象、气虚证症状及止凝血功能的变
·601· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009206207
　　作者简介 :苏旭春 (1972 —) ,女 ,湖南茶陵人 ,副主任医师 ,硕士 ,研究方向为中西医结合治疗肿瘤疾病。E2mail : sxc118 @126. com